1、環(huán)境消毒方法及效果的驗證（一）滅菌與消毒醫(yī)藥工業(yè)潔凈室與其他工業(yè)潔凈室有所不同，特別是無菌生產，不僅要控制空氣中一般的懸浮狀態(tài)的氣溶膠粒子，還要控制活微生物數(shù)，即提供所謂“無菌 ”環(huán)境（無菌室）。另一方面，不能認為進入潔凈室的空氣無菌了，室內各種表面就不沾污細菌了。如果這些地方有營養(yǎng)源，細菌繁殖的可能性就存在。在潔凈室中人體是主要菌源之一，不僅皮膚帶有細菌（其中約1%為病原性的），人通過呼吸、講話也會散布細菌，所以在潔凈室中除戴口罩外，對潔凈室表面消毒仍是一個重要措施。按理說，在空氣凈化系統(tǒng)中，送入經高效過濾器過濾的空氣，可以使房間的微生物數(shù)控制在規(guī)定的范圍內。其實不然，實際生產時由于機器的運

2、行、人員的進出，建筑物的表面均會產生塵粒，從而滋生細菌并極易再吹落，特別是人員的污染幾乎是唯一的細菌來源，一個人每小時約散發(fā)1000只死皮細胞（等價于20m 大小的粒子），因此潔凈室的室內建筑材料、設備等應能經受藥物的消毒滅菌處理，潔凈服的衣料要選用不產生靜電或經防靜電處理的材料，潔凈服的洗滌、涼干、包裝必須在潔凈環(huán)境中進行，無菌衣要經高溫消毒滅菌，人員、設備、儀器進入無菌室應作嚴格的消毒滅菌處理（人手需用消毒藥物浸泡或噴灑），需定期進行室內消毒滅菌操作。各國GMP 均對潔凈室中空氣浮游菌及表面細菌有嚴格的規(guī)定，如美國藥典（ 1991 年 10月）建議潔凈環(huán)境中的細菌允許值如下表所示。美國藥典

3、（1991 年 10 月）建議的潔凈環(huán)境中細菌允許值手套其他100 級13331000 級及10000級55510100000 級8710（地板）1530潔凈度級別浮游菌數(shù)/CFU m-3表面細菌數(shù)/ CFUin-2 人體細菌數(shù)/CFU in-22030（地板）注：1 CFU/in2 =1550 CFU /m2 藥品生產時由于在潔凈室的地面、墻面、頂棚、機器、人體及衣服表面可能有活微生物粒子存在，當溫度、濕度合適時，細菌即在這些表面繁殖，并不時被氣流吹散到室內，因此潔凈室(特別是無菌室)一般不安排三班生產，每天必須有足夠時間用于清潔、消毒。消毒和滅菌是兩個概念。滅菌(Sterilization

4、 )、除菌(Disinfection )和消毒( Sanitization )這三個經常被誤用的詞必須加以區(qū)別。滅菌和除菌是絕對化的術語。滅菌是指殺滅或不活化所有生命形式；除菌則是破壞或不活化致病微生物的傳染，但在應用于細菌孢子時往往無效。滅菌法是對無菌制劑等生產過程中的滅菌，常用的方法有：濕熱滅菌法，可用無菌保證值SAL( Sterility AssuranceLevel )來表示效果；干熱滅菌法；除菌滅菌法；輻射滅菌法；環(huán)氧乙烷滅菌法。監(jiān)測滅菌效果往往使用生物指示劑 一種標準的對滅菌條件穩(wěn)定的微生物。而消毒可以說是減少微生物數(shù)量，使之達到安全或相對安全水平，而與使用規(guī)定和使用目的相符合?？?/p>

