1、實(shí) 驗(yàn) 四細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察 細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的觀察目的要求染色劑和染色的原理實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)程序思考題目的要求學(xué)習(xí)微生物涂片掌握細(xì)菌的一般染色發(fā)和革蘭氏染色 進(jìn)一步熟練掌握顯微鏡油鏡的使用技術(shù) 觀察和識(shí)別細(xì)菌細(xì)胞的特殊構(gòu)造染色劑和染色原理微生物染色的基本原理，是借助物理和化學(xué)因素的作用而進(jìn)行的。物理因素如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對(duì)染料的毛細(xì)現(xiàn)象、滲透、吸附作用等。 化學(xué)因素如：正負(fù)離子之間的相互吸引等染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型： 1. 酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。 2. 堿性染料：一般有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基

2、紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。 3. 中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細(xì)胞核染色）。 4. 單純?nèi)旧哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類（Sudan b)的染料。染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：實(shí)驗(yàn)程序 （細(xì)菌染色的方法和步驟）細(xì)菌染色的方法: .單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以觀察微生物的大小、形狀、和細(xì)胞排列狀況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。 .復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進(jìn)行染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染

3、色法、鞭毛染色法、細(xì)胞染色法等。染色技術(shù)的一般過程 涂片干燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗干燥鏡檢實(shí)驗(yàn)程序 （簡(jiǎn)單染色的方法和步驟）簡(jiǎn)單染色法（一般染色法） .菌種：牙垢細(xì)菌 .涂片 .干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。 固定 .染色：在整個(gè)涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色分鐘 。 .水洗：傾去染液，用自來水細(xì)流沖洗至流下的水中無染料顏色為止。 干燥：空氣中自然干燥。 鏡檢：在油鏡下觀察牙垢中的各種細(xì)菌形態(tài)并繪圖。革蘭氏染色法1.涂片固定2.單染結(jié)晶紫染液第一次染色 1min 3.媒染碘-碘化鉀溶液浸濕30S4. 脫色95%乙醇溶液進(jìn)行顏色洗脫5.復(fù)染紅色的藩紅染液第二次染色呈現(xiàn)第二次染色的效果紅色

4、；稱革蘭氏陰性菌（紅陰G -）細(xì)菌呈現(xiàn)第一次染色的效果紫色，革蘭氏陽(yáng)性菌（紫陽(yáng)G）；細(xì)菌莢膜和負(fù)染色法實(shí)驗(yàn)程序 （鞭毛染色的方法和步驟）菌液的制備及涂片：菌種應(yīng)預(yù)先連續(xù)傳代56代。 1. 接種：先在斜面底部加入0.51mL無菌水，取活化的枯草桿菌12環(huán)菌苔，接種于無菌水中，300C 培養(yǎng)1518h。 2. 制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數(shù)環(huán)，移入1mL與菌種同溫的無菌水中，在280C溫箱中保溫10min。 3. 鞭毛涂片：先用懸滴法觀察其運(yùn)動(dòng)性，若運(yùn)動(dòng)性很強(qiáng)，即可涂片。涂片后自然干燥、固定。染色：染色液必須新配制，涂片必須充分晾干才能染色。 1. 先用剛過濾的鞭毛染色液A染7.58min左右。 2. 傾去A液，再加鞭毛染色液B液染35min，水洗，自然干燥。 .用液石炭酸復(fù)紅復(fù)染min，水洗、晾干、鏡檢。油鏡下觀察鞭毛的數(shù)目及著生情況（示范鏡）并繪圖 （菌體與鞭毛都呈紅色，