1、PCR實(shí)驗(yàn)室及核酸檢測院感防控單擊此處添加副標(biāo)題匯報人：人民醫(yī)院 醫(yī)院感染管理科聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制綜發(fā)2020181號文件要求：“各地要加強(qiáng)三級醫(yī)院、傳染病?？漆t(yī)院、縣（區(qū)）級及以上疾控機(jī)構(gòu)、海關(guān)及有條件的縣醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室建設(shè)，使其具備開展新冠病毒檢測能力”感控人員在參與PCR實(shí)驗(yàn)室的建設(shè)工作，和對使用中實(shí)驗(yàn)室的檢查中，仍存在一些問題新冠病毒核酸檢測是COVID-19確診的直接證據(jù)，也是早期發(fā)現(xiàn)新冠病毒感染者的有效手段 背 景醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實(shí)驗(yàn)室管理辦法醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）新型冠狀病毒肺炎防控方案 （第九版）主要依據(jù)PCR實(shí)驗(yàn)室院感防控核酸檢

2、測及PCR實(shí)驗(yàn)室概述01大 綱核第一部份核酸檢測及PCR實(shí)驗(yàn)室概述PCR是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。又稱為特異性DNA序列體外引物定向酶促擴(kuò)增法，這種方法可以把極微量的靶DNA特異地擴(kuò)增上百萬倍，是基因擴(kuò)增技術(shù)的一次重大革新。PCR技術(shù)憑借特異性強(qiáng)、靈敏度高、對檢測樣品要求低、方便快捷等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于各種臨床診斷PCR實(shí)驗(yàn)，即臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，是專門用來檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病等病毒感染性疾病的一種檢測手段。它可以通過將病毒體內(nèi)所含的基因進(jìn)行擴(kuò)增的方法，測出一些病毒含量不高的感染者體內(nèi)是否含有特定的病毒。就新冠病毒核酸檢測來，RT-PCR

3、是目前使用最廣泛和較準(zhǔn)確的篩選和確認(rèn)方法（一）PCR實(shí)驗(yàn)原理新冠病毒核酸檢測流程核酸提取0第一階段體系配置第二階段上機(jī)檢測第三階段具備相關(guān)專業(yè)的大專以上學(xué)歷或具有中級及以上專業(yè)技術(shù)職務(wù)任職資格，并有2年以上的實(shí)驗(yàn)室工作經(jīng)歷基因檢驗(yàn)相關(guān)培訓(xùn)合格證書按照標(biāo)本量配備實(shí)驗(yàn)室檢測，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性和報告的及時性（二）實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)人員要求開展核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室，應(yīng)當(dāng)符合病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例（國務(wù)院令第424號）和醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)2010194號）有關(guān)規(guī)定具備經(jīng)過衛(wèi)生健康行政部門審核備案的生物安全二級及以上實(shí)驗(yàn)室條件，以及臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室條件獨(dú)立設(shè)置的醫(yī)

4、學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)當(dāng)符合醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本標(biāo)準(zhǔn)（試行）醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范（試行）等要求（三）實(shí)驗(yàn)室資質(zhì)要求新冠核酸檢測實(shí)驗(yàn)室按功能區(qū)布置位置的不同，可分為集中布置形式和分散布置形式開展新冠病毒核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)設(shè)置以下區(qū)域：試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)根據(jù)使用儀器的功能，區(qū)域可適當(dāng)合并。如采用標(biāo)本加樣、核酸提取及擴(kuò)增檢測為一體的自動化分析儀，標(biāo)本制備區(qū)、擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)可合并（四）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)要求集中布置形式的實(shí)驗(yàn)室設(shè)置應(yīng)遵循“各區(qū)獨(dú)立，單向流動(注意風(fēng)向，壓力梯度走向)，因地制宜，方便工作”的原則（四）實(shí)驗(yàn)室分區(qū)要求試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)用于分裝、儲存試劑、制備擴(kuò)增反應(yīng)混合液，

