1、不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量測定【摘要】目的測定柘木藥材中雙指標(biāo)成分槲皮素與山萘酚的含量，為柘木商品藥材的質(zhì)量控制提供方法。方法采用高效液相色譜法，以槲皮素和山萘酚為指標(biāo)，對購自廣西不同商品柘木藥材進(jìn)展含量測定。結(jié)果不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量有顯著差異。結(jié)論實(shí)驗(yàn)方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可為鑒定柘木的藥用部位和控制柘木藥材的質(zhì)量提供參考?！娟P(guān)鍵詞】柘木;槲皮素;山柰酚;高效液相色譜法柘木為?？浦参镨蠘鋟draniatriuspidata(arr.)Bur.的枯燥根及木材1。柘木始載于?本草拾遺?，1977年版?中國藥典?曾將柘樹的根收載于穿破石項(xiàng)下2，是我國傳統(tǒng)的中藥材。柘樹廣泛分布

2、于我國的華南、華東、西南以及河北以南地區(qū)。民間多用柘木的水煎液治療消化系統(tǒng)的癌癥3，能明顯改善病人生活質(zhì)量，延長生存期。柘木糖漿作為消化系統(tǒng)癌癥治療中的輔助治療藥物具有較好的臨床療效。文獻(xiàn)報道柘木中含有黃酮、生物堿及多糖等多種成分，現(xiàn)代藥理研究證明黃酮類成分具有體外抗腫瘤的作用4。本實(shí)驗(yàn)采用HPL法，以槲皮素和山萘酚為指標(biāo)，對購自廣西不同商品的柘木藥材進(jìn)展了含量測定，通過雙指標(biāo)成分含量來評價柘木商品藥材的質(zhì)量和鑒定藥用部位，為柘木商品藥材的質(zhì)量控制提供參考。1儀器與試藥1.1儀器Agilent1100液相色譜儀;DAD檢測器;電子天平(上海天平儀器廠);KQ-250型超聲清洗器(昆山超聲儀器)

3、。1.2試藥實(shí)驗(yàn)所用藥材購于廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室廖月葵教師鑒定為桑科柘屬植物柘樹udraniatriuspidata(arr.)Bur.的枯燥根及木材。槲皮素(批號:10129905)、山萘酚(批號:1108612202203)購自中國藥品生物制品檢定所;甲醇為色譜純(天津科密歐公司);水為亞沸純化水、磷酸、鹽酸為分析純。2方法與結(jié)果2.1色譜條件色譜柱為DikaDiansil-18，(5，2004.6);流動相為甲醇-0.1%磷酸水(4852);檢測波長365n;體積流量:1lin-1。理論塔板數(shù)按槲皮素和山萘酚峰計均大于5000。見圖1。a.對照品b.供試品1-槲皮素2-

4、山萘酚圖1高效液相色譜圖2.2供試品溶液的制備精細(xì)稱取柘木藥材粉末(過60目篩)2g，置于50l圓底燒瓶中，加甲醇25l，稱重，回流提取2h，冷卻，補(bǔ)足失重，過濾，精細(xì)移取續(xù)濾液10l，參加25%的鹽酸10l，水浴回流水解30in，快速冷卻，轉(zhuǎn)移至25l容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取樣，過濾，作為供試品溶液。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.3對照品溶液的制備精細(xì)稱取槲皮素對照品5.10g、山萘酚對照品5.05g,各加甲醇溶解定容至25l，作為貯存溶液。各取5l按11混合后，定容至25l容量瓶中，配成混合對照品溶液，濃度分別為40.8gl-1和40.4gl-1。2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精細(xì)汲取對照品溶液(

5、槲皮素和山萘酚)1，2，3，4，5，6l注入高效液相色譜儀中，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)展回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程。槲皮素：Y=165.12X-33.991，r=0.9999，線性范圍：0.04080.245g;山萘酚:Y=168.47X-45.532,r=0.9996，線性范圍：0.04040.242g。2.5精細(xì)度實(shí)驗(yàn)取含槲皮素和山萘酚的混合對照品溶液，進(jìn)樣5l，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄槲皮素、山萘酚的峰面積，計算RSD分別為0.89%與0.92%(n=5)，說明精細(xì)度良好。2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取柘木供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10h測定，結(jié)果槲皮素峰面積的RS

