1、硒的形態(tài)分析方法階段性總結(jié)報告由于不同形態(tài)硒化合物的功效及其毒性各不同，因此準(zhǔn)確地定性定量分析食品中不同形態(tài)和價態(tài)的硒對保障人體安全及健康具有重要意義。食品中 微量元素的形態(tài)分析不能停留在靜態(tài)檢測，而應(yīng)該將該技術(shù)應(yīng)用到如何提高微量元素的生物有效性和開發(fā)功能食品的研究上。1硒的形態(tài)分析研究現(xiàn)狀表1是對近年來有關(guān)學(xué)者在硒的形態(tài)檢測上常用的技術(shù)方法進(jìn)行了介紹。表1硒形態(tài)分析實(shí)例檢測對象檢出硒形態(tài)種類提取溶劑和方法分離方法分離參數(shù)測定方法引用竹筍亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）；硒代 蛋氨酸（SeMet）；硒代胱氨酸（SeCys2）；甲基 硒代半胱氨酸（MeSeCys）；硒代乙硫氨酸（SeEt

2、）（6種）鏈酶蛋白酶E 超聲波提取液相色譜法（LC）Hamilton PRP-X100；5 mmol/L 檸檬酸(pH 4.72) 作為流動相電感耦合等 離子體質(zhì)譜 法（ICP-MS）吳雅穎 等人富硒食品亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）；硒代 蛋氨酸（SeMet）；硒代胱氨酸（SeCys2）；硒脲 （SeUr）；硒代乙硫氨酸（SeEt）（6種）0.1 mol/L HCl超聲波提取液相色譜發(fā)（LC）Hamilton PRP-X100；20 mmol/L 檸檬酸(pH 6.0) 作為流動相電感耦合等 離子體質(zhì)譜 法（ICP-MS）王欣等 人扇貝、海參、魚亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（

3、W）；硒代 蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸（SeCys2）（4 種）2去離子水 超聲波提取液相色譜法（LC）Hamilton PRP-X100；40 mmol/L(NH4)2HPO4 (pH 6.0)作為流動相原子火光光 譜法（AFS）尚德榮 等人藍(lán)莓亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）（2種）交聯(lián)殼聚糖（脫 乙酰度為92% ） 固相萃取可實(shí)現(xiàn)分離，但吸收速率根 據(jù)PH值變化原子吸收光譜（AAS）孟昭榮 等人大蒜油二甲基硒（DMSe）；二甲基二硒（DMDSe）（2種）氣相色譜法（GC）SE-54毛細(xì)管色譜柱； 起始溫度40C,lmin后以 15C/min 程序原子吸收光譜（AAS）白文

4、敏 等人升溫至所需溫度，汽化室溫 度 20C奶粉亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）；硒代 蛋氨酸（SeMet）；硒代胱氨酸（SeCys2）（4 種）2乙酸沉淀蛋白，流動相提取離子色譜（IC）Hamilton PRP-X100；5 mmol/L 檸檬酸、10 mmol/L 乙酸銨、0.1%三氟乙酸（pH 5.2）作為流動相電感耦合等 離子體質(zhì)譜 法（ICP-MS）林立等 人新鮮的蘑菇和豬肉亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）；硒代 蛋氨酸（SeMet）；硒代胱氨酸（SeCys2）；硒 代乙硫氨酸（SeEt）（5種）Se（W）、Se（W）、Se Met用稀酸提 ??；SeCys2 和SeE

5、t用酶水解提 取液相色譜法（LC）Hamilton PRP-X100；5 mmol/L 檸檬酸（pH 4.5） 作為流動相電感耦合等 離子體質(zhì)譜 法（ICP-MS）土內(nèi)濤 等人牛奶游離的硒代蛋氨酸（free SeMet）（1種）乙月青渦流萃取液相色譜法（LC）Acquity UPLC BEH 七 色譜 柱；以水：乙青：甲酸 （95：5：0.1，V / V）為流 動相超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法（UPLC-MS/MS）何夢潔 等人目前，硒的形態(tài)分析應(yīng)用最廣泛的提取方法是超聲提取法，常用的分離方法是液相色譜法（LC），應(yīng)用較多的檢測方法是電感耦合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS）。2硒的形態(tài)分析現(xiàn)象2.

