1、T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能T細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義”通過閱讀科技書籍，我們能豐富知識，培養(yǎng)邏輯思維能力；T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能T細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能檢測

2、平臺的建立和應(yīng)用課件機(jī)體的免疫系統(tǒng)非特異免疫 皮膚粘膜，吞噬細(xì)胞，NK細(xì)胞，補(bǔ)體，正常菌群特異性免疫 細(xì)胞免疫：CD4+ 細(xì)胞，CD8+ 細(xì)胞 體液免疫：B細(xì)胞機(jī)體的免疫系統(tǒng)非特異免疫機(jī)體的免疫系統(tǒng)CD4細(xì)胞非特異性免疫特異性免疫NK細(xì)胞，吞噬細(xì)胞B細(xì)胞CD8細(xì)胞機(jī)體的免疫系統(tǒng)CD4細(xì)胞非特異性免疫特異性免疫NK細(xì)胞，吞噬CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能CD4+細(xì)胞的免疫中樞指揮功能CD4+細(xì)胞的產(chǎn)生和分群記憶 CD4胸腺純真 CD4Net Naive CD4 # 5x107/天抗原CD4+細(xì)胞的產(chǎn)生和分群記憶 CD4胸腺純真 CD4N

3、et 純真 純真和記憶/效應(yīng)4細(xì)胞亞群的產(chǎn)生記憶效應(yīng)凋亡胸腺效應(yīng)效應(yīng)效應(yīng)純真 純真和記憶/效應(yīng)4細(xì)胞亞群的產(chǎn)生記憶效應(yīng)凋亡胸腺純真 CD4和記憶CD4細(xì)胞純真 CD4和記憶CD4細(xì)胞純真/記憶CD+細(xì)胞分泌不同的介素純真/記憶CD+細(xì)胞分泌不同的介素細(xì)胞免疫功能的抗感染作用感染發(fā)生的兩個(gè)基本要素：病原體和機(jī)體免疫功能免疫功能對疾病轉(zhuǎn)歸的影響：對免疫功能正常的人不起致病作用的病原體，在免疫功能低下的人身上可發(fā)生致命性的感染；免疫功能正常的人發(fā)生某種感染后可很快恢復(fù)，而在免疫功能紊亂的人則成為慢性狀態(tài)；對同樣的病原體所導(dǎo)致的感染，給予同樣的抗感染治療，轉(zhuǎn)歸完全不一樣細(xì)胞免疫功能的抗感染作用感染發(fā)生

4、的兩個(gè)基本要素：病原體和機(jī)體細(xì)胞免疫功能的抗感染作用為什么？乙肝病毒感染：有人為乙肝病毒攜帶者, 也有人成為慢性乙肝病人？HPV感染：多數(shù)人表現(xiàn)為無癥狀的HPV潛伏感染者，少數(shù)人表現(xiàn)為復(fù)發(fā)性HPV CMV感染: 90%的正常人隱性感染終生帶病毒，但免疫功能低下時(shí)可致死？細(xì)胞免疫功能的抗感染作用為什么？T細(xì)胞免疫功能檢測平臺的建立和應(yīng)用課件 HIV感染的自然史 CD4細(xì)胞(cell/mm3）800400 急性感染期 無癥狀期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒載量抗HIV 的CTLHIV抗體 HIV感染的自然史 CD4細(xì)胞 急性感染期 HIV感染者的三種臨床轉(zhuǎn)歸VirusCD4CD8 aHIVC

5、D4CD4CD8CD8 aHIVVirusVirusStandard 8 yFast : 4-5 y : (2%) (CCR genes, HLA B35Slow : 10 y : (2%), CCR genes, HLA B57HIV感染者的三種臨床轉(zhuǎn)歸VirusCD4CD8 aHIVC免疫功能與機(jī)會性感染相關(guān)性 years200CD4 counts白念菌Zona卡波濟(jì)肉瘤淋巴瘤PCP弓型體CMVMAIC48艾滋病期HIV load210免疫功能與機(jī)會性感染相關(guān)性 years200CD4 coun細(xì)胞免疫功能的抗感染作用不重視機(jī)體免疫功能的后果化療藥物的濫用耐藥菌的產(chǎn)生二重感染的發(fā)生進(jìn)一步損