5、以及儲存和準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)耗材該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、離心機(jī)、試驗(yàn)臺、渦旋振蕩器、微量加樣器等為防止污染，該區(qū)宜保持正壓狀態(tài)（五）實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功能標(biāo)本制備區(qū)標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶的開啟、標(biāo)本滅活(必要時)、核酸提取及模板加入至擴(kuò)增反應(yīng)管等該區(qū)應(yīng)配備冰箱或冰柜、生物安全柜、離心機(jī)、試驗(yàn)臺、微量加樣器，可根據(jù)實(shí)際工作需要選配自動化核酸提取儀等標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶的開啟、分裝應(yīng)在生物安全柜內(nèi)完成為防止污染，該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)為操作方便，標(biāo)本的分裝以及核酸提取也可以在獨(dú)立的生物安全二級(BSL-2)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，提取的核酸可以轉(zhuǎn)運(yùn)至該區(qū)加至擴(kuò)增反應(yīng)液中（五）實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功能核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析區(qū)：進(jìn)行核酸擴(kuò)增反應(yīng)和產(chǎn)物分析該區(qū)應(yīng)配備實(shí)時

6、熒光定量PCR儀為防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染環(huán)境，該區(qū)宜保持負(fù)壓狀態(tài)，壓力等于或低于標(biāo)本制備區(qū)（五）實(shí)驗(yàn)室各區(qū)的功能02PCR實(shí)驗(yàn)室感染防控第二部份實(shí)驗(yàn)室核心控制目標(biāo)實(shí)驗(yàn)室生物安全（laboratory biosafety）：實(shí)驗(yàn)室的生物安全條件和狀態(tài)不低于容許水平，可避免實(shí)驗(yàn)室人員、來訪人員、社區(qū)及環(huán)境受到不可接受的損害，符合相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)等對實(shí)驗(yàn)室生物安全責(zé)任的要求生物安全柜（ biosafety cabinet；BSC ）：具備氣流控制及高效空氣過濾裝置的操作柜，可有效降低病原微生物或生物實(shí)驗(yàn)過程中產(chǎn)生的有害氣溶膠對操作者和環(huán)境的危害生物安全實(shí)驗(yàn)室（ biosafety laboratory ）：

7、通過防護(hù)屏障和管理措施，達(dá)到生物安全要求的病原微生物實(shí)驗(yàn)室加強(qiáng)型生物安全二級實(shí)驗(yàn)室（ enhanced biosafety level 2 laboratory ）：在普通型生物安全二級實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)上，通過機(jī)械通風(fēng)系統(tǒng)等措施加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)要求的實(shí)驗(yàn)室相關(guān)定義PCR實(shí)驗(yàn)室是否等同于生物安全實(shí)驗(yàn)室？標(biāo)本管理個人防護(hù)實(shí)驗(yàn)過程防控（前、中、后）措施規(guī)范處置醫(yī)療廢物及時處理污染核酸檢測院感防控關(guān)鍵點(diǎn)標(biāo)本種類：上呼吸道標(biāo)本、下呼吸道標(biāo)本、便標(biāo)本/肛拭子、血液標(biāo)本、血清標(biāo)本、尿標(biāo)本、物體表面標(biāo)本、污水標(biāo)本、其它標(biāo)本包裝所有標(biāo)本應(yīng)當(dāng)放在大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的標(biāo)本采集管里，擰緊將密閉后的標(biāo)

8、本裝入密封袋，每袋限一份標(biāo)本標(biāo)本包裝要求要符合危險品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)涉及外部標(biāo)本運(yùn)輸?shù)?，?yīng)根據(jù)標(biāo)本類型，按照A類或B類感染性物質(zhì)進(jìn)行三層包裝（一）標(biāo)本管理基本要求標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本包裝應(yīng)符合國際民航組織文件 Doc9284危險品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則的 PI602分類包裝要求根據(jù)當(dāng)前版本的國際航空運(yùn)輸協(xié)會（IATA）危險品規(guī)則， SARS-CoV-2 感染疑似和確診患者標(biāo)本屬于 UN 3373 B 類生物物質(zhì)，涉及外部標(biāo)本運(yùn)輸?shù)?，?yīng)按照 B類感染性物質(zhì)進(jìn)行三層包裝疑似或確診患者標(biāo)本應(yīng)標(biāo)示有特殊標(biāo)識，并進(jìn)行單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)。（一）標(biāo)本管理基本要求注意：標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)箱封閉前，須使用 75%酒精或 0.2

