1、食物中亞硝酸鹽的測(cè)定目前國(guó)內(nèi)外測(cè)定亞硝酸鹽的標(biāo)準(zhǔn)方法仍為重氮偶合比色法，即在 稀磷酸介質(zhì)中，NO2-與對(duì)氨基苯酰氨（或?qū)Π被交撬幔┓磻?yīng)生成重氨 鹽，再與N.（卜萘基）一乙二胺（或旺一萘氨）偶聯(lián)生成紅色染料，用 光度法進(jìn)行測(cè)定，進(jìn)而求出N0 2-的量。該法雖然有較高的靈敏度和選 擇性，但是所需試劑和顯色反應(yīng)穩(wěn)定性較差，試劑本身都是毒性大的 致癌物質(zhì)，同時(shí)cu2+、Fe3+等對(duì)測(cè)定都有干擾，給測(cè)定帶來(lái)不便。所 以人們一直試圖對(duì)此進(jìn)行改進(jìn)，或建立新的方法體系來(lái)測(cè)定亞硝酸鹽 的含量。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外己報(bào)道的測(cè)定N0 2-的方法很多，有分光光度法、 發(fā)光分析法、催化動(dòng)力學(xué)法、電化學(xué)分析法、色譜分析法等，

2、本文對(duì) 這些方法做分類介紹。其中國(guó)標(biāo)法有：分光光度法分光光度法是N0 2-分析中應(yīng)用最廣泛的方法。光度分析能保持長(zhǎng) 盛不衰的原因很多，主要概括為5個(gè)方面：相對(duì)于其它痕量分析方 法而言，光度法的精密度和準(zhǔn)確度比較高，所以在標(biāo)樣定值及標(biāo)準(zhǔn)方 法中被廣泛采用；光度法比較成熟，可以測(cè)定的元素（包括離子） 很多，比較靈活；光度法有一定的靈敏度和選擇性，比較簡(jiǎn)單、快 速；光度法不需要大型的儀器設(shè)備，不需要過(guò)多的投資，特別適合 我國(guó)的國(guó)情；光度法歷史悠久，普及廣泛，有一支龐大的技術(shù)隊(duì)伍 和雄厚的技術(shù)力量。N0 2-在紫外區(qū)有較強(qiáng)的特征吸收，因而可以直接 用紫外光度法測(cè)定N02-，也有用堿性品紅紫外光度法測(cè)定

3、N0 2-的報(bào)道。， 但靈敏度較低（ =1 . 2x104），干擾嚴(yán)重。但紫外光度法和化學(xué)計(jì)量 學(xué)方法聯(lián)用，在很大程度上解決了譜圖重疊、干擾嚴(yán)重等問(wèn)題，實(shí)現(xiàn) 了多組分不分離同時(shí)測(cè)定。可見光分光光度法測(cè)定N0-；大多基于N0 2- 在較低溫度下的重氮.偶合反應(yīng)和亞硝化反應(yīng)，在水樣及食品分析中 有重要的應(yīng)用（表1-1）。但這些方法大多要使用有毒有害試劑，不僅 危及操作者的身心健康，也會(huì)造成二次污染，因而有一定局限性。訾 言勤等采用Uv-Vis、FT。IR、NMR及電化學(xué)等方法對(duì)含伯胺結(jié)構(gòu)的堿 性染料與N0 2-反應(yīng)機(jī)理進(jìn)行了系統(tǒng)研究，對(duì)于完善和應(yīng)用該類染料以 及建立測(cè)定N0 2-的UV-vis方法

4、和電化學(xué)方法具有重要的指導(dǎo)意義。一 般的光度分析都需要一定的處理轉(zhuǎn)化時(shí)間，很難應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)急分析 和快速分析，近年來(lái)相繼有亞硝酸根的現(xiàn)場(chǎng)快速半定量分析的報(bào)道。 自從1987年Motes等報(bào)道亞硝酸根的催化動(dòng)力學(xué)測(cè)定方法以來(lái)，以檢 測(cè)活化劑為主的動(dòng)力學(xué)光度法頗多，已有綜述l引，在R此不贅述。也 有采用其他顯色體系、流動(dòng)注射光度法、萃取光度法、固相萃取光度 法、固相光度法測(cè)定N0 2-的報(bào)道.值得一提的是，Yord印ov等首次提 出以電子順磁共振譜法測(cè)定食品及水樣中N02-和N03-，方法快速、準(zhǔn)確。表1基于重氮一偶合反應(yīng)和亞硝化反應(yīng)測(cè)定NO,-實(shí)例樣品顯色體系酸度1/niTJi線性益屜文獻(xiàn)水樣N

