1、高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法測定金銀花中綠原酸和木犀草苷的庫爾班江蘇文琴張鵬威【摘要】目的創(chuàng)立高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測HPL-ELSD法測定金銀花中綠原酸及木犀草苷的要領(lǐng)。要領(lǐng)接納hrasil18色譜柱(4.6250，5.0)為色譜柱，用乙腈(A)-0.5%冰醋酸(B)為活動(dòng)相梯度洗脫，以蒸發(fā)光散射檢測器檢測綠原酸和木犀草苷。梯度步伐為：0in(A：10%，B：90%)16in(A：25%，B：75%)22in(A：50%，B：50%)；流速1.0lin-1；檢測器漂移管溫度110，載氣流速3.0lin-1。結(jié)果綠原酸及木犀草苷的回歸方程別離為：lgA=1.34lg+4.360，r=0.

2、9995；lgA=1.653lg+5.327,r=0.9996。線性范疇別離為5.045g和0.43.6g；均勻接納率別離為99.94%(RSD=1.43%，n=5)和100.85%(RSD=1.78%，n=5)。結(jié)論該要領(lǐng)操縱輕便、結(jié)果正確，專屬性強(qiáng)，分散結(jié)果和重現(xiàn)性好，可有用收縮總闡發(fā)時(shí)間。為較全面操縱金銀花藥材的質(zhì)量操縱提供了輕便可靠的要領(lǐng)?！娟P(guān)鍵詞】金銀花綠原酸木犀草苷高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器含量測定Abstrat:bjetiveTdevelpaethdfrdeterinatinfhlrgeniaid(hA)andgalutelin(Gal)inFlsLnieraeJapniae

3、.ethdsAnHPLequippedithELSDethdasappliedtquantifyhlrgeniaidandgalutelinTheanalytiallunashrasil18(4.6250,5.0)iththeteperaturef30.ThehratgrafrthehAandGalasdevelpednagradientphase.Tslutinereaetnitrile(A)and0.5%aetiaidslutinandthegradientdeasasflls：0in(A：10%,B：90%)16in(A:25%,B:75%)22in(A：50%,B：50%).Thefl

4、rateas1.0lin-1Theteperaturefdrifttubeassetat110andtheflratefgasaintainedat3.0lin-1ResultsThealibratinurvesfhAandGalerelinearintherangef5.045gand0.43.6g，andtheaveragereveriesere99.94%(RSDas1.43%)and100.85%(RSDas1.78%)respetivelynlusinTheethdisaurate，speifi，andanshrtenthettalanalytialtiefFlsLnieraeJap

5、niae1儀器與質(zhì)料1.1儀器Agilent1100高效液相色譜儀美國，安捷倫公司；Allteh2000型蒸發(fā)光散射檢測器美國，Allteh公司；K無油空壓機(jī)(天津，興國科技)；SB2200超聲波洗濯器(上海超聲儀器廠)；ETTLER220電子天平(美國，梅特勒公司)。1.2質(zhì)料綠原酸購于中國藥品生物成品檢定所，批號(hào)110753-202213，木犀草苷購于上海郎中堂化劑公司，純度大于98%；從差異產(chǎn)地網(wǎng)絡(luò)5批金銀格式品，通過天津藥物研究院張鑫新老師斷定，天津、河南、山東產(chǎn)為忍冬LnierajapniaThunb.,陜西產(chǎn)為紅腺忍冬L.hypglauaiq.，新疆產(chǎn)為山銀花L.nfusaD.；水

6、為飲用純潔水杭州娃哈哈團(tuán)體，冰醋酸(天津奧凱化工商業(yè))。別的試劑均為闡發(fā)純。2要領(lǐng)與結(jié)果2.1色譜條件與體系實(shí)用性試驗(yàn)Krasil18色譜柱(4.6250，5)，柱溫30；梯度洗脫，活動(dòng)相A為：乙腈，活動(dòng)相B為：0.5%冰醋酸水溶液,梯度步伐為：0in(A：10%，B：90%)16in(A：25%，B：75%)22in(A：50%,B：50%)，每次重新開始梯度前，以0in時(shí)比例活動(dòng)相平衡10in。流速1.0lin-1；ELSD檢測器參數(shù)為：漂移管溫度110，氣體流速3.0lin-1。理論塔板數(shù)按木犀草苷峰盤算不低于2000，與相鄰峰的分散度大于2.0。色譜圖見圖1。2.2溶液的配制2.3線性

