1、生物樣本庫建設(shè).1第1頁定義生物樣本庫biological specimen bank, BSB標(biāo)準(zhǔn)化地搜集、保留用于各種研究正?；虿±順?biāo)本，包含人體器官組織、全血、血漿、血清、生物體液或經(jīng)處理過生物樣本（DNA、RNA、蛋白等）以及與這些生物樣本相關(guān)臨床、病理、治療、隨訪、知情同意等資料及其質(zhì)量控制、信息管理與應(yīng)用系統(tǒng)。2第2頁生物樣本庫政策法規(guī)技術(shù)標(biāo)準(zhǔn) 倫理規(guī)范ISO標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)室安全臨床試驗(yàn)室倫理運(yùn)輸標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOPs） 質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)樣本采集樣本處理樣本質(zhì)量檢驗(yàn)樣本儲(chǔ)存樣本運(yùn)輸DNA質(zhì)量判定、RNA質(zhì)量判定、蛋白質(zhì)質(zhì)量判定知情同意書質(zhì)量審查樣本運(yùn)輸樣本轉(zhuǎn)移協(xié)議倫理委員會(huì)倫理審查3第3頁I

2、SO15189: 醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室質(zhì)量和能力專用要求CNAS-CL02 醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室-質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則ISO/IEC17025: 檢測和校準(zhǔn)試驗(yàn)室能力通用要求CNAS-CL01 檢測和校準(zhǔn)試驗(yàn)室認(rèn)可準(zhǔn)則ISO9001:/GBT19001- 質(zhì)量管理系統(tǒng) 要求GB/T1.1- 標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則：標(biāo)準(zhǔn)結(jié)構(gòu)和編寫規(guī)則ISO標(biāo)準(zhǔn)4第4頁試驗(yàn)室安全GB 19489- 試驗(yàn)室生物安全通用要求CNAL/AC30- 試驗(yàn)室生物安全認(rèn)可準(zhǔn)則WS/T233- 微生物和生物醫(yī)學(xué)試驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則GB 50346- 生物安全試驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范已建立試驗(yàn)室生物安全管理體系5第5頁臨床試驗(yàn)室GB/T 20468- 臨床試驗(yàn)室

3、定量測定室內(nèi)質(zhì)量控制指南GB/T 20469- 臨床試驗(yàn)室設(shè)計(jì)總則GB/T 20470- 臨床試驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)價(jià)要求WS/T102-1998 臨床檢驗(yàn)項(xiàng)目分類與代碼WS/T224- 真空采血管及其添加劑WS/T225- 臨床化學(xué)檢驗(yàn)血液標(biāo)本搜集與處理WS/T227- 臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程編寫要求WS/T228- 定量臨床檢驗(yàn)方法初步評(píng)價(jià)WS/T230- 臨床診療中聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)應(yīng)用WS/T249- 臨床試驗(yàn)室廢物處理標(biāo)準(zhǔn)WS/T250- 臨床試驗(yàn)室質(zhì)量確保要求WS/T251- 臨床試驗(yàn)室安全準(zhǔn)則WS/T255- 臨床檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)參考測量試驗(yàn)室6第6頁赫爾辛基宣言包括人類為研究對(duì)象生物醫(yī)學(xué)研

4、究了國際倫理方針指南關(guān)于DNA序列申請(qǐng)專利申明：專利關(guān)于早期公布原始序列數(shù)據(jù)相關(guān)專利申請(qǐng)問題申明關(guān)于DNA取樣申明：控制與獲取世界人類基因組與人權(quán)宣言包括人體生物醫(yī)學(xué)研究倫理審查方法（試行）人類基因治療申報(bào)臨床試驗(yàn)指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于利益共享申明關(guān)于基因治療申明關(guān)于人類基因組數(shù)據(jù)庫申明國際包括人類生物醫(yī)學(xué)研究倫理準(zhǔn)則人類遺傳數(shù)據(jù)國際宣言綱要人體生物醫(yī)學(xué)研究國際倫理指南倫理7第7頁物流術(shù)語液氮生物容器中國民用航空危險(xiǎn)品運(yùn)輸管理要求危險(xiǎn)物品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則運(yùn)輸8第8頁組織機(jī)構(gòu)樣本庫管理委員會(huì)專家委員會(huì)倫理委員會(huì)樣本庫職能部門樣本庫負(fù)責(zé)人業(yè)務(wù)主管質(zhì)量主管專職技術(shù)人員全部從業(yè)人員應(yīng)取得崗前培訓(xùn)考評(píng)合格證9

