1、關于分子生物學常用技術簡化版第一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九章分子生物學常用技術第二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月分子生物學技術能幫助我們干什么？揭示生物大分子(DNA、RNA、蛋白質)的結構與功能DNA 水平：基因序列分析、拷貝數(shù)和染色體定位RNA 水平：定量分析、基因表達產(chǎn)物的可變剪接分析蛋白質水平：蛋白質定量、定位、功能細胞與整體水平：基因在活體中的功能目的：了解疾病發(fā)生的規(guī)律，提供治療與預防手段第三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月我們需要了解和掌握哪些基本技術？基本技術：核酸：測序、印跡、雜交、體外擴增技術蛋白質：電泳與印跡、組學技術、相互作用

2、綜合技術：基因工程技術轉基因生物與基因敲除技術應用技術：基因診斷基因治療第四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Molecular hybridization: 利用已知核酸序列 (探針/probe) 檢測與其互補的未知核酸序列用途：確認核酸序列間同源性對特定核酸序列進行定量自核酸混合體中辨認特定核酸序列第一節(jié)：核酸分子雜交第五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月一、基本原理變性(denature)復性(renature)雜交(hybiridization)第六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月核酸變性在特定變性因素作用下，DNA雙螺旋解離的過程破壞氫鍵與疏水作用可導致變性

3、熱變性：高溫可使核酸變性，溫度高于 90時任何核酸雙鏈都將變性酸堿變性：pH11 時核酸將變性，DNA 使用堿變性，RNA 則不可化學試劑變性：能夠破壞氫鍵的化學試劑如尿素或甲酰胺可使核酸變性第七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月變性溫度Tm：melting temperature，解鏈溫度或變性溫度影響變性溫度的因素：溶液的離子強度變性溫度與離子強度 正相關，低鹽利于變性DNA分子的 GC 含量GC(Tm69.3)2.24第八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月核酸復性變性的 DNA 單鏈相互識別并結合，恢復其天然雙螺旋結構的過程復性類似與化學反應，需要一定反應時間第九張，PP

4、T共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月影響 DNA 復性速度的因素DNA 分子的濃度：濃度高，復性快DNA 分子的長度：長片段復性速度慢DNA 分子的復雜性：重復序列復性速度快不同物種C0t曲線比較 人類基因組C0t曲線第十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月二、核酸探針Probe：用于測定未知核酸片段的已知序列探針為 DNA 或 RNA，可以為單鏈或雙鏈探針必需經(jīng)過標記：放射性標記或非放射性標記第十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 探針有哪些種類？DNA 探針：常規(guī)探針 利用基因組 DNA 序列或 cDNA 序列合成的探針，一般為雙鏈，也可制備成單鏈RNA 探針：高靈敏度探

5、針 一般是通過體外轉錄而來，均為單鏈寡核苷酸探針(oligo-nucleotide)：用于點突變檢測人工合成的短序列(20nt)，可自由選擇序列第十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 標記物有哪些？標記物的要求：高度的靈敏性：足以檢測到極微量的核酸序列高度的特異性：足以在大量非特異性序列中檢測到特異的靶序列標記物的種類：放射性同位素(radio isotope)非放射性標記物(non-radioactive label)第十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月放射性同位素特點：靈敏度最高的標記物，足以檢測到飛克級微量的核酸序列 gmggngpgfg常用的放射性同位素第十四

6、張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月放射性標記的核苷酸單體dNTP or NTP5 or 3 P32 labelling第十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月非放射性標記物特點：安全且易于存放，但靈敏度與特異性均不及放射性同位素地高辛：通過地高辛抗體結合并檢測生物素：結合親和素/鏈親和素(avidin/streptavidin)化學發(fā)光物質：通過紫外激發(fā)或化學反應而發(fā)光電子密度標記物：金等重金屬第十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 如何檢測雜交信號？同位素標記物：蓋革計數(shù)器、液體閃爍計數(shù)器放射自顯影(autoradiography)第十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)