6、1硒的形態(tài)分析方法研究（1）不同單酶對花生中硒形態(tài)的影響到目前為止，我們嘗試了五種單酶用于研究硒形態(tài)的試驗(yàn)，分別為：中性蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、鏈霉蛋白酶、脂肪酶。本試驗(yàn)以富硒花生為 研究對象。試驗(yàn)結(jié)果如下：五種單酶一鋼代胱氨酸曬代蛋氨酸（SeMet）T-丑曬酸鹽（硒酸鹽”心F圖1不同單酶對花生中硒形態(tài)的單酶名稱-尤點(diǎn)缺點(diǎn)中性蛋白酶能提取出硒代胱氨酸 和硒代蛋氨酸，且提 取率較高沒有提取出亞硒酸鹽和硒 酸鹽蛋白酶K能提取出硒代胱氨酸 和硒-弋蛋氨馥提取率較低，沒有提取出 亞硒馥鹽和硒酸鹽胰蛋白酶能提取出硒代胱氨酸 和硒-弋蛋氨馥提取率較低，沒有提取出 亞硒馥鹽和硒酸鹽鏈霉蛋白酶能提取出4種

7、硒形態(tài)： 硒代胱氨酸、硒代蛋 氨酸、亞硒酸鹽和硒 酸鹽,且提取率是五 種酶中最11的。不能確定該酶會不會影響 硒形態(tài)之間的轉(zhuǎn)化，使測 出的硒的形態(tài)含量增加.脂肪酶能提取出硒代蛋氨酸提取率是五種單酶中最小 的，不能提取出硒代胱氨 馥、亞硒酸鹽和硒酸鹽表2不同單嗨作為提取劑的優(yōu)缺點(diǎn)總體而言，鏈霉蛋白酶的提取效果最好，所提取出的四種硒形態(tài)的含量均最高。提取效果排列順序?yàn)殒溍沟鞍酌钢行缘鞍酌敢鹊鞍酌傅鞍酌竗脂 肪酶。（2）不同酶提取時間對大米中硒形態(tài)的影響酶提取時間對硒形態(tài)的提取效果有至關(guān)重要的影響，若提取時間過短，提取不充分，測量結(jié)果偏低；若提取時間過長，浪費(fèi)時間、精力 和財力，還可能會提取出更多的

8、雜質(zhì)，硒形態(tài)之間也可能發(fā)生轉(zhuǎn)化。本研究設(shè)置的酶提取時間分別為4 h、8 h、12 h、16 h、20 h、24 h，研 究對象為富硒大米。試驗(yàn)結(jié)果如下：-鋼代胱氨酸曬代蛋氨酸（SeMet）丑曬酸鹽（派IV）一硒酸鹽”心F表3不同酶提取時間對大米硒形態(tài)提暇率的鍛響酶提取時間（h）提取率424.7S50.61258. 91674. 42079.124119. 1圖2不同酶提取時間對大米中硒形態(tài)的影響由圖2和表可知，硒形態(tài)的提取率隨著提取時間的增加而增大，提取時間為24h時，大米的硒形態(tài)提取率達(dá)到最大值，為119.1%。易知知24 h時， 硒形態(tài)之和大于總硒含量，導(dǎo)致這一現(xiàn)象的可能原因如下：一是24

9、 h的提取時間過長，導(dǎo)致有雜質(zhì)產(chǎn)生；二是測形態(tài)用的離心管未清洗干凈，殘留有硒; 三是測定總硒時，消解不徹底，導(dǎo)致總硒含量偏低。提取時間為20 h時，硒形態(tài)提取率為79.1%，仍有上升空間，因此最適酶提取時間應(yīng)選在20 h到 24 h之間。（3）中性蛋白酶的不同用量對富硒大米和富硒酵母中硒的形態(tài)的影響中性蛋白酶不同用量對富硒大米中硒形態(tài)的影響不同硒含量的樣品，其酶的添加量不同。本組試驗(yàn)選用硒含量低的樣品（總硒含量10 mg/kg）富硒大米作為研究對象，研究添加不同的酶量，對富 硒大米中硒形態(tài)的影響，添加的酶量分別為5 mg、10 mg、20 mg、50 mg、80 mg、100 mg。試驗(yàn)結(jié)果如

10、下：表4中性蛋白酶的不同用量對大米酒形態(tài)的影響一硒代耽氨酸(SeCy52 ) T增代蛋氨酸 SeMet)酶的用量(吧)提取率(V534.91049. 520&8. 85030.480125.0100130.5Q& 10 20 BO 10 50 60 70 ED 90 LOO L1C酶的用里(mg)圖3中性蛋白酶不同用量對富硒大米中硒形態(tài)的影響由圖3可知，硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸的含量隨著中性蛋白酶添加量的增加而增加，酶的添加量為100 mg時，兩種硒代氨基酸的含量達(dá)到最大值。 但是當(dāng)酶的添加量為80 mg和100 mg時，硒形態(tài)的提取率分別為125.8%、130.5%，測出的硒形態(tài)之和大于總硒含

