1、 感染性疾病實(shí)驗(yàn)室診斷 Laboratory Diagnosis of Infectious Diseases一般實(shí)驗(yàn)檢測(cè) 病原學(xué)檢測(cè)WBC常規(guī)檢查 直接顯微鏡檢查C-反應(yīng)蛋白（CRP） 分離培養(yǎng)和鑒定血清降鈣素原（PCT） 病原體核酸檢測(cè)體溫 病原體抗原與抗體檢測(cè) 代謝產(chǎn)物毒素等檢測(cè) 體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)（一）直接顯微鏡檢查（形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查） 1. 染色標(biāo)本檢查法了解病原體的形態(tài)、染色性或觀察宿主細(xì)胞內(nèi)包涵體 2.不染色標(biāo)本檢查生活狀態(tài)下細(xì)菌的動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)狀況 3. 直接電鏡檢測(cè)EM 免疫電鏡技術(shù)IEMHAV particles found in fecal extracts by immun

2、oelectron microscopy 高倍暗視野顯微鏡下懸滴米泔樣糞便，觀察到來回穿梭似流星樣運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌（二）分離培養(yǎng)和鑒定 分離培養(yǎng)是微生物學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，是最可靠的傳統(tǒng)診斷技術(shù)臨床意義：1.明確感染病原體2.為臨床提供體外抗微生物藥物敏 感試驗(yàn)結(jié)果藥物敏感試驗(yàn)標(biāo)本培養(yǎng)特征形態(tài)特征生化試驗(yàn)血清學(xué)試驗(yàn)毒力試驗(yàn)普通瓊脂平板？血平板？選擇培養(yǎng)基？1. 細(xì)菌的分離培養(yǎng)和鑒定一）病毒分離培養(yǎng) 1動(dòng)物接種2.病毒的分離與鑒定 2雞胚培養(yǎng)卵黃囊接種、絨毛尿囊膜接種尿囊接種及羊膜腔接種敏感動(dòng)物合適部位 識(shí)別病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖 病毒在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖的指標(biāo) 1）細(xì)胞病變: 細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）、包涵體

3、2）紅細(xì)胞吸附（hemadsorption） 細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）： 病毒感染細(xì)胞后引起的細(xì)胞病變，可出現(xiàn)細(xì)胞圓縮、裂解或細(xì)胞 腫大、數(shù)個(gè)細(xì)胞融合成多核巨細(xì)胞等。二）病毒鑒定Cytopathic effect (CPE) of primary severe acute respiratory syndromeassociated coronavirus strain48h72h36hN常用鑒定試驗(yàn)：血凝抑制實(shí)驗(yàn)紅細(xì)胞凝集抑制（HI）試驗(yàn)原理： 病毒 病毒（特異性抗體） + + 紅細(xì)胞 紅細(xì)胞 凝集 不凝集 血凝現(xiàn)象 血凝抑制現(xiàn)象 （三）真菌的分離培養(yǎng) 常用培養(yǎng)基 沙保（Sabourud）培養(yǎng)

4、基含4%葡萄糖 1.0%蛋白胨 pH4.06.0，用于真菌培養(yǎng)。大多數(shù)真菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在沙保氏培養(yǎng)基，2228生長(zhǎng)良好。大多于12周出現(xiàn)典型菌落。真菌的菌落有兩種：酵母型菌落和絲狀菌落酵母型菌落絲狀菌落（三）病原體抗原與抗體的檢測(cè)病原體抗原成分的檢測(cè)： 早期診斷 現(xiàn)癥感染特異性 IgM： 早期診斷 現(xiàn)癥感染特異性 IgG： 雙份血清的滴度呈4倍或4倍以上升高，考慮病原體現(xiàn)癥感染 *排除交叉反應(yīng)的影響核酸分子雜交(nucleic acid molecula hybridization)genomeprobe32P 35S 3H 125I 生物素 地高辛 酶genomegenomegenomep

5、robeprobeprobe檢測(cè)方法：放射自顯影 底物顯色 化學(xué)發(fā)光2PCR 核酸檢測(cè)結(jié)果評(píng)價(jià)檢測(cè)病原體微生物最靈敏的方法早期診斷現(xiàn)癥感染假陽(yáng)性與假陰性 （五）細(xì)菌毒素的檢測(cè) 1. 內(nèi)毒素的測(cè)定 常用方法：鱟試驗(yàn)（limulus tests） 內(nèi)毒素與鱟試劑接觸時(shí)，可激活凝固酶原，使可溶 性的凝固蛋白原變成凝膠狀態(tài)的凝固蛋白 內(nèi)毒素(鱟試劑 ) 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白原 凝固蛋白(凝膠)2. 外毒素的測(cè)定（1）體內(nèi)毒力試驗(yàn) 細(xì)菌外毒素對(duì)機(jī)體的毒性作用，可被相應(yīng)抗毒素中和，若先給動(dòng)物注射抗毒素，然后再注射外毒素，則動(dòng)物不產(chǎn)生中毒癥狀。 （2）體外毒力試驗(yàn) 以細(xì)菌外毒素的特異性免疫血清為抗體與被檢細(xì)菌外毒素(抗原)進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，來檢測(cè)外毒素，從而鑒定細(xì)菌是否產(chǎn)生該種毒素。 白喉棒狀桿菌的Elek平板毒力測(cè)定 （) 免疫學(xué)方法：如ELISA法 葡萄球菌腸毒素、腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌LT及ST等的測(cè)定 （4）分子技術(shù) (六）體外