1、體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第1頁體外診療試劑產(chǎn)品介紹一酶聯(lián)免疫診療試劑產(chǎn)品乙型肝炎病毒表面抗原診療試劑盒（酶聯(lián)免疫法）二快速診療試劑產(chǎn)品人類免疫缺點(diǎn)病毒抗體檢測試劑盒（膠體金法）三PCR核酸診療試劑產(chǎn)品乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）四臨床化學(xué)診療試劑產(chǎn)品葡萄糖試劑盒（液體單試劑）（氧化酶法）體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第2頁一.酶聯(lián)免疫診療試劑產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】 乙型肝炎病毒表面抗原診療試劑盒（酶聯(lián)免疫法）【包裝規(guī)格】 96人份/盒【預(yù)期用途】 本試劑盒采取酶聯(lián)免疫法原理檢測HBsAg，適合用于血清或血漿類標(biāo)本。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量

2、控制要點(diǎn)概要第3頁酶聯(lián)免疫法反應(yīng)原理雙抗體夾心法雙抗原夾心法標(biāo)本抗-HBs抗-HBs-HRPHBsAg體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第4頁乙型肝炎病毒表面抗原診療試劑盒（酶聯(lián)免疫法）原理采取抗-HBs包被反應(yīng)板，加入待測樣本，經(jīng)孵育后，加入抗-HBs-HRP，當(dāng)樣本中存在HBsAg時，該HBsAg與包被抗-HBs結(jié)合并與抗-HBs-HRP結(jié)合形成抗-HBs-HBsAg-抗-HBs-HRP復(fù)合物，加入TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)，反之則無顯色反應(yīng)。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第5頁試劑盒組份 1. 微孔反應(yīng)板 2. 酶結(jié)合物 3. 陽性對照 4. 陰性對照 5. 洗滌液 6. 顯色劑A 7. 顯

3、色劑B 8. 終止液 9. 封片 10. 說明書體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第6頁主要生產(chǎn)設(shè)備微孔反應(yīng)板包被機(jī)微孔反應(yīng)板全自動封閉生產(chǎn)線灌封流水線超聲波洗瓶機(jī)全自動進(jìn)口分裝機(jī)生物安全柜酶標(biāo)儀橫枕式包裝機(jī)體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第7頁生產(chǎn)工藝流程圖合并分裝純化包被結(jié)酶純化配制配制配制抗-HBs血清酶標(biāo)用抗-HBs抗-HBs-HRP酶結(jié)合物反應(yīng)板包板用單抗-HBs單抗-HBs腹水正常人血清、陽性血陰、陽性對照顯色劑、終止液、洗滌液TMB、硫酸、吐溫20成品半成品滴配半成品檢定成品檢定體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第8頁外購原輔料控制原輔料必須從合格供給商目錄所載廠家購入。采購生產(chǎn)用原

4、輔料，均應(yīng)符合藥品標(biāo)準(zhǔn)、包裝材料標(biāo)準(zhǔn)、生物制品規(guī)程或其它標(biāo)準(zhǔn)，不得對產(chǎn)品質(zhì)量產(chǎn)生不良影響。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第9頁自制主要原料生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn) 工藝用水 抗原 抗體 酶標(biāo)識物體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第10頁基因工程HBsAg生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)基因工程細(xì)胞株，經(jīng)接種復(fù)蘇后，進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基配制，細(xì)胞培養(yǎng)溫度，細(xì)胞形態(tài)及傳代速度。純化搜集細(xì)胞培養(yǎng)上清液經(jīng)抗-HBs 親和層析柱等純化。層析柱填料使用次數(shù)， 所用緩沖液pH值， 上樣、平衡、洗脫速度。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第11頁基因工程HBsAg質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)效價： E

5、LISA純度：采取SDS功效性試驗 ：陰性對照、陽性對照、陰性參考品符合率、最低檢出量、精密性、穩(wěn)定性蛋白濃度：用雙縮脲法測定體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第12頁單抗-HBs生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)細(xì)胞復(fù)蘇及傳代培養(yǎng)單克隆抗體細(xì)胞株，經(jīng)接種復(fù)蘇后，進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基配制，細(xì)胞培養(yǎng)溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細(xì)胞懸液注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HBs腹水。對數(shù)生長久細(xì)胞接種。腹水純化用制備單抗-HBs腹水，經(jīng)飽和硫酸銨二步沉淀，經(jīng)離子交換層析柱純化即為單抗-HBs。層析填料使用次數(shù)， 所用緩沖液pH值