11、量，導(dǎo)致這一現(xiàn)象的可能原因如下：- 是酶的用量過大，導(dǎo)致有雜質(zhì)產(chǎn)生或發(fā)生了轉(zhuǎn)化；二是測形態(tài)用的離心管未清洗干凈，殘留有硒；三是測定總硒時，消解不徹底，導(dǎo)致總硒含量偏低。 酶的添加量為50 mg時，硒形態(tài)的提取率為88.4%，因此酶的最適添加量為50 mg。中性蛋白酶不同用量對富硒酵母中硒形態(tài)的影響本組試驗(yàn)選用硒含量高的樣品(2000 mg/kg總硒含量3000 mg/kg)富硒酵母作為研究對象，研究添加不同的酶量，對富硒酵母中硒形態(tài)的影響，添 加的酶量分別為 0 mg、60 mg、80 mg、100 mg、120 mg、140 mg、160 mg、200 mg。試驗(yàn)結(jié)果如下：f 一地代胱氨酸(

12、SeCv52).曬代蛋氨酸(SeUet)Y-甲基柄代半胱氨酸 (SeMeCy :-*，亞仍酸鹽(5eK)(與置)硼御表5中性蛋白酶的不同用量對富硒酹母硒形態(tài)的影響酶的用量3我提眼率011 0&026一2&085.410090.3120了45140605160G4.320072.5圖4中性蛋白酶不同用量對富硒酵母中硒形態(tài)的影響由圖4可知，測出的四種硒形態(tài)在酶添加量小于100 mg時，均隨著酶添加量的增加而增加，在酶添加量大于100 mg時，隨著酶添加量的增加， 硒代蛋氨酸的含量與硒代胱氨酸、亞硒酸鹽和硒酸鹽的含量呈負(fù)相關(guān)變化，造成這一現(xiàn)象的原因可能是：酶的添加量過高，使硒的形態(tài)之間發(fā)生了轉(zhuǎn)化。

13、由表5易知，隨著酶用量的增加，硒形態(tài)的提取率呈先增加后減少再增加的趨勢，在酶的用量為100 mg時，硒形態(tài)的提取率達(dá)到最大值，因此酶的最適 添加量為100 mg。2.2已檢樣品硒的形態(tài)分析總結(jié)樣品名稱測出硒形態(tài)種類富硒龍須米硒代蛋氨酸(Se Met)；硒代胱氨酸(SeCys2)；亞硒酸鹽(Se(W)；硒酸鹽(Se(W)（4種）富硒大米硒代蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）（4種）富硒酵母粉硒代蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）（4種）富硒竹蓀硒代蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸

14、（SeCys2）；甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）2（5 種）細(xì)胞提取液硒代蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）（4種）富硒花生硒代蛋氨酸（Se Met）；硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W）（4種）富硒茶葉硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）（2種）富硒樣品普遍含有硒的四種形態(tài)，包括硒代蛋氨酸（SeMet）；硒代胱氨酸（SeCys2）；亞硒酸鹽（Se（W）；硒酸鹽（Se（W），極少數(shù)樣品會含 有甲基硒代半胱氨酸（SeMeCys），茶葉硒的形態(tài)分析前處理方法仍需進(jìn)一步改進(jìn)。3硒的形態(tài)分析方法結(jié)論（1）目前，我們可以成熟的開展硒的五種形態(tài)分析。（2）目前，我們的硒形態(tài)分析方法提取效果最好的提取條件是：用鏈霉蛋白酶超聲波提取1小時，靜置提取20小時。（2）大部分富硒樣品均含有硒代蛋氨酸，且硒代蛋氨酸的含量均大于硒代胱氨酸的含量。4問題（1）請問有哪些專家對硒的形態(tài)分析方面比較在行的？（2）請問在硒的形態(tài)試驗(yàn)過程中，樣品的硒形態(tài)之間有沒有可能發(fā)生相互轉(zhuǎn)化？引起轉(zhuǎn)化的可能原因有哪些？（3）開展硒的形態(tài)分析試驗(yàn)，需要用到各種硒形態(tài)