1、第28章肝炎病毒病原生物學(xué)教研室1教學(xué)目的與要求（一）掌握HAV、HBV、HCV的生物學(xué)性狀、致病性與免疫性 、微生物學(xué)檢查和預(yù)防措施。（三）掌握HDV的 生物學(xué)特點(diǎn)和致病性。（四）掌握HEV的生物學(xué)性狀、致病性、微生物學(xué)檢查。 2肝炎病毒是引起病毒性肝炎的病原體，這些病毒分別屬于不同病毒科，性狀顯著不同，但均以肝細(xì)胞為復(fù)制場(chǎng)所，引起病毒肝炎。3甲型肝炎病毒（HAV）乙型肝炎病毒（ HBV ）丙型肝炎病毒（HCV）丁型肝炎病毒（ HDV ）戊型肝炎病毒（ HEV ）消化道傳播， 急性肝炎，不轉(zhuǎn)為慢性及攜帶者血行傳播，急慢性肝炎，并與肝硬化、肝癌相關(guān)缺陷病毒， HBV為其輔助病毒 肝炎病毒的類型

2、4第一節(jié) 甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)第二節(jié) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus) 一、生物學(xué)性狀 二、致病性和免疫性 三、微生物學(xué)檢查法 四、防治原則 主線第三節(jié) 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus)第四節(jié) 丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus)第五節(jié) 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus)5甲型肝炎病毒是引起甲型肝炎的病原體6 1. 形態(tài)與結(jié)構(gòu) 小核糖核酸病毒科，嗜肝病毒屬 無包膜，20面體對(duì)稱，直徑27-32 nm 兩種顆粒 基因組為單正鏈RNA，長約7500個(gè)核苷酸 有7個(gè)基因型一、生物學(xué)性狀7HAV的基因組結(jié)構(gòu)

3、一、生物學(xué)性狀8 2. 抵抗力 耐受乙醚、氯仿等脂溶劑 耐酸：在pH3的酸性環(huán)境中穩(wěn)定 不耐熱：60 ， 4 h；100 5 min可使之滅活 在海水、淡水、毛蚶、泥沙中存活數(shù)天至數(shù)月一、生物學(xué)性狀93. 培養(yǎng)特性 易感動(dòng)物： 黑猩猩，狨猴，鷹面猴，短尾猴允許性細(xì)胞： Vero、恒河猴胚腎細(xì)胞（FRHK-4） 人肝癌細(xì)胞株（PLC/PRF/S）等 在培養(yǎng)細(xì)胞中生長緩慢，無CPE一、生物學(xué)性狀104. 抗原性 HAV抗原性穩(wěn)定，僅有一個(gè)血清型 衣殼蛋白VP1、VP2、VP3具有抗原性， 可誘導(dǎo)產(chǎn)生中和抗體 一、生物學(xué)性狀11 傳染源：患者、隱性感染者 傳播途徑： 糞 口途徑傳播 密切接觸傳播 潛

4、伏期 15-50 d（平均30 d） 自限性疾病二、致病性與免疫性12 HAV（污染水源、食物、海產(chǎn)品等） 口咽部、唾液腺 腸黏膜或局部淋巴結(jié) 病毒血癥 肝臟 膽汁 糞便 肝細(xì)胞變性、壞死（急性肝炎） 二、致病性與免疫性 臨床類型： 臨床型 20% 亞臨床型 45.7% 隱性感染 34.3%13甲型肝炎的臨床特征 肝脾腫大 黃疸 轉(zhuǎn)氨酶升高 血膽紅素升高 惡心、嘔吐、食欲減退、發(fā)熱 一般為自限性疾病，預(yù)后良好，不發(fā)展 成慢性肝炎和慢性攜帶者。二、致病性與免疫性14 NK細(xì)胞的殺傷作用 肝細(xì)胞溶解特異性細(xì)胞免疫IFN-分泌增加，促進(jìn)肝細(xì)胞表達(dá)HLA，HLA介導(dǎo)的CTL對(duì)肝細(xì)胞的細(xì)胞毒作用增強(qiáng)。

