1、手足口病流行病和病毒學(xué)特征1人腸道病毒簡介和分類人腸道病毒2脊髓灰質(zhì)炎病毒：通過將標(biāo)本接種至猴子體內(nèi)，1909年首次鑒定出該病毒，1949年，利用細(xì)胞培養(yǎng)的方法增殖病毒，為疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。柯薩奇病毒：1948年在美國紐約Coxsackie鎮(zhèn)，將兩名麻痹患兒的標(biāo)本接種至乳鼠體內(nèi)，分離出來的一組病毒定名為柯薩奇病毒。根據(jù)它們?cè)谌槭笊袭a(chǎn)生的組織病理學(xué)變化和在細(xì)胞培養(yǎng)上的能力，分為柯薩奇病毒A組和B組。?？刹《荆?951年在一名無癥狀的兒童的糞便標(biāo)本中分離到，在細(xì)胞培養(yǎng)上可以造成致細(xì)胞病變，但對(duì)乳鼠和靈長類動(dòng)物不致病。新腸道病毒：后來，新發(fā)現(xiàn)的病毒被按照序號(hào)命名（6971），最近，已經(jīng)命名至11

2、1型人腸道病毒發(fā)現(xiàn)的歷史3人腸道病毒型別分類44 CoxA23與ECHO9為同一病毒，已歸入ECHO9 CoxA15與CoxA11為同一病毒，統(tǒng)一命名為CoxA11 CoxA18與CoxA13為同一病毒，統(tǒng)一命名為CoxA13 ECHO8與ECHO1為同一病毒，統(tǒng)一命名為ECHO1 ECHO10已歸入呼腸孤病毒1型（Reo 1） ECHO22和ECHO23被劃分為新的病毒屬副腸孤病毒屬，分別重新命名為副腸孤病毒1型和2型 ECHO28歸入鼻病毒1A型 ECHO34并入CoxA24，為CoxA24的變種 鼻病毒87型重新劃為腸道病毒68型 腸道病毒72型劃為肝病毒屬中的人甲型肝炎病毒 豬水皰病病

3、毒(SVDV)類似于Cox B5型5Courtesy of Linda M. Stannard, University of Cape Town, S.A.h30nm二十面體對(duì)稱無包膜人腸道病毒的毒粒結(jié)構(gòu)6人腸道病毒的流行病學(xué)7人腸道病毒傳播方式 糞-口途徑傳播: 唾液與糞便 呼吸道傳播: 空氣飛沫 接觸傳播: 8人人9環(huán)境因素影響經(jīng)水傳播的病原體河流海洋排毒水海產(chǎn)品污水處理廠休閑、娛樂直接、間接接觸灌溉盤子門把手洗針對(duì) 脊灰病毒、NPEV、輪狀病毒、諾如病毒，甲肝10造成人腸道病毒感染與流行的因素宿主因素：營養(yǎng)、衛(wèi)生、抵抗力病毒的種類侵入易感個(gè)體的人腸道病毒量病毒的毒性強(qiáng)弱整個(gè)族群里含有抗體

4、的個(gè)體（群體免疫）少數(shù)研究：特定HLA基因較易出現(xiàn)肢體麻痹癥候群有些研究：新生兒與嬰兒易遭受嚴(yán)重的柯薩奇B型 、 ECHO和EV71病毒感染11隱性感染多見，很少引起腹瀉，嬰幼兒、免疫力低下的成人易感。 病毒在機(jī)體腸道中增殖，很少引起腸道癥狀，是以消化道為原發(fā)灶的全身感染。不同人腸道病毒可引起相同癥狀，同一種人腸道病毒可引起不同臨床表現(xiàn)。感染過程中形成病毒血癥。致病特點(diǎn)12人腸道病毒感染的一般致病機(jī)制進(jìn)入途徑口腔/呼吸道咽喉及下腸胃道傳播扁桃體、深層淋巴結(jié)、腸道淋巴結(jié)微病毒血癥先天性感染神經(jīng)系統(tǒng)心臟肝臟、胰臟、腎上腺呼吸系統(tǒng)皮膚及黏膜病毒血癥神經(jīng)系統(tǒng)抗體產(chǎn)生、病毒血癥消失，病毒感染癥狀改善飛沫

