1、實驗二 培養(yǎng)基的配制和滅菌一、實驗目的1.了解配制培養(yǎng)基的原理，并掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟。2.學習幾種常用培養(yǎng)基的配制、分裝和滅菌的操作方法.3.進一步熟練掌握手提式高壓蒸汽滅菌鍋的使用方法。二、實驗器材1.藥品及試劑：可溶性淀粉，KNO3，K2HPO43H2O，MgSO47H2O，F(xiàn)eSO47H2O，1mol/L NaOH，瓊脂，牛肉膏，蛋白胨，NaCl2.儀器及其它試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻棒、天平、藥匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙(5.5-9.0) 、棉花、牛皮紙、記號筆、麻繩、紗布、干燥箱、培養(yǎng)皿、涂布棒、吸管（1ml）、玻璃珠、PH試紙三、實驗內(nèi)容1.分組配制高氏一號培養(yǎng)基3

2、00ml。配方：可溶性淀粉20g NaCl 0.5g KNO3 1g K2HPO43H2O 0.5g MgSO47H2O 0.5g FeSO47H2O 0.01g 瓊脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.62.配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：牛肉膏1.5g 蛋白胨5g NaCl 2.5g 瓊脂7.5g 水500ml PH 7.4-7.63.每組制備玻璃珠無菌水(45ml)三角瓶2個。4.每組制備無菌水試管(4.5ml/管)10支。5.每組包9cm培養(yǎng)皿24套，6套為一包。6.每組包1ml吸管5支，玻璃刮鏟4個。四、方法步驟（一）培養(yǎng)基的制備與分裝1.稱量 按培養(yǎng)基配方比例依次準確地

3、稱取藥品?？扇苄缘矸巯扔蒙倭繜崴芑笤偌尤肫渌煞?，補足所需水分，混勻后加入瓊脂。2.熔化 在沸水浴鍋中加熱熔化。3.調(diào)pH 用1mol/L NaOH調(diào)pH至7.4-7.6。4.過濾 趁熱用多層紗布過濾（本實驗勿需過濾）5.分裝 將溶化的固體培養(yǎng)基趁熱加至漏斗上，裝試管時，注意管口不要沾上培養(yǎng)基。液體分裝裝量不超過試管的1/4，固體分裝裝量不超過試管的1/5，分裝三角瓶的量不超過三角瓶容積的一半，半固體分裝裝量為試管的1/3，滅菌后垂直待凝。6.加棉塞 培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能，然后包扎一層牛皮紙。試管應先捆

4、成一捆后再于棉塞外包扎牛皮紙，貼上標簽，注明培養(yǎng)基名稱、日期、組別。（二）無菌水的制備7.用量筒量取45ml水于帶玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮紙。8.用5ml吸管取4.5ml水于試管中，塞上棉塞，包扎牛皮紙。（三）器皿的準備9.培養(yǎng)皿的包裝 每6套一包，用舊報紙包扎（或放在特制鐵皮圓筒里，加蓋扣嚴）。10.吸管的包裝 首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用長紙條包扎、打結(jié)。11.玻璃涂布棒的包裝方法同吸管的包裝。（四）培養(yǎng)基、無菌水、器皿的滅菌12.將培養(yǎng)基、無菌水放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，1.05kg/cm2壓力，121.313.滅菌完畢，將試管培養(yǎng)基冷至5014.將滅菌的培養(yǎng)基放入3715.器皿放入干熱滅菌箱內(nèi)，加熱滅菌。五、思考題1.培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？2.加壓蒸汽滅菌的原理是什么？是否只要壓力表上的指針指到