5、第9頁生物樣本庫工作流程標(biāo)本采集標(biāo)本處理入庫登記標(biāo)本儲(chǔ)存質(zhì)控YesNo銷毀廢棄物處置操作程序抽檢NoYes標(biāo)本使用使用申請(qǐng)標(biāo)本發(fā)放剩下標(biāo)本回收數(shù)據(jù)庫10第10頁標(biāo)本采集生物標(biāo)本采集和儲(chǔ)存 研究成功關(guān)鍵要求依據(jù)所采樣本類型和所分析物質(zhì)而定在采集和儲(chǔ)存過程中不能受到“污染” 儲(chǔ)存生物標(biāo)本在任何時(shí)候進(jìn)行檢測都能夠取得一致結(jié)果全部生物標(biāo)本都應(yīng)有詳細(xì)背景材料和判別標(biāo)識(shí)11第11頁標(biāo)本采集舉例尿液標(biāo)本晨尿濃縮尿，適用于尿常規(guī)檢查隨機(jī)尿僅適用于門診、急診尿常規(guī)過篩檢驗(yàn)空腹尿糖尿病患者餐前尿糖測定餐后尿餐后兩小時(shí)采集，適用于糖尿病患者病理性蛋白尿、糖尿檢查12h尿晚上8點(diǎn)排空尿液后12小時(shí)內(nèi)采集的所有尿液。用

6、于尿沉渣計(jì)數(shù)、尿微量白蛋白排泄率測定等12h禁水尿晚8時(shí)開始禁飲，次日早8時(shí)排空膀胱后再次留取的尿液，適用于尿滲透壓檢測24h尿上午8時(shí)排盡后，收集接下來24小時(shí)內(nèi)排出的所有尿液，記錄總尿量，用于體內(nèi)代謝產(chǎn)物的定量檢測，如尿蛋白、尿糖、尿肌酐、尿鈣、尿兒茶酚胺、檢查等培養(yǎng)用尿留尿前先清洗外陰，消毒尿道口后，以無菌容器只接留中段尿10ml，用于微生物檢查12第12頁標(biāo)本采集尿液標(biāo)本保留-最好不超出2h 尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)改變，如膽紅素、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。尿液保留慣用方法有兩種： 1.

7、冷藏法：4條件下不超出8h可抑制微生物生長，維持尿液pH恒定，使尿中有形成份形態(tài)基本不變，不過可造成磷酸鹽和尿酸鹽析出形成沉淀，影響尿沉渣檢驗(yàn)。13第13頁標(biāo)本采集尿液標(biāo)本保留-最好不超出2h 尿液化學(xué)物質(zhì)和有形成份不穩(wěn)定，排出后即開始發(fā)生物理和化學(xué)改變，如膽紅素、尿膽原被氧化，細(xì)菌生長，尿素酵解生成氨使尿pH升高，尿液有形成份破壞，葡萄糖被細(xì)菌利用而降低。尿液保留慣用方法有兩種：2.化學(xué)防腐法：甲苯：（普通用量為1.02.0ml甲苯/100ml尿液），預(yù)防細(xì)菌污染，通慣用于尿酮體、尿糖，尿蛋白質(zhì)等測定甲醛：每100ml尿液加40%甲醛0.5ml，可抑制細(xì)菌生長并固定尿中有形成份，適合用于尿液

8、中細(xì)胞與管型測定；麝香草酚：用10%麝香草酚異丙醇溶液，到達(dá)抑菌及保護(hù)代謝物作用，適合用于尿鉀、鈉、鈣等測定濃鹽酸：每100ml尿標(biāo)本中加入濃鹽酸1ml即可，使尿液維持在pH 2.0左右。主要可用于17-羥皮質(zhì)類因醇、17-酮類固醇、兒茶酚胺、VMA等定量測定等。14第14頁標(biāo)本采集樣本采集操作規(guī)程血液糞便尿液口腔拭子唾液陰道拭子皮膚拭子15第15頁標(biāo)本采集16第16頁標(biāo)本運(yùn)輸血液標(biāo)本采集后應(yīng)盡快從采血現(xiàn)場運(yùn)輸至試驗(yàn)室，注意是否存在干擾血凝塊。 標(biāo)本運(yùn)輸過程中要注意樣本包裝、溫度要求及處理方法等，要確保分析成份穩(wěn)定性，標(biāo)本管在運(yùn)輸過程中要保持管口封閉，向上垂直放置，防止猛烈振動(dòng) 尿液標(biāo)本從流取

