化驗員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義之儀器分析法PAGEPAGE23化驗員、質(zhì)監(jiān)員培訓(xùn)講義第三部分儀器分析法第一章紫外分光光度法一、原理可可見光、紫紫外線照照射某些些物質(zhì)，主主要是由由于物質(zhì)質(zhì)分子中中價電子子能級躍躍遷對輻輻射的吸吸收，而而產(chǎn)生化化合物的的可見紫紫外吸收收光譜。基基于物質(zhì)質(zhì)對光的的選擇性性吸收的的特性而而建立分分光光度度法或稱稱吸收光光譜法的的分析方方法。它它是以朗朗伯───比耳定定律為基基礎(chǔ)。1朗伯—比耳耳定律A=llg—-==ECCLT式中AA為吸收收度；T為為透光率率；E為為吸收系系數(shù)，采采用的表表示方法法是（EEeq\o(\s\up5(),\s\do3())），其其物理意意義為當(dāng)當(dāng)溶液濃濃度為11%（gg/mll），液液層厚度度為1ccm時的的吸收度度數(shù)值；；C為為1000ml溶溶液中所所含被測測物質(zhì)的的重量（按按干燥品品或無水水物計算算），gg；L為為液層厚厚度，ccm。二、使用范范圍凡凡具有芳芳香環(huán)或或共軛雙雙鍵結(jié)構(gòu)構(gòu)的有機(jī)機(jī)化合物物，根據(jù)據(jù)在特定定吸收波波長處所所測得的的吸收度度，可用用于藥品品的鑒別別、純度度檢查及及含量測測定。三、儀器可可見-紫紫外分光光光度計計。其應(yīng)應(yīng)用波長長范圍為為2000～4000nmm的紫外外光區(qū)、4400～～8500nm的的可見光光區(qū)。主主要由輻輻射源（光光源）、色色散系統(tǒng)統(tǒng)、檢測測系統(tǒng)、吸吸收池、數(shù)數(shù)據(jù)處理理機(jī)、自自動記錄錄器及顯顯示器等等部件組組成。本儀器是根根據(jù)相對對測量的的原理工工作的，即即先選定定某一溶溶劑（或或空氣、試試樣）作作為標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)（空白白或稱參參比）溶溶液，并并認(rèn)為它它的透光光率為1100％％（或吸吸收度為為0），而而被測的的試樣透透光率（或或吸收度度）是相相對于標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)溶液液而言，實實際上就就是由出出射狹縫縫射出的的單色光光，分別別通過被被測試樣樣和標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)溶液，這這兩個光光能量之之比值，就就是在一一定波長長下對于于被測試試樣的透透光率（或或吸收度度）。本儀器可精精密測定定具有芳芳香環(huán)或或共軛雙雙鍵結(jié)構(gòu)構(gòu)的有機(jī)機(jī)化合物物、有色色物質(zhì)或或在適當(dāng)當(dāng)條件下下能與某某些試劑劑作用生生成有色色物的物物質(zhì)。使使用前應(yīng)應(yīng)校正測測定波長長并按儀儀器說明明書進(jìn)行行操作。四、儀器的的校正11.波長長的準(zhǔn)確確度試驗驗以儀器顯示示的波長長數(shù)值與與單色光光的實際際波長值值之間誤誤差表示示，應(yīng)在在±1.00nm范范圍內(nèi)?？煽捎脙x器器中氘燈燈的4886.002nmm與6566.100nm譜譜線進(jìn)行行校正。22.吸收收度的準(zhǔn)準(zhǔn)確度試試驗33.雜散散光的試試驗44.波長長重現(xiàn)性性試驗55.分辨辨率試驗驗五、測定方方法11.