1、SUTTER公司P-97微電極拉制儀使用說明一前后面板（按鈕、開關、旋鈕）控制的功能及作用1前面板LCDDisplay：顯示程序參數(shù)Reset：初始化復位控制AirPressure：在拉制周期的有效制冷狀態(tài)期間設置空氣壓力的值Keypad：用于設置程序參數(shù)值和執(zhí)行程序09：用于選擇所要的程序或控制功能，當程序設計時輸入數(shù)字值和作決定是/否（Yes/No）（1/0）CLR：進入某個程序后本鍵用于刪除程序或數(shù)值，也用于作坡度測試（RAMPTEST）的入口ENTER：回車，確定新數(shù)值或程序NEXT：編輯時移動到程序的下一行LAST：編輯時移動到程序的上一行PULL：開始執(zhí)行程序STOP：終止執(zhí)行程序

2、LEDDisplay顯示：Program（0-9）：個程序由一行（Cycle）或多行組成（一個Cycle包括4個程序參數(shù)：HEAT、PULL、VELOCITY、TIME，一個Cycle相當于一行程序代碼）。當執(zhí)行拉制一支嵌入儀器的毛細玻璃管時，一個程序能連續(xù)拉16Cycles長度。HEAT：HEAT是控制一個供給加熱片的電流水平，設置加熱片的功能，使之能熔化特定的玻璃管（組成物質(zhì)及大小），在操作部分討論坡度測試的相對值很重要，它就是你所要的加熱（HEAT）值。PULL：Pull控制強加給的拉力，一般較高的pull值會產(chǎn)生較小的和較長的錐形尖端。VELOCITY:拉制桿移動速度達到一定程度，拉斷

3、電極。TIME：TIME控制有效的制冷空氣時間長度。2后面板說明1）電壓轉換器，國內(nèi)使用220V,應使對準220V。2）電源接口及保險絲（電源開關在左側面）。二安裝及使用1使電壓對準220V，并插上電源線。2打開左側的開關。3安裝玻璃管。4運行RAMPTEST坡度測試，這測試是讓你確定加熱值，加熱值能夠熔化玻璃但又不至于燒斷加熱片。當你第一次使用拉制儀或更換加熱絲、更換不同型號的玻璃時，都應該作RAMPTEST坡度測試，然后把RAMPTEST的值當做你的新編輯的程序的HEAT值。下面是運行RAMPTEST的步驟：*進入任一程序（按0-9Enter回車）。*按清除鍵vCLR進入控制功能。*按0不

4、要清除參數(shù)數(shù)值。*按1即能運行RAMPTEST坡度測試。*安裝玻璃管和按vPULL。*記錄RAMPTEST值，將用于設置HEAT。運行RAMPTEST時，將有以下現(xiàn)象發(fā)生：*HEAT值逐一增加。*當加熱值達到一定程度開始軟化玻璃時，拉制桿將有小的移動；*當移動速度達到一定程度，加熱關閉。*RAMPTEST值也不再增加并顯示出來。做完RAMPTEST后記下它的值按RESET。進入0顯示程序0,光標將閃爍在HEAT，檢查參數(shù)是否符合RAMPTEST值，否則改變它，按PULL。松開夾子旋鈕拿出微玻璃管。*按RESET退出程序0；*按1進入程序1再做測試。*Y*、八，I/r-.r*三.注意事項1，安放

5、加熱片要在吹氣孔的正中間，不能和微玻管有任何接觸。2，程序0、程序1是系統(tǒng)設置的程序，配合隨機器的微玻管作顯示用，用戶要根據(jù)自己的需要先通過RAMPTEST確定HEAT值，再不斷調(diào)整PULL、VELOCITY.TIME值，使之做一步二步甚至多步拉制達到自己的應用目的。（詳細使用請查閱英文使用說明書）電極拉制手冊（1）目錄（2010-10-1321:45:40）轉載目錄1）玻璃微管的選擇2）拉制儀的結構與拉制原理3）P-97電極拉制過程4）功能參數(shù)設置5）膜片鉗電極的拉制6）P-97的日常維護a.鉑金片的更換b.干燥劑的更換玻璃微管的選擇我們一般都是選用Sutter公司生產(chǎn)的硼硅酸鹽硬質(zhì)玻璃管。

6、我們現(xiàn)在選用的是：BF120-69-15:這是產(chǎn)品貨號其中B為Borosilicate（硼硅酸鹽）的縮寫表示硬質(zhì)玻璃、F為Filament的縮寫表示為有芯的玻璃毛胚管、120為外徑1.2mm、69為內(nèi)徑0.69mm、15為玻璃管的長度15cm。選用15cm的玻璃管是最為劃算的，這是在中科院神經(jīng)所所了解到的。Sutter的電極有三種長度分別為15,10,7.5cm他們的價格相差不多但15cm的點擊可以截為兩段也就能讓其成本降低了一半。但這樣存在一個問題！Sutter的玻璃管兩端是經(jīng)過加熱處理的，所以很光滑。我們使用砂輪在玻璃管正中磨一下然后輕輕將玻璃管掰開，經(jīng)過聯(lián)系可以讓斷口較平整。但斷口就會非

