1、高效液相色譜法測定奈韋拉平的血藥濃度【關(guān)鍵詞】色譜法,高壓液相；奈韋拉平；血藥濃度【關(guān)鍵詞】色譜法，高壓液相；奈韋拉平；血藥濃度奈韋拉平nevirapine是人體免疫缺陷病毒(HIV1)的非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTI).奈韋拉平與HIV1的逆轉(zhuǎn)錄酶(RT)直接連接并通過使此酶的催化端斷裂來阻斷RNA依賴和DNA依賴的DNA聚合酶活性1-2.奈韋拉平不與底物或三磷酸核苷產(chǎn)生競爭.我們旨在探究一種簡便、快速、專屬性高的測定奈韋拉平血漿濃度的方法.1材料和方法1.1材料安捷倫1100液相色譜儀美國安捷倫公司消費(fèi)；低溫高速離心機(jī)德國SIGA公司消費(fèi)；振蕩器美國科爾帕默儀器公司消費(fèi)；萬分之一天平上

2、海衡平儀器儀表廠消費(fèi).甲醇、乙腈，色譜純，erk公司消費(fèi)；磷酸、磷酸二氫鈉、三氯乙酸、三乙胺，AR級，上?；瘜W(xué)試劑公司消費(fèi).受試制劑：國產(chǎn)奈韋拉平膠囊劑商品名艾極，批號0309001，每粒200g，浙江華海藥業(yè)股份消費(fèi)；國產(chǎn)奈韋拉平片劑商品名艾太，批號0402022，每片200g，浙江華海藥業(yè)股份消費(fèi)；參比制劑：進(jìn)口奈韋拉平片商品名維樂命，批號304185d，每片200g，德國勃林格殷格翰消費(fèi)；奈韋拉平標(biāo)準(zhǔn)品，批號556503002，含量99.8%，浙江華海藥業(yè)股份提供.1.2方法1504.6,0.5；流動相：乙腈:0.01l/L磷酸二氫鈉含0.01l/L三乙胺，磷酸調(diào)pH至5.0=18:82

3、；流速：1.0L/in；柱溫：45；檢測波長：240n；進(jìn)樣量：25L；靈敏度：0.01AUFS.參加標(biāo)準(zhǔn)品的血漿樣品和待測血漿樣品的二維色譜圖，比擬所測成分的保存時間及檢測波長是否一致.參加20L500L/L三氯乙酸，漩渦振蕩，4下離心5in15000r/in，取上清液25L進(jìn)樣，作HPL分析.參加A對藥物濃度進(jìn)展線性回歸，計(jì)算回歸方程.濃度相比，計(jì)算血樣中奈韋拉平的相對回收率和日內(nèi)、日間精細(xì)度.2結(jié)果2.1色譜別離與定性從參加標(biāo)準(zhǔn)品的血漿樣品的二維色譜圖可知，奈韋拉平在12.165in出峰，比擬空白血漿、參加標(biāo)準(zhǔn)品的血漿樣品和待測血漿樣品的色譜圖，奈韋拉平的保存時間根本一致，證明定性成功圖

4、1.A：空白血漿；B：參加標(biāo)準(zhǔn)品的血漿樣品；：待測血漿樣品.圖1人血漿中奈韋拉平的高效液相色譜圖2.2線性關(guān)系回歸方程：=81.45A+58.65,相關(guān)系數(shù)r2.3專屬性本方法專屬性高，在該色譜條件下，測得奈韋拉平保存時間為12.165in，藥物峰形良好，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾奈韋拉平的測定.2.5血藥濃度時間曲線采用二重3*3拉丁方設(shè)計(jì)，24名受試者按照隨機(jī)順序承受3種藥物奈韋拉平國產(chǎn)膠囊劑、片劑與進(jìn)口片劑200g后的平均血藥濃度時間曲線見圖2.結(jié)果顯示，血樣中奈韋拉平實(shí)測濃度均在本試驗(yàn)線性范圍內(nèi).圖2奈韋拉平的平均血藥濃度時間曲線3討論測定人血漿中奈韋拉平濃度的方法有高效液相色譜法3-4和

5、離子對色譜法5.我們采用高效液相色譜法，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾藥物的測定.采用磷酸鹽緩沖溶液，調(diào)節(jié)pH=5，以獲得較好的別離度和較短的保存時間.該方法符合人體藥代動力學(xué)研究生物樣品測定的方法學(xué)要求.本實(shí)驗(yàn)中，對于流動相的選擇和藥物的萃取進(jìn)展了大量探究工作，固相萃取可得到較高和較穩(wěn)定的回收率6，卻代價昂貴，應(yīng)用500L/L三氯乙酸作為萃取溶劑，回收率高而且穩(wěn)定，以乙腈和磷酸鹽溶液作為流動相7，藥物峰受到血漿內(nèi)源性雜質(zhì)峰干擾，磷酸鹽溶液中參加三乙胺，消除雜質(zhì)峰的干擾，實(shí)驗(yàn)方法有較高專屬性.奈韋拉平是一種抗艾滋病新藥，有較多不良反響，會引起肝毒性和耐受性8-9.本次試驗(yàn)過程因志愿者出現(xiàn)不良反響而脫落4

6、例.【參考文獻(xiàn)】1TebasP,YarasheskiK,HenryK,etal.EvaluatinfthevirlgialandetablieffetsfsithingprteaseinhibitrbinatinantiretrviraltherapytnevirapinebasedtherapyfrthetreatentfHIVinfetinJ.AIDSResHuRetrviruses,2022,20(6):589-594.2ansuthi,SungkanuparphS,VibhaglA,etal.Nevirapineversusefavirenzbasedhighlyativeantire

7、trviraltherapyregiensinantiretrviralnaivepatientsithadvanedHIVinfetinJ.HIVed,2022,5(2):105-109.4LpezR,PuL,GezR,etal.SipleandrapiddeterinatinfnevirapineinhuanserubyreversedphasehighperfraneliquidhratgraphyJ.JhratgrBBiedSiAppl,2001,751(2):371-376.5FanB,SteartJT.Deterinatinfzidvudine/laivudine/nevirapi

8、neinhuanplasausinginpairHPLJ.JPharBiedAnal,2002,28(5):903-908.6lbS,BeguinA,arzlini,etal.DeterinatinfthenvelnnpeptidiHIVprteaseinhibitrtipranavirbyHPLUVafterslidphaseextratinJ.JhratgrBAnalytTehnlBiedLifeSi,2022,832(1):138-143.7NtariS,BediA,IpplitG,etal.Siultaneusdeterinatinf16antiHIVdrugsinhuanplasabyhighperfraneliquidhratgraphyJ.JhratgrBAnalytTehnlBiedLifeSi,2022,831(12):258-266.8GkenginD,YaazhanT.Hepatiadverseeventsduringhighlyativeantiretrviraltherapyntainingnevirapine:AasereprtJ.AnnlinirbilAntiirb,2002,1:1.9ansuthi,hupathatN,havavanihA,etal.Safetyandtler