1、 PAGE 31時間分辨技術(shù)的原理目前最先進(jìn)的免疫檢測技術(shù)：時間分辨原理： 用三價稀稀土離子子及其鰲鰲合劑作作為示蹤蹤物，代代替熒光光物質(zhì)、同同位素或或酶，標(biāo)標(biāo)記蛋白白質(zhì)、多多胎、激激素、抗抗體、核核酸探針針或生物物流行性性細(xì)胞，當(dāng)當(dāng)反應(yīng)體體系發(fā)生生后，用用時間分分辨儀器器測定最最后產(chǎn)物物中熒光光強(qiáng)度。根根據(jù)熒光光強(qiáng)度或或相對熒熒光強(qiáng)度度比值，來來判斷反反應(yīng)體系系中分析析物的濃濃度，達(dá)達(dá)到定量量分析之之目的。時間分辨原原子標(biāo)記記物的特特點(diǎn)：發(fā)射光和激激發(fā)光有有較大的的STOOKESS位移高特異異性長壽命熒光光，降低低其他物物質(zhì)的熒熒光干擾擾高靈靈敏度半衰期長達(dá)達(dá)幾十萬萬年，試試劑受干干擾小高穩(wěn)

2、穩(wěn)定性原子標(biāo)記與與大分子子標(biāo)記物物的對比比 原 子子 標(biāo) 記 物物 大大 分 子 標(biāo)標(biāo) 記 物標(biāo)記位點(diǎn)多個,可達(dá)達(dá)20個個只有1個對被標(biāo)記物物蛋白活活性的影影響影響小,基基本無影影響影響大,經(jīng)經(jīng)常影響響蛋白活活性對被標(biāo)記物物空間結(jié)結(jié)構(gòu)的影影響無影響,保保證穩(wěn)定定性影響大,造造成試劑劑的不穩(wěn)穩(wěn)定受環(huán)境因素素的影響響影響小影響大,溫溫度影響響3、波長分分辨：標(biāo)記離子的的熒光激激發(fā)光波波長范圍圍較寬，發(fā)發(fā)射光光光譜范圍圍較窄，是是類線光光譜，有有利于降降低本底底熒光強(qiáng)強(qiáng)度，提提高分辨辨率。激發(fā)與發(fā)射射光之間間有一個個較大的的STOOKESS位移，有有利于排排除非特特異熒光光的干擾擾，增強(qiáng)強(qiáng)測量的的特

3、異性性。4、時間分分辨：標(biāo)記離子螯螯合物產(chǎn)產(chǎn)生的熒熒光強(qiáng)度度高，壽壽命長，有有利于消消除樣品品及環(huán)境境中熒光光物質(zhì)對對檢測結(jié)結(jié)果的影影響。每一秒名檢檢測樣品品10000次，取取其中不不受干擾擾的4000次的的均值作作為測定定值，有有利于提提高檢測測的準(zhǔn)確確性。時間分辨技技術(shù)取代代酶免、放放免是免免疫檢測測技術(shù)發(fā)發(fā)展的必必然趨勢勢！RIA（放放免）放射性（1125II），對對環(huán)境和和身體的的危害，已已經(jīng)為重重視環(huán)保保的國家家逐步取取消，如如整個歐歐洲僅尚尚存幾個個放免試試驗(yàn)室。125I半半衰期短短，導(dǎo)致致試劑的的有效期期短，需需每次定定標(biāo)，造造成很大大的浪費(fèi)費(fèi)。由于標(biāo)記物物（1225I）的的不斷

4、變變化，帶帶來藥盒盒批間、批批內(nèi)較大大的變異異，標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線無無法保存存?zhèn)溆?。ELESAA（酶免免）靈敏度、重重復(fù)性不不及放免，易易造成漏漏檢和假假陽性。酶的純度和和反應(yīng)過過程容易易受環(huán)境境因素影影響，導(dǎo)導(dǎo)致穩(wěn)定定性、重重復(fù)性不不好。與其它技術(shù)術(shù)的相對對優(yōu)勢：（1）、是是現(xiàn)有的的免疫檢檢測方法法中靈敏敏度最高高的（2）、是是現(xiàn)有的的免疫檢檢測方法法中穩(wěn)定定性最好好的（3）、多多標(biāo)記檢檢測是目目前所有有免疫檢檢測技術(shù)術(shù)中獨(dú)一一無二的的TRF技術(shù)術(shù)與電化化學(xué)發(fā)光光的比較較時間分辨熒熒光電化學(xué)發(fā)光光標(biāo)記物四種原子:Eu,Sm,Te,Dy一種原子:釕多標(biāo)記技術(shù)術(shù)有無科研項(xiàng)目能(10000多種種科研項(xiàng)項(xiàng)目

5、)無試劑種類58種臨床床,244種科研研,共882種40種臨床床,無科科研試劑價格低高TRF與化化學(xué)發(fā)光光的比較較時間分辨熒熒光化學(xué)發(fā)光發(fā)光效率95%1%重復(fù)檢測可無數(shù)次重重復(fù)不可重復(fù)本底噪聲零本底干擾大靈敏級數(shù)10-19910-155標(biāo)記物原子大分子化合合物標(biāo)記位點(diǎn)每個抗體可可達(dá)200個1個標(biāo)準(zhǔn)曲線穩(wěn)定達(dá)一年年以上穩(wěn)定2到44周多標(biāo)記有,最多可可達(dá)四標(biāo)標(biāo)記無科研開發(fā)有無時間分辨熒熒光免疫疫定量分分析簡介介時間分辨熒熒光分析析（Tiimerresoolveed Fluuorooimmmunooasssay,TRFFIA）是一種非同位素免疫分析技術(shù)，它用鑭系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物

6、的發(fā)光特點(diǎn)，用時間分辨技術(shù)測量熒光，同時檢測波長和時間兩個參數(shù)進(jìn)行信號分辨，可有效地排除非異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。解離增強(qiáng)鑭鑭元素?zé)蔁晒饷庖咭叻治鍪鞘菚r間分分辨熒光光免疫分分析中的的一種。它它用具有有雙功能能基團(tuán)結(jié)結(jié)構(gòu)的螯螯合劑，使使其一端端與銪（EEu）連連接，另另一端與與抗體/抗原分分子上的的自由氨氨基連接接，形成成EU標(biāo)記記的抗體體/抗原原，經(jīng)過過免疫反反應(yīng)之后后生成免免疫復(fù)合合物。由由于這種種復(fù)合物物在水中中的熒光光強(qiáng)度非非常弱，因因此加入入一種增增強(qiáng)劑，使使Eu33+從復(fù)復(fù)合物上上解離下下來，自自由Euu3+同同增強(qiáng)劑劑中的另另一種螯螯合劑螯螯形成一一種膠態(tài)態(tài)分子團(tuán)團(tuán)，