6、， 上樣、平衡、洗脫速度。純化得率。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第13頁單抗-HBs質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)純度 ：采取SDS法蛋白含量 ：采取Lowry法效價 ：ELISA效價功效性檢測：免疫活性、穩(wěn)定性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第14頁多抗-HBs生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)抗血清制備用福氏佐劑和純化HBsAg抗原 制成乳化膠乳劑注射試驗動物 ，經(jīng)屢次免疫后，采集動物血清。動物選擇，乳劑配制均一性。純化 抗血清，經(jīng)親和層析柱粗提后，正常人全血清等各種親和層析柱等純化制得。親和柱制備及使用次數(shù)，所用緩沖液pH等控制， 純化收率。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第15頁多抗-HBs質(zhì)量

7、標(biāo)準(zhǔn)純度 ：SDS法檢定蛋白含量 ：Lowry法效價 ：對流電泳法測定效價功效性檢測：免疫活性、穩(wěn)定性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第16頁多抗-HBs-HRP生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)酶活化 HRP與 NaIO4反應(yīng)，再加入乙二醇制成活化酶溶液。 辣根過氧化物酶RZ值3.0 及活化時間控制酶偶聯(lián) 酶溶液液加入抗-HBs抗體pH,溫度及時間控制還原酶反應(yīng)液加入NaBH4溶液還原。還原時間控制純化 飽和硫酸銨純化純度控制體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第17頁辣根過氧化物酶質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)溶解性 ：應(yīng)符合要求PH值 ：應(yīng)符合要求活性測定 ：應(yīng)符合要求RZ值：應(yīng)3.0 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)

8、量控制要點(diǎn)概要第18頁多抗-HBs-HRP質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)免疫活性穩(wěn)定性試驗體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第19頁生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)反應(yīng)板制備1包被液配制pH值控制2*反應(yīng)板包被包被液量準(zhǔn)確性，反應(yīng)板包被放置溫度、濕度及時間控制3反應(yīng)板洗滌、加封閉液液量準(zhǔn)確性4*反應(yīng)板封閉房間溫度控制，封閉時間控制5反應(yīng)板抽干抽干機(jī)真空度、溫度6*鋁箔袋熱封房間濕度控制，鋁箔袋密封性7*反應(yīng)板抽檢應(yīng)符合相關(guān)質(zhì)量要求反應(yīng)板制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第20頁反應(yīng)板制備包被液配制質(zhì)量控制點(diǎn)：包被緩沖液pH 測定方法：用pH計測定體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第21頁反應(yīng)板制備反應(yīng)

9、板包被質(zhì)量控制點(diǎn)：包被液量準(zhǔn)確性 要求：100l/孔 操作： 將待包被微孔反應(yīng)板放置傳送帶上，開始包被，每塊包被板應(yīng)用目測法檢驗其96孔加液是否完整。前10塊包被板檢驗加液量是否準(zhǔn)確，檢后包被板放入報廢專用盤內(nèi)，作報廢處理。 連續(xù)100塊包被板檢驗合格后，進(jìn)入正常包被過程。正常包被過程中每100塊包被板應(yīng)抽1塊作過程檢驗。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第22頁反應(yīng)板制備反應(yīng)板包被質(zhì)量控制點(diǎn)： 反應(yīng)板包被放置溫度及時間控制 要求： 2-8冷庫包被過夜。 操作：包被板應(yīng)堆放整齊，并用一次性塑料布覆蓋。注明產(chǎn)品名稱、批號和時間，放入2-8冷庫包被過夜。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第23頁反應(yīng)板