9、%含氯消毒劑噴灑消毒，再次開蓋放入標(biāo)本前、后也要噴灑消毒。不允許手持采樣管或黃袋子裝著采樣管送檢。標(biāo)本接收標(biāo)本接收人員的個人防護(hù)按采樣人員防護(hù)裝備執(zhí)行標(biāo)本運(yùn)送人員和接收人員對標(biāo)本進(jìn)行雙簽收注意：接到標(biāo)本后，應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)對標(biāo)本進(jìn)行清點(diǎn)核對日常小規(guī)模檢測，樣本可以直接進(jìn)入樣本制備區(qū)，進(jìn)行清理核對大規(guī)模檢測，樣本量太大，需要先接收，然后送入專門的樣本整理區(qū)進(jìn)行清理核對。因此，需要單獨(dú)設(shè)置樣本接收區(qū)、樣本整理區(qū)，兩區(qū)不可混淆、混合?。ㄒ唬?biāo)本管理基本要求標(biāo)本處理 使用含胍鹽等滅活型采樣液的標(biāo)本無需進(jìn)行滅活處理，可直接進(jìn)行核酸提取使用非滅活型采樣液的標(biāo)本，按照核酸提取試劑盒的說明，取適量標(biāo)本加至核

10、酸提取裂解液中充分混勻作用一定的時間則可以有效滅活病毒選用熱滅活時可采用95加熱15分鐘，不推薦采用56孵育30分鐘的處理方式滅活病毒，該條件不能保障充分滅活病毒檢測完成后的剩余標(biāo)本，可在結(jié)果報告發(fā)出到達(dá)其保存時限要求后，如為檢測前非滅活標(biāo)本，則裝入專用密封廢物轉(zhuǎn)運(yùn)袋中進(jìn)行壓力蒸汽滅菌處理，隨后隨其他醫(yī)療廢物一起轉(zhuǎn)運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行銷毀處理；如為檢測前已滅活標(biāo)本，則無需高壓滅活，直接按醫(yī)療廢物一起轉(zhuǎn)運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行銷毀處理擴(kuò)增完成后反應(yīng)管不可開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不可高壓，按一般醫(yī)療廢物轉(zhuǎn)移出實(shí)驗(yàn)室處理（一）標(biāo)本管理基本要求核酸檢測應(yīng)當(dāng)在生物安全二級實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，并應(yīng)在生物安全風(fēng)險評估的基

11、礎(chǔ)上，采取適當(dāng)?shù)膫€體防護(hù)措施，包括手套、口罩和隔離衣等（二）規(guī)范做好個人防護(hù)應(yīng)使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行桌面、臺面及地面消毒消毒液需每天新鮮配制，不超 過24小時轉(zhuǎn)運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)桶應(yīng)在生物安全柜內(nèi)開啟轉(zhuǎn)運(yùn)桶開啟后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精對轉(zhuǎn)運(yùn)桶內(nèi)壁和標(biāo)本采集密封袋進(jìn)行噴灑消毒取出標(biāo)本采集管后，應(yīng)首先檢查標(biāo)本管外壁是否有破損、管口是否泄露或是否有管壁殘留物確認(rèn)無滲漏后，推薦用0.2%含氯消毒劑噴灑、擦拭消毒樣品管外表面（此處不建議使用75%酒精，以免破壞標(biāo)本標(biāo)識）如發(fā)現(xiàn)滲漏應(yīng)立即用吸水紙覆蓋，并噴灑有效氯含量為0.55%的含氯消毒劑進(jìn)行消毒處理，不得對標(biāo)本繼續(xù)檢測操