7、這種種分子團(tuán)團(tuán)在紫外外光的激激發(fā)下能能發(fā)出很很強(qiáng)的熒熒光，信信號增強(qiáng)強(qiáng)了百萬萬倍。因因?yàn)檫@種種分析方方法使用用了解離離增強(qiáng)步步驟，因因此稱為為解離增增強(qiáng)鑭系系元素?zé)蔁晒饷庖咭叻治觥Ｒ腋尾《荆℉HBV）標(biāo)記物的檢測方法常用測定乙肝病毒的抗原、抗體標(biāo)記物，由60年代末70年代初的瓊脂擴(kuò)撒法，依次發(fā)展為血凝法酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）、同位素免疫標(biāo)記（RIA）化學(xué)發(fā)光免疫分析、生物發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光免疫標(biāo)記和80年代中建立的稀土離子熒光標(biāo)記（時間分辨熒光免疫分析）等不同的檢測方法。隨著科學(xué)的發(fā)展和檢驗(yàn)技術(shù)的進(jìn)步，其方法每發(fā)展一步，乙肝標(biāo)記物檢出的靈敏度和準(zhǔn)確性都得到不同的提高。時間分辨熒熒光免疫疫分析

8、（TTRF）為近年新研制成功的用三價稀土離子作為示蹤物，以單克隆抗體包被支持物與樣品中抗原反應(yīng)，再加入有銪（EU）標(biāo)記的抗體，進(jìn)行反應(yīng)檢測，可大大降低一般同位素和熒光標(biāo)記受環(huán)境干擾缺點(diǎn)，提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)性，該TRF法檢測乙肝病毒標(biāo)記物較其他方法靈敏度高、特異性好，干擾因素少，TRF為目前檢測乙肝病毒標(biāo)記物最理想的方法。TRF定量量檢測乙乙肝病毒毒“兩對半半”為臨床床診斷乙乙肝提供供了新手手段，有有助于臨臨床客觀觀的分析析HBVV感染情情況、療療效的觀觀察和轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)歸等情情況的分分析，至至少可對對下列情情況更具具有獨(dú)特特的診斷斷價值：1、治療前前進(jìn)行病病毒定量量檢測，可可以指導(dǎo)導(dǎo)選擇抗抗病毒藥

9、藥物，避避免盲目目用藥。2、治療后后定量間間接判斷斷體內(nèi)病病毒數(shù)量量，有助助于療效效的觀察察。 3、懷孕孕前進(jìn)行行定量測測定，有有助于選選擇有利利于的懷懷孕時機(jī)機(jī)。乙肝肝孕婦進(jìn)進(jìn)行定量量檢查，有有助于使使部分病病人得到到及時的的正確的的診斷 目前我科已已正式開開展了乙乙肝二對對半的TTRFIIA定量量分析，其其每一項(xiàng)項(xiàng)的正常常值范圍圍均是由由我國衛(wèi)衛(wèi)生部根根據(jù)美國國雅培的的標(biāo)準(zhǔn)而而制定，其其靈敏度度，準(zhǔn)確確度，及及精確度度都有遠(yuǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于于一般的的ELIISA法法，乙肝肝兩對半半的定量量制定將將給臨床床提供一一個關(guān)于于乙肝診診斷及療療效，預(yù)預(yù)后判斷斷的更可可靠的實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果果。極大地提高高了檢測測

10、的靈敏敏度 時時間分辨辨熒光免免疫定量量技術(shù)（TTRFIIA）檢檢測HbbsAgg靈敏度度可達(dá)00.2nng/mml,而而酶標(biāo)（EEIASSA）檢檢測的靈靈敏度是是2ngg/mll,極大大地提高高檢測的的靈敏度度。因此此，在急急性乙肝肝早期能能及早檢檢出HbbsAgg，確證證HBVV感染，縮縮短窗口口期；其其次，可可發(fā)現(xiàn)低低濃度HHbsAAg攜帶帶者；在在部分慢慢性乙肝肝患者中中，由于于機(jī)體缺缺乏對HHBV包包蟆蛋白白的免疫疫應(yīng)答，HbsAg表達(dá)較低，酶標(biāo)檢測可出現(xiàn)HbsAg和HbsAb均陰性的情況，TRF技術(shù)則可避免這些情況的發(fā)生，為正確判斷病情提供依據(jù)。能動態(tài)觀察察療效和和監(jiān)測病病情定量分

11、析HHBsAAg和HBssAb的的濃度變變化，可可預(yù)見急急性乙肝肝是否處處于恢復(fù)復(fù)期。如如HBssAg濃濃度降低低，HBBsAbb濃度逐逐漸升高高，可說說明病情情正往恢恢復(fù)期發(fā)發(fā)展；反反之，HHBsAAg濃度度處于較較高水平平或上升升趨勢，而而HBssAb一一直處于于較低水水平，則則易發(fā)展展為慢性性乙肝或或病毒攜攜帶者。定量分析HHBeAAg和HBeeAb的的濃度變變化，可可反映病病情變化化和治療療效果。定定量測定定能明確確檢測 HBeeAg和和HBeeAb轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換的時時期，即即表現(xiàn)為為HBeeAg濃濃度下降降和HBBeAbb升高的的過程。高高濃度的的HBeeAg還還可間接接提示病病毒處于于高復(fù)

12、制制狀態(tài)，具具有較高高傳染性性。高濃濃度的HHBeAAb一方方面提示示病情好好轉(zhuǎn)而在在某些時時候（如如肝功能能指標(biāo)很很差）則則可能與與肝壞死死、肝硬硬化、肝肝癌有關(guān)關(guān)。HBcAbb濃度的的高低可可反映病病毒感染染的狀態(tài)態(tài)。高濃濃度的抗抗-Hbbc提示示乙肝性性感染，恢恢復(fù)期濃濃度降低低。慢性性乙肝呈呈抗-HHbc持持續(xù)高濃濃度。而而低濃度度的抗-Hbcc一般為為恢復(fù)期期或既往往感染。有利于對慢慢性肝炎炎活動性性或非活活動性的的判斷。非非活動性性慢性乙乙肝各項(xiàng)項(xiàng)指標(biāo)相相對穩(wěn)定定，活動動性往往往呈現(xiàn)進(jìn)進(jìn)行性變變化。TRFIAA和定量量PCRR技術(shù)可可互相補(bǔ)補(bǔ)充血清HBVVDNAA熒光定定量PCCR

13、測定定可以直直接反映映血液中中病毒復(fù)復(fù)制狀態(tài)態(tài)，具有有很多臨臨床應(yīng)用用價值，但但不能完完全反映映病毒復(fù)復(fù)制靜息息期肝細(xì)胞胞內(nèi)HBBV病毒毒狀態(tài)。HBVDNA陰性并不完全代表體內(nèi)HBV已被清除，結(jié)合“兩對半”各項(xiàng)指標(biāo)更能客觀反映體內(nèi)HBV病毒狀態(tài)。HBsAbb的定量量測定能能夠?qū)σ乙腋蔚念A(yù)預(yù)防起到到監(jiān)督作作用 HBsAAb的定定量測定定能夠?qū)贵w是是否真正具有有“中和”HBVV的免疫疫力作出出正確評評價，對對乙肝的的預(yù)防起起到監(jiān)督督作用。HBsAb的含量在10mlU/ml以上病人ELISA檢測即可呈陽性結(jié)果，但并不提示機(jī)體都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10100mlU/ml 之間的樣本