10、制備反應(yīng)板洗滌、加封閉液質(zhì)量控制點(diǎn)：液量準(zhǔn)確性 要求: 洗板液量：200l/孔 封閉液量：250l/孔 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第24頁反應(yīng)板制備反應(yīng)板封閉質(zhì)量控制點(diǎn)： 封閉溫度：370.5 封閉時間：2小時 操作：將加好封閉液包被板整齊堆放在托盤內(nèi)，注明批號、封閉開始時間和結(jié)束時間，放入恒溫房。抵達(dá)要求時間后，快速取出包被板，轉(zhuǎn)入下一道工序生產(chǎn)。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第25頁反應(yīng)板制備反應(yīng)板抽干質(zhì)量控制點(diǎn)：抽干機(jī)真空度、溫度 要求： 真空度：低于100Pa，維持4小時以上 溫度：202 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第26頁反應(yīng)板制備鋁箔袋熱封質(zhì)量控制點(diǎn)： 房間濕度：4

11、0% 鋁箔袋密封性： 端面刀封溫度2105 中封刀封溫度2105 操作： 房間濕度控制：生產(chǎn)操作前提前2小時，打開去濕機(jī)進(jìn)行工作場地去濕，使車間濕度到達(dá)40%以下。 鋁箔袋密封性：在線袋袋檢。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第27頁反應(yīng)板制備 反應(yīng)板抽檢質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：陰性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標(biāo)化參考品進(jìn)行檢定，不得出現(xiàn)假陽性。陽性參考品符合率：用國家參考品或國家參考品標(biāo)化參考品進(jìn)行檢定，不得出現(xiàn)假陰性。 最低檢出量：用國家參考品或國家參考品標(biāo)化參考品進(jìn)行檢定， HBsAg adr、adw及ay亞型最低檢出量應(yīng)符合要求。 精密性：用國家參考品或國家參考品標(biāo)化參考品進(jìn)行檢定，CV（%

12、）應(yīng)不高于15%（n=10）。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第28頁生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)陰、陽性對照配制1陰性血清滅活滅活時間，溫度2*陰性對照配制檢測陰性O(shè)D值3陽性血清滅活滅活時間，溫度4*陽性對照配制檢測陽性O(shè)D值陰、陽性對照制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第29頁陰、陽性血清滅活要求： 滅活時間：1小時 溫度：60操作：將血清置水浴箱內(nèi)。隨時注意測量血清溫度，當(dāng)血清溫度抵達(dá)60時，開始計時至要求時間止。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第30頁陰、陽性對照配制控制陰性對照配制質(zhì)控點(diǎn)：陰性對照OD值要求：OD值0.050 陽性對照配制質(zhì)控點(diǎn)：陽性對照OD

13、值要求：OD值1.000 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第31頁通用試劑制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)顯色劑、終止液、洗滌液等通用試劑制備1顯色劑B配制避光配制、分裝溶液配制pH、電導(dǎo)控制配制后12小時內(nèi)進(jìn)行分裝2顯色劑A配制72小時內(nèi)進(jìn)行分裝溶液配制pH、電導(dǎo)控制3終止液配制比重控制 4洗滌液配制pH、電導(dǎo)控制體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第32頁顯色劑B配制質(zhì)量控制點(diǎn)： 1 溶液配制準(zhǔn)確性 用pH計測定溶液pH值應(yīng)符合要求 用電導(dǎo)率儀測定溶液電導(dǎo)率應(yīng)符合要求 2 配制、分裝環(huán)境：避光 3 配制后溶液分裝即時性：12小時內(nèi)進(jìn)行分裝體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第3

14、3頁顯色劑A配制質(zhì)量控制點(diǎn)： 1溶液配制準(zhǔn)確性 用pH計測定溶液pH值 用電導(dǎo)率儀測定溶液電導(dǎo)率 2配制后溶液存放：72小時內(nèi)進(jìn)行分裝體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第34頁終止液配制質(zhì)量控制點(diǎn)： 溶液配制準(zhǔn)確性： 用婆美計測定溶液比重應(yīng)符合要求 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第35頁洗滌液配制質(zhì)量控制點(diǎn)： 溶液配制準(zhǔn)確性 用pH計測定溶液pH值 用電導(dǎo)率儀測定溶液電導(dǎo)率 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第36頁酶結(jié)合物制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)酶結(jié)合物制備、滴配1酶稀釋液配制pH控制2*酶結(jié)合物滴配經(jīng)過比較陽性參考品、陰性參考品、精密性以及最低檢出率情況，用方陣滴