7、干系觀察別離細(xì)密汲取上述比較品溶液2，5，8，11，15，18l，注入色譜儀，按上述色譜條件測定，以峰面積對(duì)數(shù)比照擬品進(jìn)樣量對(duì)數(shù)舉行線性回歸，別離得綠原酸及木犀草苷的回歸方程別離為：lgA=1.34lg+4.360，r=0.9995；lgA=1.653lg+5.327，r=0.9996，線性范疇別離為5.045g和0.43.6g。2.4提取要領(lǐng)觀察細(xì)密稱取金銀花藥材粉末約2.0g，用加石油醚609020l脫脂，置具塞三角瓶中，別離用80l70%乙醇、甲醇超聲提取兩次20l2或1次40l1，30in/次，過濾，歸并濾液，用相應(yīng)溶液洗滌濾渣，將濾液60減壓蒸干，用甲醇定量轉(zhuǎn)移至2l容量瓶中，搖勻，

8、濾過，取續(xù)濾液，取10l進(jìn)樣闡發(fā)，比力色譜峰面積大校結(jié)果表白以40l70%乙醇超聲提取兩次20l2即能完全提取綠原酸和木犀草苷。2.5要領(lǐng)學(xué)觀察細(xì)密汲取同一樣品溶液，一連進(jìn)樣5次，10l/次，測定峰面積，綠原酸和木犀草苷峰面積的RSD(n=5)值別離為0.73%和0.84%。表白儀器細(xì)密度精良。取同一批供試品溶液，室溫避光安排，別離于0，2，4，8，12，24h舉行測定，結(jié)果綠原酸、木犀草苷峰面積的RSD(n=6)別離為1.72%，0.54%；表白供試品溶液在24h內(nèi)不變。細(xì)密稱取5份已重復(fù)測定的金銀花藥材粉末1.0g，別離細(xì)密參加綠原酸和木犀草苷比較品溶液適量，按“2.2項(xiàng)下要領(lǐng)測定含量，盤

9、算接納率。結(jié)果見表12。表1綠原酸的加樣接納率測定結(jié)果略表2木犀草苷的加樣接納率測定結(jié)果略2.6樣品測定差異產(chǎn)地的樣品按上述要領(lǐng)制備樣品溶液，按含量測定項(xiàng)下的色譜條件舉行測定，每個(gè)產(chǎn)地樣品平行測定3次，取峰面積均勻值，按尺度曲線盤算差異產(chǎn)地金銀花中綠原酸和木犀草苷含量。結(jié)果見表3。表3樣品含量測定結(jié)果略3討論蒸發(fā)光散射檢測器可以檢測任何揮發(fā)性比活動(dòng)相小的化合物，因此其順應(yīng)性比UV檢測器要廣，但其敏捷度比UV要低約一個(gè)數(shù)目級(jí)4，6。金銀花中木犀草苷的含量相對(duì)較低，因此本文接納加大樣品濃度的要領(lǐng)來降服ELSD敏捷度低的缺點(diǎn)。為了使待測物提取完全，將?中國藥典?里的一次提取改為分兩次提取，在利用雷同

10、量的溶劑條件下進(jìn)步了提取服從。從本實(shí)行色譜圖可以看出在活動(dòng)相組分產(chǎn)生變革的階段，色譜圖的基線照舊比力平展，這是由于ELSD檢測器是利用樣品蒸發(fā)所形成的氣溶膠引起的光散射而產(chǎn)生信號(hào)的，只要儀器漂移管溫度充足高，載氣充足大，就可制止產(chǎn)生溶劑信號(hào)，制止對(duì)樣品的滋擾。而通用的UV檢測器中活動(dòng)相組分變革時(shí)會(huì)引起光折射引起基線不穩(wěn)，因此利用ELSD檢測有大概舉行較大梯度的活動(dòng)相切換以收縮闡發(fā)時(shí)間。由于金銀花的產(chǎn)地差異，其綠原酸和木犀草苷含量也差異，但測定結(jié)果表白，百般品中的綠原酸和木犀草苷含量均切合2022年版?中國藥典?部劃定1。【參考文獻(xiàn)】1國度藥典委員會(huì).中國藥典,部S.北京：化學(xué)產(chǎn)業(yè)出書社，2022：152.2武曉紅，田智勇，王煥.金銀花的研究新希望J.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2022，16(l2)：1303.3石鉞，石任兵，陸蘊(yùn)如.我國藥用金銀花資源、化學(xué)身分及藥理研究希望J.中國藥學(xué)雜志，199