5、、接觸、飲食肌肉13與人腸道病毒感染相關(guān)的疾病14臨床特征病毒由口進(jìn)入胃腸道，潛伏期為335天，一般714天。 90的感染為隱性感染約5出現(xiàn)流產(chǎn)感染12為非麻痹性脊髓灰質(zhì)炎或無菌性腦膜炎僅約0.1%出現(xiàn)永久性弛緩性肢體麻痹極少數(shù)發(fā)展為延髓麻痹15與人腸道病毒感染相關(guān)的疾病癥狀 脊灰 Cox A Cox B Echo麻痹性疾病+腦膜炎-腦炎+心肌炎+新生兒疾病-+胸膜痛-+-咽峽炎-+-發(fā)熱性疾病-+出血性結(jié)膜炎. -+-呼吸系統(tǒng)感染+不明原因發(fā)熱+糖尿病/胰腺炎-+-16引起的疾病麻痹性疾病 脊灰病毒是最常見的引起麻痹性疾病的病原體，但 其它病毒有時(shí)也可引起，如腸道病毒 71型（EV71）無菌

6、性腦膜炎 所有人腸道病毒都可以引起, 尤其常見于 5歲以下兒童；腦炎 典型或者不典型的腦炎可能伴有腦膜炎癥狀大 部 分病例恢復(fù)后不留后遺癥；“不明原因”發(fā)熱 由A組柯薩奇病毒（Cox A16）和EV71引起，但 B組柯薩奇病毒和某些?？刹《疽步?jīng)常造成暴發(fā)；咽峽炎 由 A組柯薩奇病毒引起；傳染性胸膜痛(博恩霍爾姆氏病 ，Bornholm disease) 通常由B組柯薩奇病毒引起；17人腸道病毒病例死亡時(shí)間死亡機(jī)率心衰竭早期死亡1428天神經(jīng)系統(tǒng)損傷腦死亡及中樞衰竭123456呼吸衰竭晚期死亡18人腸道病毒感染后的病程816816感染00天2424病毒分離糞便糞便咽拭CSF血清雙 份 血抗體傳染

7、性臨床特征糞-口2 - 7 (10)天19手足口病 手足口病皮疹分布 1. 頰粘膜和手指; 2. 手掌 ；3. 足底 ； 4. 唇粘膜； 5.咽峽炎12345無皮疹的手足口病重癥病例20HFMD引起關(guān)注的原因HFMD的定義和相關(guān)病毒病原HFMD的標(biāo)本的采集中國HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的初步建立和運(yùn)轉(zhuǎn)中國大陸HFMD流行、現(xiàn)狀和趨勢(shì)中國大陸2008年-2009年HFMD 的病原譜分子流行病和血清流行病HFMD病理特征HFMD預(yù)防和治療手足口病Hand-foot-mouth Disease, HFMD21阜陽手足口病“阜陽13例不明原因肺炎死亡病例”病例高度散發(fā)不具有傳染性，可能為感染性疾病只在一例中發(fā)

8、現(xiàn)疹子以“重癥肺炎”為主要臨床表現(xiàn)病情進(jìn)展迅速， 大部分入院幾小時(shí)-2天 死亡病因不明“疫情概況”22圖3. 2008 年3月1日至5月9日阜陽市HFMD病例數(shù)231.阜陽聚集死亡病例和較多重癥病例的出現(xiàn)2.發(fā)病到死亡進(jìn)展迅速，引起社會(huì)恐慌3.臨床上無特效藥物,重癥的早期預(yù)警存在一定難度4.對(duì)疫情的擴(kuò)散無有效的控制手段,無疫苗5.第38種法定傳染病 HFMD引起關(guān)注的原因 24阜陽不明原因肺炎死亡病原學(xué)鑒定4月18，中國CDC組織專家組流行病學(xué)臨床資料實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)EV71是此次疾病的主要致病原證實(shí)4月23日分析判定病原和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方向?yàn)?HEV7125從3月 23至4月29阜陽市死亡病例 (共2

9、2例)早期死亡病例15確認(rèn) EV71為致病原262715例死亡病例的臨床癥狀臨床癥狀病例數(shù)比例（%）發(fā)熱15100呼吸急促1493.3口唇紫紺1280.0粉紅色泡沫痰960.0咳嗽746.7嘔吐853.3肌陣攣320.0手足部皮疹640.0卡他性鼻炎213.3頸項(xiàng)強(qiáng)直213.327病例類型病例數(shù)HFMD病例EV71核酸檢測(cè)陽性數(shù)陰性數(shù)陽性率輕癥1581471193.04%重癥1613381.25%阜陽重癥和輕癥病人的咽拭子EV71核酸陽性率 28 阜陽2008年3月1至5月9日不同年齡組的HFMD病例 90%以上病例為5歲以下兒童EV71為阜陽2008年HFMD爆發(fā)的絕對(duì)優(yōu)勢(shì)血清型29二. H