5、O.對(duì)硝基章跖己酸丙酮530.2.7&-24 郵0mlB水樣正交實(shí)驗(yàn)對(duì)硝基苯碰酸H酸強(qiáng)酸性520,7,50,02 5-ng/ml食品N02-磺跋嗟哩-NEDD酸性546,4.61O.054-0.Sl6pg/mL水樣波長(zhǎng)疊加D.2mol/L HC1560.2940-20郵5抵11639,3,23水樣NO2PNA-MOX*CTMA B稀KI洌，4.72陌第ml水樣NOz-RKIGO稀HC1526a0.02-0.4 g/mlB水樣NOj-AR稀HC1525*23,00,025-0,5 岫1114H酸:l，8氨基萘酚一 3，6-磺酸；NEDD :鹽酸萘乙二胺；VBB :維多利亞藍(lán)B；PNA :對(duì)硝基苯

6、胺：MOX : 2 一甲基一 8 一羥基喹琳；Rh3GO :羅丹明 3GO ； AR :吖啶紅。色譜分析法色譜分析法具有良好的分離能力和較高的靈敏度，比較適合于分 離分析成分比較復(fù)雜樣品。而環(huán)境水樣中一般含有F-，Cl-，Br-，N02-，N0，S032。，S04) , P043。等陰離子，自1975年離子色譜(IC)問(wèn)世 以來(lái)，IC就逐漸取代了其他陰離子測(cè)定方法，成為陰離子測(cè)定的首 選方法，但一般需要配備價(jià)格昂貴的高泵。Havel等運(yùn)用人工神經(jīng)網(wǎng) 絡(luò)(ANN)預(yù)測(cè)亞硝酸根等陰離子的保留行為，于泓等詳細(xì)總結(jié)了各種 類型的非抑制型電導(dǎo)檢測(cè)離子交換色譜(IEC)中的淋洗液，這對(duì)于用 這些方法測(cè)定水

7、樣中 F-，C1-，Br-，N02-，N03-，S032。，S04)，P043- 等陰離子的流動(dòng)相選取及預(yù)處理過(guò)程具有重要的參考意義。表1-5列 出了部分IC法(包括IPC)測(cè)定N0 2-的應(yīng)用實(shí)例。有關(guān)離子色譜法在食 品樣品中無(wú)機(jī)陰離子分析的進(jìn)展可參閱文獻(xiàn)H11。毛細(xì)管電泳(CE)是 20世紀(jì)80年代初期迅速發(fā)展起來(lái)的一種新型分離分析技術(shù)，具有分 離效率高、分析速度快、樣品及試劑用量少等優(yōu)點(diǎn)，利用CE分析水 樣中的N0 2的文獻(xiàn)及食品中N0 2-的文獻(xiàn)都有報(bào)道，另外，也有采用衍 生化氣相色譜(GC)法測(cè)定水樣中的N02-靜電離子色譜(EIC)和毛細(xì)管 電色譜(CEC)測(cè)定亞硝酸根的報(bào)道，限于

8、篇幅，在此不一一例舉。表2離子色譜法測(cè)定N0 2-實(shí)例樺品色譜條件檢測(cè)器文獻(xiàn)水祥IC, DionerAS4A-SCP 柱后 Cc ( IV ) 生化斐光松測(cè)45盤品ICj YSAE8022A-9* 4mmcl/L NajCOj+lnunol/L NaHOOj電尋檢測(cè)m水樣RP-IPC, ODSCJr 甲醇-水 C20： 80), l.Offll/mm紫外-210mn研水樣IC, Iianer Icm-Pac AS16, NaOH 梯度洗脫，I.Oml/mitix 室溫電導(dǎo)檢測(cè)4SIG離子色譜7 RF-1PC：反相離子肘色譜法,工業(yè)及其他檢測(cè)方法有：1.發(fā)光分析法發(fā)光分析法(包括熒光法，化學(xué)發(fā)光

9、法和生物發(fā)光法)具有選擇性 好，靈敏度高，抗干擾能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)。特別是化學(xué)發(fā)光法和生物發(fā)光 法，由于不需要外來(lái)光源，有效地避免了瑞利散射和拉曼散射等噪音， 因而光電倍增管在高壓下工作時(shí)具有比熒光更高的信噪比，且儀器簡(jiǎn) 單易得，分析速度快。該方法的優(yōu)點(diǎn)是靈敏度高、選擇性強(qiáng)、試樣用 量少，且不受檢測(cè)液本身顏色和渾濁的干擾，也不受樣品稀釋度的影 響；但許多物質(zhì)不能直接發(fā))極為敏感，因而應(yīng)用不及紫外?？梢姺?光光度法。文獻(xiàn)檢索表明，近年來(lái)利用發(fā)光分析測(cè)定N0 2-的研究很活 躍，表1-2列出了部分利用發(fā)光分析測(cè)定N0 2-的實(shí)例，而生物發(fā)光法 測(cè)定NO2-未見諸報(bào)道。表3發(fā)光分析法測(cè)定N02 實(shí)例樣品發(fā)