14、，定性雖為“陽性”，但此時機(jī)體對HBV的免疫力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染。只有HBsAb的含量達(dá)到100mlU/ml以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量檢測，可根據(jù)HBsAb的含量判斷機(jī)體對HBV的免疫狀態(tài)及乙肝苗的免疫效果。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。乙肝兩對半半定量的的臨床意意義抗HA定能極早地檢檢出HBBsAgg，確證證乙肝感感染，幾幾乎能與與preeSl同同時檢測測出。在在乙肝病病程中大大大縮短了了窗口期期的時間間。由于機(jī)體常常缺乏對對包膜蛋蛋白的免免疫應(yīng)答答，HBBsAgg表達(dá)較較低，可可出現(xiàn)HHBsAA

15、g、AAntii-HBBs均陰陰性的情情況，定定量檢測測HBssAg則則可避免免這些情情況的出出現(xiàn)。病毒發(fā)生變變異后，病病毒表達(dá)達(dá)量較低低，甚至至“定性”檢測不不出抗原原?？蓹z檢測出HHBsAAg，并并極有可可能同時時檢測出出HBssAg、Anti-HBs。國內(nèi)外學(xué)者者研究表表明HBBsAgg的細(xì)胞胞免疫應(yīng)應(yīng)答與肝肝細(xì)胞損損傷有一一定關(guān)系系。血清清中HBBsAgg含量和和病人對對HBssAg細(xì)細(xì)胞免疫疫成反比比關(guān)系，而而肝功能能改就則則與此種種細(xì)胞免免疫成反反比。而而定量檢檢測HBBsAgg是反映映這一關(guān)關(guān)系的唯唯一手段段。一般來說，慢慢性肝炎炎HBssAgCCOI相相對恒定定：而活活動性肝肝

16、炎HBBsAggCOII往往較較高且不不穩(wěn)定。2、乙肝表表面抗體體（Annti-HBss）定量量Anti-HBss的定量量檢測能能夠地機(jī)機(jī)體是否否真正具具有“中和”HBVV免疫力力作為正正確評價價，避免免誤誤導(dǎo)導(dǎo)病人，對對乙肝的的預(yù)防起起到監(jiān)督督作用。Anti-HBss含理在在101000IU/L之間間的樣本本，乙肝肝兩對半半定性的的結(jié)果為為陽性，但但此時機(jī)機(jī)體對HHBV并并無中和和作用，仍仍有感染染HBVV的危險險。只有有定量檢檢測Annti-HBss在1000UII/L以以上時才才具有抵抵抗HBBV入侵侵的作用用。因此此，定量量檢測乙乙肝兩對對半對乙乙肝疫苗苗免疫力力的評價價和高危危人群預(yù)

17、預(yù)防具有有重要意意義。3、乙能ee抗原（HHBeAAg）定定量HBeAgg是乙肝肝病毒在在肝細(xì)胞胞在繁殖殖時出現(xiàn)現(xiàn)的前CC/C基基因的產(chǎn)產(chǎn)物，經(jīng)經(jīng)蛋白酶酶水解后后HBee蛋白質(zhì)質(zhì)以非顆顆粒形式式分泌入入血清中中。在急急性HBBV感染染時，血血清中可可出現(xiàn)HHBeAAg，但但維持可可測水平平的時間間很短暫暫（數(shù)天天數(shù)周）。HHBeAAg陽性性一般是是提示有有大量病病毒存在在，是急急性乙肝肝恢復(fù)期期的首選選血清學(xué)學(xué)指標(biāo)。由前C基因因突變HHBV感感染所致致的急性性或慢性性乙肝，始始終不出出HBeeAg，但但HBVV-DNNA進(jìn)行行性復(fù)制制。HBBeAgg亦在高高COII水平波波動。與與前者HHBe

18、AAg陽性性慢性乙乙肝類型型中的轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換期比比較，兩兩對半定定性均表表現(xiàn)為小小三陽，但但后者主主要表現(xiàn)現(xiàn)在高HHBeAAgCOOI值，忽忽高忽低低的ALLT值和和HBVV-DNNA始終終陽性。4、乙肝ee抗體（AAntii-HBBe定量量由HBV野野型株感感染所引引起的急急性或慢慢性乙型型肝炎，其其自然史史分為HHBeAAg陽性性期和AAntii-HBBe陽性期。定定量監(jiān)測測能明確確出HBBeAgg向Annti-HBee換的時時期，即即表現(xiàn)為為HBeeAgCCOI下下降（含含量降低低）和AAntii-HBBeCOOI下降降（含量量升高）的的過程。因因此，AAntii-HBBe定量量與HBBeAg

19、g定量聯(lián)聯(lián)合檢測測對監(jiān)測測HBVV感染的的病程及及藥物的的療效觀觀察有很很好的實(shí)實(shí)際意義義。由前C基因因突就株株HBVV感染所所致異型型慢性乙乙肝，由由于患者者始終不不出現(xiàn)HHBeAAg。因因此，長長期監(jiān)測測患者AAntii-HBBe含量量對判斷斷其預(yù)后后和轉(zhuǎn)歸歸具有十十分重要要的價值值。5、乙肝核核心抗體體（Annti-HBcc）定量量乙肝病毒由由外殼HHBsAAg和內(nèi)內(nèi)核HBBcAgg組成。乙乙肝病毒毒感染期期間，一一般會產(chǎn)產(chǎn)生Annti-HBcc，在HHBcAAg出現(xiàn)現(xiàn)后即可可從血清清中檢測測到。偶偶爾也有有Antti-HHBc陰陰性的HHBV感感染者，多多見于免免疫抑制制的病人人。在乙

20、肝感染染康復(fù)者者HBssAg攜攜帶者中中，Annti-HBcc可長期期存在。因因此，在在特殊人人群中開開展Annti-HBcc篩選試試驗(yàn)對預(yù)預(yù)防乙肝肝的傳播播有重要要參考價價值。Anti-HBcc定量懷懷其他HHBV試試驗(yàn)一同同檢測有有助于乙乙肝感染染的診斷斷和監(jiān)測測。在其其他指標(biāo)標(biāo)缺乏的的情況下下（如HHBsAAg陰性性），AAntii-HBBc定量量可能是是現(xiàn)存HHBV感感染的唯唯一指標(biāo)標(biāo)。免光測肝毒物臨床工作中中發(fā)現(xiàn)少少部分經(jīng)經(jīng)酶聯(lián)免免疫吸附附法（EELISSA）檢檢測僅乙乙型肝炎炎表面抗抗原（HHBsAAg）和和抗HBBc IIgG陽陽性的患患者，病病毒含量量卻很高高。為此此，采用用時

21、間分分辨免疫疫熒光分分析法（TTRF）對對34例例此類患患者進(jìn)行行乙型肝肝炎標(biāo)志志物（HHBVMM）的檢檢查，現(xiàn)現(xiàn)將結(jié)果果報道如如下：資料與方法法 11.病例選選擇：為為20002年22月至99月住院院或門診診患者，共共34例例，男221例，女女13例例，年齡齡5558歲，平平均（229.2218.7）歲歲。采靜靜脈血分分離血清清，用EELISSA進(jìn)行行HBVV標(biāo)志物物（HBBV MM）檢測測及HBBV DDNA定定量檢查查。留取取血清置置-300保存。（11）HBBsAgg、抗HHBc IgGG陽性，乙乙型肝炎炎e抗原原（HBBeAgg）、抗抗-HBss、抗-HBcc IggM陰性性；（22

