1、金銀花水提取液對(duì)糖代謝影響的體外實(shí)驗(yàn)研究【摘要】目的研究金銀花水提液在體外對(duì)-淀粉酶、-葡萄糖苷酶活性的影響。方法用超聲波處理和直接水煮制備金銀花水提液，采用碘-淀粉比色法和PNPG法分別測(cè)定金銀花水提液對(duì)-淀粉酶、-葡萄糖苷酶活性的影響。結(jié)果兩種金銀花水提液對(duì)-淀粉酶的活性具有抑制作用，且抑制效果隨提取液濃度的增加而增大;對(duì)-葡萄糖苷酶的活性也有抑制，超聲波處理的金銀花水提液的作用才能較強(qiáng)。結(jié)論金銀花提取液在體外對(duì)-淀粉酶和-葡萄糖苷酶的活性均有一定的抑制作用，因此金銀花可能具有降血糖功能?！娟P(guān)鍵詞】金銀花;水提液;酶活性;血糖Abstrat：bjetiveTstudytheeffetsfu

2、ltrasnitreatentandaterbiledhneysukleextratinnativitiesfaylaseand-glusidaseinvitr.ethdsHneysukleextratserepreparedbyultrasnitreatentanddiretaterbilingrespetively,thentheeffetsfhneysukleextratsnativitiesfaylaseand-glusidaseeredeterinedseparatelybyidine-starhlrietritehniqueandPNPGethd.ResultsTheresults

3、shedthatbthextratsinhititryeffetsnativitiesfaylaseand-glusidaseinanentratindependentanner.hilen-glusidase,ultrasnipressedhneysukleextratshedstrngerinhibitryeffet.nlusinHneysukleextratshaveseinhibitryeffetsinvitrntheativitiesfaylaseand-glusidase,indiatingthehneysukleayhavefuntinfreduingbldgluse.Keyrd

4、s：Hneysukle;Extratin;Enzyeativity;Bldgluse-葡萄糖苷酶是小腸內(nèi)麥芽糖、蔗糖等寡糖水解的酶1。人體對(duì)淀粉、糊精、蔗糖等碳水化合物的吸收利用依賴于小腸刷狀緣上-葡萄糖苷酶的活性2。目前該酶的抑制劑有防治糖尿并肥胖癥等作用3。-淀粉酶可作用于淀粉內(nèi)部將糖苷鍵裂開(kāi)，使淀粉水解為糊精、復(fù)原糖等成分4。因此-葡萄糖苷酶、淀粉酶活性抑制作用的研究，對(duì)糖尿并肥胖癥的治療和預(yù)防有積極意義。金銀花是我國(guó)傳統(tǒng)的藥食兩用植物，主要含有綠原酸、類黃酮等生理活性成分。中醫(yī)認(rèn)為金銀花具有抗菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫、保護(hù)肝功能等諸多成效,目前對(duì)金銀花已有較廣泛和深化的研究5。但其是否具有

5、降血糖的作用，目前還未見(jiàn)研究報(bào)道。本文以傳統(tǒng)的水煮和現(xiàn)代化的超聲波處理金銀花所得水提液作為研究對(duì)象，通過(guò)在體外考察它們對(duì)-淀粉酶、-葡萄糖苷酶活性的影響，確定金銀花水提液是否可能具有降血糖作用，對(duì)金銀花的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用具有重要價(jià)值。1材料與儀器1.1藥材供試材料金銀花購(gòu)于重慶普通超市。1.2試劑-淀粉酶，北京奧博星生物技術(shù)公司;-葡萄糖苷酶，Siga公司;PNPG(4-硝基酚-D吡啶葡萄糖苷)，Siga公司;復(fù)原型谷胱苷肽，中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。其余試劑均為分析純。1.3儀器KQ5200型超聲波提取儀，昆山市超聲儀器產(chǎn)品;ZFQ-S旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，天津玻璃儀器廠產(chǎn)品;UV-2405紫外可見(jiàn)