7、作于2022年6月如何檢測雜交信號？非放射性標記物：酶聯(lián)免疫技術(enzyme linked immuno-assay)化學發(fā)光(chemiluminescence)第十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月三、如何對核酸探針進行標記？第十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 缺口平移nick translation:適用于標記雙鏈DNA控制 DNase I 的用量，可以控制探針的長度第二十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 非放探針的酶促標記生物素或地高辛標記的核苷酸單體通過酶促反應可以參入探針第二十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 非放探針的化

8、學標記利用光敏基因經(jīng)可見光照射直接與核酸結合第二十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月四、如何進行雜交？樣品(DNA or RNA)吸附于支持物尼龍膜、硝酸纖維膜、載玻片等與標記的探針雜交封閉液封閉后雜交，雜交爐中進行緩沖液清洗控制溫度與變性劑濃度顯色放射自顯影/酶聯(lián)顯色第二十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月五、雜交有哪些不同的方式？斑點雜交：dot hybridizationSouthern 印跡雜交：Southern blotNorthern 印跡雜交：Northern blotWestern blotting：不是雜交原位雜交：in situ hybridizatio

9、n反 Northern 印跡雜交：reverse Northern blot基因芯片/DNA微陣列：Genechip/DNA microarray第二十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月dot hybridization將核酸樣品直接點在雜交膜上與探針進行雜交特點：簡便但特異性不高可探測核酸含量，但無法得知分子大小第二十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Southern blotEdwin Southern 創(chuàng)立的方法電泳技術與雜交結合，可顯示靶 DNA 序列的長度可進行毛吸管轉移、真空轉移與電轉移第二十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月電泳轉膜雜交第二十七張，P

10、PT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Northern blot類似于 Southern 印跡雜交的方法，用于 RNA 檢測第二十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月in situ hybridization原位雜交：特定 mRNA 的組織細胞分布第二十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月FISHFluorescence in situ hybridization (FISH)：特定基因的染色體定位第三十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月反 Northern 雜交與 DNA 芯片反 Northern 雜交：將探針 DNA 片段固定在雜交膜上，利用標記物標記的 RNA 進行

11、雜交第三十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié)：聚合酶鏈式反應PCR，polymerase chain reaction在體外選擇性擴增特定 DNA 片段的高效手段70 年代有人提出 PCR 的設想，因缺乏寡核苷酸的合成手段和適合的酶而無法進行1984 年 Kary Mullis 發(fā)明 PCR，并因此獲得 1993 年的諾貝爾化學獎全自動的熱循環(huán)儀和多種 PCR 衍生技術使其成為重要的科學研究手段第三十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月一、PCR 的基本原理在體外，以特定引物引導，通過 DNA 聚合酶選擇性擴增特定區(qū)域變性(denature)退火(anneal)延伸(e

12、xtension)第三十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA的體內(nèi)復制ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35解旋酶解鏈酶DNA解旋解鏈第三十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5引物酶引物酶RNA引物RNA引物DNA解旋解鏈引物合成DNA的體內(nèi)復制第三十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53T

13、AGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35GGAUCG5AUCGCG5TAGCGCTATCGCATCGACGCT3ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3DNA聚合酶DNA聚合酶DNA解旋解鏈引物合成新鏈延伸DNA的體內(nèi)復制第三十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC53TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG35變性復性加熱退火DNA加熱解鏈第三十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月模板DNA94第三十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月55引物1引物2DNA引物第三十九張，PPT共九

14、十七頁，創(chuàng)作于2022年6月引物1引物2DNA引物72Taq酶Taq酶第四十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第1輪結束94第2輪開始第四十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月72TaqTaqTaqTaq55第四十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第2輪結束第四十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月重復30輪后230=1,073,741,824模板DNA第1輪擴增第2輪擴增第3輪擴增第4輪擴增第5輪擴增第6輪擴增理想拷貝數(shù)=2n n 循環(huán)次數(shù)實際拷貝數(shù)=(1+x)n X 平均效率,約為0.85 n 循環(huán)次數(shù) 第四十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1