6、害免疫功能細(xì)胞免疫功能的抗感染作用不重視機(jī)體免疫功能的后果化療藥物細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能的抗感染作用細(xì)胞免疫功能與感染免疫功能測定方法體內(nèi)： PPD試驗(yàn)？體外： 體液免疫：B細(xì)胞數(shù)量，免疫球蛋白定量 細(xì)胞免疫：T細(xì)胞亞群的數(shù)量和功能 （流式細(xì)胞儀，ELISA，ELISPOT）細(xì)胞免疫功能與感染免疫功能測定方法體內(nèi)：T細(xì)胞免疫功能的測定T細(xì)胞功能（細(xì)胞介素，增殖反應(yīng)）功能亞群（CD28）激活亞群（CD38、 HLA-Dr）純真亞群和記憶亞

7、群凋亡亞群, Treg（T細(xì)胞、CD4、CD8、B 、 NK）T細(xì)胞免疫功能的測定T細(xì)胞功能功能亞群（CD28）（T細(xì)胞、A cytometer looks like an easy-to-use machine but look inside:Its a complex laser machine!A cytometer looks like an easyPMTPMTPMTPMT 4DichroicFiltersBandpassFiltersFlow Cytometry PrincipleLaser 1234Flow cellPMTPMTPMTPMTDichroicFiltersBanT細(xì)

8、胞免疫功能的測定T細(xì)胞功能（細(xì)胞介素，增殖反應(yīng)）功能亞群（CD28）激活亞群（CD38、 HLA-Dr）純真亞群和記憶亞群凋亡亞群, Treg（T細(xì)胞、CD4、CD8、B 、 NK）T細(xì)胞免疫功能的測定T細(xì)胞功能功能亞群（CD28）（T細(xì)胞、淋巴細(xì)胞免疫表型檢測指標(biāo)B淋巴細(xì)胞（CD19+） 反映機(jī)體體液免疫功能狀態(tài) 自然殺傷細(xì)胞（CD3-CD16/56+） 反映機(jī)體天然免疫功能狀態(tài) 輔助性及殺傷性T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+/CD8+） 反映機(jī)體細(xì)胞免疫功能狀態(tài) T淋巴細(xì)胞純真和記憶亞群（CD4+CD45RA+62L+/CD45RO+ ）判斷CD3+CD4+降低的重要指標(biāo)T淋巴細(xì)胞的激活亞群（

9、CD4+/CD8+CD38+/HLA-DR+） 評價(jià)細(xì)胞的激活狀態(tài)。T淋巴細(xì)胞的功能亞群（CD4+/CD8+CD28+） 衡量T淋巴細(xì)胞功能的重要指標(biāo)。 淋巴細(xì)胞免疫表型檢測指標(biāo)B淋巴細(xì)胞（CD19+） 反映機(jī)體體不同年齡組正常細(xì)胞亞群的建立淋巴細(xì)胞表型青年(18-40y,N=57)中年(41-60,N=45)老年(大于61y,N=52)B淋巴細(xì)胞6.430.61045714.219.7775662.424.339544自然殺傷細(xì)胞4.235.6968723.540.4539854.149.8711340輔助性T淋巴細(xì)胞25.164.0442164519.854.0259194619.655.