9、到檢驗(yàn)應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成，如不能及時(shí)送檢分析，必須加防腐劑或冷藏不超出8小時(shí)細(xì)菌檢驗(yàn)標(biāo)本應(yīng)采取消毒容器，預(yù)防細(xì)菌污染，室溫條件不超出2小時(shí)或4冷藏保留。17第17頁標(biāo)本運(yùn)輸18第18頁標(biāo)本處理和保留標(biāo)本采集后應(yīng)及時(shí)處理、分裝后保留血液標(biāo)本處理操作規(guī)程DNA提取和純化操作規(guī)程：血液、糞便、棉拭子、唾液RNA提取和純化操作規(guī)程：血液、棉拭子蛋白質(zhì)提取和保留操作規(guī)程19第19頁標(biāo)本處理和保留血液標(biāo)本處理操作規(guī)程全血、血清、血漿、干血片、血凝塊、白細(xì)胞血清：指全血不經(jīng)抗凝處理，在凝固過程中，血漿中除去纖維蛋白原分離出淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去血漿血漿：離開血管全血經(jīng)抗凝處理后，經(jīng)過離心沉淀，所

10、取得不含細(xì)胞成份液體，其中含有纖維蛋白原。全血：由液態(tài)血漿和血細(xì)胞組成20第20頁標(biāo)本處理和保留血液標(biāo)本處理操作規(guī)程全血標(biāo)本保留生化檢驗(yàn)：盡可能在2小時(shí)內(nèi)檢驗(yàn)或分離血清/血漿，不能及時(shí)分離或檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)4低溫冷藏，不能超出二十四小時(shí)。操作時(shí)動(dòng)作應(yīng)輕柔，防止劇烈振蕩，防止溫度改變過大或凍融，易造成溶血。DNA檢測： 4保留不超出7天，-20保留不超出一年，-80長久保留RNA檢測：采集后應(yīng)盡快分離血細(xì)胞、血清/血漿，或加入RNA抑制劑（如trizol）， -20保留不超出2個(gè)月，-80保留不超出六個(gè)月。21第21頁標(biāo)本處理和保留血液標(biāo)本處理操作規(guī)程血清分離采血時(shí)應(yīng)采取無抗凝劑采血管；采血后，室溫（

11、2225）放置3060min，加促凝劑時(shí)凝集加緊（515min)，10001200g離心10min，吸收上層淡黃色上清液。有凝膠屏障分離管可保留在4 ，二十四小時(shí)內(nèi)吸收上層血清；無凝膠屏障必須立即吸收上層血清。保留條件常溫下不超出8小時(shí)；4 不超出48小時(shí)；48小時(shí)以上應(yīng)置于-20保留；提取RNA應(yīng)立即置于-80 保留。防止重復(fù)凍融。22第22頁標(biāo)本處理和保留血液標(biāo)本處理操作規(guī)程血漿分離采血時(shí)應(yīng)采取有抗凝劑采血管；采血后，10001200g離心10min，吸收上層淡黃色上清液。有凝膠屏障分離管可保留在4 ，二十四小時(shí)內(nèi)吸收上層血清；無凝膠屏障必須立即吸收上層血清。保留條件常溫下不超出8小時(shí)；4

12、 不超出48小時(shí)；48小時(shí)以上應(yīng)置于-20保留；提取RNA應(yīng)立即置于-80 保留。防止重復(fù)凍融。23第23頁質(zhì)量控制標(biāo)本入庫前應(yīng)經(jīng)過質(zhì)量控制，符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本才能入庫符合標(biāo)本采集、處理要求，檢驗(yàn)采集和處理統(tǒng)計(jì)標(biāo)本信息采集表填寫完整標(biāo)本運(yùn)輸符合要求，交接運(yùn)輸統(tǒng)計(jì)完整標(biāo)本管無空管、無破損、良好密封，標(biāo)簽清楚完整、無脫落檢驗(yàn)標(biāo)本是否受到污染，核酸質(zhì)量24第24頁標(biāo)本入庫編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)總標(biāo)準(zhǔn)：唯一性、共享性輔標(biāo)準(zhǔn)：在滿足總標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，盡可能精簡，編號(hào)長度盡可能保持統(tǒng)一生物樣本庫信息表25第25頁標(biāo)本入庫標(biāo)本編號(hào)標(biāo)準(zhǔn)總標(biāo)準(zhǔn)：唯一性、共享性輔標(biāo)準(zhǔn)：在滿足總標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)上，盡可能精簡，編號(hào)長度盡可能保持統(tǒng)一舉例：收到第102份標(biāo)本，類型是糞便，目標(biāo)用于結(jié)腸道菌群分析 1700102D15W21收到第256份標(biāo)本，類型是血清，目標(biāo)用于心梗研究 1700256G01BS1 26第26頁標(biāo)本使用使用申請(qǐng)：填寫標(biāo)本申請(qǐng)單標(biāo)本發(fā)放：填寫標(biāo)本使用記錄表標(biāo)本銷毀：按照感染性廢棄物，執(zhí)行廢棄物處置