1、蛋白質(zhì)實驗技術楊琳（明理樓107）課程介紹選修課 選修課（34學時，216） 期末考試閉卷筆答 成績合算期末0.5平時0.25+論文/上課講解 自編講義課程內(nèi)容：介紹蛋白質(zhì)性質(zhì)、表達、分離、純化以及鑒定過程中所涉及到的基本技術的基本原理、應用范圍及注意事項。主要參考書：1生物化學面向21世紀課程教材（第三版） 王鏡巖,朱圣庚,徐長法主編 高教出版社2蛋白質(zhì)技術手冊 汪家政，范 明主編 科學出版社 3生物化學與分子生物學實驗常用數(shù)據(jù)手冊 吳冠蕓，潘華珍，吳 惲主編 科學出版社 4蛋白質(zhì)純化指南 （第二版） R.R. 伯吉斯, M.P. 多伊徹 編著 陳薇 主譯 科學出版社5蛋白質(zhì)分析實驗技術指南

2、李玉花 主編 科學出版社第一章 緒論牛胰島素人源葡萄糖轉運蛋白GLUT1 牛胰島素高潮：混亂的大兵團作戰(zhàn) （正常的科研程序被嚴重干擾；對參與研究的人員造成了很大的身體傷害 ）苦撐：北大最少時只剩下兩個科研人員 攻關：各單位放棄內(nèi)部競爭通力協(xié)作，終于結出碩果 。諾貝爾獎？ 1923年，班丁(FGBanting)和麥克勞德(JJRMac1eod)因為發(fā)現(xiàn)胰島素和使用胰島素治療糖尿病而榮獲了醫(yī)學和生理學諾貝爾獎；1955年，維格納奧德因為合成多肽激素催產(chǎn)素而獲得諾貝爾化學獎；1958年，桑格因為分離和確定胰島素的氨基酸組分的構成而榮獲諾貝爾化學獎；1972年，安芬森(CBAnfinsen)等人因為發(fā)

3、現(xiàn)氧化被還原的核糖核酸酶肽鏈能恢復活力而獲得諾貝爾化學獎；1984年，梅里菲爾德(RBMerrifleld)因為發(fā)明固相合成方法而獲得諾貝爾化學獎。葡萄糖是地球上各種生物最重要、最基本的能量來源，也是人腦和神經(jīng)系統(tǒng)最主要的供能物質(zhì)。 須依靠轉運蛋白這個“運輸機器”來完成 1，催化劑酶（碳酸酐酶）2，結構成分膠原蛋白3，貯藏功能麥醇溶蛋白（小麥種子）4，運輸功能血紅蛋白（氧分子），跨膜運輸5，運動功能肌肉收縮，細菌鞭毛6，激素胰島素，生長激素7，防御（免疫）抗體（免疫球蛋白）8，接受、傳遞信息視覺，味覺9，調(diào)節(jié)生長發(fā)育蛋白質(zhì)主要功能功能紊亂導致的疾病GLUT1功能完全缺失將致死 GLUT1在癌細

4、胞的新陳代謝過程中也發(fā)揮著重要功能。Macheda, M. L., Rogers, S. & Best, J. D. Physiol. 202, 654662 (2005) 餓死癌細胞？結構解析結構解析Linfeng Sun ，et al. 2013. Nature.2013年清華大學的顏寧教授課題組報道了人的葡萄糖轉運蛋白GLUT1-4在大腸桿菌中的同源蛋白XylE的晶體結構，并且運用生化手段對其工作機理進行了研究。人源葡萄糖轉運蛋白GLUT1葡萄糖是地球上各種生物最重要、最基本的能量來源，也是人腦和神經(jīng)系統(tǒng)最主要的供能物質(zhì)。 須依靠轉運蛋白這個“運輸機器”來完成 GLUT1對健康的影響GL

5、UT1功能完全缺失將致死 GLUT1在癌細胞的新陳代謝過程中也發(fā)揮著重要功能。GLUT1對健康的影響GLUT1功能完全缺失將致死 GLUT1在癌細胞的新陳代謝過程中也發(fā)揮著重要功能。團隊：這項具有里程碑意義的科研成果是由一個清華大學的年輕團隊完成的 ，第一作者鄧東博士為80后 ，三位共同第一作者都是90后 。細胞培養(yǎng)提純蛋白蛋白結晶不要把你純粹的思想浪費在不純的酶上！ -Efraim Racker經(jīng)典酶學方法：20世紀初無細胞條件下蔗糖 乙醇 -Eduard Bchner從現(xiàn)象追蹤到功能（乙醇發(fā)酵、糖酵解等）為什么要純化酶？第一講 主要儀器介紹和安全規(guī)范離心機操作注意事項使用之前要仔細閱讀說明

6、書使用后：離心機使用完畢后，若有液體濺出要聯(lián)系老師取出轉子，清潔后倒置放在干燥、平穩(wěn)的地方。轉子清潔時只能用中性洗滌液，禁止用腐蝕性液體擦拭。使用致冷功能后在關閉電源時不要蓋上離心機蓋，應待離心機腔體內(nèi)冷凝結的霜完全融化后，用干凈的軟布擦干水滴并充分曬干后再蓋上離心機蓋，否則會導致機器生銹。儀器斷電后再開機應間隔3分鐘以上，防止損壞壓縮機。離心機操作注意事項高壓滅菌鍋操作步驟1、確認電源的正確連接，將滅菌鍋右側的電源開關打開，然后按下“POWER ON/OFF”鍵開機。 2、確認鍋內(nèi)壓力為0的情況下，輕輕向下按滅菌器蓋的把手，腳踏蓋鎖解除踏板，把蓋打開。向滅菌鍋內(nèi)注水(蒸餾水)直到看到水漫過底

7、盤中心孔的橫杠（大約需要2.0升水）。 3、放置待滅菌的物品，蓋上蓋子到磁封條封好，將蓋鎖住。注意不要過滿，不要有單獨的小型顆粒。4、選擇運行模式（一般均選擇普通滅菌模式，選其他模式需要請示安全員）。高壓滅菌鍋操作步驟5、啟動滅菌程序：（1）確定放氣瓶內(nèi)的水位在“HIGH”和“LOW”之間；（2）確定排水瓶內(nèi)的水位足夠低，不會碰到排氣管的頂端；（3）按“START/STOP”鍵啟動滅菌程序。7、滅菌完成后，溫度降至90度以下（鍋內(nèi)壓力為0）的情況下才能打開蓋子，拿出滅好的物品。8、按“POWER ON/OFF”鍵斷開電源。高壓滅菌鍋操作注意事項1.在壓力到達0 MPa之前，不打開滅菌器蓋。2.壓力表出現(xiàn)異常時