10、22911730殺傷性T淋巴細(xì)胞16.747.2321116615.942.32088258.244.41731114T淋巴細(xì)胞純真亞群17.461.51175865.268.5407162.262.725688CD4/CD80.573.280.553.300.625.97不同年齡組正常細(xì)胞亞群的建立淋巴細(xì)胞表型青年(18-40y細(xì)胞免疫功能測定方法T細(xì)胞功能的測定T細(xì)胞增殖功能 同位素H3摻入試驗(yàn) BrdU ，Ki67 CFSUT細(xì)胞毒試驗(yàn)（CTL）和細(xì)胞介素測定 同位素Cr51 四聯(lián)體 ELISA 流式細(xì)胞儀 ELISPOT細(xì)胞免疫功能測定方法T細(xì)胞功能的測定T細(xì)胞增殖功能ELISPOT

11、方法ELISPOT方法是目前國際上廣泛應(yīng)用的較新的體外測定特異性抗體分泌細(xì)胞和細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的方法。該方法可在單細(xì)胞水平檢測淋巴細(xì)胞對特異性抗原的反應(yīng)能力及計(jì)數(shù)特異性抗原刺激下細(xì)胞因子分泌細(xì)胞的頻數(shù)。 優(yōu)點(diǎn)：敏感-能檢測產(chǎn)生細(xì)胞因子頻率極低的細(xì)胞，靈敏度高達(dá) 1/1000000。 特異 直觀-可直接在顯微鏡下人工計(jì)數(shù)斑點(diǎn)或通過ELISPOT分 析系統(tǒng)對斑點(diǎn)進(jìn)行計(jì)數(shù)， 1 個(gè)斑點(diǎn)代表 1 個(gè)特異性 抗體分泌細(xì)胞或細(xì)胞因子分泌細(xì)胞。 ELISPOT 方法ELISPOT方法是目前國際上廣泛應(yīng)用的ELISPOT 原理- PBMC-刺激原孵育16 18h或4048hIFN抗體BSPA酶和底物斑點(diǎn)!EL

12、ISPOT 原理- PBMC-刺激原孵育16 18ELISpot 結(jié)果陰性對照陽性對照樣本孔樣本孔圖中的每個(gè)斑點(diǎn)代表一個(gè)能分泌IFN- 的抗原特異性CD4+T細(xì)胞或CTLELISpot 結(jié)果陰性對照陽性對照樣本孔樣本孔圖中的每個(gè)斑T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用 正常人的免疫功能 T細(xì)胞免疫的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能的測定 T細(xì)胞亞群 T細(xì)胞功能T細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義T細(xì)胞免疫功能與感染T細(xì)胞免疫功能的抗感染作用T細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義HIV感染和艾滋病其它各種感染性疾病-病毒感染：SARS, HBV，HCV，EBV， CMV，HFRS, HFMD-結(jié)

13、核病，真菌感染。腫瘤和化療病人的免疫功能監(jiān)測器官移植病人的免疫監(jiān)測自身免疫病和過敏性疾病T細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義HIV感染細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義中國HIV/AIDS的免疫病理改變和免疫重建細(xì)胞免疫功能與感染細(xì)胞免疫功能測定的臨床意義中國HIV/艾滋病的主要免疫病理改變CD4+ T 細(xì)胞數(shù)的減少；CD4+ T 功能的減低;異常的細(xì)胞免疫激活。艾滋病的主要免疫病理改變CD4+ T 細(xì)胞數(shù)的減少； HIV感染的自然史 CD4細(xì)胞(cell/mm3）800400 急性感染期 無癥狀期 艾滋病前期和艾滋病期 CD4 病毒載量抗HIV 的CTLHIV抗體 HIV

14、感染的自然史 CD4細(xì)胞 急性感染期 HIV/AIDS 患者淋巴細(xì)胞亞群與正常對照比較HIV/AIDS患者n=263正常對照n=57B細(xì)胞計(jì)數(shù)109 (159,71)*261 (294,207)NK細(xì)胞計(jì)數(shù)110 (195,61)*339 (471,234)CD4+T計(jì)數(shù)205 (348,63)*787 (1058,615)純真CD4+T計(jì)數(shù)29 (86,6)*328 (382,256)純真CD4+T比例18.5 (32.0,6.5)*35.4 (45.5,30.0)記憶CD4+T計(jì)數(shù)136 (232,44)*453 (538,360)記憶CD4+T比例72.6 (83.2,60.1)*56.