對照照品比較較法（11）按各各品種項項下的方方法，分分別配制制供試品品溶液和和對照品品溶液，對對照品溶溶液中所所含被測測成分的的量應(yīng)為為供試品品溶液中中被測成成分標(biāo)示示量的1100±±10%%，所用用溶劑也也應(yīng)完全全一致，在在規(guī)定的的波長測測定供試試品溶液液和對照照品溶液液的吸收收度后，按按下式計計算含量量，即得得。（22）計算算式A樣樣×G對/稀釋釋倍數(shù)××1000×1含含量（%%）=————————————————--×1000%A對對×G樣/稀釋釋倍數(shù)××1000×122.吸收收系數(shù)法法（11）按各各品種項項下的方方法配制制供試品品溶液，在在規(guī)定的的波長處處測定其其吸收度度，再以以該品種種在規(guī)定定條件下下的吸收收系數(shù)計計算含量量。用本本法測定定時，應(yīng)應(yīng)注意儀儀器的校校正和檢檢定。（22）計算算式A樣含含量（%%）=——————————————————--×1000%G樣樣/稀釋釋倍數(shù)××(Eeq\o(\s\up5(),\s\do3()))對×1000×133.計算算分光光光度法采采用計算算分光光光度法應(yīng)應(yīng)慎重。本本法有多多種，使使用時均均應(yīng)按各各品種項項下規(guī)定定的方法法進(jìn)行。當(dāng)當(dāng)吸收度度處在吸吸收曲線線的陡然然上升或或下降的的部位測測定時，波波長的微微小變化化可能對對測定結(jié)結(jié)果造成成顯著影影響，故故對照品品和供試試品測試試條件應(yīng)應(yīng)盡可能能一致。若若測定時時不用對對照品，如如維生素素A測定定法，則則應(yīng)在測測定時對對儀器作作仔細(xì)的的校正和和檢定。六、注意事事項11.空白白溶液與與供試品品溶液必必須澄清清，不得得有渾濁濁。如有有渾濁，應(yīng)應(yīng)預(yù)先過過濾，并并棄去初初濾液。22.測定定時，除除另有規(guī)規(guī)定外，應(yīng)應(yīng)以配制制供試品品溶液的的同瓶溶溶劑為空空白對照照，采用用1cmm的石英英吸收池池。33.在規(guī)規(guī)定的吸吸收峰波波長±2nmm以內(nèi)測測試幾個個點的吸吸收度，以以核對供供試品的的吸收峰峰波長位位置是否否正確，除除另有規(guī)規(guī)定外，吸吸收峰波波長應(yīng)在在該品種種項下規(guī)規(guī)定的波波長±2nmm以內(nèi)；；否則應(yīng)應(yīng)考慮該該試樣的的真?zhèn)?、純純度以及及儀器波波長的準(zhǔn)準(zhǔn)確度，并并以吸收收度最大大的波長長作為測測定波長長。44.一般般供試品品溶液的的吸收度度讀數(shù)，以以在0..3～00.7之之間的誤誤差較小小。55.吸收收池應(yīng)選選擇配對對，否則則要引入入測定誤誤差。在在規(guī)定波波長下兩兩個吸收收池的透透光率相相差小于于0.55％的吸吸收池作作配對，在在必要的的情況時時，須在在最終測測量扣除除吸收池池間的誤誤差修正正值。66.由于于吸收池池和溶劑劑本身可可能有空空白吸收收，因此此測定供供試品的的吸收度度后應(yīng)減減去空白白讀數(shù)，再再計算含含量。77.儀器器的接地地必須良良好，一一切裸露露的零件件對地電電位不得得超過224伏（測測電筆的的氖管不不得發(fā)亮亮）。88.在使使用過程程中，如如需開啟啟試樣室室蓋時或或暫時停停止測試試時，必必須及時時推入光光門鈕桿桿（使光光電管前前光門關(guān)關(guān)閉），保保護(hù)光電電管，以以防止光光電管受受強(qiáng)光或或長時間間照射而而損壞。99.在測測定時或或改測其其它檢品品時，應(yīng)應(yīng)用待測測溶液沖沖洗吸收收池3～～4次，用用干凈綢綢布或擦擦鏡紙擦擦凈吸收收池的透透光面至至不留斑斑痕（切切忌把透透光面磨磨損）。110.