22、）HBBV DDNA含含量1044拷貝/ml;（3）近近3個月月未使用用抗病毒毒藥物。每每人進(jìn)行行2次抗抗原抗體檢查查，結(jié)果果一致。22次HBBV DDNA檢檢查，結(jié)結(jié)果相差差1個數(shù)數(shù)量級以以下。2.常規(guī)HHBV M檢測測：用EELISSA法，試試劑為上上海科華華生物工工程股份份有限公公司產(chǎn)品品，按產(chǎn)產(chǎn)品說明明書操作作。3.HBVV DNNA含理理測定：采用實(shí)實(shí)時熒光光定量PPCR法法，試劑劑盒購自自廣州中中山醫(yī)科科大學(xué)達(dá)達(dá)安基因因診斷中中心。儀儀器為美美國Peerkiin EElmeer 公公司GeeneAAmp E57700型型PCRR儀。嚴(yán)嚴(yán)格按說說明書操操作，檢檢測靈敏敏度為1103拷

23、拷貝/mml。 44.TRRF法檢檢查HBBV MM：試劑劑為上海海新波生生物技術(shù)術(shù)有限公公司產(chǎn)品品，采用用Anyytesst20000時時間分辨辨檢測儀儀。嚴(yán)格格按照說說明書操操作。 5.統(tǒng)計分分析：取取HBVV DNNA含量量的對數(shù)數(shù)值進(jìn)行行成組設(shè)設(shè)計的兩兩樣本均均數(shù)比較較，行tt檢驗(yàn)。結(jié)果 11.HBVV M ：用TTRF法法檢查發(fā)發(fā)現(xiàn)，334例患患者中HHBsAAg、HHBeAAg、抗抗-HBBc陽性性者155例，HHBsAAg、抗抗-HBee、抗-HBcc均陽性性者144例，僅僅HBssAg、抗抗-HBBc陽性性者5例例。即用用ELIISA檢檢查時HHBeAAg假陰陰性155例，抗抗

24、-HBee假陰性性14例例（表11）。 2.HBBV DDNA含含量：HHBeAAg及抗抗-HBBc均陰陰性組、HBeAg陽性組、抗-HBc陽性組HBV DNA含量的對數(shù)平均值分別為6.451.74、7.291.59、5.801.46。將前者與后兩組分別進(jìn)行成組設(shè)計的兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，t值分別為1.005、0.816，P值均0.05，差異無顯著性。討論HBV MM的變化化是評估估HBVV感染后后病情轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)歸的重重要依據(jù)據(jù)，也是是抗病毒毒治療的的療效考考核指標(biāo)標(biāo)之一。通通過TRRF檢查查發(fā)現(xiàn)，大大部分EELISSA法檢檢測為HHBsAAg、抗抗-HBBc陽性性模式的的患者其其實(shí)為HHBeAA

25、g假陰陰性（115/334，444.112%）及及抗-HBee假陰性性（144/344，411.188%）。僅僅少部分分可能為為病毒變變異的結(jié)結(jié)果。研研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)，HBBsAgg、抗-HBcc濃度顯顯著高于于正常，EELISSA及TTRF符符全率為為1000%，抗抗-HBBs濃度度明顯低低于正常常，兩者者符合率率為1000%。而而HBeeAg、抗抗HBee濃度僅僅稍高于于正常，因因此ELLISAA易出現(xiàn)現(xiàn)假陰性性。目前前TRFF主要用用于激素素的檢測測。隨著著儀器及及試劑的的國產(chǎn)化化，檢測測費(fèi)用的的降低，TTRF因因其突出出的高敏敏感性、特特異性強(qiáng)強(qiáng)、無放放射污染染等特點(diǎn)點(diǎn)，在HHBV M的檢檢

26、測中有有著廣泛泛的應(yīng)用用前景。作者單位：41000111長沙，中中南大學(xué)學(xué)湘雅二二醫(yī)院肝肝病研究究中心目前我院已已正式開開展了乙乙肝二對對半的時時間分辨辨定量分分析，其其每一項(xiàng)項(xiàng)的正常常值范圍圍均是由由我國衛(wèi)衛(wèi)生部根根據(jù)美國國雅培的的標(biāo)準(zhǔn)而而制定，其其靈敏度度，準(zhǔn)確確度，及及精確度度都有遠(yuǎn)遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于于一般的的ELIISA法法，乙肝肝兩對半半的定量量制定將將給臨床床提供一一個關(guān)于于乙肝診診斷及療療效，預(yù)預(yù)后判斷斷的更可可靠的實(shí)實(shí)驗(yàn)結(jié)果果。時間分辨熒熒光免疫疫定量測測定乙肝肝兩對半半的臨床床意義極大地提高高了檢測測的靈敏敏度時間分辨熒熒光免疫疫定量技技術(shù)（TTRFIIA）檢檢測HBBsAgg靈敏度度

27、可達(dá)00.2nng/mml,而而酶標(biāo)（EEIASSA）檢檢測的靈靈敏度是是2ngg/ml,極極大地提提高檢測測的靈敏敏度。因因此，在在急性乙乙肝早期期能及早早檢出HHBsAAg，確確證HBBV感染染，縮短短窗口期期；其次次，可發(fā)發(fā)現(xiàn)低濃濃度HBBsAgg攜帶者者；在部部分慢性性乙肝患患者中，由由于機(jī)體體缺乏對對HBVV包膜蛋蛋白的免免疫應(yīng)答答，HBBsAgg表達(dá)較較低，酶酶標(biāo)檢測測可出現(xiàn)現(xiàn)HBssAg和和HBssAb均均陰性的的情況，TTRF技技術(shù)則可可避免這這些情況況的發(fā)生生,為正正確判斷斷病情提提供依據(jù)據(jù)。能動態(tài)觀察察療效和和監(jiān)測病病情 1）定定量分析析HBssAg和和HBssAb的的濃度

28、變變化，可可預(yù)見急急性乙肝肝是否處處于恢復(fù)復(fù)期。如如HBssAg濃濃度降低，HHBsAAb濃度度逐漸升升高，可可說明病病情正往往恢復(fù)期期發(fā)展；反之，HHBsAAg濃度度處于較較高水平平或上升升趨勢，而而HBssAb一一直處于于較低水水平，則則易發(fā)展展為慢性性乙肝或或病毒攜攜帶者。 22）定量量分析HHBeAg和和HBeeAb的的濃度變變化，可可反映病病情變化化和治療療效果。定定量測定定能明確確檢測HHBeAg向向HBeeAb轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)換的時時期，那那表現(xiàn)為為HBeeAg濃濃度下降降和HBBeAb升升高的過過程。高高濃度的的HBeAg還可可以間接接提示病病毒處于于高復(fù)制制狀態(tài),具有較較高的傳傳染性.高