15、234522557294時間（min）溫度（）適溫延伸3高溫變性1低溫退火2重復1-3步25-30輪目的DNA片段擴增100萬倍以上DNA雙螺旋DNA單鏈與引物復性新鏈延伸DNA的體外擴增熱循環(huán)DNA解鏈第四十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月PCR反應體系4種dNTP混合物 各200 mol/L引物 各0.1-0.5 mol/L模板DNA 0.12 gTaq DNA聚合酶 2.5 UMg2+ 1.5mmol/LDNA的體外擴增第四十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月PCR 技術的特點高度的靈敏性：理論上經(jīng) 20 循環(huán)可將目的基因片段擴增 2201000000 倍高度的特異

16、性：利用引物與模板的特異性配對，可保證擴增的特異性一對 20 堿基長引物的多樣性為4401024應用的廣泛性：目前已經(jīng)成為分子生物學研究必不可少的手段操作的簡便性：不需要復雜的設備和繁瑣的流程第四十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月二、做 PCR 要有什么條件？酶：Taq DNA 聚合酶模板 DNA：可以為基因組 DNA 或 cDNA引物：人工合成的寡核苷酸片段dNTP：聚合反應的核苷酸單體緩沖液：包含特定的 pH、離子強度和 Mg2+反應程序：變性、退火、延伸組成的循環(huán)儀器：DNA 熱循環(huán)儀，或稱 PCR 儀第四十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月DNA聚合酶催化的聚合反

17、應dNTP第四十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月1. 什么是耐熱 DNA 聚合酶早期 PCR 曾使用 DNA 聚合酶 I在高溫時發(fā)生變性，每一循環(huán)都需要重新添加酶延伸反應溫度為 37，非特異性太多目前常用 Taq DNA 聚合酶純化自嗜熱水生菌 (Thermus aquaticus)可耐受 95 高溫，最適反應溫度為 72 左右第五十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Taq DNA polymerase在 7075 范圍活性最佳，每秒可延伸 150nt95 時的半衰期為 40 min按變性時間 1 min 計，能滿足 30 循環(huán)的反應Taq 酶具有 5 3 聚合活性和 5

18、3外切活性不具備校讀活性，錯誤率為 2104 左右錯誤合成的 DNA片段可以作為模板，循環(huán)數(shù)越多，最終擴增產(chǎn)物錯誤率越高只能用于檢測，不適合基因克隆第五十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月有保真性的耐熱 DNA 聚合酶嗎？Pfu DNA polymerase：常用的高保真耐熱 DNA聚合酶有5 3 外切活性錯誤率約 1106適應于基因克隆第五十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月2. 如何設計寡聚核苷酸引物？引物(primer)是 PCR 反應必備的前提，對 PCR 產(chǎn)物類型、長度和反應的特異性具有決定作用PCR 需要兩條引物，引物決定擴增范圍和擴增片段長度第五十三張，PPT

19、共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月引物設計原則引物長度一般為 1530 核苷酸引物太短影響雜交體的穩(wěn)定和特異性引物太長隨機匹配序列增多，特異性反而下降GC 含量一般為 40 60應充分考慮退火溫度(annealing temperature)GC 含量低，退火溫度低，易出現(xiàn)非特異GC 含量高，非特異性結合也會增加引物解鏈溫度粗略計算公式： 引物的解鏈溫度Tm4(GC)2(AT)第五十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月引物設計原則引物自身不應該存在鏈內(nèi)互補序列，以防止出現(xiàn)發(fā)卡結構 兩條引物間、同一引物的分子間不應存在互補序列出現(xiàn)互補易導致引物二聚體的出現(xiàn)，影響擴增效率第五十五張，PPT共

20、九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月引物設計原則避免引物與非特異序列間的同源性引物的 3，末端必須與模板完全互補，5，末端允許添加非配對序列5，末端允許添加非匹配序列，如：酶切位點53第五十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月3. 如何選擇 dNTP 和緩沖液?dNTP 是聚合反應的底物常規(guī)使用濃度：0.2 mM each探針標記時，可使用同位素或非放標記的 dNTP緩沖液：特定的 pH 和離子強度Mg2濃度一般為 1.5 mMPCR mix：預制的便捷反應體系第五十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月4. 用什么做模板 DNA？PCR 的模板(template)可以是基因組 DNA