取取吸收池池時，應(yīng)應(yīng)拿毛玻玻璃兩面面，切忌忌用手拿拿捏透光光面，以以免粘上上油污。使使用完后后及時用用測定溶溶劑沖凈凈，再用用純化水水沖凈，用用干凈綢綢布或擦擦鏡紙擦擦干，晾晾干后，放放入吸收收池盒中中，防塵塵保存。111.若若吸收池池內(nèi)外壁壁沾污，兩兩池差較較大的處處理。（11）可用用綢布纏纏在扁竹竹條外或或用脫脂脂棉纏在在細(xì)玻璃璃棒上蘸蘸上乙醇醇，輕輕輕摩擦，再再用純化化水沖凈凈。（22）如上上述方法法處理不不好，必必要時可可用重鉻鉻酸鉀--硫酸洗洗液泡洗洗1～22分鐘，用用自來水水沖凈，再再用純化化水沖凈凈。（33）不得得用毛刷刷刷洗或或硬物拭拭擦，以以防止表表面光潔潔度受損損影響正正常使用用。112.請請務(wù)必注注意經(jīng)常常保持硅硅膠的干干燥，目目的是保保護(hù)光學(xué)學(xué)元件和和光電放放大器系系統(tǒng)不致致受潮損損壞而影影響儀器器的正常常工作，如如發(fā)現(xiàn)有有的硅膠膠由藍(lán)色色變?yōu)榉鄯奂t色，應(yīng)應(yīng)立即更更換。該該儀器干干燥劑筒筒有兩個個：一個個是裝在在放大器器暗盒上上，另一一個裝在在單色光光器暗盒盒上。113.在在更換硅硅膠干燥燥劑時，應(yīng)應(yīng)關(guān)閉切切斷電源源。114.在在停止工工作期間間，主機(jī)機(jī)試樣室室內(nèi)應(yīng)放放入袋裝裝或筒裝裝硅膠干干燥劑。用用防塵罩罩罩住整整個儀器器，并在在防塵罩罩內(nèi)放數(shù)數(shù)袋防潮潮硅膠。115.儀儀器在操操作中，狹狹縫的寬寬度應(yīng)從從小逐漸漸開大。若若狹縫過過大，由由于進(jìn)入入光電管管的光能能量強(qiáng)度度過大，將將會使放放大器輸輸出信號號達(dá)到飽飽和，以以至數(shù)字字顯示出出溢出（即即數(shù)字閃閃爍或示示1不變變）。這這不是儀儀器有故故障。116.將將波長旋旋轉(zhuǎn)放在在6255nm，鋏鋏縫關(guān)閉閉在0..02nnm附近近，選擇擇按鍵恢恢復(fù)在停停止工作作部位（即即三個鍵鍵均彈出出）。117.搬搬動儀器器時應(yīng)搬搬在主體體端，不不要搬在在試樣室室和光電電管盒端端以及光光源燈室室部位，以以防止儀儀器狹縫縫或光路路部件受受力而發(fā)發(fā)生變形形。并在在搬動或或運(yùn)輸時時，應(yīng)將將可動部部分固定定，如各各旋鈕可可用膠布布貼住，狹狹縫位置置開大些些，然后后固定，不不要關(guān)小小狹縫，以以免運(yùn)輸輸時振動動使狹縫縫刀口受受損壞。118.儀儀器的光光柵、反反射鏡絕絕對不能能擦拭，否否則將損損壞儀器器光學(xué)表表面，增增加雜散散光。119.儀儀器經(jīng)過過搬動請請及時檢檢查并糾糾正波長長精度，為為保證測測定的準(zhǔn)準(zhǔn)確性請請經(jīng)常校校準(zhǔn)波長長精度。如如有異常常，應(yīng)立立即報告告質(zhì)量保保證部，但但不得擅擅自調(diào)整整，并及及時做好好記錄。七、結(jié)果計計算AEeq\o(\s\up5(),\s\do3())（供試品品）==———CCLEeq\o(\s\up5(),\s\do3())（供試品品）含含量（%%）=—————————————-×1000%Eeq\o(\s\up5(),\s\do3())（標(biāo)準(zhǔn)值值或?qū)φ照掌罚┌?、允許差差儀儀器分析析方法的的誤差限限度，除除另有規(guī)規(guī)定外，其其相對偏偏差應(yīng)在在±(2.00～3..0)%。第二章比色法法一、原理及及適用范范圍在在可見光光區(qū)，除除某些物物質(zhì)有吸吸收外，很很多物質(zhì)質(zhì)本身并并沒有吸吸收，但但可在一一定條件件下加入入顯色試試劑或經(jīng)經(jīng)過處理理使其顯顯色后，根根據(jù)顏色色深淺與與濃度成成正比關(guān)關(guān)系，則則可用比比色法測測定含量量。