5、微生物劑是一種用來抑制微生物繁殖或消滅微生物的試劑的總稱，它包括：消毒劑能消除以細胞繁殖形態(tài)出現(xiàn)的微生物污染的化學試劑；滅菌劑殺滅在無生命環(huán)境內的所有微生物生命形態(tài)的化學試劑；除菌劑用來消滅在無生命物體上的病原體的抗菌劑；殺菌劑可按具體作用分類：殺細菌的稱為殺細菌劑；殺霉菌的則稱之為殺霉菌劑；殺病毒的則稱之為殺病毒劑；殺孢子的則稱之為殺孢子劑；抑菌劑僅是抑制微生物生長的化學試劑。因此滅菌和消毒是不可互換的術語，消毒劑在定義上也并不意味著是滅菌劑。消毒是消滅來自繁殖形態(tài)的細胞的活微生物的污染，但它不保證滅菌。(二)消毒劑的選擇和配制1消毒劑的選擇在選擇一種消毒劑時，首先要了解消毒劑的性質，但同時

6、又應該認識到沒有一種消毒劑是完全理想的。細菌學家建議理想的消毒劑應該具備以下特征：能廣譜地殺滅微生物；對人體無害；無腐蝕性，對設備無污染；具有洗滌劑作用；具有穩(wěn)定性；作用迅速；不因有機物的存在而失去活性；產生所期望的后效作用；廉價。各種試劑都有優(yōu)點和局限性，應選擇一種試劑或幾種試劑結合使用，以最低成本獲得最大效果。2無菌室常用消毒劑的配制無菌室所使用的消毒劑應在凈化工作臺上配制，需過濾的應準備好已滅菌（ 122.1，45min）的濾膜及容器。過濾好的消毒劑應在盛放瓶上注明消毒劑名稱、批號、配制日期及失效期，放在無菌室中。 75%酒精（Alcohol ）溶液（體積分數(shù)）的配制先用定性濾紙過濾95

7、%的乙醇溶液，再將冷卻的注射用水加到濾過的乙醇溶液中充分混合，直到酒精比重計讀數(shù)為75%。將配制好的溶液用0.22 m 混合纖維素脂微孔過濾膜過濾后，放入已滅菌的瓶中待用。此溶液須在48h 內使用。 0.1%（體積分數(shù)）新潔爾滅（Dodecy Dimethyl Benzylammonium Bromide，DDBB ）溶液的配制在 49ml 的注射用水中加入1ml 的 5%新潔爾滅溶液并攪拌均勻，將配制好的溶液用 0.22 m混合纖維素脂微孔過濾膜過濾后放入已滅菌的瓶中待用。此溶液須在48h 內使用。 Exspor溶液的配制按注射用水Exspor基質濃縮劑Exspor活性濃縮劑為4 1 1（體

8、積比）的比例混合并攪拌均勻。注意次消毒劑須放在非金屬容器中配制，注射用水溫度用小于20。將配制好的溶液用0.22 m混合纖維素脂微孔過濾膜過濾后放入已滅菌的瓶中待用。此溶液須在72h 內使用。 1%（體積分數(shù)）Germ Warfare滅菌溶液的配制在 990ml 注射用水中加入10ml 的 Germ Warfare溶液并攪拌均勻。將配制好的溶液用 0.22 m混合纖維素脂微孔過濾膜過濾后放入已滅菌的瓶中待用。此溶液須在72h 內使用。 5%（質量分數(shù)）麝香草酚（Thymol）溶液的配制在95g的50%乙醇溶液中加入5g麝香草酚并攪拌均勻。此溶液不必過濾，但須在24h 內使用。此消毒劑主要用來殺

9、霉菌。2%（質量分數(shù)）戊二醛（Glutaric Dialdehyde）溶液的配制在 250g的 20%戊二醛溶液中加入注射用水至2500g，再加入1.3g緩沖劑并攪拌均勻。此溶液不必過濾，但須在24h 內使用。（三）主要消毒和滅菌方法1干熱法是在干燥空氣中加熱處理的方法，基于高熱作用下的氧化作用破壞微生物的原理，一般需要的溫度高達160以上，時間長達12h。2濕熱法是用高溫濕蒸汽（通常為飽和蒸汽）的滅菌方法，基于濕熱作用下使細菌細胞內蛋白質凝固的原理，一般需要的溫度比干熱法低，時間也短，例如121、12min 或134、2min。3藥物法是用某種氣體或藥劑進行熏蒸或擦洗，其效果與藥物種類及細菌