29、濃度度的HBBeAb一方方面提示示病情好好轉(zhuǎn)，而而在某些些時候（如如肝功能能指標(biāo)很很差）則則可能與與肝壞死死、肝硬硬化、肝肝癌有關(guān)關(guān)。 33）HBBsAbb濃度的的高低可可反映病病毒感染染的狀態(tài)態(tài)。高濃濃度的抗抗-Hbbc提示示乙肝急急性感染染，恢復(fù)復(fù)期濃度度降低。慢慢性乙肝肝呈抗-Hbcc持續(xù)高高濃度。而而低濃度度的抗-Hbcc一般為為恢復(fù)期期或既往往感染。 44）有利利于對慢慢性肝炎炎活動性性或非活活動性的的判斷。非非活動性性慢性乙乙肝各項(xiàng)項(xiàng)指標(biāo)相相對穩(wěn)定定，活動動性往往往呈現(xiàn)進(jìn)進(jìn)行性變變化。TRFIAA和定量量PCRR技術(shù)可可互相補(bǔ)補(bǔ)充血清HBVVDNAA熒光定定量PCCR測定定可以直直

30、接反映映血液中中病毒復(fù)復(fù)制狀態(tài)態(tài)，具有有很多臨臨床應(yīng)用用價值，但但不能完完全反應(yīng)應(yīng)病毒復(fù)復(fù)制靜息息期細(xì)胞胞內(nèi)HBBV病毒毒狀態(tài)。HHBVDNAA陰性并并不完全全代表體體內(nèi)HBBV已被被清除，結(jié)結(jié)合“兩對半半”各項(xiàng)指指標(biāo)更能能客觀反反映體內(nèi)內(nèi)HBVV病毒狀狀態(tài)。HBsAbb的定量量測定能能夠?qū)σ乙腋蔚念A(yù)預(yù)防起到到監(jiān)督作作用嗎？HBsAbb的定量量測定能能夠?qū)箍贵w是否否真正具具有“中和”HBVV的免疫疫力作出出正確評評價，對對乙肝的的預(yù)防起起到監(jiān)督督作用。HHBsAAb的含含量在1100mmlU/ml以以上病人人ELIISA檢檢測即可可呈陽性性結(jié)果，但但并不提提示機(jī)體體都一定定具有免免疫力，而而

31、HBssAb的的含量在在101000mlUU/mll之間的的樣本，定性雖為“陽性”，但此時機(jī)體對HBV的免疫力較弱，甚至不能預(yù)防HBV感染。只有HBsAb的含量達(dá)到100mlU/ml以上時才可確定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量檢測，可根據(jù)HBsAb的含量判斷機(jī)體對HBV的免疫狀態(tài)及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量測定對乙肝疫苗免疫力的評價和高危人群預(yù)防免疫具有重要意義，特別是在少年兒童預(yù)防乙肝方面。時間分辨熒熒光免疫疫分析在在乙肝的的應(yīng)用中南大學(xué)湘湘雅二醫(yī)醫(yī)院肝病病研究中中心教授授：楊旭旭乙肝抗原體體測定是是診斷乙乙肝最常常用的方方法。酶酶聯(lián)免疫疫測定由由于操作作簡便，成成本低廉廉，敏感感性和特

32、特異性較較好，880年代代中期以以來就成成為乙肝肝抗原體體檢測最最主要的的方法。但但是本法法只能定定性，作作為定量量測定的的方法，其其重復(fù)性性很差。據(jù)據(jù)觀察，不不同乙肝肝感染者者表面抗抗原的濃濃度相差差8000倍,ee抗原的的濃度相相差1000倍，僅僅用“陽性”來表示示，實(shí)在在太粗糙糙，太不不科學(xué)，難難以滿足足臨床的的需要。觀觀察指標(biāo)標(biāo)的量化化是提高高診斷水水平的基基本要求求，也是是科學(xué)發(fā)發(fā)展的必必然趨勢勢，因此此，進(jìn)入入90年年代以來來，國外外先后推推出第四四代檢測測方法：化學(xué)發(fā)發(fā)光法、電電化學(xué)發(fā)發(fā)光法。但但是這兩兩個方法法需要昂昂貴的設(shè)設(shè)備，試試劑成本本高，難難以普遍遍應(yīng)用。 為了滿滿足臨

33、床床的需要要，根據(jù)據(jù)國情和和省情，我我科瞄準(zhǔn)準(zhǔn)抗原抗抗體檢測測發(fā)展的的方向，220022年100月引進(jìn)進(jìn)具有世世界先進(jìn)進(jìn)水平的的時間分分辨熒光光免疫檢檢測儀，在在省內(nèi)率率先建交交時間分分辨熒光光免疫分分析（TTRFIIA）檢檢測乙肝肝抗原抗抗體的新新方法，我我院也是是國內(nèi)少少數(shù)應(yīng)用用本法檢檢測乙肝肝的醫(yī)院院之一。時時間分辨辨熒光免免疫分析析的原理理和通常常的免疫疫測定方方法基本本相同，只只是標(biāo)記記物和測測定方法法不同。時時間分辨辨熒光免免疫分析析以三價價稀土離離子（常常用的是是銪）及及其螯合合劑代替替同位素素、熒光光素或酶酶，作為為標(biāo)記抗抗原或抗抗體的示示蹤物，檢檢測未知知的抗體體或抗原原，用

34、特特制的時時間分辨辨熒光儀儀測定最最后反應(yīng)應(yīng)產(chǎn)物中中熒光的的強(qiáng)度，根根據(jù)熒光光強(qiáng)度來來判斷待待測物質(zhì)質(zhì)的濃度度。在免免疫復(fù)合合物中的的稀土離離子自身身可產(chǎn)生生微弱的的熒光信信號，而而當(dāng)加入入增強(qiáng)液液以后，稀稀土離子子從免疫疫復(fù)合物物中釋放放出來，受受到激發(fā)發(fā)光照射射時，熒熒光強(qiáng)度度可增強(qiáng)強(qiáng)1000萬倍。稀稀土離子子發(fā)出性性熒光不不僅光度度強(qiáng)，而而且壽命命長。反反應(yīng)系統(tǒng)統(tǒng)中許多多物質(zhì)也也可以發(fā)發(fā)出熒光光，但他他們的熒熒光的壽壽命極短短，因此此，通過過簡單的的延時檢檢測，就就可以將將特異性性熒光與與非特異異性熒光光區(qū)別開開來，所所以這個個方法的的名稱冠冠以“時間分分辨”。時間間分辨熒熒光免疫疫分析