7、常的鋒利，在使用是會將記錄電極銀絲上的AgCl鍍層刮掉。為了解決這一問題我們使用酒精燈適度加熱斷口斷口微微燒紅后就可以讓其變得光滑了。在做腦片膜片鉗的實驗時，我推薦使用外徑1.2的玻璃管。因為腦片膜片鉗要使用正置顯微鏡工作空間狹小選用細一些的電極可以略微的彌補空間狹小的問題。在單細胞的試驗中也可以選用BF150-86-15外徑1.5的玻璃管，具體就要看你自己的喜好了。此外我們還是用過WPI的玻璃管，其也有規(guī)格同Sutter相似的，使用起來沒有什么明顯區(qū)別。探嚴重推薦上面所提供的厚壁玻璃管，Sutter還有相應的薄壁玻璃管十分的不好用，很難拉出理想的電極。不推薦國產(chǎn)的玻璃管（如南京六和，北京正天

8、易等），它們的玻璃管內(nèi)壁沒有經(jīng)過妥善的清洗會有污染致使拉出的電極封接成功率比較低。雖然它們的比較便宜但電極損耗大綜合起來成本并沒有優(yōu)勢，并會嚴重影響你的實驗效率和心情！拉制儀的結構與拉制原理Sutter公司的P97拉制儀是現(xiàn)今十分常用的電極拉制儀，它的電源開關在機身的左側面的前部，使用起來還是蠻方便的。其結構如圖：SUTTERINSTRUMENTCO干燥罐2,電極加熱室3,牽拉臂4,顯示屏5,數(shù)字操作鍵盤6,復位按鈕其可大體分為四個系統(tǒng)：1加熱系統(tǒng)，在電極加熱室（2）中有鉑金片通電后用來融化玻璃管。2空氣冷卻系統(tǒng)，壓縮的空氣進入干燥罐（2）然后再通過管道從鉑金片下的小孔吹出用于冷卻鉑金片。干燥

9、的空氣可以電極加熱室中的濕度降低以減少空氣濕度對拉制的影響。3機械拉制系統(tǒng)，兩側牽拉臂（3）可以控制拉制時的力度和速度。4電子控制系統(tǒng)，（4.5）用于控制拉制時的各種參數(shù)。四個系統(tǒng)相互配合以完成精密的拉直過程見下篇。P-97電極拉制過程加熱PULL值P值氣流VEL值HEAT值JTIME值rf葉Hi年i1I23I4,5拉制儀控制著四個物理量（如上圖）。（1）兩臂拉開電極的速度，（2）鉑金片加熱電極（HEAT的值只是一個代表并不代表溫度，往往同是P97不同機器之間會有較大的差異所以都要以Ramp為標準）。（3）拉力表示兩臂拉開電極用力的大小。（4）氣流用于冷卻鉑金片以使融化的電極凝固斷裂。下面將整

10、個電極拉制的過程描述如下，編號與圖下方的數(shù)字相對應：啟動拉制后首先你會聽到有噴氣聲，這是P97給加熱盒噴入一定時間的氣體，干燥后的氣體由鉑金片下的小孔吹入目的是讓拉制空間干燥（空氣的濕度會影響電極拉制）。噴氣持續(xù)一段時間后鉑金片開始加熱，加熱的溫度就是你所設定的HEAT值，這是你可以看到鉑金片慢慢的變紅發(fā)熱，一會之后毛配管就會開始融化。由于固定電極的兩臂有一定的拉力（這個拉力并不是你所設定的PULL值，你可以認為這是本底的拉力）所以兩臂會將電極拉開并且有一個加速的過程，當拉開的速度達到你所設定的VEL.值是鉑金片就會停止加熱并開始吹氣冷卻。4吹氣的壓力是在功能菜單中所設定的pressure大小

11、，也就是顯示面板上方所顯示的P值。吹氣的時程如圖也就是你所設定的TIME值。5在加熱停止后40毫秒（如圖加熱軌跡）與吹氣的同時兩臂還會給與以持續(xù)一秒力度是你所設定的PULL值的拉力拉開電極。經(jīng)過上述的五個步驟就完成了一步的拉制。P97中稱為一個line。一個完整的拉直過程往往包括多個line并稱之為一個Loop。當拉直過程完成后會顯示如下的內(nèi)容：=THEPROGRAMLOOPED01TIMES.THEL7XSTLINEUSEDWXSD1,HEATONSEC=6.05上面的顯示表示，一步拉制（第二行）一次（第一行）加熱時間6.05秒。功能參數(shù)設置P97有多個功能參數(shù)可供設置。開機后進入任何一個拉