15、定法進(jìn)行EIA法測定確定酶結(jié)合物濃度體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第37頁半成品檢定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物理檢驗 試劑空白陰性對照陽性對照 陰性參考品符合率陽性參考品符合率最低檢出量精密性穩(wěn)定性試驗 :體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第38頁試劑分裝、貼簽生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)除菌過濾質(zhì)量控制點(diǎn)：過濾膜起泡點(diǎn)試驗要求：濾器滅菌12130分鐘；0.22m濾芯泡點(diǎn)3.5bar 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第39頁 分裝質(zhì)量控制點(diǎn)：液量準(zhǔn)確性、試劑瓶密封性 要求： 分裝液量應(yīng)大于等于標(biāo)示量 ； 分裝好試劑瓶應(yīng)無漏液現(xiàn)象。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第40頁 貼簽質(zhì)量控制點(diǎn)：批號打印準(zhǔn)確性 要求：批號等

16、打印正確、清楚操作： 貼瓶開始后，前30瓶應(yīng)仔細(xì)檢驗瓶貼質(zhì)量，包含瓶貼位置，批號等打印是否正確、清楚，粘貼是否牢靠、平整等。 合格后，每50瓶抽1瓶進(jìn)行檢驗。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第41頁合并包裝生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)合并包裝1包裝盒壓印生產(chǎn)日期、批號打印準(zhǔn)確性、清楚度2合并合并組分齊全性印刷類包裝品物料平衡體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第42頁成品檢定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物理檢驗 試劑空白陰性對照陽性對照陰性參考品符合率陽性參考品符合率最低檢出量精密性穩(wěn)定性試驗 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第43頁成品入庫入庫控制點(diǎn)：產(chǎn)品放行匯報；入庫數(shù)要求： 憑由質(zhì)量管理部

17、經(jīng)理簽署成品出廠合格匯報，成品檢定書辦理入庫手續(xù)，入庫數(shù)應(yīng)與成品出廠合格匯報中所報數(shù)量一致。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第44頁P(yáng)2生物安全試驗室管理人員衛(wèi)生 進(jìn)入P2試驗室必須加穿潔凈防護(hù)服，帶一次性乳膠手套和一次性口罩。只允許工作人員進(jìn)入，禁止非工作人員進(jìn)入試驗室。生物安全柜 試驗室操作嚴(yán)格按操作規(guī)程進(jìn)行操作，對存在感染性或潛在感染性操作須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。做好對應(yīng)消毒、使用統(tǒng)計。消毒及滅菌 全部直接或間接接觸病原微生物儀器、設(shè)備、器具，均需進(jìn)行消毒處理，能高壓選擇121高壓滅菌30分鐘處理，不能高壓選擇1%次氯酸鈉消毒。試驗中產(chǎn)生含有感染性或潛在感染性穿透性利器廢物置入黃色塑料利器

18、盒中，其它非利器廢物置入黃色醫(yī)療廢物塑料袋中。 試驗室應(yīng)指定專員負(fù)責(zé)感染性或存在潛在感染性材料保藏，做好標(biāo)識，建立臺帳。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第45頁二.金標(biāo)產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】人類免疫缺點(diǎn)病毒(HIV1/2)抗體診療試劑盒(膠體金法)【包裝規(guī)格】 50人份/盒【預(yù)期用途】本試劑盒適合用于對人血清/血漿或全血中(HIV1/2)抗體快速檢測。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第46頁金標(biāo)產(chǎn)品檢驗原理 本品采取膠體金免疫層析技術(shù)，在玻璃纖維膜上預(yù)包被金標(biāo)識HIVgp160和gp36抗原等，在硝酸纖維膜檢測線和質(zhì)控線上分別包被HIVgp41、gp36混合抗原和抗體等，當(dāng)檢測進(jìn)行時，樣品中HIV抗