35、是是一種超超靈敏的的高度特特異性的的檢測技技術(shù)，是是今后抗抗原抗體體檢測發(fā)發(fā)展的方方向，其其靈敏度度比化學(xué)學(xué)發(fā)光和和電化發(fā)發(fā)光高110倍1000倍，比比放免法法和酶標(biāo)標(biāo)法高110000倍以上上。據(jù)我我科現(xiàn)場場測評，其其特異性性、敏感感性和重重復(fù)性均均極強(qiáng)，幾幾乎沒有有假陰性性，假陽陽性率低低于0.1%，同同一標(biāo)本本連續(xù)220次檢檢測CVV1%，同一一批（110個）連連續(xù)3天天檢測CCV= 0.99%，檢檢測后反反應(yīng)板連連續(xù)3天天重復(fù)閱閱讀CV11%。 這一方方法的建建立必將極極大的提提高我科科的乙肝肝診斷水水平，使使我們對對乙肝感感染者的的病情、預(yù)預(yù)后、病病毒復(fù)制制程度、抗抗病毒藥藥物的療療效

36、等的的判斷更更變科學(xué)學(xué)。乙肝肝時間分分辨熒光光免疫分析析試劑盒盒共5項(xiàng)項(xiàng)，包括括表面抗抗原、表表面抗體體、e抗抗原、ee抗體和和核心抗抗體，可可任選11項(xiàng)或多多項(xiàng)，全全套需備備血3mml（不不加抗凝凝劑），記記賬后（每每項(xiàng)455元）標(biāo)標(biāo)本送傳傳染科實(shí)實(shí)驗(yàn)室，當(dāng)當(dāng)天下午午出結(jié)果果。時間分辨熒熒光免疫疫測定技技術(shù)在HHBVM定量量檢測及及臨床應(yīng)應(yīng)用分析析【摘要】目目的 研研究乙肝肝病毒感感染者血血清免疫疫學(xué)標(biāo)志志物，利利用時間間分辨熒熒光免疫疫分析技技術(shù)（TTRFIIA）檢檢測其含含量結(jié)果果與ELLISAA法結(jié)果果的任合合程度、靈靈敏度、特特異性；了解TTRFIIA測定定HBVV-M的的準(zhǔn)確性性、

37、可行行性及臨臨床應(yīng)用用價值。方方法 分分別用TTRFIIA和EELISSA法測測定2660例隨隨機(jī)血清清標(biāo)本HHBV-M結(jié)果果及含量量。結(jié)果果HBssAg(ELIISA)陽性336例，TTRFIIA陽性性40例例，x2=4,P00.055,兩法法符合率率98.46%；抗-HBss(ELLISAA)陽性性1300性，TTRFIIA陽性性1600例，xx2=300，P0.001，兩兩法符合合率888.5%；HBBeAgg(ELLISAA)陽性性17例例，TRRFIAA陽性118例，xx2=1，PP0.05，兩兩法符合合率999.6%；抗-HBee(ELLISAA)陽性性86例例，TRRFIAA陽性

38、773例, x22=6.76，PP0.01，兩兩法符合合率900.4%；抗-HBcc(ELLISAA)陽性性54例例，TRRFIAA陽性772例，xx2=155.6 ，P0.001，兩兩法符合合率911.5%；結(jié)論論TRFFIA法法與ELLISAA法比較較，特異異性、敏敏感性都都高，TTRFIIA作用用于HBBV-MM含量檢檢測可為為臨床間間接反映映病毒的的感染狀狀況，同同時也為為臨床療療效提供供動力學(xué)學(xué)觀察及及接種乙乙肝疫苗苗提供依依據(jù)。關(guān)鍵詞HBBV-MM時間分分辨熒光光免疫分分析技術(shù)術(shù) 酶酶聯(lián)免疫疫吸附試試驗(yàn)【文獻(xiàn)標(biāo)識識碼】AA【文章章編號】1606-8106（2004）06-0486-

39、02The ttimee-reesollvedd flluorroimmmunnoasssayy TRRFIAA ussed in theeHBV-MM raatioon ttestt annd tthe anaalyssis on cliiniccal apppliccatiionCai YYiheeDeparrtmeent of Labboraatorry,CChaoozhoouCentrralHHosppitaal,GGuanngdoong55210021.【Absttracct】OObjeectiive to stuudy thee suubsttancce oof bbloood i

40、immuunitty HHBV-M,AAppllyinng,tthe tecchnoologgy oof TTRFII-A tto ttestt thhe rresuult andd thhen commparre iitwiith thee reesullt oof tthe ELIISA in fixxnesss,ssenssiviity andd sppeciificcityy annd ttocoomprre-hhcndd thhe aaccuuraccy,ffeassibiilitty aand thee vaaluee off clliniicall apppliicattionn

41、 inn teestiing HBVV-M by TRFFIA.Mettfodds tto ddeteer-mminaate thee reesullt aand conntennt oof2660annd HHBV-M bby TTRFIIA aand ELIISA resspecctirrelyy.Reesullts HBssAg possitrre iis366by ELIISA,andd40bby TTRFIIA, x2=4,P00.055,thhe ffix ratte iis988.466%;aantii-HBBs pposiitivve iis1330byy ELLISAA,an

42、nd1660byy TRRFIAA, xx2=300，P0.001；tthe fixx raate is888.55%；HHBeAAg pposiitivve iis177by ELIISA,andd18bby TTRFIIA, x2=1，PP0.05；thee fiix rratee iss99.6%；Antti-HHBe possitiive is886byy ELLISAA,annd733by TRFFIA, x22=6.76，PP0.01，tthe fixx raate is990.44%；AAntii-HBBc pposiitivve iis544by ELIISA,andd72bb

43、y TTRFIIA, x2=155.6 ，P0.001，tthe fixx raate is991.55%.CCon-cluusioon TTRFIIA hhas higgherr sppeciificcityy annd ssenssitiivitty tthann ELLISAA,TRRFIAA inn teestiing HBVV-M conntennt mmay inddireectlly nnefllectt thhe vviruus iinfeectiion in cliiniccal andd offferr dyynammicss obbserrvattionn inn thh

44、e cclinnicaal iiffeectss annd bbasiis iin iinocculaatioon aa-gaainsst HHBV. Keey wwordds HHBV-M TTRFIIA EELISSA時間分辨熒熒光免疫疫測定技技術(shù)在HHBV-M定量量檢測及及臨床應(yīng)應(yīng)用分析析目前國內(nèi)臨臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)室最常常用的乙乙型肝炎炎病毒（HHBV）感感染者的的血清學(xué)學(xué)標(biāo)志物物檢測主主要靠EELISSA法，由由于ELLISAA法簡單單、方便便、快速速的優(yōu)點(diǎn)點(diǎn)在臨床床得到廣廣泛應(yīng)用用，但受受方法學(xué)學(xué)本身的的限制，它它不能提提供HBBV-MM的具體體含量，只只能作為為陰陽性性判斷，故故不可能完

45、成HBVV感染的的動力學(xué)學(xué)觀察，而而時間分分辨熒光光免疫技技術(shù)的出出現(xiàn)提供供了對HHBV-M進(jìn)行行定量檢檢測的手手段。本本文采用用TRFFIA法法對2660份血血清標(biāo)本本進(jìn)行HHBV-M檢測測，并與與ELIISA法法結(jié)果進(jìn)進(jìn)行比較較和分析析。現(xiàn)報報告如下下：1對象與方方法1.1對象象 血清清標(biāo)本均均來自本本院門診診及住院院病人2260例例，無年年齡性別別要求。早早晨空腹腹抽取靜脈血血，分離離血清后后產(chǎn)即檢檢測。1.2檢測測試劑EELISSA試劑劑盒由上上海榮盛盛生物技技術(shù)有限限公司提提供。TTRFIIA試劑劑盒由廣廣州市豐豐華生物物工程有有限公司司提供。1.3儀器器 ELL-3112e酶酶標(biāo)儀