10、FMD的定義和相關(guān)病毒病原30HFMD是由多種腸道病毒引起的一種兒童常見傳染病，是我國法定報(bào)告管理的丙類傳染病大多數(shù)患者癥狀輕微，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要臨床癥狀。少數(shù)患者可出現(xiàn)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫和心肌炎等，個(gè)別重癥患兒病情進(jìn)展快，可導(dǎo)致死亡。 手足口病預(yù)防控制指南（2009版）HFMD的定義31Courtesy of Linda M. Stannard, University of Cape Town, S.A.h30nm二十面體對(duì)稱無包膜人腸道病毒（HEV71）的毒粒結(jié)構(gòu)32 病原: HFMD可由20多種腸道病毒所引起，其中包括柯薩奇病毒

11、、?？?病毒和腸道病毒新的血清型。CoxA組的16、4、5、7、9、10等型, CoxB組的2、5等型, 以CoxA16 和EV71最為常見。 傳播途徑: 糞-口途徑傳播: 唾液與糞便; 呼吸道傳播: 空氣飛沫; 接觸傳播 皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。 HFMD為全球性傳染病，多發(fā)生于5歲以下的嬰幼兒, 在全球廣泛分 布，無明顯的地域分布, 但近年EV71在東南亞幾個(gè)國家或地區(qū)流行, 引起較多的重癥和死亡病例。 HFMD的相關(guān)病毒病原33CoxA161957年在加拿大首次報(bào)告，新西蘭Seddon于1957年最早加以描述，1958年加拿大Robinson從患者糞便和咽拭中分離出Cox

12、A16，同時(shí)患者血清抗體有四倍增長,初步查明CoxA16為本病病原；1959年提出HFMD命名，HFMD在全球廣泛流行，無明顯的地域分布。發(fā)熱, 不適, 咽喉腫痛, 口腔、手、腳側(cè)面及掌心、屁股出現(xiàn)小泡傳染性極高病程約1周341972年EV71在美國被首次確認(rèn)，1974年Schmidt等首次發(fā)表從美國加利福尼亞州20例具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀患者（19691973年）中分離到EV71。隨后，世界上眾多國家都有EV71流行的報(bào)道。EV71感染可引起HFMD、皰疹性咽峽炎、無菌性腦炎、腦干腦炎和脊髓灰質(zhì)炎樣麻痹，但更多情況下是產(chǎn)生隱性感染。同脊灰病毒相似，EV71對(duì)脊髓前角細(xì)胞具有一定的組織嗜性，是最

13、常見的引起急性遲緩性麻痹（acute flaccid paralysis，AFP）的非脊灰腸道病毒（non-polio enterovirus，NPEV）。EV71潛伏期一般為37天,感染EV71后，患者發(fā)病12周內(nèi)可自咽部排出病毒，從糞便中排毒可持續(xù)至發(fā)病后35周。皰疹液中含大量病毒，皰疹破潰后病毒排出。 腸道病毒71型（enterovirus 71，EV71）35三. 標(biāo)本采集尸檢標(biāo)本肛拭子標(biāo)本皰疹液標(biāo)本血清標(biāo)本咽拭子標(biāo)本糞便標(biāo)本腦脊液標(biāo)本3636 用于病毒分離的標(biāo)本包括糞便、咽拭子和皰疹液 如果患者出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，應(yīng)該采集腦脊液標(biāo)本。 在手足口病的實(shí)驗(yàn)室診斷中，從皰疹液或腦脊液中分離