12、作，做好標(biāo)本不合格記錄后需立即進(jìn)行密封打包，壓力蒸汽滅菌處理后銷毀（三）實(shí)驗(yàn)前標(biāo)本進(jìn)行核酸提取和檢測時應(yīng)盡可能在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行操作如為打開標(biāo)本管蓋或其他有可能產(chǎn)生氣溶膠的操作，則必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行（四）實(shí)驗(yàn)中需對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行清潔，消除可能的核酸污染實(shí)驗(yàn)室空氣清潔：實(shí)驗(yàn)室每次檢測完畢后，可采用房間固定和/或可移動紫外燈進(jìn)行紫外照射2小時以上，必要時可采用核酸清除劑等試劑清除實(shí)驗(yàn)室殘留核酸工作臺面清潔：每天實(shí)驗(yàn)后，使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行臺面、地面清潔生物安全柜消毒：實(shí)驗(yàn)使用后的耗材廢棄物放入醫(yī)療廢物垃圾袋中，包扎后使用0.2%含有效氯消毒液或75%酒精噴灑消毒其外表面，手消

13、毒后將垃圾袋帶出生物安全柜放入實(shí)驗(yàn)室廢棄物轉(zhuǎn)運(yùn)袋中；試管架、實(shí)驗(yàn)臺面、移液器等使用75%酒精進(jìn)行擦拭；隨后關(guān)閉生物安全柜，紫外燈照射30分鐘轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒：轉(zhuǎn)運(yùn)及存放標(biāo)本的容器使用前后需使用0.2%含氯消毒劑或75%酒精進(jìn)行擦拭或噴灑消毒塑料或有機(jī)玻璃材質(zhì)物品清潔：使用0.2%含氯消毒劑或過氧乙酸或過氧化氫擦拭或噴灑（五）實(shí)驗(yàn)后廢液的處理實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的廢液可分為普通污水和感染性廢液普通污水產(chǎn)生于洗手池等設(shè)備，對此類污水應(yīng)當(dāng)排入實(shí)驗(yàn)室水處理系統(tǒng)，經(jīng)統(tǒng)一處理達(dá)標(biāo)后進(jìn)行排放感染性廢液即在實(shí)驗(yàn)操作過程中產(chǎn)生的廢液，需采用化學(xué)消毒（0.55%含氯消毒劑處理）或物理消毒（紫外照射30分鐘以上）方式處理，確認(rèn)徹

14、底消毒滅活后方可排入實(shí)驗(yàn)室水處理系統(tǒng)，經(jīng)統(tǒng)一處理達(dá)標(biāo)后進(jìn)行排放污水消毒處理效果按GB18466醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染物排放標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)規(guī)定進(jìn)行評價（六）實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢物管理固體廢物的處理應(yīng)當(dāng)分類收集收集容器應(yīng)當(dāng)具有不易破裂、防滲漏、耐濕耐熱、可密封等特性實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的潛在感染性廢物不允許堆積存放，應(yīng)當(dāng)及時進(jìn)行壓力蒸汽滅菌處理廢物處置之前，應(yīng)當(dāng)存放在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)指定的安全位置小型固體廢物如檢測耗材、個人防護(hù)裝備等均需使用雙層防滲漏專用包裝袋打包密封后經(jīng)過壓力蒸汽滅菌處理，再轉(zhuǎn)運(yùn)出實(shí)驗(yàn)室體積較大的固體廢物如HEPA過濾器，應(yīng)當(dāng)由專業(yè)人士進(jìn)行原位消毒后，裝入安全容器內(nèi)進(jìn)行消毒滅菌。不能進(jìn)行壓力蒸汽滅菌的物品如電子設(shè)備可采用環(huán)氧乙烷熏蒸消毒處理經(jīng)消毒滅菌處理后移出實(shí)驗(yàn)室的固體廢物需集中交由醫(yī)療廢物處理單位進(jìn)行處置（六）實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢物管理PCR實(shí)驗(yàn)室是否必須設(shè)污物走廊？（六）實(shí)驗(yàn)室醫(yī)療廢物管理標(biāo)本污染生物安全柜的操作臺造成局限污染時：立即用吸水紙覆蓋，并使用0.55%含氯消毒劑進(jìn)行噴灑消毒。消毒液需要現(xiàn)用現(xiàn)配，24小時內(nèi)使用。標(biāo)本傾覆造成實(shí)驗(yàn)室污染時：保持實(shí)驗(yàn)室空間密閉，避免污染物擴(kuò)散。立即使用潤濕有0.55%含氯消毒劑的毛巾覆蓋污染區(qū)。