46、。泰泰萊-11時間分分辨熒光光分析儀儀。Eggatee23110全自自動洗滌滌。25510變變頻振蕩蕩器。1.4 質(zhì)質(zhì)控物 由衛(wèi)生生部臨床床檢驗(yàn)中中心提供供。1.5 方方法 EELISSA法和和TRFFIA法法測定HHBV-M，嚴(yán)嚴(yán)格按照照試劑操操作規(guī)程程操作，同同時加入入相應(yīng)質(zhì)質(zhì)控物監(jiān)監(jiān)測。1.6 統(tǒng)統(tǒng)計學(xué)方方法 采采用配對對x2檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1HBBsAgg ELLISAA法 結(jié)結(jié)果陽性性36例例，陽性性率133.8%；TRR-FIAA法結(jié)果果陽性440例，陽陽性率115.44%；兩兩法都陽陽性366例，兩兩法都陰陰性2220例，TTRFIIA陽性性而ELLISAA陰性44例，TTRFI

47、IA陰性性而ELLISAA陽性無無，采用用配對xx2檢驗(yàn)，xx2=4,P00.055，差異異有顯著著性，兩兩法比較較符合率率為2556/2260=98.46%；其中中HB-sAgg含量00.55ngg/mll占4例，625nng/mml占77例，22650nng/mml占88例，55150nng/mml占88例，1150nng/mml以上上占133例。2.2抗-HBss ELLISAA法 結(jié)結(jié)果陽性性1300例，陽陽性率550%；TRFFIA法法結(jié)果陽陽性1660例，陽陽性率661.55%；兩兩法都陽陽性1330例，兩兩法都陰陰性1000例，TTRFIIA陽性性而ELLISAA陰性330例，T

48、TR-FIAA陰性而而ELIISA陽陽性無，采采用配對對x2檢驗(yàn)，xx2=300,P0.001，差差異有非非常顯著著性，兩兩法比較較符合率率為2330/2260=88.5%；其中-HBss含量1101100mmIU/ml占占79例例，1002000mIUU/mll占166例，220110000mIIU/mml占446例，110000mIUU/mll以上占占19例。2.3HBBeSgg ELLISAA法 結(jié)結(jié)果陽性性17例例，陽性性率6.5%；TR-FIAA法結(jié)果果陽性118例，陽陽性率66.9%；兩法法都陽性性17例例，兩法法都陰性性2422例，TTRFIIA陽性性而ELLISAA陰性11例，

49、TTRFIIA陰性性而ELLISAA陽性無無，采用用配對xx2檢驗(yàn)，xx2=1,P00.055，差異異無顯著著性，兩兩法比較較符合率率為2559/2260=99.6%；其中HHBeSSg含量量0.0030.11NCUU/mll占1例例，0.110.55NCUU/mll占4例例，0.512NCCU/mml111例，22.18NCUU/mll12例。2.4 抗抗-HBBe EELISSA法 結(jié)果陽陽性866例，陽陽性率333%；TR-FIAA法結(jié)果果陽性773例，陽陽性率228%；兩法都都陽性667例，兩兩法都陰陰性1668例，TTRFIIA陽性性而ELLISAA陰性66例，TTRFIIA陰性性而

50、ELLISAA陽性119例，采采用配對對x2檢驗(yàn)，xx2=6.76,P00.011，差異異有非常常顯著性性，兩法法比較符符合率為為2355/2660=990.44%；其其中抗-HBee含量11.52NCCU/mml144例，22 .115NNCU/ml114例， 5.1110NNCU/ml223例，220NCCU/mml以上上24例例。2.5抗-HBcc ELLISAA法 結(jié)結(jié)果陽性性54例例，陽性性率200.8%；TRRFIAA法結(jié)果果陽性772例，陽陽性率227.77%；兩兩法都陽陽性522例，兩兩法都陰陰性1886例，TTRFIIA陽性性而ELLISAA陰性220例，TTRFIIA陰性性

51、而ELLISAA陽性22例，采采用配對對x2檢驗(yàn)，xx2=155.6,P00.011，差異異有非常常顯著性性，兩法法比較符符合率為為2388/2660=991.55%；其其中抗-HBcc含量00.10.55NCUU/mll11例例，0.511NCUU/mll1例， 15NCUU/mll10例，5.110NNCU/ml336例，110NCCU/mml以上上14例。3討論 TRFIAA法檢測測HBVV-M與與ELIISA法法相比，其其特異性性和敏感感性都高高，特別別是能夠夠檢測低低濃度HHBsAAg和HHBeAAg，對對減少HHBV感感染漏診診和誤診診具有較較高價值值。因HHBsAAg陽性性是HB

52、BV感染染的金標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)11。有有學(xué)者對對血清呈呈低水平平存在、血血清HBBsAgg約在55ng/ml以以下者做做過研究究2，對象象是非肝肝炎患者者住院人人群，結(jié)結(jié)果是占占總?cè)巳喝旱?.34%，占HHBsAAg陽性性人群的的23.16%。而本本文只檢檢測出11.5%和100%。此此結(jié)果存存在一定定差異，有有待進(jìn)一一步探討討?？?HBss是對HHBV的的保護(hù)性性免疫指指標(biāo)，有有學(xué)者認(rèn)認(rèn)為仍有有保護(hù)作作用的最最低抗-HBss的濃度度為100mIUU/mll，提出出基礎(chǔ)免免疫后高高度抗體體滴度的的再接種種方案，最最后一次次接種后后4周，如如抗-HHBs10mmIU/ml立立即再接接種；1101000mI

53、UU/mll，36個月月后必須須再接種種3。實(shí)際際工作中中發(fā)現(xiàn)抗抗-HBBs定量量檢測對對于監(jiān)測測、指導(dǎo)導(dǎo)肝移值值中乙型型肝炎免免疫球蛋蛋白的應(yīng)應(yīng)用具有有肯定作作用。說說明了對對抗-HHBs定定量的檢檢測是很很有必要要的，同同時也可可了解人人體是否否有抗-HBss、是否否有足夠夠的量可可抵御HHBV的的侵襲。本本文抗-HBss結(jié)果顯顯示，1160例例TRFFIA法法陽性779例，抗抗-HBBs濃度度值在1101000mIUU/mll以內(nèi)，此此量因無無確切的的抵御能能力，建建議加強(qiáng)強(qiáng)預(yù)防措措施。對對于抗-HBss陰性的的人群更更應(yīng)做好好預(yù)防，至至于1000mIIU/mml以上上含量的的人群，說說