14、病毒具有很高的診斷意義。 用于采集咽拭子的無菌拭子要放在適當(dāng)?shù)谋４嬉褐校?病毒保存液。 為了保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和有效性，標(biāo)本應(yīng)在病例發(fā) 病后盡早采集，盡快檢測(cè)。 不能立即檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)冷凍保存。 對(duì)于血清學(xué)診斷，急性期血清應(yīng)該在發(fā)病后盡早采集， 恢復(fù)期血清在發(fā)病2-4周后采集。標(biāo)本采集注意事項(xiàng)37細(xì)胞系RD細(xì)胞，來源于人橫紋肌肉瘤細(xì)胞HEp-2細(xì)胞，來源于人喉癌上皮細(xì)胞Vero細(xì)胞，來源于非洲綠猴腎細(xì)胞可聯(lián)合使用RD和HEp-2，或者RD和Vero細(xì)胞系進(jìn)行腸道病毒的分離。聯(lián)合使用RD、HEp-2和Vero細(xì)胞，有助于提高腸道病毒檢出率。38Progression of CPE: EV71

15、in RD-A Cell linesEV71在RD-A細(xì)胞上產(chǎn)生病變的過程39HainanBeijingTianjingXinjiangGansuXizangQinghaiNeimengHeilongjiangJilinLiaoningHebeiGuangdongHunanHenanFujianZhejiangJiangsuShanghaiTaiwanShanxiNingxiaShaanxiChongqingYunnanGuizhouSichuanGuangxiJiangxiHubeiAnhuiShandong四. 中國HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的初步建立和運(yùn)轉(zhuǎn)2131.國家實(shí)驗(yàn)室2. 31個(gè)省級(jí)實(shí)驗(yàn)

16、室3.部分地市實(shí)驗(yàn)室40中國HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)的初步建立和運(yùn)轉(zhuǎn) HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)的建立及應(yīng)用 操作規(guī)程的制定，包括：標(biāo)本的采集和運(yùn)輸從臨床標(biāo)本直接進(jìn)行EV71和CVA16V RT-PCR鑒定EV71和CVA16 的Real-time PCR鑒定EV71和CVA16 VP1全長的RT-PCR擴(kuò)增用RD/HEp-2細(xì)胞分離EV71和CVA16EV71-IgM抗體的檢測(cè) 建立了中國HFMD相關(guān)病原毒株庫和數(shù)據(jù)庫 培訓(xùn): 2008年4月初在鄭州，12月在杭州，2009年7月在青島分別舉辦 了HFMD實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)培訓(xùn)班；2009年4月7-10日在北京舉辦了發(fā)熱出 疹癥侯群檢測(cè)和監(jiān)測(cè)技術(shù)培訓(xùn)

17、班，2010年深圳HFMD實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)培訓(xùn)班41 31個(gè)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室1國家實(shí)驗(yàn)室部分地市級(jí)實(shí)驗(yàn)室 腸道病毒分離物基因分型,血清流行病學(xué)檢測(cè),診 斷方法建立 質(zhì)量控制 對(duì)省級(jí)實(shí)驗(yàn)室提供技術(shù)支持 RT-PCR, Real time PCR和 IgM檢測(cè)。腸道病毒分離和鑒定對(duì)地級(jí)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制 對(duì)地級(jí)實(shí)驗(yàn)室提供技術(shù)支持 RT-PCR, Real time PCR和 IgM檢 測(cè)。負(fù)責(zé) 采集標(biāo)本 ， 中國腸道病毒三級(jí)實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)42待檢標(biāo)本病毒分離CPE陽性RT-PCR基因定型腸道病毒非腸道病毒EV71或CA16-IgM或測(cè)雙份血清中和抗體滴度RT-PCRReal time RT-PCR檢測(cè)病毒核酸基因定

18、型無CPE常規(guī)實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)中和定型手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)流程見下圖：43 建立多種HFMD診斷方法 診斷RT-PCR: 從臨床標(biāo)本直接進(jìn)行檢測(cè) 基因型鑒定RT-PCR：VP1全長 用RD/HeP2細(xì)胞分離腸道病毒標(biāo)準(zhǔn)程序（SOP） 磁珠法自動(dòng)化提取咽拭子和糞便標(biāo)本中腸道病毒核酸 基于顏色的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（LAMP）檢測(cè)EV71和CA16核酸 nRT-PCR自動(dòng)化工作站檢測(cè)EV71、CVA16和腸道病毒核酸 rRT-PCR單通道快速檢測(cè)腸道病毒 rRT-PCR單通道快速檢測(cè)EV71病毒 rRT-PCR單通道快速檢測(cè)CA16病毒 rRT-PCR雙通道快速檢測(cè)腸道病毒和EV71病毒 rRT-PCR雙通道