19、體可與金標(biāo)識HIV抗原結(jié)合形成復(fù)合物，因為層析作用復(fù)合物沿試紙條向前移動。 若樣品中含有可被檢測HIV抗體，則與檢測線預(yù)包被HIV抗原結(jié)合形成“金標(biāo)識HIV抗原HIV抗體HIV包被抗原”復(fù)合物而凝聚顯色；若樣品中沒有HIV抗體或HIV抗體含量低于檢測限時，則不形成復(fù)合物而不顯色。示 意 圖 陰性加樣區(qū)加樣區(qū) 陽性 無效檢測線質(zhì)控線體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第47頁主要組成成份 HIV(1/2)抗體膠體金試紙條/板 50 Tests 樣品稀釋液（磷酸鹽緩沖液） 1瓶4.0ml/瓶說明書1份體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第48頁金標(biāo)產(chǎn)品主要生產(chǎn)設(shè)備點(diǎn)樣儀切割機(jī)核酸蛋白儀電子防潮箱全自動噴點(diǎn)

20、系統(tǒng)劃膜機(jī)多功效薄膜封口機(jī)干燥箱體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第49頁金標(biāo)產(chǎn)品生產(chǎn)工藝流程圖氯化金膠體金標(biāo)識抗原HIVgp36HIVgp160金標(biāo)識抗原金反應(yīng)墊燒金標(biāo)金噴金干燥包被抗原HIVgp36A抗原檢測線包被液抗HIVgp160單抗質(zhì)控線包被液配制配制反應(yīng)膜劃膜干燥試紙大板組裝試紙條切割試紙板封裝氯化鈉等配制樣品稀釋液待檢成品合并出廠成品檢定滴配 滴配檢定半成品檢定半成品檢定成品檢定分裝、帖簽物料質(zhì)控點(diǎn)工序關(guān)鍵工序體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第50頁gp160抗原制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)細(xì)胞培養(yǎng)取工程細(xì)胞株，經(jīng)接種復(fù)蘇后，進(jìn)行大規(guī)模細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)，搜集培養(yǎng)上清液。上清

21、液經(jīng)滅活、過濾、超濾，得濃縮上清液，置-20保留。無菌操作，培養(yǎng)溫度，溶氧值，pH值，細(xì)胞密度，細(xì)胞表示水平。 純化濃縮上清液經(jīng)親和層析柱純化，用適宜緩沖溶液淋洗、洗脫，搜集洗脫峰，經(jīng)濃縮即得純化gp 160抗原。層析柱填料使用次數(shù)，所用緩沖液pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第51頁gp160抗原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)物理性狀：為澄清溶液 純度：采取SDS分子量 ：免疫活性穩(wěn)定性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第52頁gp36抗原制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)發(fā)酵用gp36工程菌發(fā)酵，搜集菌體。工程菌誘導(dǎo)溫度，工程菌誘導(dǎo)時間。純化菌體經(jīng)超聲破碎，制得粗制gp36抗原。

22、粗制gp36抗原經(jīng)親和層析柱純化，用適宜緩沖液進(jìn)行透析，經(jīng)濃縮即得純化gp 36抗原。超聲破碎時間，層析柱填料使用次數(shù)，所用緩沖液pH值控制，上樣、淋洗、洗脫速度。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第53頁gp36抗原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)純度分子量 功效性試驗 穩(wěn)定性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第54頁gp41抗原制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)發(fā)酵用工程菌發(fā)酵，搜集菌體。工程菌誘導(dǎo)溫度，工程菌誘導(dǎo)時間。純化超聲破碎，制得粗制gp41抗原。粗制gp41抗原經(jīng)親和層析、分子篩等純化，搜集目標(biāo)蛋白峰，即得純化gp 41抗原。超聲破碎時間，層析柱填料使用次數(shù)，所用緩沖液pH值，上樣、淋洗、洗脫速度。體

23、外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第55頁 gp41抗原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)純度：采取SDS法檢定應(yīng)符合要求分子量 功效性試驗 穩(wěn)定性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第56頁 抗HIV單抗制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制生產(chǎn)工序質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)細(xì)胞復(fù)蘇及傳代培養(yǎng)單克隆抗體細(xì)胞株，經(jīng)接種復(fù)蘇后，進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。無菌操作，培養(yǎng)基配制，細(xì)胞培養(yǎng)溫度。腹水制備福氏不完全佐劑免疫，7-10天后單克隆抗體細(xì)胞懸液注射于F1代小鼠 ，10天后采集小鼠腹水，離心，制得單抗-HIV腹水。對數(shù)生長久細(xì)胞接種。純化用制備抗HIV 單抗腹水，經(jīng)親和層析柱純化等即得抗HIV 單抗。層析柱填料使用次數(shù)，所用緩沖液pH值，上樣、平衡、洗脫速度。體外診斷