12、制程序然后按CLR按鈕，屏幕顯示如下內(nèi)容：DOYOUWISHTOCLEARALLVALUESFROMTHEPRESENTCYCLETOTHEEND?NO=0YES=1按0按鈕后就進入了P-97的功能菜單，屏幕第二行會滾動顯示8個功能，點擊相應的數(shù)字就可以進入相應的功能設置，各功能列表如下：功冃匕編號功能名稱功能描述1RAMPTESTRamp測試用于測量融化玻璃管的HEAT值2CHANGEAIRPRESSURE設置氣體壓強，也就是P值3AIRMODE設置控制噴氣的方式4AIRTIMEATSTARTOFPULL電極拉制前噴氣時間5AIRTIMEATENDOFPULL電極拉制后噴氣時間6RESETT

13、IMEANDDATE時間日期設置7WRITE-PROTECTTHEPROGRAM鎖定拉制程序8MEMORYTEST內(nèi)存檢測其中第一項最長用到，第二有時也會用到，我將分述如下，其他的都不用管保留默認值就好了。1RAMPTEST此功能用于測量玻璃管的熔點，當啟動之后你可以看到RAMP值以1為步進不斷的上升，同時你還可以看到鉑金片逐漸變紅發(fā)亮。當玻璃管受熱融化在牽拉臂的作用下向兩邊拉開這時候拉制儀就會停止加熱，這是所顯示的值就是玻璃管的熔點。這一RAMP值用于確定拉制參數(shù)中的HEAT值。HEAT值的測定根據(jù)你選用的鉑金片而有所不同。建議：梯形鉑金片：HEAT=RAMP+15方形鉑金片：HEAT=RA

14、MP但大家要注意這個值只是一個相對的值不是真實的溫度，而且不同一臺拉制儀的數(shù)值也是不相同的！當每次更換鉑金片或者是更換了不同型號不同品牌的玻璃管時都要從新測量RAMP值。CHANGEAIRPRESSURE此功能用于設置噴氣的壓強，就是第一行中顯示的P值。可在1到999之間設置。對與不同的玻璃管推薦如下厚壁玻璃管：500薄壁玻璃管：300探處理以上的拉制模式還有另一種成為延時模式（DELAY）這種方式不常用。啟動這種模式的標志就是四個參數(shù)最后一個的TIME顯示為DELAY。這是你可以通過功能三AIRMODE將其切換回TIME模式膜片鉗電極的拉制下圖是一個理想的膜片鉗試驗中所使用的電極尖端：以由下

15、圖來說明:使用胖一些（就是肚子比較大尖端比較?。┑狞c擊可以有更好的封接效果，至于其原因可可以看到左側是較胖的電極，其相對于右側較瘦（尖端陡峭）的電極在尖端內(nèi)有較大的體積，所以當胞膜吸入電極尖端后胞膜與電極尖端內(nèi)壁有較大的接觸面積。因此以此類電極有較好的封接效果。當你了解了何種電極才是好電極后，下一步就是如何使用P-97制作理想的電極。首先將pressure設為500（般默認就是500），其次對與不同的鉑金片要使用不同的參數(shù)。我實驗室常用的是梯形鉑金片，此外還有一種方形的鉑金片。首先使用RAMP功能測量玻璃管熔點（此熔點用RAMP表示）。兩種鉑金片對應的參數(shù)列表如下：鉑金片類型HEATPULLV

16、ELOCITYTIME梯形RAMP+15040200方形RAMP040200先使用上述的參數(shù)設置一步。開始拉制！往往這樣一步是不能拉斷電極的，所以P-97就會自動循環(huán)執(zhí)行程序直到拉斷電極。比如這時拉制程序循環(huán)三次也就是通過三步拉斷了電極然后使用拋光儀（或者顯微鏡）觀察點擊尖端，往往三步拉斷的電極會比較瘦尖端很陡而且開口太小，這樣的電極是不理想的電極。接下來我們只調(diào)節(jié)拉制速度，減少拉制速度可以讓點擊變胖。你可以以“3”步進逐步減少拉制速度并可以做如下的記錄。例如：拉制速度40373431282522拉制步數(shù)3344445你會發(fā)現(xiàn)以同樣的步數(shù)拉斷的電極形狀是相似的，但不同步數(shù)之間差異就比較大了。一般而言四步拉斷的電極就已經(jīng)比較理想了。在上面的例子中你不要設置拉制速度為34或25以為他們處在步數(shù)變化的臨界值。由于拉制儀每次拉制多少都有一些波動，你設置為臨界值就很有可能在拉制的過程中出現(xiàn)拉制步數(shù)的變化而使拉制失敗。你應該設置拉直速度為31或28這樣就會比較穩(wěn)定了。如果這是已經(jīng)拉制