5、免疫力持久，成人多因隱性感染免疫 致病與免疫機(jī)制二、致病性與免疫性肝細(xì)胞的損害主要與免疫病理反應(yīng)有關(guān)，而不是病毒對(duì)肝細(xì)胞的直接損害。15甲型肝炎的臨床經(jīng)過與免疫反應(yīng)16HAV-IgM檢測(cè)： 早期、快速診斷最可靠的血清學(xué)指標(biāo) HAV-IgG檢測(cè)： 主要用于了解既往感染史、疫苗免疫 效果評(píng)價(jià)或流行病學(xué)調(diào)查三、微生物學(xué)檢查法 病原學(xué)檢查： RT-PCR法檢測(cè)HAV RNA ELISA法檢測(cè)HAV抗原 免疫電鏡法檢測(cè)病毒顆粒17一般性預(yù)防 毛蚶四、防治原則 特異性預(yù)防 減毒活疫苗，我國已廣泛使用 滅活疫苗18第一節(jié) 甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)第二節(jié) 乙型肝炎病毒(Hepatit

6、is B virus) 一、生物學(xué)性狀 二、致病性和免疫性 三、微生物學(xué)檢查法 四、防治原則 主線第三節(jié) 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus)第四節(jié) 丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus)第五節(jié) 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus)19全球性公共衛(wèi)生問題2021 HBV感染的臨床類型無癥狀攜帶者重癥肝炎急性肝炎慢性乙肝與肝硬化和肝癌密切相關(guān)22 1. 形態(tài)與結(jié)構(gòu)電鏡下HBV呈三種不同形態(tài)顆粒：Dane顆粒：直徑42 nm，雙層結(jié)構(gòu) 完整的病毒顆粒，具傳染性 包膜蛋白：S(HBsAg,小)、M(HBsAg,PreS2Ag,中)、L(HBsAg, PreS1

7、 Ag, PreS2 Ag,大) 衣殼蛋白：HBcAg 核心：雙鏈DNA和DNA多聚酶小球形顆粒：直徑22 nm 中空的病毒顆粒，主要含HBsAg 管型顆粒：由小球形顆粒聚集而成 一、生物學(xué)性狀23乙肝病毒的三種顆粒一、生物學(xué)性狀24Dane顆粒核心：雙股不完全閉合的DNA 和DNA 聚合酶內(nèi)衣殼：20面立體對(duì)稱外衣殼：相當(dāng)于病毒的包膜Dane結(jié)構(gòu)一、生物學(xué)性狀25一、生物學(xué)性狀 2. HBV的基因結(jié)構(gòu)與功能 基因組為不完全雙鏈環(huán)狀DNA 長鏈（負(fù)鏈），長度固定 短鏈（正鏈）：長鏈的50%-100% 負(fù)鏈含4個(gè)ORF： S區(qū)、C區(qū)、P區(qū)、X區(qū)26一、生物學(xué)性狀S區(qū)：編碼HBsAg和前S1抗原和

8、前S2抗原 C區(qū)：編碼HBcAg和HBeAg P區(qū)：編碼DNA 多聚酶X區(qū)：編碼HBxAg(可能與肝癌發(fā)生有關(guān))分型：A-H8個(gè)基因型。我國：B型與C型。27一、生物學(xué)性狀4. HBV的復(fù)制 HBV復(fù)制周期示意圖28一、生物學(xué)性狀3. HBV的抗原組成(1) HBsAg(表面抗原）:以三種不同形式存在于患者血清中。HBsAg亞型的分布有明顯地區(qū)差異,并與種族有關(guān)（a d/y w/r)。血清HBsAg是感染HBV的重要標(biāo)志,最先出現(xiàn)。陽性見于急、慢性肝炎及攜帶者，用于獻(xiàn)血員篩選。持續(xù)6個(gè)月預(yù)示慢性化HBsAg刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗-HBs是中和抗體,對(duì)機(jī)體有保護(hù)作用，制備疫苗的成分。抗-HBs預(yù)示免疫