10、對其敏感程度有關。一些藥物對一些材料有吸附侵蝕作用。例如常用的氧化乙烯，是一種良好的滅菌劑，雖不能浸透固體，但可被塑料、橡皮之類吸收，這就需要根據(jù)潔凈室的使用對象選用合適的材料。但不要長期使用一種消毒劑，應定期更換，以防止耐藥菌株的產生。4電磁輻射法基于破壞細菌的蛋白質、核酸（脫氧核糖核酸，即DNA）以及被吸收后的熱效應等原理。紫外線滅菌就是這種方法之一。5紫外線消毒在其他消毒方法未使用之前，是一個不可代替的必備的消毒方法，為藥品生產企業(yè)普遍采用，主要用在潔凈工作臺、層流罩、物流傳遞窗、風淋室乃至整個潔凈房間的消毒。紫外線的殺菌力取決于紫外線的波長，短波具有殺菌力，長波可能對人體有害，所以它的

11、使用受到限制。紫外線波長為136390nm，消毒用的紫外燈應限制在短波的波長范圍內，以253.7 nm的殺菌力最強，但由于制造長測定波長比較困難，故發(fā)展不快。據(jù)國外最新研究表明，紫外線滅菌仍有廣闊的前景，具有安裝方便、無耐藥菌株產生等特點，關鍵是解決短波的測定問題。還有一種方法是采用氣相循環(huán)消毒滅菌。如果能讓空氣有組織地循環(huán)流過紫外燈的有效照射區(qū)，既增加了紫外線對空氣的照射時間，而又設法不讓紫外線外泄傷人，并且不產生臭氧，因此紫外線對空氣的消毒作用就大大提高了。6臭氧消毒臭氧（O3）的消毒原理是：臭氧的常溫、常壓下分子結構不穩(wěn)定，很快自行分解成氧（O2）和單個氧原子（O），后者具有很強的活性，

12、對細菌有極強的氧化作用，可氧化分解細菌內部氧化葡萄糖所必需的酶，從而破壞其細胞膜，將它殺死。多余的氧原子則會自行重新結合成為普通氧分子（O2），不存在任何有害殘留物，故稱無污染消毒劑。臭氧不但對各種細菌（包括肝炎病菌、大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌）有極強的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效。生產臭氧的原料主要是空氣和電能，一般通過高頻臭氧發(fā)生器（電子消毒器）來獲得。消毒時直接將臭氧發(fā)生器置于房間中即可?？諝庵惺褂贸粞跸镜臐舛群艿停挥邪偃f分之幾，可根據(jù)房間體積及臭氧發(fā)生器的臭氧產量來計算得到。7氣體消毒對環(huán)境空氣滅菌的傳統(tǒng)做法是采用某種消毒液，在一定條件下讓其蒸發(fā)產生氣體來熏蒸。常用的消毒液有甲醛

13、、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、石炭酸和乳酸的混合液等。8消毒劑消毒潔凈室的墻面、天花板、門、窗、機械設備、儀器、操作臺、車、桌、椅等表面以及人體雙手（手套），在環(huán)境驗證及日常生產時應定期清潔并用消毒劑噴灑。常見的消毒劑有異丙醇（75%）、乙醇（75%）戊二醛、潔爾滅等。我國藥廠無菌室消毒的傳統(tǒng)方法是用甲醛熏蒸。國外因認為甲醛對人體有一定的危害，現(xiàn)普遍采用戊二醛（Glutaraldehyde）噴灑，起方法是將戊二醛放在帶有時間控制的自動噴霧器中，在下班后或周末，無菌室內無人時自動噴灑，其噴灑量可以調節(jié)，時間可以設定，在噴灑期間空調系統(tǒng)應停止工作。二、 效果的驗證清潔和滅菌是驅除微生物污染的主要手段，但必