6、D為1.47%，山柰酚峰面積的RSD為1.15%。說明溶液中槲皮素和山萘酚在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。2.7重復(fù)性考察取樣品5份，按供試品方法制備。分別精細(xì)汲取20l，根據(jù)槲皮素、山萘酚色譜峰面積測定含量，計算RSD分別為1.18%與1.31%(n=5)。2.8回收率實(shí)驗(yàn)精細(xì)稱取準(zhǔn)確含量的樣品4.0g，置圓底燒瓶中，精細(xì)參加槲皮素對照品0.660g、山萘酚對照品1.233g，按供試品的方法制備。精細(xì)汲取20l，根據(jù)色譜峰面積測定含量。結(jié)果說明，本方法回收率均在95%105%之間，RSD分別為1.41%與1.63%，符合有關(guān)規(guī)定。2.9樣品測定按上述“2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，測定不同商品柘木中槲皮

7、素和山萘酚的含量。結(jié)果見表1。表1不同商品柘木中槲皮素和山萘酚的含量藥用部位1廣西省南寧市郊區(qū)0.090.20根2廣西省南寧市江西村0.090.22根3廣西省南寧市尹嶺巖0.100.21根4廣西省扶綏縣國醫(yī)藥店0.090.43根5廣西省南寧市九塘21號店面0.110.20根6廣西省南寧市大明山0.100.21根7廣西省邕寧九塘1號店面0.090.31根8廣西省南寧市武鳴縣0.140.30根9廣西省金秀縣0.060.23根10廣西省靈山縣0.030.28根11廣西省南寧市九塘4號店面0.220.06莖12廣西省南寧市郊吳圩0.200.08莖13廣西省窯陽縣0.290.05莖14廣西省上林縣0.2

8、10.35莖及根15廣西省邕寧九塘2號店面0.030.05品種質(zhì)量有問題3討論本實(shí)驗(yàn)之前比擬了采自同一產(chǎn)地柘木不同藥用部位槲皮素與山萘酚的含量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)根的山萘酚含量均0.2gg-1，而槲皮素的含量均較低;莖的槲皮素含量均0.2gg-1，而山萘酚含量均較低。根據(jù)這一結(jié)論可以看出，本實(shí)驗(yàn)15個樣品中，110號樣品由于山萘酚的含量均0.2gg-1，且槲皮素的含量較低，此商品藥材鑒定為柘木的根;1113號樣品由于槲皮素的含量均0.2gg-1，山萘酚的含量較低，由此鑒定該商品藥材為柘木的莖。14號樣品由于槲皮素和山萘酚的含量均0.2gg-1，該商品藥材為柘木的根及莖混合品。15號商品藥材槲皮素與山萘酚

9、的含量均很低，因此斷定該樣品的品種質(zhì)量有問題。據(jù)文獻(xiàn)報道柘木中黃酮類化合物槲皮素與山萘酚大多以糖苷的形式存在，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，未水解的樣品槲皮素和山萘酚的含量很低，水解后含量顯著升高，因此本實(shí)驗(yàn)采取酸水解方法進(jìn)展前處理，對于酸水解條件的選擇，考察了鹽酸的不同濃度、加酸量、水解時間和不同提取方法。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著酸濃度的增加，槲皮素與山萘酚的含量也增加，在鹽酸濃度大于25%后含量增加并不明顯且考慮到酸濃度太高對色譜柱的損害，因此選用25%的鹽酸10l，加熱回流30in。流動相的pH值對色譜峰的峰形及別離度影響很大，色譜條件最終確定流動相為：甲醇-0.1%磷酸水(4852)，色譜峰別離度良好。本實(shí)驗(yàn)的方法簡便，可靠，可用于分析鑒定柘木的不同藥用部位，評價柘木商品藥材的品種與質(zhì)量，為柘木商品藥材的鑒定與質(zhì)量控制提供參考?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊).上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1998：1502.2國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京：人民衛(wèi)生出版社，1977：443.3丁紅華，陳揀琿，朱莉菲，等.柘木糖漿治療胃癌療效觀察