24、試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第57頁單抗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)純度 分子量 功效性檢測穩(wěn)定性試驗：37放置15天，檢測上述標(biāo)本，可到達(dá)上述功效性檢測標(biāo)準(zhǔn)。 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第58頁金反應(yīng)墊制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)金反應(yīng)墊制備1膠體金制備顏色、波長控制2*金標(biāo)抗原制備pH值、顏色、波長控制3*滴配適當(dāng)?shù)卣{(diào)整兩種金標(biāo)抗原濃度和百分比，比較靈敏度和特異性結(jié)果，確定最正確工作濃度。4*噴金包被量控制5抽干真空度、時間控制6保留避光、干燥控制體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第59頁金反應(yīng)墊制備膠體金制備控制點(diǎn)：膠體金顏色、波長控制要求： 膠體金顏色：紅色； 波長：5284nm體

25、外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第60頁金反應(yīng)墊制備金標(biāo)抗原制備質(zhì)量控制點(diǎn)：GP160和GP36抗原標(biāo)識時 pH值、顏色、波長控制要求：用PH計測定，pH值：6-7； 顏色：紅色 波長：5334nm體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第61頁金反應(yīng)墊制備滴 配質(zhì)量控制點(diǎn)：金標(biāo)抗原靈敏度和特異性要求：經(jīng)過HIV快速診療試劑國家參考品測定方法：適當(dāng)?shù)卣{(diào)整兩種金標(biāo)抗原濃度和百分比，比較靈敏度和特異性結(jié)果，確定最正確工作濃度。用HIV快速診療試劑國家參考品檢驗，應(yīng)符合要求。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第62頁金反應(yīng)墊制備噴 金質(zhì)量控制點(diǎn)：包被液量準(zhǔn)確性 要求：2l/mm 方法： 將待包被玻璃纖維放置于面

26、板，開始包被，每張玻璃纖維應(yīng)用目測法檢驗加液是否完整。連續(xù)5張玻璃纖維檢驗合格后，進(jìn)入正常包被過程。正常包被過程中每100張金反應(yīng)墊應(yīng)抽1張作過程檢驗。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第63頁金反應(yīng)墊制備金反應(yīng)墊抽干質(zhì)量控制點(diǎn)：真空度、時間控制要求： 真空度：低于100Pa 時間：維持2小時以上體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第64頁 金反應(yīng)墊保留質(zhì)量控制點(diǎn)：金反應(yīng)墊存放要求：避光、干燥（濕度30% ）操作： 用目測法檢測保留金反應(yīng)墊鋁箔袋密封性。 存放金反應(yīng)墊干燥柜 天天監(jiān)測濕度2次。金反應(yīng)墊制備體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第65頁金反應(yīng)膜制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控

27、制點(diǎn)金反應(yīng)膜制備1質(zhì)控線包被液配制pH值及濃度控制2檢測線包被液配制pH值及濃度控制3*包被抗原滴配適當(dāng)?shù)卣{(diào)整抗原濃度和百分比，比較靈敏度和特異性結(jié)果，確定最正確工作濃度。4*劃膜包被點(diǎn)樣量控制、質(zhì)控線及檢測線間距控制5抽干真空度、時間控制6保留避光、濕度控制體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第66頁金反應(yīng)膜制備質(zhì)控線包被液配制控制點(diǎn)： 包被緩沖液pH值及包被濃度要求： 包被緩沖液pH值：用pH計測定 包被濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應(yīng)符合要求體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第67頁金反應(yīng)膜制備檢測線包被液配制質(zhì)量控制點(diǎn)： 包被緩沖液pH值及包被濃度要求： 包被緩沖液pH值：pH計測定 包被