二、儀器可可見分光光光度計計（或比比色計）其其應(yīng)用波波長范圍圍為4000～8850nnm的可可見光區(qū)區(qū)。主要要由輻射射源（光光源）、色色散系統(tǒng)統(tǒng)（或濾濾光片）、檢檢測器系系統(tǒng)、顯顯示系統(tǒng)統(tǒng)、記錄錄器及吸吸收池等等部件組組成。使使用前應(yīng)應(yīng)校正測測定波長長并按儀儀器說明明書進(jìn)行行操作。三、儀器的的校正按按照紫外外分光光光度法項項下的有有關(guān)規(guī)定定及按儀儀器說明明書要求求進(jìn)行校校正。波波長的準(zhǔn)準(zhǔn)確度應(yīng)應(yīng)在±3nmm范圍內(nèi)內(nèi)。四、測定方方法11.用比比色法測測定時，應(yīng)應(yīng)取對照照品同時時操作。除除另有規(guī)規(guī)定外，比比色法所所用的空空白系指指用同體體積的溶溶劑代替替對照品品或供試試品溶液液，然后后依次加加入等量量的相應(yīng)應(yīng)試劑，并并用同樣樣方法處處理。在在規(guī)定的的波長處處測定對對照品和和供試品品溶液的的吸收度度后，按按紫外分分光光度度法項下下“對照品品比較法法”的計算算式計算算含量。22.當(dāng)吸吸收度和和濃度關(guān)關(guān)系不呈呈線性時時，應(yīng)取取數(shù)份梯梯度量的的對照品品溶液，用用溶劑補(bǔ)補(bǔ)充至同同一體積積，顯色色后測定定各份溶溶液的吸吸收度，然然后以吸吸收度與與相應(yīng)的的濃度繪繪制標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線，再再根據(jù)供供試品的的吸收度度在標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)曲線上上求出其其含量。三、注意事事項測測定時，應(yīng)應(yīng)取對照照品平行行操作，使使所用試試劑用量量、反應(yīng)應(yīng)溫度、酸酸堿度、反反應(yīng)時間間等完全全一致，對對隨時間間變化影影響顯色色的品種種應(yīng)準(zhǔn)確確控制讀讀數(shù)時間間，操作作時應(yīng)注注意避光光。第三章高效液液相色譜譜法一、原理高高效液相相色譜法法是用高高壓輸液液泵將具具有不同同極性的的單一溶溶劑或不不同比例例的混合合溶劑、緩緩沖液等等流動相相，壓入入裝有固固定相的的色譜柱柱，經(jīng)進(jìn)進(jìn)樣閥注注入供試試品，由由流動相相帶入柱柱內(nèi)，在在柱內(nèi)各各成分被被分離后后，依次次進(jìn)入檢檢測器，色色譜信號號由記錄錄儀或積積分儀記記錄。二、適用范范圍高高效液相相色譜法法是一種種分離分分析方法法，適用用于揮發(fā)發(fā)性低、熱熱穩(wěn)定性性差、分分子量大大的高分分子化合合物以及及離子型型化合物物等的定定性、定定量分析析。中國國藥典主主要用于于藥品的的含量測測定、有有關(guān)物質(zhì)質(zhì)檢查、雜雜質(zhì)限度度檢查和和鑒別等等。三、儀器高高效液相相色譜儀儀主要由由輸液泵泵系統(tǒng)、進(jìn)進(jìn)樣器系系統(tǒng)、色色譜柱、檢檢測器、記記錄器、顯顯示器及及數(shù)據(jù)處處理機(jī)（或或兼有組組分收集集系統(tǒng)）等等組成。使使用時應(yīng)應(yīng)按儀器器的說明明書進(jìn)行行操作。四、儀器的的校正11.高效效液相色色譜儀的的柱箱控控溫精度度、基線線噪聲、基基線漂移移、靈敏敏度或檢檢測限、線線性范圍圍的檢定定均按儀儀器說明明書的技技術(shù)要求求進(jìn)行校校驗，應(yīng)應(yīng)符合規(guī)規(guī)定。