1、1.2 基因工程的基本操作程序1、基因工程包括哪些步驟？3、基因工程中的核心環(huán)節(jié)是哪一步？4、基因表達載體導入到受體細胞有哪些方法？5、目的基因導入受體細胞就會成功表達嗎？ 如何檢測和鑒定？2、什么是目的基因？獲取的方法有哪些方法？ 思考討論問題：基因工程的基本操作程序一、目的基因的獲取二、基因表達載體的構建三、將目的基因導入受體細胞四、目的基因的檢測與鑒定 主要是指編碼蛋白質的結構基因(一）目的基因 目前被廣泛提取使用的目的基因有：蘇云金桿菌抗蟲基因、植物抗病基因、人胰島素基因等。一、目的基因的獲?。ǘ┇@取目的基因的方法1、從基因文庫中獲取2、PCR技術擴增3、人工合成 核心二、基因表達載

2、體的構建編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子 啟動子：位于基因首端一段能與RNA聚合酶結合并能起始mRNA合成的序列。沒有啟動子，基因就不能轉錄。 RNA聚合酶:能夠識別啟動子上的結合位點并與其結合的一種蛋白質. 終止子：終止轉錄。終止子編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)啟動子終止子A G G T C A C G T C GT C C A G T G C A G CRNA聚合酶A G G U C A C G U C G基因表達載體的組成：b、目的基因a、啟動子c、終止子d、標記基因e、復制原點1、下列屬于獲取目的基因的方法的是 利用mRNA反轉錄形成 從基因組文庫中提取 從受體細胞中提取 利用PCR技術 利用DN

3、A轉錄 人工合成 A. B. C. D.小試牛刀2、有關基因工程的敘述中，錯誤的是 A、DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來 B、限制性內切酶用于目的基因的獲得 C、目的基因須由運載體導入受體細胞 D、人工合成目的基因不用限制性內切酶小試牛刀3、1997年，科學家將動物體內的能夠合成胰島素的基因與大腸桿菌的DNA分子重組，并且在大腸桿菌中表達成功。請據(jù)右下圖回答問題。(1)此圖表示的是采取_合成基因的方法獲取_基因的過程。(2) 圖中DNA是以_ _為模板，形成單鏈DNA，在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得了所需要的目的基因。人工 目的 控制胰島素合成的信使RNA 小試牛刀(3) 圖中代表

4、 ，它往往含 基因，以便對目的基因的檢測。重組DNA分子 標記 將目的基因導入受體細胞 轉化農(nóng)桿菌轉化法基因槍法花粉管通道法顯微注射技術感受態(tài)法受體細胞植物細胞動物細胞原核細胞常用的受體細胞： 有大腸桿菌、枯草桿菌、酵母菌和動植物細胞等。將目的基因導入受體細胞的原理借鑒細菌或病毒侵染細胞的途徑。農(nóng)桿菌轉化法適用于雙子葉植物裸子植物顯微注射技術目的基因的表達和檢測接種實驗抗原抗體雜交法DNA-RNA分子雜交法DNA分子雜交法受體是否具有轉基因特征個體水平目的基因是否翻譯目的基因是否轉錄目的基因是否導入分子水平方法檢測對象DNA分子雜交法DNA分子雜交1、從基因文庫中直接獲?。?）基因文庫的概念部

5、分基因文庫： 基因組DNA文庫： 將含有某種生物不同基因的許多DNA片斷，導入到受體菌的群體中，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因，稱為基因文庫含有一種生物的全部基因只包含了一種生物的部分基因，如:cDNA文庫?為什么cDNA文庫中不含啟動子、內含子？原核細胞的基因結構編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)編碼區(qū)上游編碼區(qū)下游調控遺傳信息的表達(調控序列)轉錄RNA(編碼序列)編碼區(qū)非編碼區(qū)(下游)非編碼區(qū)（上游）(與RNA聚合酶結合位點)啟動子(轉錄終止標記)終止子原核細胞的基因結構包括若干個結構基因啟動子 .VS. 起始密碼/終止子 .VS. /終止密碼存在分子：作用：DNA啟動/終止轉錄mRNA起始/

6、終止翻譯mRNA中存在啟動子/終止子的序列嗎？編碼區(qū)非編碼區(qū)非編碼區(qū)外顯子(能編碼蛋白質)啟動子內含子(不能編碼蛋白質)真核細胞的基因結構終止子真核細胞的一個基因的編碼區(qū)轉錄出mRNA前體，需把其中的內含子切除，外顯子拼接成成熟mRNA。(結構基因)（2）基因文庫的建立方法提取某種生物的全部DNA用適當?shù)南拗泼该盖幸欢ù笮〉腄NA片段將DNA片段與運載體連接導入受體菌中儲存基因組文庫方法一：直接分離法某種生物的單鏈mRNA單鏈互補DNA雙鏈cDNA片段導入受體菌中儲存與運載體連接cDNA文庫反（逆）轉錄酶DNA聚合酶方法二：反轉錄法-cDNA的合成流程圖解PCR技術聚合酶鏈式反應PCR擴增儀DNA雙鏈復制的基本原理一段已知目的基因的核苷酸序列四種脫氧核苷酸一對引物熱穩(wěn)定DNA聚合酶(Taq酶）模板DNA2、利用PCR技術擴增目的基因原理：前提：原料：條件：利用PCR技術擴增目的基因53GG TC35 AGCC53引物GG高溫變性低溫復性中溫延伸1.目的基因DNA受熱變性，解鏈；53 AG 引