21、 或 cDNA逆轉錄-PCR(reverse transcription PCR)：RT-PCR在利用 DNA 為模板進行擴增時純化比較簡單血液、病原體、體外培養(yǎng)細胞、甚至病理標本經(jīng)簡單處理后均可直接進行 PCR 擴增RNA 樣品一般要經(jīng)過嚴格純化，并逆轉錄未經(jīng)純化的 RNA 不穩(wěn)定，無法進行逆轉錄反應體系中如存在 DNA，將對 RNA 擴增產(chǎn)生干擾 第五十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月6. 如何設計反應程序？PCR 的循環(huán)數(shù)：理論上 20 25 即可滿足擴增需要，但實際循環(huán)數(shù)一般為 25 35過多循環(huán)后到達平臺期，繼續(xù)延長循環(huán)數(shù)無效模板濃度高時平臺期出現(xiàn)早，模板濃度低時平臺期出

22、現(xiàn)晚，應根據(jù)模板濃度調(diào)節(jié)循環(huán)數(shù)第五十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月反應程序的關鍵是退火溫度退火溫度：提高退火溫度有助于提高反應的特異性退火溫度過高將導致引物與模板無法配對，影響擴增效率反應的退火溫度主要取決于引物序列 第六十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月三、我們能用 PCR 做什么？自 PCR 技術創(chuàng)立以來，經(jīng)近 20 年的發(fā)展，在基本 PCR 技術基礎上產(chǎn)生了多種 PCR 的衍生技術，應用于各種不同的目的基因克隆或亞克隆基因工程特定基因表達量的分析基因突變的檢測基因診斷病原體特征性序列的鑒定基因診斷定點誘變第 4 節(jié)DNA 序列測定第 3 節(jié)第六十一張，PPT共九十

23、七頁，創(chuàng)作于2022年6月最常用的 PCR 是 RT-PCRRT-PCR：reverse transcription PCR以 mRNA 為模板先進行逆轉錄，再進行 PCR為什么要以 mRNA 為模板？mRNA 無內(nèi)含子，克隆的基因可在原核表達mRNA 的量代表了基因的表達水平第六十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月如何利用 RT-PCR 檢測基因表達水平? 定量 PCR(quantitative PCR)PCR 產(chǎn)物的量與起始的模板量有關利用 PCR 對模板 DNA 或 cDNA 進行定量測定定量 PCR 一般用于特定基因 mRNA 水平的檢測RT-PCR 可用于基因表達水平檢測需

24、設定內(nèi)部參照物(reference gene)，如：GAPDH、actin、18s rRNA 等穩(wěn)定表達基因定量是相對的，一般是不準確的第六十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月為什么說 RT-PCR 定量是不準確的？ 指數(shù)擴增期，產(chǎn)物量與模板量成正比進入平臺期，產(chǎn)物量不能再反應模板量不同樣品進入平臺期的循環(huán)數(shù)不同，難以選擇測定的時間節(jié)點第六十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月有精確定量方法嗎？實時熒光定量 PCR(real-time PCR)：以產(chǎn)物量到達一定閾值所需要的循環(huán)數(shù)為定量標準需要對 PCR 產(chǎn)物的生成量進行動態(tài)監(jiān)控第六十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6

25、月如何進行產(chǎn)物量的實時檢測？需要熒光標記探針與兩側 PCR 引物探針標記有報告熒光與粹滅熒光反應過程中探針被降解，報告熒光顯色可通過熒光定量 PCR 儀進行實時監(jiān)控第六十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月巢式 PCR 可以提高擴增效率和特異性 Nested-primer PCR內(nèi)外兩套引物分兩輪進行擴增在克隆一些低豐度基因時可以采用經(jīng)過兩輪 PCR 擴增，具有更高的靈敏度四條引物均與模板匹配，因此增加了特異性第六十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月可以利用多對引物進行多重 PCR多重 PCR(multi-primer PCR)多組引物同時進行的 PCR，可大幅度降低 PCR