22.以紫紫外-可可見光檢檢測器、熒熒光檢測測器、差差示折光光檢測器器為檢測測器的實實驗室通通用液相相色譜儀儀的檢定定，所用用各種標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)應(yīng)使用用經(jīng)國家家技術(shù)監(jiān)監(jiān)督部門門批準(zhǔn)頒頒發(fā)的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)質(zhì)。具體體校正方方法和主主要技術(shù)術(shù)指標(biāo)見見“高效液液相色譜譜儀檢測測器的校校驗”。33.泵的的耐壓試試驗44.泵流流量設(shè)定定值誤差差、流量量穩(wěn)定性性誤差的的試驗55.柱恒恒溫箱溫溫度設(shè)定定值誤差差和控溫溫穩(wěn)定性性誤差的的試驗66.梯度度準(zhǔn)確度度的試驗驗77.定性性定量重重現(xiàn)性的的試驗五、對儀器器的一般般要求11.色譜譜柱的填填充劑和和流動相相的組分分應(yīng)按各各品種項項下的規(guī)規(guī)定。常常用的色色譜柱填填充劑有有硅膠（正正相色譜譜）和化化學(xué)鍵合合硅膠，后后者以十十八烷基基硅烷鍵鍵合硅膠膠（反相相色譜）最最為常用用，辛基基硅烷鍵鍵合硅膠膠次之，氰氰基或氨氨基鍵合合硅膠也也有使用用。離子子交換填填充劑用用于離子子交換色色譜；凝凝膠或玻玻璃微球球等填充充劑用于于分子排排阻色譜譜等。除除另有規(guī)規(guī)定外，柱柱溫為室室溫，檢檢測器為為紫外吸吸收檢測測器。22.藥典典正文中中各品種種項下規(guī)規(guī)定的條條件除固固定相種種類、流流動相組組分、檢檢測器類類型不得得任意改改變外，其其余如色色譜柱內(nèi)內(nèi)徑、長長度、固固定相牌牌號、載載體粒度度、流動動相流速速、混合合流動相相各組分分的比例例、柱溫溫、進(jìn)樣樣量、檢檢測器的的靈敏度度等，均均可適當(dāng)當(dāng)改變，以以適應(yīng)具具體品種種并達(dá)到到系統(tǒng)適適用性試試驗的要要求。33.一般般色譜圖圖約于220分鐘鐘內(nèi)記錄錄完畢。六、系統(tǒng)適適用性試試驗按各品種項項下要求求對儀器器進(jìn)行適適用性試試驗，即即用規(guī)定定的對照照品對儀儀器進(jìn)行行試驗和和調(diào)整，應(yīng)應(yīng)達(dá)到規(guī)規(guī)定的要要求，或或規(guī)定分分析狀態(tài)態(tài)下色譜譜柱的最最小理論論板數(shù)、分分離度、重重復(fù)性和和拖尾因因子。11.色譜譜柱的理理論板數(shù)數(shù)（n）n=55.544(tR/Wh/22)2式中ttR為保留留時間（以以分鐘或或長度計計，下同同，但應(yīng)應(yīng)取相同同單位）；；Wh/2為為半峰高高寬。22.分離離度（RR）除另有有規(guī)定外外，分離離度應(yīng)大大于1..5。2(ttR2－tR1)RR=—————-W1＋W22式中ttR2為相相鄰兩峰峰中后一一峰的保保留時間間；tR1為相相鄰兩峰峰中前一一峰的保保留時間間；W1及W22為此相相鄰兩峰峰的峰寬寬。33.重復(fù)復(fù)性取取各品種種項下的的對照溶溶液，連連續(xù)進(jìn)樣樣5次，除除另有規(guī)規(guī)定外，其其峰面積積測量值值的相對對標(biāo)準(zhǔn)偏偏差應(yīng)不不大于22.0%%。也可可按各品品種校正正因子測測定項下下，配制制相當(dāng)于于80%%、1000%和和1200%的對對照品溶溶液，加加入規(guī)定定量的內(nèi)內(nèi)標(biāo)溶液液，配成成3種不不同濃度度的溶液液，分別別進(jìn)樣33次，計計算平均均校正因因子，其其相對標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差差也應(yīng)不不大于22.0%%。