19、快速檢測(cè)EV71病毒和CA16病毒 rRT-PCR三通道快速檢測(cè)腸道病毒、EV71病毒和CA16病毒 EV71和CA16血清中和抗體檢測(cè)方法（微量細(xì)胞中和試驗(yàn)） 環(huán)境污水中腸道病毒提取、純化和檢測(cè)技術(shù)相關(guān)檢測(cè)方法應(yīng)用于HFMD爆發(fā)的診斷和鑒別診斷，滿足了不同層次省、地市和縣級(jí)醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)開展HFMD實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的迫切需要HFMD檢測(cè)、監(jiān)測(cè)技術(shù)和標(biāo)準(zhǔn)的建立及應(yīng)用待檢標(biāo)本病毒分離CPE陽性RT-PCR基因定型腸道病毒非腸道病毒測(cè)雙份血清中和抗體滴度RT-PCRReal time RT-PCR基因定型無CPE常規(guī)實(shí)驗(yàn)補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)中和定型貝爾公司使用我們研制的核心技術(shù)研制了ELISA檢測(cè)血清中EV71

20、-IgM抗體試劑盒：第一個(gè)獲得藥監(jiān)局文號(hào)關(guān)鍵診斷技術(shù)和監(jiān)測(cè)技術(shù)44實(shí)驗(yàn)室診斷方法病毒分離鑒定病毒核酸的檢測(cè)普通RT-PCR熒光定量RT-PCR血清學(xué)檢測(cè)急性期/恢復(fù)期血清中和抗體滴定ELISA法檢測(cè)血清IgM和IgG45手足口病的診斷一般是通過采集適當(dāng)?shù)呐R床標(biāo)本后進(jìn)行基因檢測(cè)、抗原檢測(cè)、血清學(xué)抗體檢測(cè)、病毒分離和病毒鑒定。很多血清型的腸道病毒能引起手足口病，不同細(xì)胞系對(duì)不同病毒的敏感性是有所不同的，而不同時(shí)期腸道病毒的流行株也不同。通常用于腸道病毒分離的細(xì)胞系為RD、HEp-2、Vero等，聯(lián)合使用上述的兩種或更多細(xì)胞有助于分離到更多的腸道病毒。手足口病的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)46質(zhì)量控制31個(gè)省級(jí)網(wǎng)絡(luò)實(shí)

21、驗(yàn)室骨干標(biāo)準(zhǔn)化操作技術(shù)培訓(xùn)各網(wǎng)絡(luò)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)培訓(xùn)地市實(shí)驗(yàn)室骨干標(biāo)本采集的時(shí)間分布、數(shù)量和質(zhì)量的定期核查職能考核(血清、核酸）標(biāo)本復(fù)核(血清、核酸）實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)場(chǎng)督導(dǎo)和認(rèn)證臨床、流行病和實(shí)驗(yàn)室信息管理質(zhì)量保證47質(zhì)量保證省級(jí)統(tǒng)一核酸檢測(cè)方法 統(tǒng)一病毒分離方法 (提供用于病毒分離的細(xì)胞系RD,HeP2等) 試劑盒（或方法學(xué)）的評(píng)價(jià) 使用組合標(biāo)本或核酸評(píng)價(jià)所使用的試劑盒 儀器校對(duì) 生物安全柜：每年一次 加樣器：每36個(gè)月一次 溫度監(jiān)測(cè)（培養(yǎng)箱） 標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP） ： 血清學(xué) 細(xì)胞培養(yǎng)、病毒分離 PCR，RT-PCR，Real time PCR記錄 電子版和實(shí)驗(yàn)記錄本標(biāo)本和病毒的儲(chǔ)存專家組對(duì)本實(shí)驗(yàn)室的

22、認(rèn)證評(píng)估 48病毒疾病常出現(xiàn)的陰性結(jié)果分析 rRT-PCR和病毒培養(yǎng)： - 標(biāo)本采集時(shí)間過早或太遲 - 標(biāo)本采集部位錯(cuò)誤 - 標(biāo)本采集技術(shù)不過關(guān) - 標(biāo)本保存不好 - 病毒培養(yǎng)細(xì)胞株選擇錯(cuò)誤 - 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 - 其他 血清抗體： - 血清標(biāo)本采集時(shí)間不對(duì) - 非特異性抑制物質(zhì)干擾 - 抗體反應(yīng)微弱：抗原變異 - 病毒或病毒株選擇錯(cuò)誤 - 檢測(cè)方法錯(cuò)誤 - 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制： - 其他49發(fā)熱伴出疹，發(fā)熱37.5，持續(xù)一天以上，伴有全身或局部的皮膚或粘膜出疹。腸道病毒（HEV71，CA16）登革熱病毒麻疹、風(fēng)疹、 B19 其它發(fā)熱伴出疹癥候群傷寒、副傷寒鏈球菌伯氏疏螺旋體（萊姆?。┧?0Re