26、 反應的工作量第六十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月可以在組織切片上進行原位 PCR原位 PCR(in situ PCR)在組織切片或細胞涂片上進行的 PCR 方法主要用于特定基因表達水平的原位分析組織切片經(jīng)過固定、蛋白酶和 DNase 消化后進行 RT-PCR 擴增第六十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Sequencing：基因結構分析的最基本方法主要方式：化學降解法酶法：Sanger 法/雙脫氧鏈末端終止法二代/三代測序技術第三節(jié)：基因測序第七十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月適用于寡核苷酸片段測序的方法基本反應：G：DMSG/A：哌啶T/C：肼(低鹽)C

27、：肼(高鹽)一、化學降解法第七十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Sanger 在 1977 年建立的方法，也稱酶法測序DNA 序列測定的最常用方法二、雙脫氧末端終止法 在反應體系中加入 2, 3 -ddNTP，由于其沒有 3-OH 而不能與下一個核苷酸相連，于是DNA鏈的合成便終止。第七十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Sanger法測序第七十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月模板：單鏈單雙鏈均可酶： Klenow 耐熱 DNA 聚合酶標記：同位素標記熒光標記電泳：平板電泳毛細管電泳 4 泳道單一泳道酶法測序的自動化程度越來越高第七十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)

28、作于2022年6月二代測序技術(next-generation sequencing)1 天完成全基因組測序羅氏、Solexa、ABI 等公司各有不同技術利用微珠或芯片實現(xiàn)大通量，邊合成邊測序三代測序技術(next-next-generation sequencing)：3 分鐘完成全基因組測序基于納米微孔的單分子測序技術二代測序與三代測序技術第七十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第四節(jié)：DNA 定點誘變技術(自學）目前主要用 PCR 方法進行定點誘變也可進行突變基于的全合成第七十六張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第五節(jié)：RNA 干擾技術學習基因工程之后，在基因剔除技術部

29、分介紹第七十七張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第六節(jié)：生物芯片生物芯片(biochip)：基于微電子技術和生物信息技術建立的高度集成化的生物樣本分析方法生物芯片是后基因組時代的利器生物芯片有哪些種類？DNA microarrayProtein microarrayAntibody microarrayChemical compound microarrayTissue microarray第七十八張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月什么是基因芯片技術？基因芯片(gene chip)，一種高通量的核酸雜交方法，又稱 DNA 微陣列 (DNA microarray)將大量探針固定與

30、固相支持物，與標記的待測樣品進行雜交的方法Affymetrix 公司已經(jīng)將 GeneChip 注冊第七十九張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月如何制作基因芯片？cDNA 芯片：cDNA 片段以顯微打印的方式固定于固相支持物表面，集成度較低原位合成芯片：以激光蝕刻技術直接合成寡核苷酸探針，集成度可達 105 點陣/cm2以上第八十張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月基因芯片能幫助我們干什么？基因表達譜芯片(gene expression profile)：基因表達的大通量分析SNP 芯片(single nucleotide polymorphism)：單核苷酸多態(tài)性的大通量檢測微小

31、RNA 芯片(miRNA)：分析 microRNA甲基化芯片：分析基因組甲基化狀態(tài)ChIP-chip(chromatin immunoprecipitation)：分析 DNA 與蛋白質的相互作用第八十一張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月芯片的主要工作流程選擇與購買芯片準備樣品標記樣品雜交檢測雜交信號分析處理結果第八十二張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月第七/八節(jié)：蛋白質分析方法蛋白質的定量分析：ELISA(Enzyme-Linked-Immuno-Sorbent-Assay)Western blot蛋白質的定位：免疫組織化學熒光蛋白的活細胞定位蛋白質相互作用的研究蛋白質功能的研究蛋白質組學技術第八十三張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月Proteomics蛋白質組與蛋白質組學：對特定組織細胞總蛋白的整體性研究第八十四張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質組學研究的目的什么？解讀基因組：基因組編碼了多少基因？蛋白表達：比研究 RNA 表達深入了一步蛋白功能：超過 1/3 的蛋白質功能不明確蛋白質修飾：糖基化、磷酸化、酶解等蛋白質定位：subproteome蛋白-蛋白相互作用：互作是功能的基礎第八十五張，PPT共九十七頁，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質組學的核心技術是什么？1975 年，雙向電泳