28、濃度：用核酸蛋白儀檢測其蛋白濃度應(yīng)符合要求體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第68頁金反應(yīng)膜制備包被抗原滴配控制點(diǎn)：包被抗原滴配靈敏度和特異性要求：經(jīng)過HIV快速診療試劑國家參考品測定方法：適當(dāng)?shù)卣{(diào)整抗原濃度和百分比，比較靈敏度和特異性結(jié)果，確定最正確工作濃度。用國家參考品檢驗，應(yīng)符合要求。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第69頁金反應(yīng)膜制備劃膜包被控制點(diǎn)：點(diǎn)樣量、質(zhì)控線及檢測線間距要求：點(diǎn)樣量0.5-1.5l/mm ；兩線間距5-6.5mm操作： 將待包被硝酸纖維素膜放置于軌道，用卡尺檢測質(zhì)控線和檢測線出樣管間距，符合要求后開始包被。觀察包被液體出樣情況，連續(xù)5分鐘無異常，則進(jìn)入正常包被過程。

29、正常包被過程中每卷金反應(yīng)膜抽1張進(jìn)行檢驗。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第70頁金反應(yīng)膜制備金反應(yīng)膜抽干質(zhì)量控制點(diǎn)：真空度、時間控制要求： 真空度：低于100Pa 時間：維持2小時以上體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第71頁金反應(yīng)膜制備金反應(yīng)膜保留控制點(diǎn)：金反應(yīng)膜存放要求：避光、干燥（濕度30% ）操作： 用目測法檢測保留金反應(yīng)膜鋁箔袋密封性。 存放金反應(yīng)膜干燥柜 天天監(jiān)測濕度2次。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第72頁樣品稀釋液制備生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)樣品稀釋液配制質(zhì)量控制點(diǎn)： pH值要求：用pH計進(jìn)行測量體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第73頁試紙大板組裝及分裝生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)

30、工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)試紙大板組裝及分裝1*試紙大板裝配加樣墊、金反應(yīng)墊、金反應(yīng)膜、吸水紙等各組分銜接控制2*試紙條切割試紙條切割寬度控制3CT盒組裝試紙條完整性檢驗4裝鋁箔袋鋁箔袋密封性體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第74頁試紙大板組裝及分裝試紙大板裝配質(zhì)量控制點(diǎn)： 加樣墊、金反應(yīng)墊、金反應(yīng)膜、吸水紙等各組分應(yīng)銜接緊密體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第75頁試紙大板組裝及分裝試紙條切割質(zhì)量控制點(diǎn)：試紙條切割寬度 要求：3002mm*8mm 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第76頁試紙大板組裝及分裝CT盒組裝質(zhì)量控制點(diǎn)：應(yīng)檢驗試紙條完整性 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第77頁試紙大板組

31、裝及分裝控制裝鋁箔袋質(zhì)量控制點(diǎn)： 鋁箔袋應(yīng)密封體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第78頁樣品稀釋液配制、分裝及貼簽生產(chǎn)工序生產(chǎn)關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)樣品稀釋液制備1配制溶液配制pH控制2分裝、燈檢液量準(zhǔn)確性，分裝液量應(yīng)不低于標(biāo)示量3標(biāo)簽打印批號打印準(zhǔn)確性及清楚度體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第79頁合并包裝生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)質(zhì)量控制點(diǎn)：1.包裝盒批號打印準(zhǔn)確、清楚。2.合并組分齊全性，物料損耗是否符合要求要求。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第80頁成品檢驗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)外觀 ：試紙條外觀平整，材料附著牢靠。每條寬大于3mm。 物理檢驗：膜面無破損、劃痕。 陰性參考品符合率 ：應(yīng)符合要求陽性參考品符合率

32、 ：應(yīng)符合要求最低檢出限參考品符合率：應(yīng)符合要求精密性試驗：應(yīng)符合要求濾血功效：應(yīng)符合要求穩(wěn)定性試驗：試劑盒各組分置3715天 ，應(yīng)符合性能要求。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第81頁三.PCR核酸診療試劑產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】乙型肝炎病毒核酸定量檢測試劑盒（PCR-熒光探針法）【包裝規(guī)格】 32人份/盒【預(yù)期用途】 本試劑盒采取PCR技術(shù)、實(shí)時熒光探針技術(shù)、用于對臨床血清或血漿標(biāo)本中乙型肝炎病毒核酸DNA定量檢測。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第82頁P(yáng)CR診療試劑原理本品系由乙型肝炎病毒特異性引物、熒光探針、以及Taq酶等成份組成，采取PCR體外擴(kuò)增方法，用過熒光信號改變，定量檢測人血清或血

