1、 技術(shù)咨詢電話：400-607-9999注意：本制品僅供研究使用，請(qǐng)勿用于臨床治療等其他用途植物RNA大提試劑盒-柱式Large Scale Column Plant RNAout貨號(hào): M090105產(chǎn)品及特點(diǎn) 本產(chǎn)品是本公司柱式植物RNAOUT（CAT#:M090108）的大提升級(jí)產(chǎn)品，它結(jié)合了植物RNAOUT的高效性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗(yàn)證，植物名單見植物RNAOUT產(chǎn)品介紹的附錄)和本公司柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：樣品處理量大，一次可以處理5g的植物材料。操作簡(jiǎn)單快速，處理一個(gè)樣品只需要約二十分鐘。RNA純度更高，平均 OD260/280一般都在2.0左右

2、，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。產(chǎn)量高（具體根據(jù)材料不同而不同）。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern雜交、cDNA合成等實(shí)驗(yàn)。規(guī)格及成分 成 份5次包裝溶液A100 mL溶液B30 mL溶液C100 mL大提離心吸附柱5套通用洗柱液100 mLRNA洗脫液5 mL使用手冊(cè)1份運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸，4保存，有效期一年。使用方法估算組織細(xì)胞的用量。每次大量提取一般需要3-5g植物葉片、或1-3g植物種子、或5-10g植物果實(shí)。先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在RNALOCKER中的植物組織需用紙吸去RNALOCKER液體后再剪切成小塊)，放入50mL塑料離心管中，加入20mL

3、溶液A，然后用勻漿器勻漿。勻漿時(shí)會(huì)產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎植物組織，但為避免氧化，硯磨時(shí)必須將組織浸泡在溶液A中進(jìn)行，不能只在液氮中硯磨，然后再將硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的50 mL塑料離心管中。注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4放置后可能會(huì)產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在65水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。在離心管中加入5 mL的溶液B和5 mL自備氯仿，在振蕩器上充分振蕩1-3分鐘，此時(shí)溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時(shí)必須使管底溶液震蕩起來。室溫5000-7000 rpm離心3-5分鐘，水相和有機(jī)相之間將有較厚的細(xì)胞破碎物。注意：可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間。將上清液轉(zhuǎn)移

4、到另一干凈的50mL塑料離心管中。下層有機(jī)相和中間層含有DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。最好留下少量上清液不取。加入等體積的溶液C，充分顛倒混勻。將一半的溶液轉(zhuǎn)移到大提離心吸附柱中，5000-7000 rpm室溫離心3-5分鐘，棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一大提離心吸附柱中， 5000-7000 rpm室溫離心3-5分鐘，棄穿透液。加10 mL通用洗柱液，室溫離心3-5分鐘，棄穿透液。重復(fù)上步一次，加10 mL通用洗柱液，室溫離心3-5分鐘，棄穿透液。室溫離心1-3分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。將大提離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的RNase-free收集管中

5、，加入0.5 mL RNA洗脫液，室溫放置1-2分鐘。5000-7000 rpm室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為RNA樣品。再加入0.5 mL RNA洗脫液，重復(fù)上面兩步一次。將兩次洗脫得到的RNA立即使用或存放于-80待用RNA完整性的電泳檢測(cè)：如果需要做Northern雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行RNA電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的RNA分子（BioTechniques，28：414，2000）。RNA產(chǎn)量產(chǎn)率測(cè)定：將5-10 L RNA溶于TE緩沖液中(pH7.5-8.2之間)檢測(cè)其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的RNA=40 g/mL），進(jìn)而計(jì)算出RNA的產(chǎn)量（濃度X體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。RNA純度測(cè)定：無污染的總RNA的OD26