9、力，見于恢復(fù)期、既往感染或疫苗接種者29一、生物學(xué)性狀3. HBV的抗原組成(1) Pre-S1和Pre-S2:Pre-S1和Pre-S2抗原性強(qiáng)（中和抗原）,與肝細(xì)胞表面受體結(jié)合，阻斷病毒吸附與病毒活動(dòng)性復(fù)制有關(guān)，與HBV DNA含量成正比，是病毒復(fù)制的指標(biāo)抗Pre-S2持續(xù)時(shí)間短（急性），抗Pre-S1持續(xù)時(shí)間長，見于急性肝炎恢復(fù)期早期，預(yù)后良好。30一、生物學(xué)性狀3. HBV的抗原組成（2）HBcAg（核心抗原）于病毒的核衣殼及被感染肝細(xì)胞核、胞質(zhì)與胞膜上一般不游離于血循環(huán)中表示有感染性病毒顆粒存在，具有很強(qiáng)的抗原性抗HBc產(chǎn)生早，低度高，持續(xù)時(shí)間長，急性期存在，沒有免疫保護(hù)作用抗HBc

10、-IgM是病毒復(fù)制活躍的指標(biāo)抗HBc-IgG預(yù)示急性感染（高滴度）或既往感染（低滴度）31一、生物學(xué)性狀3. HBV的抗原組成（3）HBeAg游離存在于血、感染肝細(xì)胞核、胞質(zhì)與胞膜與病毒的復(fù)制成正比，是病毒復(fù)制活躍的指標(biāo)之一，轉(zhuǎn)陰預(yù)示病毒復(fù)制減弱或停止，持續(xù)陽性預(yù)示慢性化抗HBe具有免疫保護(hù)作用Pre-C區(qū)突變 免疫逃逸32一、生物學(xué)性狀培養(yǎng):黑猩猩是HBV最敏感的動(dòng)物模型細(xì)胞培養(yǎng)已獲成功抵抗力:強(qiáng)耐受低溫、紫外線、干燥和一般消毒劑（70%乙醇） 10010分鐘、高壓蒸汽滅菌、0.5過氧 乙酸等能使HBV滅活 消毒可使HBV失去感染性，保留HBsAg的抗原性33急性感染 慢性乙型肝炎肝硬化肝癌

11、 死亡慢性攜帶者 痊愈肝硬化痊愈 死亡 靜止性肝硬化 1.傳染源：乙肝病人、無癥狀病毒攜帶者2.傳播途徑：血液、血制品、母嬰垂直、性及密切接觸傳播3.臨床表現(xiàn)：二、致病性與免疫性“三部曲”體力不支，疲勞，精神不濟(jì)食欲不振，厭油，惡心，腹脹，上腹部不適等黃疸肝區(qū)疼痛肝脾腫大肝硬化患者面色晦暗，肝病面容，蜘蛛痣或肝掌及內(nèi)分泌失調(diào)等34(1)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫損傷：CTL：直接殺傷、細(xì)胞因子、細(xì)胞凋亡細(xì)胞免疫功能正常:急性肝炎細(xì)胞免疫功能低下:慢性肝炎 細(xì)胞免疫反應(yīng)過強(qiáng):重型肝炎(2)免疫復(fù)合物性的免疫損傷:肝外及肝臟損傷(3)自身免疫反應(yīng)的免疫損傷:肝特異性脂蛋白(LSP)抗原二、致病性與免疫性4.