33、漿標(biāo)本中HBV DNA。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第83頁【試劑盒組份】樣品處理液A樣品處理液BHBV PCR反應(yīng)液AHBV PCR反應(yīng)液BHBV PCR反應(yīng)液C工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品陰性對照 體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第84頁生產(chǎn)工藝流程圖Tris、PEG 6000、氯化鈉、辛酸鈉、EDTA-Na2樣品處理母液引物、探針、Taq酶、dNTP、UNG酶樣品處理試劑樣品處理液A樣品處理液BPCR工作母液PCR擴(kuò)增反應(yīng)試劑PCR反應(yīng)液APCR反應(yīng)液B PCR反應(yīng)液C基因工程菌株工作標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)粒配制配制配制配制培養(yǎng)、抽提工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品工作標(biāo)準(zhǔn)品HBV DN

34、A陰性血陰性對照配制配制分裝待檢半成品半成品檢定半成品待檢成品貼簽、合并出廠成品成品檢定物料工序關(guān)鍵工序質(zhì)控點(diǎn)功效性試驗工作參數(shù)標(biāo)定體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第85頁P(yáng)CR產(chǎn)品生產(chǎn)和質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)生產(chǎn)工序質(zhì)量控制點(diǎn)原輔料檢驗主要原輔料按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行檢驗，合格才能用于生產(chǎn)提取試劑配制及分裝配制完成試劑馬上分裝 ，分裝裝量準(zhǔn)確性控制擴(kuò)增試劑配制及分裝配制完成試劑應(yīng)立分裝 ，分裝裝量準(zhǔn)確性控制*工作標(biāo)準(zhǔn)品制備工作標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)半成品檢定應(yīng)符合對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)成品檢定應(yīng)符合對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第86頁工作標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo) 依據(jù)測定HBV質(zhì)粒含量，取適量HBV質(zhì)粒用模擬血清稀釋后，以質(zhì)控參考

35、品為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)定，使最終稀釋濃度為約107Copies/ml，即為工作標(biāo)準(zhǔn)品。 然后將工作標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行10倍系列梯度稀釋，稀釋后為工作標(biāo)準(zhǔn)品、工作標(biāo)準(zhǔn)品、工作標(biāo)準(zhǔn)品。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第87頁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)陰性對照：陰性對照檢測結(jié)果應(yīng)為陰性，工作標(biāo)準(zhǔn)品： 工作標(biāo)準(zhǔn)品Q1Q4測定值符合下表范圍，而且其線性相關(guān)系數(shù)|r|0.950。工作標(biāo)準(zhǔn)品 已知拷貝數(shù)（IU/ml） 拷貝數(shù)允許范圍（IU/ml）Q1（工作標(biāo)準(zhǔn)品）K11073.54K11062.83K1107Q2（工作標(biāo)準(zhǔn)品）K21063.54K21052.83K2106Q3（工作標(biāo)準(zhǔn)品）K31053.54K31042.83K3105Q4（

36、工作標(biāo)準(zhǔn)品）K41043.54K41032.83K4104陰性參考品符合率：檢測國家標(biāo)準(zhǔn)品，對8份陰性參考品檢測結(jié)果不得出現(xiàn)假陽性。陽性參考品符合率：檢測國家標(biāo)準(zhǔn)品，對9份陽性參考品檢測結(jié)果不得出現(xiàn)假陰性。最低檢出限：檢測國家標(biāo)準(zhǔn)品中，線性和靈敏度參考品L0L5必須檢出，L6僅供參考。與標(biāo)準(zhǔn)值線性回歸系數(shù)R97.0%。精密性：測定企業(yè)工作標(biāo)準(zhǔn)品10次，定量結(jié)果變異CV10%。若以Ct計算，CV值小于15（n10）。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第88頁四.臨床化學(xué)診療試劑產(chǎn)品【產(chǎn)品名稱】葡萄糖試劑盒（氧化酶法）【預(yù)期用途】 本試劑盒用以測定人血清中葡萄糖含量。體外診斷試劑生產(chǎn)質(zhì)量控制要點(diǎn)概要第89頁生化產(chǎn)品包裝規(guī)格規(guī)格1（240ml）R1:2*80ml R2:1*80ml 校準(zhǔn)