54、明他們們已有好好的抵御御能力。另另外結(jié)果果提示，EELISSA法的的抗-HHBe陽陽性率明明顯高于于TRFFIA法法，由于于本身方方法學(xué)的的限制，最最好在發(fā)發(fā)出報告告時加以以綜合分分析或提提高Cuutofff值。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果果表明HHBV-M各項(xiàng)項(xiàng)陽性結(jié)結(jié)果都顯顯示了不不同的含含量，說說明了人人體感染染HBVV后，病病毒的復(fù)復(fù)制程度度或經(jīng)抗抗病毒藥藥物治療療后，HHBV-M含量量也隨之之變化，提提示了動動力學(xué)關(guān)關(guān)系。據(jù)據(jù)所掌握握的資料料觀察，患患都治療療前及治治療后HHBV-M含量量變化結(jié)結(jié)果比較較。見表表1。表1 2例例病人HHBV-M治療療前后結(jié)結(jié)果比較較 略略可以看出，HBsAg和HBeA

55、g逐漸下降，而所有抗體逐步增高，這說明抗病毒治療是有效的，同時也給臨床預(yù)后判斷提供了依據(jù)。目前臨床上上對檢測測HBVV-M的的血清常常用方法法是血清清免疫學(xué)學(xué)檢測，也也就是檢檢測患者者對病毒毒侵染機(jī)機(jī)體產(chǎn)生生的免疫疫反應(yīng)，因因此免疫疫血清學(xué)學(xué)指標(biāo)可可間接反反映病毒毒的感染染狀況。隨隨著檢測測水平的的不斷提提高，TTRFIIA技術(shù)術(shù)的問世世給免疫疫自身的的研究和和發(fā)展提提供了新新的手段段。雖然然DNAA是直接接反映病病毒本身身在機(jī)體體內(nèi)的存存在情況況，而人人們越來來越意識識到兩者者既相關(guān)關(guān)，又不不盡一致致，高靈靈敏準(zhǔn)確確的HBBV-MM定量結(jié)結(jié)果可與與HBVV-DNNA的檢檢測相互互印證，給給臨

56、床提提供更客客觀有效效的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)報告，臨臨床上需需要將兩兩者結(jié)合合起來對對患者進(jìn)進(jìn)行綜合合診斷、治治療和預(yù)預(yù)后等判判斷。如如果在沒沒有開展展HBVV-DNNA項(xiàng)目目檢測的的單位，HHBV-M含量量檢測其其本身也也就是一一個很好好監(jiān)測病病毒動力力學(xué)變化化的輔助助指標(biāo)。參考文獻(xiàn) 陳紫榕，病病毒性肝肝炎，北北京：人人民衛(wèi)生生出版社社，20002，66，1991.陳瑜，鐘步步云，徐徐根云，等等.低水水平血清清乙肝病病毒表面面抗原測測定及臨臨床意義義。中華華檢測醫(yī)醫(yī)學(xué)雜志志，20001，224：11.Klauss-peeterr Maaierr 著，郝郝連杰等等譯.第第四版；北京人人民衛(wèi)生生出版社社，19

57、997，88，355。作者單位：52110211廣東省省潮州市市中心醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)驗(yàn)科病記半功肝化測知各臨床科室室： 為增加加我院臨臨床診斷斷、治療療和觀察察病情的的參考依依據(jù)，進(jìn)進(jìn)一步提提高我院院的醫(yī)療療水平和和我院的的綜合競競爭能力力。我們們要積極極開展應(yīng)應(yīng)用技術(shù)術(shù)、新項(xiàng)項(xiàng)目。最最近檢驗(yàn)驗(yàn)科在院院領(lǐng)導(dǎo)的的大力支支持下引引進(jìn)了WWALLLAC公公司生產(chǎn)產(chǎn)的時間間分辨熒熒光免疫疫分析系系統(tǒng)，該該時間分分辨熒光光免疫分分析系統(tǒng)統(tǒng)可進(jìn)行行多種檢檢測（見見附錄）其其中對“乙肝兩兩對半”可進(jìn)行行準(zhǔn)確的的定量測測定。歡歡迎各臨臨床科選選用醫(yī)務(wù)科2002年年12月月25日日一、兩對半半定量測測定乙肝病毒（HH

58、BV）標(biāo)標(biāo)記物的的檢測方方法常用用測定乙乙肝病毒毒的抗原原、抗體體標(biāo)記物物，由660年代代末700年代初初的瓊脂脂擴(kuò)撒法法，依次次發(fā)展為為血凝法法酶聯(lián)免免疫吸附附（ELLISAA）、同同位素免免疫標(biāo)記記（RIIA）化學(xué)發(fā)發(fā)光免疫疫分析、生生物發(fā)光光、電化化學(xué)發(fā)光光免疫標(biāo)標(biāo)記和880年代代中建立立的稀土土離子熒熒光標(biāo)記記（時間間分辨熒熒光免疫疫分析）等等不同的的檢測方方法。隨隨著科學(xué)學(xué)的發(fā)展展和檢驗(yàn)驗(yàn)技術(shù)的的進(jìn)步，其其方法每每發(fā)展一一步，乙乙肝標(biāo)記記物檢出出的靈敏敏度和準(zhǔn)準(zhǔn)確性都都得到不不同的提提高（其其中RIIA為110-112mool/LL、ECCL 110為110-119 mmol/L、C

59、CLIAA為100-155m oll/L、EECL110為-17/L、TTRF為為10-19 moll/L）。其其中時間間分辨熒熒光免疫疫分析（TTRF）為為近年新新研制成成功的用用三價稀稀土離子子作為示示蹤物，以以單克降降抗體包包被支持持物與樣樣品中抗抗原反應(yīng)應(yīng)，再加加入有銪銪（EUU）標(biāo)記記的抗體體，進(jìn)行行反應(yīng)檢檢測，可可大大降降低一般般同位素素和熒光光標(biāo)記受受環(huán)境干干擾缺點(diǎn)點(diǎn)，提高高了檢測測的靈敏敏和準(zhǔn)性性，該TTRF法法檢測乙乙肝病毒毒標(biāo)記物物較其他他方法靈靈敏度高高、特異異性好，因因干擾因因素少可可大地優(yōu)優(yōu)于以上上各種方方法，可可與HBBV-DDNA的的檢測相相比（未未經(jīng)規(guī)范范化要求

60、求開展的的HBVV-DNNA檢測測，多年年的臨床床實(shí)驗(yàn)證證明，假假陽性、假假陰性率率較高，重重復(fù)性差差，且不不能定量量。）TTRF為為目前檢檢測乙肝肝病毒標(biāo)標(biāo)記物最最理想怕怕方法。TRF定量檢測乙肝病毒“兩對半”為臨床診斷乙肝提供了新手段，有助于臨床客觀的分析HBV感染情況、療效的觀察和轉(zhuǎn)歸等情況的分析，至少可對一列情況更具有獨(dú)特的診斷價值：治療前進(jìn)行行病毒定定量檢測測，可以以指導(dǎo)選選擇抗病病毒藥物物，避免免盲目用用藥。治療后定量量間接判判斷體內(nèi)內(nèi)病毒數(shù)數(shù)量，有有助于療療效的觀觀察。懷孕前進(jìn)行行定量測測定，有有助于選選擇有利利的懷孕孕時機(jī)。乙乙肝孕婦婦進(jìn)行定定量檢查查，有助助于使部部分病人人得