14、須保證清潔及滅菌的徹底性，因此藥品生產企業(yè)必須制定清潔與滅菌規(guī)程，并定期進行驗證，以確保清潔與滅菌的有效性。清潔與滅菌往往是聯(lián)系在一起的，總是在房間清潔之后再進行消毒，消毒結束后再次清潔。對于環(huán)境消毒效果驗證的內容有：消毒條件，方法，所用介質，清潔劑，滅菌劑及濃度，消毒設備，消毒時間以及最后的環(huán)境監(jiān)測。消毒方法驗證的要點各種消毒方法均需用到消毒設備，因原理不同各有特點。1紫外燈消毒驗證的要點紫外燈的殺菌力隨使用時間的增加而減弱，若紫外燈使用超過平均壽命時，就達不到預期效果，則必須更換。國產紫外燈平均壽命一般為2000h。紫外燈的殺菌作用隨菌種不同而不同，殺霉菌時的照射量要比殺桿菌時大4050倍

15、。紫外燈通常按相對濕度為60%的基準設計，室內濕度增加時，照射量應相應增加。紫外線強度要求在操作面上達40 W/cm2 以上。因此紫外燈消毒方法驗證中紫外燈需確認的參數(shù)主要有紫外線的波長、紫外線強度、燈管的壽命。此外，紫外燈消毒的效果照射的時間長短有關，這需通過驗證來確定。2臭氧消毒驗證的要點臭氧消毒效果的驗證中需確定和校正的臭氧發(fā)生器技術指標主要有臭氧產量、臭氧濃度和時間定時器，并通過最終檢驗細菌數(shù)來確定消毒時間。消毒效果的驗證方法各種消毒方法的效果需通過驗證來得到證實。比如說如何使用消毒劑？噴灑法、煙霧法或者浸潤法哪種更好？接觸時間需多長？溫度和PH值也是需估計的因素，因為它們能影響消毒的

16、速度。提高溫度、降低PH值，有時能提高消毒劑的活性，但這取決于使用河種消毒劑。消毒劑是否與被處理的表面相接觸？消毒劑殘留存在的意義和給制造帶來的污染的風險都是極端的重要考慮因素。一般來說陶器、大多數(shù)玻璃和不銹鋼能經受大多數(shù)化學消毒劑。在選擇一種試劑前必須有一個對生產區(qū)所用材料，如墻壁、天花板和地板涂層的相溶性及關于腐蝕性、玷污、氣味等方面的研究。在選擇消毒劑及其使用方法時，比受處理材料表面特性更為重要的是被殺滅的微生物種類。許多消毒劑只對特定的生物體（如對革蘭陰性菌、霉菌等）有效，可發(fā)現(xiàn)有些菌種對消毒劑有抵抗力或極少受藥劑的影響。各種化學消毒劑獲得最大效果的條件各不相同，但重要的影響因素包括：

17、 PH值；溫度；濕度；使用稀釋劑性質；濃度；有機物的存在；接 觸時間。通常消毒作用隨溫度的升高而增強，因為其對微生物的作用猶如一個化學反應。消毒劑可殺滅微生物，也可能只起抑制劑作用，這很大程度上取決于它的濃度。提高消毒劑的濃度通常能提高其殺滅效果，但是某些稀釋的消毒劑會被某些微生物代謝，例如假單孢桿菌菌種會對酚類化合物起氧化作用。在評估消毒劑使用范圍時，應重視交替使用消毒劑。由于事實上沒有一種理想的消毒劑，所以考慮使用兩種以上消毒劑是明智的。交替使用消毒劑在理論上有利于防止形成相同環(huán)境的分離菌或抑制菌的適應性。如果交替使用是必要的，就應該決定交替頻率。方法之一是當具體試驗數(shù)據(jù)顯示需要輪換時就及