23、lative levels of antibody IgM sensitivity 70%071421283542-7-14-210246810RashonsetDays after rash onsetIgGIgMInfectionvirus excretion用于IgM抗體檢測(cè)的血清標(biāo)本要在初次接觸病人時(shí)馬上采集，以及出疹后28天內(nèi)采集用于病毒分離的標(biāo)本,需出疹天內(nèi)采集咽拭子或尿液麻疹病毒感染體液免疫過程必要日期:最后接種日期出疹日期出生日期51五. 中國大陸HFMD流行、現(xiàn)狀和趨勢(shì)1981年，我國在上海首次報(bào)道了HFMD病例1987年在中國分離到EV71早期發(fā)現(xiàn)的手足口病的病原體主要為C

24、ox A16型。此后，EV 71感染與Cox A16感染交替出現(xiàn)，成為手足口病的主要病原體。我國80年代流行的手足口病病原以Cox A16為主；1998以來，各地報(bào)道的手足口病病原以EV71型和Cox A16交叉流行或同時(shí)流行為主。 1995年以來，我國陸續(xù)在武漢、深圳、上海、重慶、山東和安徽等地的HFMD患者中分離到EV71病毒。2007年，山東發(fā)生了手足口病爆發(fā)流行，累計(jì)報(bào)告HFMD病例39，606例，其中14例病例死亡。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)發(fā)現(xiàn)EV71是引起山東臨沂HFMD的主要病原，同時(shí)還檢測(cè)到Echo3 和/或 CVA16。2008年- 2010年7月:中國大陸出現(xiàn)CoxA16 和EV71 共

25、循環(huán)引起手足口病爆發(fā), 部分地區(qū)以EV71為絕對(duì)優(yōu)勢(shì)型別, 少數(shù)以CoxA16 為優(yōu)勢(shì)型別，同時(shí)還有其它腸道病毒循環(huán)引起的手足口病。52AUSTRALIABaliINDONESIAJavaBorneoHalmaheraNew GuineaSumbaPHILIPPINESBruneiMALAYSIASINGAPOREVIETNAMTHAILANDCAMBODIALAOSBURMACHINAINDIAJAPANPalawanHong KongTaiwan亞太地區(qū)HFMD暴發(fā)1997Malaysia34 deaths1998Taiwan78 deathsVarious4 deaths1999Aust

26、ralia29 severe casesTaiwan9 deaths2000Singapore7 deathsTaiwan41 deathsMalaysia4 deaths JapanHFMD epidemicCanada City outbreaks2001Taiwan58 deathsAustralia44 severe cases2002Taiwan30 deaths2003MalaysiaHFMD epidemicTaiwan8 deathsChina (Macao)at least 1 deathChina (Beijing)5cases/day2004Taiwan5 deathsU

27、SACity outbreak of HFMDUKSchools closed2005Singapore15247 HFMD cases2006MalaysiaSchools & Playgrounds closed for 2 weeksSingapore15000 cases with school closures2007China80,000 cases, 17 deathsSingapore20,000 cases 2008Singapore17,000 cases to date with school closuresTaiwan200,000 cases, 10 deaths

28、confirmed (17)China175,000 cases, 44 deathsVietnam 2,000 cases?, 11 deaths53EV71毒株各個(gè)基因型/亞型流行的地理和年代分布基因型流行地區(qū)流行時(shí)間A美國1970B1美國、澳大利亞、中國臺(tái)灣、匈牙利、保加利亞、日本19721987B2美國、19811987B3馬來西亞、澳大利亞、新加坡19971999B4馬來西亞、新加坡、中國臺(tái)灣、日本19972002B5馬來西亞2003C1美國、澳大利亞、馬來西亞、新加坡、越南、泰國、日本19862005C2美國、澳大利亞、日本、中國臺(tái)灣、19952002C3中國、韓國1997、200

