1、7/7正交優(yōu)化超聲波法提取小魚仙草黃酮的工藝研究摘 要：目的：采用正交試驗設(shè)計探討小魚仙草中黃酮提取的最佳工藝條件。方法：運用超聲技術(shù)提取小魚仙草黃酮，用比色法測定黃酮提取率.結(jié)果：影響超聲提取黃酮的因素：乙醇濃度 超聲功率 超聲頻率 提取時間，最佳工藝條件為：以%乙醇為提取溶劑，提取時間為*min,超聲功率*W，超聲頻率*KHz。最佳工藝條件下黃酮提取率為*%.結(jié)論：優(yōu)化超聲提取法提取小魚仙草中的黃酮，提取效率高，方法方便可行。關(guān)鍵詞:小魚仙草，總黃酮,正交實驗,超聲波。小魚仙草為唇形科石薺苧屬一年生草本植物Mo danera的全草，別名疏花薺苧、野香薷等。具有祛風(fēng)發(fā)表、利濕止癢之功效，主治

2、感冒發(fā)熱、扁桃體炎、中暑頭疼、潰瘍病等【】。有關(guān)小魚仙草揮發(fā)油的研究報道較多，其揮發(fā)油主要含有香荊芥酚、百里香酚、和丁香烯等成分，具有較好的抑菌作用【】；而對小魚仙草非揮發(fā)部分的研究報道較少?，F(xiàn)代研究表明，其非揮發(fā)部分最主要含有黃酮、酚酸等成分，具有抗菌、抗氧化、抗變態(tài)反應(yīng)的作用【】.目前關(guān)于小魚仙草總黃酮的提取工藝優(yōu)化方面的研究少見報道.劉小芬等【】對小魚仙草總黃酮的提取工藝做了單因素考察，缺乏多因素間的交互作用分析,具有一定的局限性.而嚴云良等【】運用響應(yīng)面法分析了溶媒倍數(shù)、提取時間、提取次數(shù)三因素在總黃酮提取中的優(yōu)化，沒有充分反應(yīng)超聲頻率及超聲功率對優(yōu)化的作用。超聲技術(shù)在有效成分提取方法

3、研究中的廣泛運用,已越來越為廣大科學(xué)研究者所重視，并顯示出其明顯的優(yōu)勢。本文采用超聲波法提取小魚仙草中黃酮,采用比色法【】對黃酮進行含量測定。以黃酮提取率為考察指標，通過正交試驗,對小魚仙草中黃酮的提取工藝進行優(yōu)化。實驗材料與方法.1 材料與儀器小魚仙草 *售；蘆丁對照品 *;其余試劑 均為國產(chǎn)分析純.*可見分光光度計、*紫外可見分光光度計 *公司；*型超聲波清洗器 *公司;2 試驗方法121 黃酮樣品的提取 精密稱取小魚仙草粉末。5g，根據(jù)文獻【】，初步選定提取溫度、提取時間、超聲功率、超聲頻率為：、*min、*、*kHz。進行超聲提取,提取液冷卻后抽濾，再用漏斗過濾，濾液用蒸餾水定容至*m

4、L容量瓶，即為待測小魚仙草樣品液。1. 黃酮提取率的測定2。21 蘆丁標準溶液的配制 精密稱取10干燥恒重的蘆丁對照品1。6mg，加0%乙醇溶解定容于50mL容量瓶，得濃度為2。12mg/mL標準品溶液。精密吸取標準品溶液1。0、20、3。0、4。0、。0、.mL，分別置于mL容量瓶中，加51.0m，搖勻，放置6in后加101。0mL，搖勻,放置mn后加0%10，加50%乙醇稀釋至25m，搖勻，靜置15mn。在紫外分光光度計中90nm范圍內(nèi)掃描，測出最大吸收波長位于51nm處。分別測量系列標準溶液濃度在最適波長50nm處的吸光度.數(shù)據(jù)處理的回歸方程:，結(jié)果表明蘆丁在0。211.22mg范圍內(nèi)線