18、時輪換消毒劑，另外可采用到一定周期（每周或每月等）就輪換的方法。常用的消毒效果驗證主要有指示劑試驗和表面污染試驗等方法。用生物指示劑進行細菌挑戰(zhàn)性試驗生物指示劑（BI ）菌種可選用枯草芽孢桿菌孢子，在使用前要測定其初期菌數(shù)，應不少于10 個。在消毒滅菌前，將裝有BI 表面皿置于各被測房間內的中央地面，滅菌前打開表皿，滅菌結束后，回收BI 放入大豆酪素消化液體培養(yǎng)基中，在37下培養(yǎng)3天，看細菌是否被殺滅。若沒有細菌生長，則為合格。表面污染試驗表面微生物污染試驗的方法只要有真空吸引法、培養(yǎng)皿接觸法（Rodac Plate取樣法）、棉簽擦抹法和浸漬法等。真空引吸法使吸引噴嘴接近需檢查的表面，隨同空氣

19、吸引附著于物體表面的粒子，并用無菌的薄膜過濾器過濾，以任何方式進行培養(yǎng)，從而測得細菌的數(shù)量。此方式在藥品生產企業(yè)用得較少。培養(yǎng)皿接觸法培養(yǎng)皿接觸法（Rodac Plate 法）最為簡單，但僅適用于平的表面。盤內滅菌的瓊脂（通常直徑為50mm）直接與設備表面接觸，然后加蓋在預定時間內和規(guī)定溫度下（例如30 35或20 25）進行培養(yǎng)，用肉眼對微生物計數(shù)并識別，如必要還得鑒別菌種。此方法要求將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中并使之隆起，要做到這一點操作上比較困難。棉球擦抹法這是一種簡單可行的方法，為制藥企業(yè)普遍采用。消毒結束后，可對潔凈室內的機械表面、內部及縫隙間、墻壁、窗臺、試驗臺等表面的一定面積，用事先經過

20、滅菌的生理鹽水、精致水和緩沖液（例如磷酸緩沖生理鹽水）潤濕的適當大小的滅菌紗布或滅菌脫脂棉充分擦拭，然后放入廣口瓶，加一定量浸出液振搖（或作超聲波洗滌），再對浸出液進行菌的培養(yǎng)。棉簽取樣能用于Rodac盤無法進行取樣的場合，例如角落、縫隙等處。棉簽可以由棉花和滌綸制成。如果棉簽是由海藻酸鈣做成的那就最好不過了，因為這種材料可溶于稀釋液，這樣便于將微生物釋放在溶液中。浸漬法棉簽先用滅菌稀釋液（如注射用水）濕潤，然后擦拭取樣區(qū)域，最后放入到一個裝有經預測試的滅菌稀釋液的試管中。樣品應盡快進行測試，以免在稀釋液中增加微生物數(shù)量。試管經攪動從棉簽上釋放出微生物，稀釋液則注入培養(yǎng)基盤內，經培養(yǎng)，然后計數(shù)

21、并鑒別。消毒效果驗證實例【示例 1】甲醛氣體熏蒸消毒的驗證甲醛消毒方法在所有的消毒液中甲醛最為常用。當相對濕度在65%以上、溫度在24 40時，甲醛氣體的消毒效果最好，但若采用過多的甲醛，會因聚合而析出白色粉末附著在建筑物或設備表面。一般甲醛的消毒方法如下。消毒前先用絲綢浸注射用水擦洗房間建筑物表面和設備表面，然后用5%麝香草酚溶液噴灑和擦洗，靜止1h 后，再用絲綢浸注射用水再擦洗一次。計算體積（包括房間和風管體積），按10ml/m3 的比例準備濃度為36%的甲醛溶液（甲醛密度約為1.1g/ml），按2 3g/ m3的比例準備高錳酸鉀溶液。在房間中放入試驗裝置，如不銹鋼培養(yǎng)皿支架； 90mm雙

22、碟玻璃培養(yǎng)皿；枯草桿菌（TESPER-G）試紙，每張試紙上枯草桿菌數(shù)量為1 106個，每個培養(yǎng)皿中放兩個試紙，1 張做無菌試驗，1 張做含菌數(shù)試驗。培養(yǎng)皿的數(shù)量應根據(jù)房間面積確定。消毒流程：在不銹鋼容器中加入高錳酸鉀，用雙層紗布蓋住桶口，再倒入36%濃度的甲醛溶液甲醛氣體擴散（約30min） 啟動空調器讓甲醛氣體循環(huán)（約20min） 關閉通風系統(tǒng)，房間熏蒸消毒，時間不少于7h房間排氣，用新鮮空氣置換（約2h） 開啟空調系統(tǒng)用 75%酒精噴灑環(huán)境。質監(jiān)部門取樣培養(yǎng)。判斷標準：試紙內枯草桿菌數(shù)量小于1103個為合格。取樣后用絲綢沾0.1%的新潔爾滅溶液擦洗機器表面；用0.1%新潔爾滅溶液或1%Ge