29、3C4中國、越南、日本、中國臺(tái)灣19982007C5越南200554中國大陸手足口病報(bào)告人數(shù)2008年：報(bào)告489073例發(fā)病率為37.01/100,000重癥病例1165例 ，占報(bào)告病例數(shù)的 0.24 % 死亡126例，病死率 0.26傳染病疫情網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)分析55 2008年全國各省手足口病病例數(shù)及發(fā)病率傳染病疫情網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)分析562008年全國手足口病病例發(fā)病及死亡時(shí)間分布傳染病疫情網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)庫統(tǒng)計(jì)分析572010年手足口病地區(qū)分布發(fā)病數(shù)發(fā)病率582010年部分重癥及死亡病例年齡、性別分布特點(diǎn)59六. HFMD 的病原譜 中國大陸2008年-2010年8月15日 60闡明了手足口病的

30、病原構(gòu)成比例（2008）重癥病例（1165例） ：EV71 占 實(shí)驗(yàn)室確診的嚴(yán)重病例的81.59 死亡病例（126例） ：EV71 占 實(shí)驗(yàn)室確 診的死亡病例的 96.43 病原學(xué)61中國大陸2008年HFMD 的病原譜 Viral etiology of HFMD in China samples HEV71 CVA16 Others 4,769 790 (16.6%) 214 (4.5%) 75 (1.6%) 表1. HFMD患者臨床標(biāo)本的腸道病毒分離率和構(gòu)成Table1A. Isolation rate of HEV from Clinical samples of HFMD Cases

31、 samples HEV71 CVA16 Others18,153 4,636(25.5%) 1,092 (6.0%) 1740 (9.6%) 表2. HFMD患者臨床標(biāo)本的腸道病毒PCR檢出率和構(gòu)成 Table1B. PCR positive rate of hev from Clinical samples of HFMD Cases62闡明了中國大陸HFMD病原譜構(gòu)成2009年2010年發(fā)現(xiàn)絕大部分死亡病例和大部分重癥病例是由EV71引起病原學(xué)6364 2010年廣西桂林全州縣手足口病實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測(cè)結(jié)果全州縣實(shí)驗(yàn)室確診HFMD106例，占報(bào)告病例總數(shù)的2.31%，其中EV71陽性77例，占實(shí)

32、驗(yàn)室確診病例的72.64%,其他EV陽性29例，占實(shí)驗(yàn)室確診病例的27.36%。重癥病例中，EV71陽性62例，占實(shí)驗(yàn)室確診重癥病例的72.09% 病例類型病例數(shù)實(shí)驗(yàn)室確診數(shù)實(shí)驗(yàn)室確診率（%）EV71構(gòu)成比（%）其他EV構(gòu)成比（%）普通病例 4290200.477525重癥病例 3028628.4872.0927.91死亡病例1010100802064Group 1病毒引物名稱擴(kuò)增片段長度腸道通用引物153EV71-SA263CoxA 16-SA245CA12163CB4167CB5193CA16203CB1223CB2233CA6243CA9251CA10273CB3 282CA24296C

33、A4256組合檢測(cè)方法-單管檢測(cè)HFMD病原的構(gòu)成65發(fā)熱伴出疹癥候群病原譜構(gòu)成及其流行規(guī)律病原譜年齡分布發(fā)熱伴出疹癥候群病毒病原原譜的時(shí)間趨勢(shì)66加強(qiáng)HFMD病原檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的十分必要 掌握手足口病病原譜，特別是EV71感染所占的比例，對(duì)分析 判斷HFMD疫情導(dǎo)致重癥和死亡的比例有重要的科學(xué)參考價(jià)值。1998年臺(tái)灣手足口病暴發(fā)疫情中，在48.7%輕癥病例中、75住院病例中、92死亡病例中均分離到HEV71。2. 2007年山東臨沂發(fā)生了手足口病暴發(fā)，有8例死亡病例，手足口病的病原譜構(gòu)成中，HEV71約占84%，CVA16約占16%；2008年當(dāng)?shù)厥肿憧诓〔±龜?shù)仍較高，但病原譜發(fā)生較大的變化，病

