1、關(guān)于臨床檢測-谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的測定第1頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四1.掌握血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定的基本原理。2.熟悉血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定的具體操作方法。3.了解血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性測定的臨床意義?！灸康囊蟆康?頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四臨床意義谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamic pyruvic Transaminase，GPT)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine Transaminase，ALT) ALT(GPT)廣泛存在于機(jī)體各種組織中，但在肝細(xì)胞中含量最多，當(dāng)肝臟有病變，特別是急性肝炎及肝細(xì)胞壞死，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶活

2、性顯著升高。在肝癌、肝硬變以及膽道疾病時，此酶活性也可中度或輕度增高。第3頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四如何測定酶的活性?活性單位定義中必須規(guī)定哪些條件?第4頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四 在紫外分光光度計中，1ml血清(反應(yīng)溶液總量為3ml)在340nm波長下，用內(nèi)徑為1.0cm的比色皿，在25，1分鐘內(nèi)生成的丙酮酸，在乳酸氫酶催化下，使NADH+H+變成NAD+，使光密度下降0.001為1個轉(zhuǎn)氨酶活性單位。 卡門氏單位的定義為：丙氨酸 + -酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸GPT乳酸氫酶 NAD+ +乳酸NADH+H+第5頁，共12頁，2

3、022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四丙氨酸 + -酮戊二酸 谷氨酸 + 丙酮酸GPT乳酸氫酶 NAD+ +乳酸NADH+H+改良賴氏法顯色反應(yīng)分光光度法 賴氏法沒有制定自身的單位定義，而是以實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)套用卡門氏單位作表示的。第6頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四血清中的谷-丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT），在37、pH7.4的條件下，可催化基質(zhì)（底物）液中的丙氨酸與-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸：【實(shí)驗(yàn)原理】第7頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四第8頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四012345丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液(ml)0.000.050.

4、100.150.200.25ALT底物試劑(ml)0.500.450.400.350.300.250.1M磷酸鹽緩沖液pH7.4(ml)0.100.100.100.100.100.10相當(dāng)于GPT活性(卡門氏單位)0.00285797150200 37水浴預(yù)溫5分鐘，各管加2,4-二硝基苯肼0.5ml混勻，再在37水浴中放置20分鐘后，各管加0.4mol/L NaOH溶液5ml，混勻放置10分鐘后，以蒸餾水調(diào)零點(diǎn)，用520nm波長比色，讀取各管光密。. 各管的讀數(shù)均減去對照管(O管)的光密度，然后以光密度值為縱坐標(biāo)，各管相應(yīng)的轉(zhuǎn)氨酶活性單位為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 實(shí)驗(yàn)操作1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

5、:第9頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四TC血 清(ml)0.1ALT底物液(ml)0.50.5混勻后，置37水浴中保溫30分鐘2，4-二硝基苯肼液(ml)0.50.5混勻后，置37水浴中保溫30分鐘血 清(ml)0.10.4mol/L NaOH(ml)5.05.02.酶活性測定：測定前將底物緩沖液在37水浴中預(yù)溫5分鐘，再按下表操作。 混勻，在室溫中放置10分鐘，以蒸餾水調(diào)零點(diǎn)，用520nm波長比色，讀取光密度。用T-C管的光密度查標(biāo)準(zhǔn)曲線，即得到待測血清中所含ALT的酶活性。參考值： 525卡門氏單位第10頁，共12頁，2022年，5月20日，17點(diǎn)14分，星期四【臨床意義】肝細(xì)胞中含ALT最豐富，因此當(dāng)肝臟疾病致肝細(xì)胞受損傷時，ALT即大量釋放入血液，致使血清中ALT活性增高。測定ALT是檢查肝功能的重要指標(biāo)之一。ALT顯著增高見于各種急性肝炎及藥物中毒性肝細(xì)胞壞死，中等程度增高見于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞，輕度增高則見于阻塞性黃疸及膽道炎等疾病。骨骼肌損傷、多發(fā)性肌炎亦可引起轉(zhuǎn)氨酶活性升高。【思考題】 1.血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測定有何臨床意義？ 2.血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的測定有何注意