10、光體系Zex/leCnin)酸度城性范圍/靈敏度文獻(xiàn)食品N02-KBrOi-Rh6G催化熒光法42CV550稀磷酸6l30pg/L118水樣二霸基斐】號(hào)二橫酸527/58S稀磷酸0.27-7.3 郵19水樣N6-FTT熨光法4 覷S18pH 7,6。E0D皿20水樣二乙酸苯胺熒光法364,4820.0121水捧Ce IV)學(xué)發(fā)光法OJmol/LHsSOj0r1-40,0pino/L22水樣HiOb魯米諾-NOz海t學(xué)發(fā)光法弱酸性20-1000 pmol/L233食品化學(xué)發(fā)光陣列(KL00|Jg/L網(wǎng)Rh6G :羅丹明6G ； IB-CD : p 一環(huán)糊精；f. 1陌：異硫氤酸熒光 素；RhB

11、:羅丹明B。2.催化動(dòng)力學(xué)法在所有的動(dòng)力學(xué)分析法測(cè)定N0 2-的體系中，以漠酸鹽作氧化劑的體系研究最多。表1-3列出了部分利用動(dòng)力學(xué)分析法測(cè)定N02-的實(shí)例。表4亞硝酸根的動(dòng)力學(xué)分析方法指示反應(yīng)測(cè)定范圍檢測(cè)限應(yīng)用文獻(xiàn)BrO+HY 眼檀04pg/l0 ml乳粉25JBtU.+Jl雀石綠26BrOj-胭脂虻。.58,0|1/2如【K 8句時(shí)嘰水27BtO3+甲基原2. 5x lOEOxI儼響此水納0rO+PGR0.003L000jig/ml水網(wǎng)BrOf+亞甲藍(lán)0頌隔/L水3。BrOj 靛紅2SO ng/ml1.36 nml水31過(guò)避暖鈉卜荔枝紅0J225 n/ml水32指示物多為染料類有機(jī)物。檢測(cè)

12、方法主要為光度法、熒光法，也 有用電化學(xué)方法檢測(cè)的。常用的指示物根據(jù)結(jié)構(gòu)可分：三苯甲烷堿 性染料。醌亞胺婁染料。三苯甲烷酸性染料。其它類試劑主要有 偶氮類試劑。除KBr0 3氧化有機(jī)試的指示反應(yīng)外，其它類的指示反應(yīng) 研究較少。常見的有H2O2作氧化劑的體系，K104作氧化劑的體系等。 從表l 一 3可以看出，雖然動(dòng)力學(xué)分析研究較早，但用于N0 2-的測(cè)定是 在80年代才發(fā)展起來(lái)的。近年來(lái)，文獻(xiàn)報(bào)道越來(lái)越多，發(fā)展迅速。這 些方法幾乎都是根據(jù)N0 2-對(duì)某些氧化還原反應(yīng)的催化作用進(jìn)行的。電化學(xué)分析法與光度法相比較，電化學(xué)法有自身的特點(diǎn)：儀器簡(jiǎn)單，操作簡(jiǎn)便， 分析速度快.近年來(lái)，采用極譜法測(cè)定N0

13、2-；已經(jīng)有不少報(bào)道，但由 于其還原電位太低，直接測(cè)定有一定的困難，故大多為間接法，主要 有3類：利用N0 2-與變價(jià)金屬離子形成配合物，催化變價(jià)金屬離子 電還原產(chǎn)生的極譜催化波來(lái)直接測(cè)定N0 2-；利用N0 2-與某些有機(jī)物 形成電活性的亞硝基化合物來(lái)間接測(cè)定N0 2-；利用N0 2-與某些有機(jī) 物形成重氮化合物或偶氮化合物來(lái)間接測(cè)定N0 2-，且隨著化學(xué)修飾電 極(CME)的出現(xiàn)更是拓寬了電化學(xué)法的分析對(duì)象，其選擇性、重現(xiàn)性 也優(yōu)于普通電極。表1-4列出了部分極譜法測(cè)定N0 2-實(shí)例。表5極譜法測(cè)定N0 2-樣品極譜體系】)酸度峰電位2)城性苑圍文獻(xiàn),水樣N0-碰肢重氤鹽-N, M二甲基戢技pH 10.00.0006-0.07mg/L331水樣NOj磺胺重氤鹽-XO二階導(dǎo)數(shù)pH 1。,1-0,650.32心 mg/L341水樣NOz MV亞硝化2.5次微分ImnLT HC1OJS2-20 pg/L35人樣NCV-KB1C3璃冠紅稀 H2SO4#一350.6-14.0 ng/ml國(guó)水洋NOj-NHSCN-HjSO稀H疝6-0.470J-50pnoL/L【37水樣NOj-HA-OXpH 9.0-0.630.0M,5 闡