44.拖尾尾因子（TT）除另有有規(guī)定外外，T應(yīng)應(yīng)在0..95～～1.005之間間。W0..05hhTT=——-2dd1式中WW0.005h為為0.005峰高高處的峰峰寬；d1為峰極極大至峰峰前沿之之間的距距離。七、測定法法定定量測定定時，可可根據(jù)供供試品的的具體情情況采用用峰面積積法或峰峰高法。測測定雜質(zhì)質(zhì)含量時時，須采采用峰面面積法。（一）內(nèi)標(biāo)標(biāo)法加校正正因子測測定供試試品中某某個雜質(zhì)質(zhì)或主成成分含量量11.按各各品種項項下的規(guī)規(guī)定，精精密稱（量量）取對對照品和和內(nèi)標(biāo)物物質(zhì)，分分別配成成溶液，精精密量取取各溶液液，配成成校正因因子測定定用的對對照溶液液。取一一定量注注入液相相色譜儀儀，記錄錄色譜圖圖。測量量對照品品和內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的峰面積積或峰高高，按下下式計算算校正因因子：AS/CSS校校正因子子（f）=——-AAR/CR式中AAS為內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的峰面積積或峰高高；AR為對照照品的峰峰面積或或峰高；；CS為內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的濃度；；CR為對照照品的濃濃度。再再取各品品種項下下含有內(nèi)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)的供試試品溶液液，注入入液相色色譜儀，記記錄色譜譜圖，測測量供試試品中待待測成分分（或其其雜質(zhì)）和和內(nèi)標(biāo)物物質(zhì)的峰峰面積或或峰高，按按下式計計算含量量：AX含含量（CCX）=f·———-AAS/CSCX×稀釋倍倍數(shù)含含量（%%）=——————————××1000%GXX×(1－干干燥失重重)式中AAX為供試試品（或或其雜質(zhì)質(zhì)）的峰峰面積或或峰高；；CXX為供試試品（或或其雜質(zhì)質(zhì)）的濃濃度；GXX為供試試品的稱稱樣量。當(dāng)當(dāng)配制校校正因子子測定用用的對照照溶液和和含有內(nèi)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)的供試試品溶液液使用同同一份內(nèi)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)溶液時時，則配配制內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)溶溶液不必必精密稱稱（量）取取。22.內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的選擇（11）內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)應(yīng)應(yīng)是樣品品中不含含有的組組分，否否則會使使峰重疊疊而無法法準(zhǔn)確測測量內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的峰面積積。（22）內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)的的保留時時間應(yīng)與與待測成成分相近近，并達(dá)達(dá)到完全全分離，分分離度RR≥1.55。