34、毒毒株是以CVA16為主（占62）,并且沒有重癥死亡病例。3. 2008年阜陽手足口病例99以上是有HEV71引起。4. 2009年山東菏澤和河南民權(quán)HEV71占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)5. 2010年死亡病例HEV71占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)67 七. 分子流行病學(xué)和血清流行病學(xué)研究68 基因組為(+)ssRNA， 全長約7400nt； 經(jīng)翻譯后加工，共編 碼11個(gè)蛋白； 其中，VP1VP4編碼 病毒的衣殼蛋白；EV71基因組VP1蛋白是最主要的衣殼蛋白，具有最多的型特異性中和位點(diǎn)，VP1蛋白編碼序列（891nt）被用于EV的型別鑒定和基因進(jìn)化分析；除VP1編碼區(qū)外，也有學(xué)者利用VP4、VP2蛋白的編碼序列和5NTR進(jìn)行

35、基因分析。但VP1全基因序列為公認(rèn)的進(jìn)行基因特征和進(jìn)化分析的標(biāo)準(zhǔn)區(qū)域，用于EV分子流行病學(xué)研究。病毒基因組含有單一開放讀碼框架（ORF），感染易感宿主后，基因組翻譯產(chǎn)生一個(gè)多肽，然后由蛋白酶水解為4個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白，同時(shí)中間過程產(chǎn)生4個(gè)重要的蛋白前體。691999年，Brown等根據(jù)19701998年分離于美國和其它5個(gè)國家的113株EV71的VP1全基因序列，對(duì)EV71首次進(jìn)行基因型別劃分，劃分為A、B、C基因型，核苷酸序列型內(nèi)差異12%，型間差異為16.5%19.7%。根據(jù)親緣性分析，基因型內(nèi)又進(jìn)一步劃分為不同的基因亞型：B1-B5，C1-C5 EV71分子流行病學(xué)研究的靶基因T

36、arget gene used for EV71 molecular epidemiology70基因型/亞型Genotype/subgenotype流行國家/地區(qū)Country/district流行年份YearA美國1970B1美國、澳大利亞、中國臺(tái)灣、匈牙利、保加利亞、日本19721987B2美國、19811987B3馬來西亞、澳大利亞、新加坡19971999B4馬來西亞、新加坡、中國臺(tái)灣、日本19972002B5馬來西亞、中國臺(tái)灣、日本、文萊20032008C1美國、澳大利亞、馬來西亞、新加坡、越南、泰國、日本、德國、荷蘭19862005C2美國、澳大利亞、日本、中國臺(tái)灣、德國、荷蘭19

37、952008C3中國、韓國1997、2003C4中國、越南、日本、中國臺(tái)灣、泰國、匈牙利、奧地利、荷蘭，韓國19982010C5越南、中國臺(tái)灣20052007EV71各個(gè)基因型/亞型流行的地理和年代分布Geographic and time distribution of all genotype/subgenotype of EV7171Genotype of EV71 Circulating in global from 19702009 19702009年全球EV71的流行基因型Genotypes still circulate in Asia-Pacific region. EV71/

38、Fuyang.Anhui/17.08/1 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/3 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/4 DTID/ZJU-74 DTID/ZJU-62 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/5 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/6 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/8 FY23 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/2 EV71/GDSG/17/2008 EV71/Zhejiang08 EV71/Fuyang.Anhui/17.08/7 SD07-1 1235 E2004104-TW-CDC 984 EV

39、71/GDFS/3/2008 SHZH03 CQ03-1 SH-6 N3340-TW-02 SH-17 SHZH98C4 1M-AUS-12-00 S40221-SAR-00 J115-MAL-01 804/NO/03 S10862-SAR-98C1 E2005125-TW 2007-07364C5 03-KOR-00 06-KOR-00C3 7F-AUS-6-99 6F/AUS/6/99 ENT/PM/SHA71 ENT/PM/SHA52 71 NUH0075/SIN/08 TW/2086/98 Tainan/5746/98 pinf7-54A 1245a/98/tw NCKU9822 Ta

40、inan/4643/98 Tainan/6092/98C2 sub strain:BrCr-TR BrCr sub strain:BrCr-tsAB1、B2 TW/2272/98B2 MS/7423/87 26M/AUS/4/99 26M/AUS/4/99 CHO cell-adapted 26M/AUS/4/99 mouse-adapted EV71/SAR/SHA66 71 MY821-3-SAR-97 MY104-9-SAR-97 EV71/SAR/SHA63 71 3799-SIN-98B3 S19841-SAR-03 SB12736-SAR-03 5511-SIN-00 2007-08747B5 UH1/PM/1997 71 EV71/9/97/SHA89 E2002042-TW-CDC PP37-MAL-01 SB2864-SAR-00 5865/sin/000009 5666/sin/002209B40.0