23、rm Warfare溶液或75%酒精噴灑建筑物四周。0.1%新潔爾滅溶液與1%GermWarfare溶液每月輪換一次，即三周用0.1%新潔爾滅，一周用1%Germ Warfare。氣體熏蒸滅菌后室內環(huán)境中殘量的測試用甲醛氣體進行熏蒸滅菌后，需用全新空氣換氣若干小時，由于甲醛的環(huán)境標準只有（ 1 2） 10-6，要使環(huán)境中殘留的甲醛濃度盡可能低至不致使人嗅出特殊臭味 0.5510-6 ，并對眼睛無刺激0.1 10-6 ，然后根據(jù)測定的室內環(huán)境中甲醛殘留量結果，正確設定換氣時間，以保證在達到作業(yè)環(huán)境中無菌的前提下，對人身心健康不致產生不良影響。取樣方法及取樣量在各取樣場所，用約30ml 的塑料待收

24、集室內空氣，將袋內空氣用由吸收瓶、泵、氣流計等組成的裝置捕集至瓶內吸收液中（樣本數(shù)應3 ）。供試液的配制取 0.5%硼酸溶液20ml 作為吸收液，用溶液吸收法，以1L/min 的速度分別讓各取樣場所的空氣通過10min，然后將吸收液移至25.0ml 的容量瓶中，加水使成25.0ml，即得。試驗操作取供試液2.0ml 至帶栓試管中，加5mol/L 的 NaOH 溶液 2.0ml 及 AHMT 溶液2.0ml，輕搖數(shù)次混勻后，室溫放置20min。然后加KIO4 溶液 2.0ml，搖2 5min至無氣泡生成為止；同時用水2.0ml 同法制成對照液，在波長550nm附近測最大吸光度。分別取甲醛標準液0

25、、 0.5ml、 1.0ml、 1.5ml、 2.0ml、，加水使成2.0ml，然后按操作，測定吸光度，制出甲醛濃度（ g/ml）與吸光度的關系檢量線。環(huán)境中的甲醛濃度（10-6）可由下式求出： 22.4 273+t甲醛濃度（10-6） =a 2530.03 273V式中a 供試液中甲醛濃度， g/ml; TOC o 1-5 h z V 采樣氣體量，L ；t 采樣時平均溫度，；22.4 1mol氣體在 0、1 個大氣壓(101.325Kpa)下的體積，L；30.03 甲醛相對分子質量；25 供試液全量，ml。試液準備甲醛標準液a甲醛稀釋液：精取中國藥典中規(guī)定“甲醛溶液 ” 1 m，加水準確至

26、l200 ml 作為甲醛稀釋液。精取該液10 ml 至碘瓶內，準確加0.1mol/L 碘液 50ml，再加 1mol/L氫氧化鋰溶液20 ml。避光放置15min 后，加 15 ml 的 10%硫酸，用硫代硫酸鈉液( 0.1mol/L)滴定。另用水10ml 進行空白試驗。( VA-VB ) 1.5013甲醛稀釋液中的甲醛濃度(mg/ml) =10 TOC o 1-5 h z 式中 VA 甲醛稀釋液消耗0.1mol/L 硫代硫酸鈉液量，ml；VB 空白試驗消耗0.1mol/L 硫代硫酸鈉液量，ml；1.5013 1 ml碘液( 0.1mol/L)相對甲醛量，mg；10 甲醛稀釋液取樣量，ml。b