12、致病機(jī)制：雙重作用(6)原發(fā)性肝癌：DNA整合和反式激活作用(4)免疫耐受:HBsAg無癥狀攜帶者或慢性肝炎(5)病毒變異：慢性化35S基因變異：a抗原表位基因發(fā)生變異，導(dǎo)致HBsAg抗原性改變, 出現(xiàn)免疫逃逸和“診斷逃逸”。PreC基因的變異：1896 nt G-A突變導(dǎo)致第28位TGG變?yōu)門AG，使PreC基因不能轉(zhuǎn)譯出完整的HBeAg。C基因的變異:導(dǎo)致HBcAg抗原位點(diǎn)的改變，出現(xiàn)免疫逃避。P基因的變異:耐藥性變異5. 病毒變異與免疫逃逸二、致病性與免疫性逆轉(zhuǎn)錄36乙肝病毒感染經(jīng)過與免疫反應(yīng)關(guān)系（急性感染）二、致病性與免疫性37乙肝病毒感染經(jīng)過與免疫反應(yīng)關(guān)系（隱性感染）HBsAg抗HB

13、s抗HBc(IgG)抗HBeHBeAg0 3月 5月 8月 1年 5年二、致病性與免疫性38乙肝病毒感染經(jīng)過與免疫反應(yīng)關(guān)系（慢性持續(xù)性肝炎）HBsAg抗HBc(IgG)抗HBe0 3月 1年 10年 20年 30年HBeAg二、致病性與免疫性39 HBV抗原、抗體檢測(cè) 血清HBV-DNA檢測(cè) 血清DNA多聚酶檢測(cè)三、微生物學(xué)檢查法40HBV抗原抗體檢測(cè)結(jié)果的臨床分析HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBc結(jié)果分析 HBV感染或無癥狀攜帶 急慢性乙肝或無癥狀攜帶 急慢性乙肝（大三陽） 趨于恢復(fù)（小三陽） 既往感染恢復(fù)期 既往感染或接種過疫苗三、微生物學(xué)檢查法41篩選供血員加強(qiáng)傳染源的管

14、理保護(hù)易感人群 HBsAg血源疫苗 主動(dòng)免疫 HBsAg基因工程疫苗 多肽疫苗、核酸疫苗 被動(dòng)免疫： HBsAb免疫球蛋白四、防治原則 治療：免疫調(diào)節(jié)劑、護(hù)肝藥物、抗病素治療42第一節(jié) 甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)第二節(jié) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus) 一、生物學(xué)性狀 二、致病性和免疫性 三、微生物學(xué)檢查法 四、防治原則 主線第三節(jié) 丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus)第四節(jié) 丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus)第五節(jié) 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus)43形態(tài)與結(jié)構(gòu)病毒顆粒呈球型，有包膜直徑約 50 nm

15、一、生物學(xué)性狀44 HCV的基因結(jié)構(gòu)和功能 基因組為ss+RNA，9.5 kb，僅有一個(gè)長開放閱讀框架（ORF） 一、生物學(xué)性狀45 培養(yǎng)特性 有嚴(yán)格的宿主限制性，人類為天然宿主 黑猩猩為敏感動(dòng)物 體外培養(yǎng)困難抵抗力不強(qiáng)一、生物學(xué)性狀46 主要經(jīng)血液及血制品傳播,潛伏期短（7-33天） 40%-50%的丙肝患者可轉(zhuǎn)變成慢性肝炎,部分可發(fā)展成肝硬化和肝癌二、致病性與免疫性HCV與HBV重疊感染易發(fā)展成重癥肝炎, 免疫力不穩(wěn)定、不持久傳染源：攜帶者、急、慢性（免疫逃避、低水平復(fù)制、肝外存在等）47 致病機(jī)制 病毒的直接致病作用 病毒在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，直接損傷肝細(xì)胞 免疫病理作用 特異性CTL對(duì)肝細(xì)胞