15、0 (66.3,47.7)CD4+CD28+功能亞群比例86.1 (94.0,68.3)*95.7 (97.6,91.0)CD8+T計(jì)數(shù)652 (914,422)538 (642,480)CD8+CD38+激活亞群比例84.3 (92.7,69.0)*42.6 (50.6,36.1)（計(jì)數(shù)：個(gè)/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示）*與正常對照組相比存在顯著差異P0.001。與正常對照組相比存在顯著差異P=0.021。HIV/AIDS 患者淋巴細(xì)胞亞群與正常對照比較HIV/AI早中晚3組患者淋巴細(xì)胞亞群的比較分組組n=131組n=66組n=66CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)63 (

16、134,20)279 (317,246)493 (627,413)病毒載量4.88 (5.41,4.46)4.3 (4.71,3.69)3.49 (4.22,2.73)B細(xì)胞計(jì)數(shù)84 (118,51)*130 (171,91)161 (216,123)純真CD4+T比例11.5 (25.5,4.7)*26.3 (37.4,15)25.4 (40.2,14.1)記憶CD4+T比例77.8 (88.3,66.7)*67.2 (79.1,58)64.9 (77.2,54.1)CD4+CD28+T/CD4+T72.7 (89.3,52.8)*92.9 (95.8,85.1)91.3 (94.9,82.

17、7)CD8+CD38+T/CD8+T90.2 (94.7,80.1)*78.9 (86.7,66.4)69 (84.9,61.5)組與、組相比P0.001, 組與組相比P0.001。*組與、兩組均存在顯著差異P0.001, 、組兩組無顯著差異。（計(jì)數(shù)：個(gè)/mm3，比例：%，數(shù)值以中位數(shù)（上四分位數(shù)，下四分位數(shù)）表示）早中晚3組患者淋巴細(xì)胞亞群的比較組組組CD4+THIV/AIDS的免疫病理改變選擇性純真T4細(xì)胞的減少正常人HIV感染者AIDS病人HIV/AIDS的免疫病理改變選擇性純真T4細(xì)胞的減少正HIV/AIDS的免疫病理改變T4細(xì)胞輔刺激信號受體的表達(dá)減少正常人HIV感染者AIDS病人H

18、IV/AIDS的免疫病理改變T4細(xì)胞輔刺激信號受體的表CD28T細(xì)胞輔刺激信號受體CD28T細(xì)胞輔刺激信號受體HIV/AIDS的免疫病理改變異常的T細(xì)胞免疫激活A(yù)IDS病人HIV感染者正常人HIV/AIDS的免疫病理改變異常的T細(xì)胞免疫激活A(yù)ID中國艾滋病病人的免疫改變特點(diǎn)艾滋病病人有選擇性的純真 T4細(xì)胞減少;CD4+CD28+ 是細(xì)胞免疫功能的標(biāo)記指標(biāo);CD8+CD38+ 亞群是疾病進(jìn)展和病毒復(fù)制的預(yù)測指標(biāo)。.HIV感染當(dāng)CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)低于200個(gè)/mm3時(shí):CD28表達(dá)下降較感染早中期更為嚴(yán)重純真CD4+T細(xì)胞減少的速率較感染早中期明顯加快 異常的免疫激活更為嚴(yán)重中國艾滋病病人的免疫改變特點(diǎn)艾滋病病人有選擇性的純真 T4細(xì)T細(xì)胞免疫功能檢測在SARS診治中的應(yīng)用T細(xì)胞免疫功能檢測在SARS診治中的應(yīng)用T細(xì)胞檢測對SARS診斷的意義SARS病人CD4+細(xì)胞(98%)和CD8+(80%)細(xì)胞同時(shí)減少；發(fā)生在發(fā)病一周內(nèi)（有些發(fā)生在胸片改變之前）T細(xì)胞檢測有助于SARS的早期診斷T細(xì)