6、分光光度計(jì)，日本島津產(chǎn)品。2方法2.1金銀花提取液的制備2.1.1超聲波處理金銀花提取液的制備取一定量的金銀花，用去離子水泡24h后，在20kHz的超聲儀中處理40in，控制溫度為40。過(guò)濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，定容到每毫升提取液相當(dāng)于0.5g(12)金銀花干品。2.1.2金銀花水煮提取液的制備取一定量的金銀花用水煮提3次，第1次60in,過(guò)濾;第2次加水煮提40in，過(guò)濾，再加水煮提30in，合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)濃縮，定容到每毫升提取液相當(dāng)于0.5g(12)金銀花干品。2.2對(duì)-淀粉酶活性作用的研究6以pH6.0、濃度為0.05g/l的可溶性淀粉液5.0l作底物，加1l濃度為0.02

7、%的-淀粉酶溶液，在60的水浴中作用，生成的糊精可與碘化物產(chǎn)生紅色，在620n處以標(biāo)準(zhǔn)色樣為參比，每隔1in讀1次透光率，直到透光率大于100%的時(shí)間即為淀粉酶的活力。在反響體系中，參加不同體積的金銀花提取液，測(cè)定對(duì)淀粉酶活力的影響，計(jì)算抑制率。抑制率(%)=(樣本時(shí)間-空白時(shí)間)/空白時(shí)間100%2.3對(duì)-葡萄糖苷酶活性作用的研究7以PNPG作底物，-葡萄糖苷酶可分解PNPG釋放出硝基酚，以Na23終止反響，在400n處測(cè)定釋放出的硝基酚的量。在反響體系中，參加不同體積的金銀花提取液，測(cè)定對(duì)-葡萄糖苷酶活力的影響，計(jì)算抑制率。不加金銀把戲液，-葡萄糖苷酶在pH6.8，37的條件下分解PNPG

8、，測(cè)得的吸光度為1.169和1.164，平均為1.166。抑制率(%)=A樣/1.166100%2.4綠原酸含量的測(cè)定8用分光光度法測(cè)定。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程是：Y=0.1283+0.0227X，r2=0.99672.5總黃酮含量的測(cè)定9用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)，分光光度法測(cè)定。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程是：Y=0.0012+0.0358X，r2=0.9999。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.3結(jié)果3.1金銀花提取液對(duì)-淀粉酶活力的影響金銀花提取液對(duì)-淀粉酶的活性具有抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表1。表1金銀花提取液對(duì)-淀粉酶活性的影響由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，當(dāng)金銀花提取液的濃度為每毫升相當(dāng)于0.5g干品時(shí)，它們對(duì)-淀粉酶活性的抑制作用

9、隨著濃度的增加而增強(qiáng);而且水煮得的提取液和超聲波處理得的提取液對(duì)-淀粉酶活性的抑制差異無(wú)顯著性。3.2金銀花提取液對(duì)-葡萄糖苷酶活性的影響在反響體系中參加不同濃度的金銀花提取液，它們對(duì)-葡萄糖苷酶的活性具有一定的抑制作用。結(jié)果見(jiàn)圖1。圖1不同濃度金銀花提取液對(duì)-葡萄糖苷酶活力的影響由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，超聲波處理的金銀花提取液在實(shí)驗(yàn)濃度的范圍內(nèi)，對(duì)-葡萄糖苷酶活力的抑制作用較強(qiáng)，抑制率一般都在60%以上;水煮得的金銀花提取液對(duì)-葡萄糖苷酶活力的抑制作用較超聲波處理的金銀花提取液弱，在參加30l時(shí)對(duì)-葡萄糖苷酶活力的抑制率到達(dá)頂峰79.93%，以后隨著參加量的增加，其抑制率反而有一定程度的下降。對(duì)提取液中綠原酸和總黃酮的含量進(jìn)展了分析。結(jié)果見(jiàn)表2。表2金銀花提取液中綠原酸和總黃酮的含量gl-1樣品綠原酸總黃酮水煮提取液23.01118.79超聲波提取液27.14186.69由表2可知，兩種提取液中綠原酸的含量差異沒(méi)有顯著性，而總黃酮的含量卻有較大的差異，超聲波提取液總黃酮的含量比水煮提取液高36.37%。這兩種提取液對(duì)-葡萄糖苷酶活力抑制作用的差異是否與黃酮的含量有關(guān)，有待進(jìn)一步研究證明。4討論飲食中的碳水化合物在-葡萄糖苷酶的作用下，釋放出葡萄糖并