16、的殺傷作用 細(xì)胞凋亡二、致病性與免疫性481. RT-PCR、熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)病毒RNA 用于丙型肝炎的快速診斷 2. ELISA法檢測(cè)特異性抗體 用于丙型肝炎的診斷、篩選獻(xiàn)血員和流行病學(xué)調(diào)查三、微生物學(xué)檢查法49 缺乏有效疫苗（抗原性不強(qiáng)、易于變異） 缺乏特效藥物 最常用的藥物 IFN-和利巴韋林 主要預(yù)防措施 篩選供血員 控制血制品四、防治原則50第一節(jié) 甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)第二節(jié) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus) 一、生物學(xué)性狀 二、致病性和免疫性 三、微生物學(xué)檢查法 四、防治原則 主線第三節(jié) 丙型肝炎病毒(Hepatitis C v

17、irus)第四節(jié) 丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus)第五節(jié) 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus)51形態(tài)與結(jié)構(gòu)：HDV為缺陷單負(fù)鏈環(huán)狀RNA病毒（最小基因組）球形，直徑35-37 nm，有包膜病毒顆粒內(nèi)部由HDVRNA和丁型肝炎病毒抗原（HDAg）組成 一、生物學(xué)性狀52 HDAgHDV形態(tài)和結(jié)構(gòu)圖53傳播途徑：與乙型肝炎相同HDV感染的臨床類型： 可表現(xiàn)為急性、慢性肝炎或無癥狀攜帶者二、致病性與免疫性 致病機(jī)制 可能與病毒對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷作用和機(jī)體的免疫病理反應(yīng)有關(guān)54聯(lián)合感染重疊感染急慢性、攜帶者HBV+HDVHBV+HDV潛伏期急性肝炎肝硬化重性肝炎慢性丁

18、肝（coinfection）（superinfection）二、致病性與免疫性551. 檢測(cè)HDVAg：檢測(cè)血清或肝細(xì)胞內(nèi)HDVAg 檢出HDAg是HDV感染的可靠證據(jù)， 也是HDV感染活動(dòng)的指標(biāo)2. 血清中HDV抗體檢測(cè) 是目前診斷HDV感染的常規(guī)方法 檢出抗-HDV IgM有早期診斷價(jià)值 抗-HDV IgG 持續(xù)高效價(jià)是慢性HDV感染的指標(biāo) 三、微生物學(xué)檢查法預(yù)防：接種HBV疫苗56第一節(jié) 甲型肝炎病毒(Hepatitis A virus)第二節(jié) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus) 一、生物學(xué)性狀 二、致病性和免疫性 三、微生物學(xué)檢查法 四、防治原則 主線第三節(jié) 丙型肝炎病

19、毒(Hepatitis C virus)第四節(jié) 丁型肝炎病毒(Hepatitis D virus)第五節(jié) 戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus)57 形態(tài)與結(jié)構(gòu)： 病毒體呈球狀，無包膜 直徑32-34 nm 表面有鋸齒狀刻缺和突起 一、生物學(xué)性狀58基因組：ssRNA，7.5 kb含有3個(gè)ORF ORF1編碼功能性酶ORF2編碼衣殼蛋白ORF3編碼型特異性抗原一、生物學(xué)性狀59抵抗力：HEV對(duì)高鹽、氯化銫、氯仿等敏感在-70-8條件下易裂解在液氮中保存穩(wěn)定培養(yǎng)特性：HEV體外培養(yǎng)困難可感染食蟹猴、非洲綠猴、獼猴、黑猩猩及乳豬等多種動(dòng)物一、生物學(xué)性狀60傳染源：潛伏期末及急性期病人 傳播途徑：糞-口傳播易感人群：青壯年潛伏期：10-60天，平均40天二、致病性與免疫性61 致病機(jī)制：病毒經(jīng)胃腸道進(jìn)入血流，在肝細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，然后釋放到血液和膽汁中，經(jīng)糞便排出體外。HEV通過對(duì)肝細(xì)胞的直接損傷和免疫病理作用引起肝細(xì)胞的炎癥或壞死。 二、致病性與免疫性臨床類型：表現(xiàn)為急性肝炎或重癥肝炎不發(fā)展為慢性肝炎6263電鏡或免疫電鏡技術(shù)檢測(cè)患者糞便中的HEV顆粒 RT-