1、高效液相色譜法測定鴨掌散差異煎液中麻黃堿的含量及體外抗菌作用葉世蕓，馮華，田維毅，武孔云，靳鳳云，賀祝英，梁光義【摘要】目的觀察用合煎傳統(tǒng)湯劑、分煎配方顆粒湯劑要領(lǐng)制備的鴨掌散湯劑中麻黃堿含量的變革，并比力其體外抗菌作用。要領(lǐng)創(chuàng)立高效液相色譜要領(lǐng)，接納Dianisl18柱(2504.6，5)，乙腈-0.1%磷酸595為活動(dòng)相，流速1l/in，檢測波長207n。闡發(fā)鴨掌散合煎液和分煎液樣品中麻黃堿的含量變革。接納稀釋法體外測試鴨掌散差異煎液對(duì)常見菌種的最低抑菌濃度(I)和最低殺菌濃度(B)。效果鴨掌散分煎液中麻黃堿的均勻含量大于合煎液中麻黃堿的均勻含量。鴨掌散分煎液對(duì)福氏痢疾桿菌有抑菌作用，而合

2、煎液沒有；合煎液對(duì)白色葡萄球菌、黃曲霉菌的抑菌作用大于分煎液。結(jié)論與傳統(tǒng)湯劑比力，鴨掌散配方顆粒湯劑中麻黃堿的含量較高，抗菌譜較廣?！娟P(guān)鍵詞】鴨掌散；麻黃堿；合煎；分煎；高效液相色譜；體外抗菌Abstrat：bjetiveTinvestigatethententsfephedrinehydrhlrideinbineddetin(ixthetraditinalhineseherbstgether,thenbiltheithater)andtheseparateddetin(bilthesingletraditinalhineseherbithaterseparately,thenixtheabs

3、trats)fYaZhangpder(psedfEphedrasinia,PrunusareniaaandGlyyrrhizauralensis)andtparethEiranti-baterialeffetsinvitr.ethdsAnHPLethdasestablishedithaDianisl18lun(2504.6,5)andbilephasefethanl-0.1%phsphriaid595.Theflrateas1lin-1andthedetetinavelengthas207n.inialbaterialinhibitrynentratin(I)andinialbateriida

4、lnentratin(B)againstthenbateriaindifferentdetinsereeasuredinvitrbyeplyingdilutinethd.ResultsTheaveragententfephedrinehydrhlrideintheseparateddetinashigherthanthatfthebineddetin.Theseparateddetinhadtheantibaterialeffetstvirulenefshigellaflexneri,butthebineddetindidnt;AndtStaphylusalbusandaspergillusf

5、lavus,theantibaterialeffetfbineddetinasslightlystrngerthanthatftheseparateddetin.nlusinparediththatftheseparateddetin,thententfephedrinehydrhlrideinthebineddetinashigherandtheanti-baterialeffetasstrnger.Keyrds：YaZhangpder;Ephedrinehydrhlride;bineddetins;Separateddetins;HPL;Anti-baterialeffetsinvitr“

6、鴨掌散出自張時(shí)徹?攝生眾妙方?，處方由麻黃、甘草、白果構(gòu)成，有斂肺定喘、化痰等成果。本實(shí)行以中藥經(jīng)方“鴨掌散中的有用身分麻黃堿作為觀察指標(biāo)，比力該方分煎法與合煎法制得的湯劑中麻黃堿含量差異以及體外抗菌活性的差異，探究中藥復(fù)方湯劑差異制法對(duì)其有用身分溶出量的影響因素，亦對(duì)單味中藥精制顆粒應(yīng)用于臨床提供一些理論根據(jù)。1儀器與質(zhì)料1.1儀器安捷倫1100型高效液相色譜儀，DAD檢測器，1100/IND3D化學(xué)事情站。1.2藥材與試劑麻黃為麻黃科植物草麻黃EphedrasiniaStapf(河北)；白果為銀杏科植物銀杏GinkgbilbaL.貴州的枯燥成熟種子；甘草Glyyrrhizauralensi

7、sFish(新疆)。以上3味藥材飲片經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院陳德媛傳授斷定，根據(jù)2022版?中國藥典?劃定要領(lǐng)測定含量切合要求。鹽酸麻黃堿比擬品(中國藥品生物成品檢定所，批號(hào):714-9202)；乙腈色譜純，甲醇、磷酸闡發(fā)純，水娃哈哈純潔水。1.3試驗(yàn)菌種、造就基金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌、白色葡萄球菌、大腸桿菌、變形桿菌、傷寒桿菌、福氏痢疾桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌、黑曲霉菌、青霉菌，由貴陽中醫(yī)學(xué)院微生物檢測室提供。本實(shí)行接納平凡肉湯造就基、平凡營養(yǎng)瓊脂、血瓊脂平板、沙氏瓊脂造就基、沙氏液體造就基及級(jí)生物寧靜柜、生化造就箱等。2要領(lǐng)與效果2.1色譜條件色譜柱為Dianisl18柱(2504.6，