5、性關(guān)系良好.1.2.2。3 樣品含量測定 精確吸取樣品液1mL,按標準曲線繪制下方法測定其吸光度值，按下式計算黃酮提取率。黃酮提取率(%）=CDV/10式中,C為待測液黃酮含量（/L）,D為稀釋倍數(shù),V為提取液體積（），W為樣品干重(g）。1.2.3 黃酮提取工藝1.3。1 單因素實驗 以乙醇作為溶劑作為溶劑,分析黃酮提取效果影響的幾個因素：提取溫度，提取時間，超聲功率，超聲頻率。依次以其中一個因素為變量,其他各因素條件不變來考察黃酮提取率。1。2. 正交試驗 根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選取提取溫度、提取時間、超聲功率和超聲頻率的三個水平為主要考察因素，以黃酮提取率作為考察指標,采用正交表進行實驗，

6、每組實驗重復(fù)3次取平均值,因素水平表見表1。表1 正交實驗因素水平表abe 1 actors an levls i rthogoal aray design水平因素超聲功率 （W）B超聲頻率 （Hz）C 時間（in） 溫度 （) 10 18 80 7 2 15 22 90 0 3 20 25 100 902 結(jié)果與討論2。1 單因素試驗結(jié)果21.1提取溫度的影響 圖為以7%乙醇為提取溶劑,提取時間為1.9h,超聲功率為10,超聲頻率為2kHz下,提取溫度對黃酮提取效果的影響。有圖1可以看出，在*之間，隨溫度的增加，黃酮提取率不斷增大,時，黃酮提取率最高，提取溫度超過時,提取率逐漸下降。根據(jù)分子

7、熱擴散原理，溫度升高,分子活動頻率加大。在*之間，隨著溫度升高，黃酮類有效成分活動頻率加大,滲出率提高,導(dǎo)致黃酮提取率呈增加趨勢;在*之間,黃酮類成分滲出率已經(jīng)達到最大,且在較高溫度下，黃酮成分可能發(fā)生變化、揮發(fā)等，而導(dǎo)致黃酮提取率略呈下降趨勢。因此，在單因素考察下,最佳溫度為*。2.1.2提取時間的影響 圖2為以70乙醇為提取溶劑,溫度為90,超聲功率15W，超聲頻率2Hz下，提取時間對提黃酮提取效果的影響.結(jié)果表明，在*之間隨著提取時間延長,黃酮提取率有明顯提高；*之間，有呈增加趨勢；但在*h后，含量再次下降。出現(xiàn)這一現(xiàn)象的原因可能：a在時間h、溫度90、超聲功率50W、超聲頻率2kHz、

8、乙醇濃度0%組合條件下,部分黃酮類組分不穩(wěn)定；小魚仙草植物組織結(jié)構(gòu)對黃酮成分有效滲出造成阻滯延遲;c.儀器造成誤差等。因此，在單因素考察下,結(jié)合能量損耗和工作效率，提取時間選擇*h為宜.2。1。 超聲功率的影響 圖3為以70乙醇為提取溶劑，溫度為9，提取時間9min，超聲頻率22kz下,提取時間對提黃酮提取效果的影響.結(jié)果表明,在*W之間隨著超聲功率的升高,黃酮提取率有明顯提高；但功率升高到*W時，再增大功率黃酮提取量增加并不明顯，但隨著功率的增加，耗電量不斷增加。綜合個方面因素，本實驗提取的超聲功率為*.21。4 超聲頻率的影響 圖4為以7乙醇為提取溶劑,溫度為90，提取時間min,超聲頻率2z下，提取時間對提黃酮提取效果的影響。結(jié)果表明,。2黃酮正交試驗結(jié)果精密稱取小魚仙草0.5，以正交表安排實驗，進行提取。以黃酮提取率為指標,考察不同因素對黃酮提取率的影響。結(jié)果見表2。表2 正交試驗結(jié)果Tabe2 Th resut of orol exement實驗號 A B C D 黃酮提取率 (） 1 1 1 1 12 1 2 2 3 3 3 2 5 2 6 2 3 1 3 3 2 8 2 9 3 3 1 精密量取小魚仙草05g,按最佳提取工藝條件試提取,測定黃酮的含量（重復(fù)四次)，其