27、甲醛標準液：精取甲醛稀釋液，加水準確稀釋1000倍，即得。 AHMT 溶液取 4-氨基-3-肼 -5-巰基-1， 2， 4-三唑0.5g,加 0.2mol/L 鹽酸 100 ml溶解，避光保存。需要說明的是，用甲醛消毒時也有不加高錳酸鉀，而將甲醛直接放入空調器內送入房間及用氨水中和的方法。不管采用什么方法，只要經過驗證是可行的，都可以使用。【示例2】潔凈室（區(qū)）臭氧消毒的驗證臭氧消毒方法臭氧消毒一般分為系統(tǒng)消毒及局部消毒，如單個緩沖間、傳遞間等。通過空氣凈化系統(tǒng)（HVAC ）對房間進行消毒。根據(jù)潔凈室（區(qū)）體積和HVAC 系統(tǒng)的風管體積（或風量）、臭氧殺菌效果選用相應的臭氧發(fā)生器?？蓪⒅鳈C置于

28、空調系統(tǒng)的總送風管或回風管道的合適位置，電源控制系統(tǒng)置于機房內。消毒時關閉相應的新風進口和回風排放閥門，使整個被消毒的潔凈區(qū)空氣通過凈化系統(tǒng)風管形成循環(huán)，臭氧發(fā)生器即開始工作。如每日做空氣滅菌，一般可開機1 1.5h；如每周以臭氧替代化學試劑熏蒸對表面、墻壁、地面及設備滅菌，一般可開機2 2.5h。其優(yōu)點是：在被消毒的房間里不需要增加任何消毒設備，即可達到規(guī)范標準的要求，保持良好的工作環(huán)境，也可直接安裝在空氣處理設備中，使臭氧發(fā)生器的安裝與維護變的更加簡潔和方便。臭氧發(fā)生器直接放在房間使用。2臭氧發(fā)生器消毒的計算以選擇合適的臭氧發(fā)生器為前提，設潔凈室（區(qū)）體積為V1 ， HVAC 系統(tǒng)風管容積

29、為V2， V3 為保持潔凈區(qū)正壓所補充的新風的臭氧消耗量。則消毒空間體積為：V= V1+ V2+ V3式中 V3 的確定根據(jù)消毒實踐，歸納出較為可靠的經驗公式如下：V=HVAC 系統(tǒng)循環(huán)總風量（m3/h） 25%（假定新風補充量為25%） 10%（保持潔凈區(qū)正壓需補充的新風量） 37.75%（計算應用臭氧半衰率的預算值）即：V 系統(tǒng)循環(huán)總風量 0.944%3臭氧發(fā)生器的選擇先按臭氧滅菌的效率和消毒技術規(guī)范的標準決定臭氧的濃度（C）：對空氣中浮游菌，臭氧滅菌濃度為（2 4） 10-6；對物體表面的沉降菌，為（10 15） 10-6（臭氧滅菌濃度參考衛(wèi)生部1991 年 12月頒布的消毒技術規(guī)范）。

30、臭氧的半自然半衰期（S）參比狀態(tài)下為20min 左右； 1h的衰退率為62.25%；設計應用臭氧滅菌60min 達到相對濃度后，繼續(xù)保持一段時間（1 1.5h），即可達到對機器設備和建筑物表面沉降菌殺滅的目的。例如，消毒空間體積（V）為600m3,要求殺滅設備和建筑物表面沉降菌。按照上述要求空氣中臭氧的濃度（C）應達到10 10-6，折算為19.63mg/ m3。臭氧發(fā)生器在工作 1h 后臭氧自然衰退率（S）為62.25%，則選擇臭氧發(fā)生器的臭氧發(fā)生量W（ mg/h）：CV 19.63 600W= = = 31200（mg/h1 S 1 0.6225【示例3】工器具進入無菌室前的消毒驗證工器具進入無菌室前必須在設備氣閘室（也叫緩沖間、空氣鎖）內先進行消毒，而人員不得通過設備氣閘室直接進入無菌室。設備氣閘室的兩個門無論在什么時候都不能同時敞開，否則便回將無菌區(qū)暴露于外環(huán)境，以至危及無菌室