8、5)；活動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸595；流速1l/in；檢測波長為207n；柱溫251。2.2溶液的制備及測定以上溶液各取10l按上述色譜條件進(jìn)樣闡發(fā)。色譜圖見圖1。a-鹽酸麻黃堿比擬品b-合煎液樣品-合煎液陰性比擬液d-分煎液樣品e-分煎液陰性比擬液圖15種溶液的HPL圖譜2.3線性干系觀察尺度曲線的繪制:別離制成6個(gè)差異濃度鹽酸麻黃堿比擬品溶液。取10l注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積積分值(A)對(duì)進(jìn)樣量()舉行線性回歸，得回歸方程為A=2.0716+7.9319，r=0.9996。鹽酸麻黃堿在62.784188.352g間濃度與峰面積的線性干系精良。2.4細(xì)密度實(shí)行細(xì)密汲取同一比擬品

9、溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定相應(yīng)峰面積，RSD=0.8%。2.5不變性實(shí)行取供試品溶液，別離于0，2，4，6，8h測定，合煎液RSD=0.5%；分煎液RSD=1.1%，表白兩種供試品溶液在8h內(nèi)不變。2.6重復(fù)性實(shí)行別離取同一樣品干粉各6份，按相應(yīng)樣品液處置懲罰要領(lǐng)制備及測試條件測定，效果合煎液RSD=1.8%,分煎液RSD=0.4%。2.7接納率實(shí)行細(xì)密稱取含量的合煎液樣品和分煎液樣品干粉各9份，別離參加3個(gè)差異濃度的鹽酸麻黃堿比擬品，按上述條件各制備9份供試液，稀釋到25倍舉行加樣接納，過0.45濾膜，并按色譜條件項(xiàng)下進(jìn)樣，同法測定。效果見表12。2.8樣品含量測定細(xì)密汲取同體積的合煎液

10、、分煎液，按上法別離平行測定5次，求均勻樣品含量。鹽酸麻黃堿在每個(gè)復(fù)方中的含量別離為合煎43.34g，分煎50.57g。用差異要領(lǐng)制備的鴨掌散湯劑中，麻黃堿的含量合煎液傳統(tǒng)湯劑小于分煎液配方顆粒湯劑。表1合煎湯劑鹽酸麻黃堿加樣接納測定效果表2分煎湯劑鹽酸麻黃堿加樣接納測定效果2.9體外抗菌實(shí)行取適量鴨掌散合煎液干粉參加50l容量瓶中，加開水至刻度，搖勻，配成濃度相稱于1g藥材/l的合煎液溶液。取適量鴨掌散分煎液干粉參加50l容量瓶中，加開水至刻度，搖勻，配成濃度相稱于1g藥材/l的分煎液溶液。3討論接納HPL法測定中藥復(fù)方制劑中的麻黃堿，文獻(xiàn)報(bào)道可用多種差異構(gòu)成的活動(dòng)相體系24，本實(shí)行選擇?中

11、國藥典?要領(lǐng)，麻黃堿在1012in之間出峰，并與雜質(zhì)峰能到達(dá)基線分散。鴨掌散有斂肺定喘、化痰等成果，麻黃有抗菌活性。因此，對(duì)鴨掌散合煎湯劑與分煎湯劑舉行了麻黃堿含量和體外抗菌活性的比擬研究。從以上研究效果可以看出，與鴨掌散合煎液比擬力，分煎液中麻黃堿的含量較高。合煎液中的有用身分含量低是否是一個(gè)比力普及的征象，另有待更深化普及的研究才氣確定。表3抗菌強(qiáng)度定性、定量實(shí)行效果黑曲霉菌A、白色葡萄球菌B、黃曲霉菌、福氏痢疾桿菌D、金黃色葡萄球菌E、綠膿桿菌F、大腸桿菌G、變形桿菌H、傷寒桿菌I、白色念珠菌J、乙型溶血性鏈球菌K根據(jù)以上效果，合煎液對(duì)白色葡萄球菌、黃曲霉菌的抑菌作用略大于分煎液。分煎液對(duì)福氏痢疾桿菌有抑菌作用,而合煎液沒有，大概是合煎液與分煎液的化學(xué)構(gòu)成差異導(dǎo)致的，兩種湯劑對(duì)差異細(xì)菌抑菌的差異還必要進(jìn)一步的實(shí)行研究,為中藥配方顆粒劑的臨床應(yīng)用提供更多的理論根據(jù)?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】1國度藥典委員會(huì).中國藥