（33）內(nèi)標(biāo)標(biāo)物質(zhì)必必須是純純度符合合要求的的化合物物，若非非純品無無干擾峰峰也可采采用。已已知含量量的較純純物質(zhì)也也可用，但但需扣除除內(nèi)標(biāo)物物質(zhì)的重重量。（二）外標(biāo)標(biāo)法測定供供試品中中某個雜雜質(zhì)或主主成分含含量11.按各各品種項項下的規(guī)規(guī)定，精精密稱（量量）取對對照品和和供試品品，配制制成溶液液，分別別精密取取一定量量，注入入液相色色譜儀，記記錄色譜譜圖，測測量對照照品和供供試品待待測成分分的峰面面積（或或峰高），按按下式計計算含量量：AX含含量（CCX）=CR·—-ARCX×稀釋倍倍數(shù)含含量（%%）=——————————××1000%GXX×(1－干干燥失重重)22.由于于微量注注射器不不易精確確控制進(jìn)進(jìn)樣量，當(dāng)當(dāng)采用外外標(biāo)法測測定供試試品中某某雜質(zhì)或或主成分分含量時時，以定定量環(huán)進(jìn)進(jìn)樣為好好。（三）加校校正因子子的主成成分自身身對照法法（四）不加加校正因因子的主主成分自自身對照照法（五）面積積歸一化化法由由于峰面面積歸一一化法測測定誤差差大，因因此，本本法通常常只能用用于粗略略考察供供試品中中的雜質(zhì)質(zhì)含量。除除另有規(guī)規(guī)定外，一一般不宜宜用于微微量雜質(zhì)質(zhì)的檢查查。方法法是測量量各雜質(zhì)質(zhì)峰的面面積和色色譜圖上上除溶劑劑峰以外外的總色色譜峰面面積，計計算各峰峰面積占占總峰面面積的百百分率，即即得。八、注意事事項11.雖然然泵能耐耐壓60000PPSI的的壓力，但但不要使使泵處于于40000PSSI以上上的壓力力為宜。22.安裝裝及拆卸卸色譜柱柱時應(yīng)注注意柱的的連接方方向，千千萬不能能接反。否否則可能能導(dǎo)致柱柱效降低低，甚至至損壞色色譜柱。33.嚴(yán)禁禁開空泵泵。在無無流動相相通過時時不要扳扳動進(jìn)樣樣閥的操操作桿，使使用時要要注意盡盡可能少少扳動，以以免磨損損內(nèi)部的的密封墊墊圈。44.為了了延長檢檢測器燈燈源的使使用壽命命，在色色譜泵穩(wěn)穩(wěn)定后再再打開檢檢測器電電源開關(guān)關(guān)，分析析結(jié)束后后立即關(guān)關(guān)閉檢測測器。55.應(yīng)使使用高純純度、高高質(zhì)量的的溶劑和和試劑。66.避免免pH值值超限，ppH值應(yīng)應(yīng)控制在在2.22～7..5之間間。pHH值偏低低或偏高高都會腐腐蝕液相相系統(tǒng)的的不銹鋼鋼材料；；破壞色色譜柱填填料的結(jié)結(jié)構(gòu)，使使填料失失活。77.色譜譜柱溫不不能超過過規(guī)定要要求，柱柱溫過高高會加速速色譜柱柱填料老老化，破破壞其結(jié)結(jié)構(gòu)。88.使用用所有溶溶劑必須須是互溶溶的。這這對于緩緩沖流動動相來說說是非常常重要的的，鹽類類的析出出會很快快損壞要要維護(hù)的的部件。99.流動動相首選選甲醇--水系統(tǒng)統(tǒng)，如經(jīng)經(jīng)試用不不適合時時，再選選用其他他溶劑。為為保護(hù)儀儀器，應(yīng)應(yīng)盡可能能少用含含有緩沖沖液的流流動相。如如果流動動相中含含有緩沖沖劑，每每日使用用后應(yīng)用用不含緩緩沖劑的的流動相相或新鮮鮮純化水水將儀器器管路、泵泵、進(jìn)樣樣閥、色色譜柱及及檢測池池等充分分沖洗干干凈。110.如如果液相相系統(tǒng)使使用未過過濾的洗洗脫液、注注入未過過濾的樣樣品、系系統(tǒng)中滯滯留緩沖沖洗脫液液都能堵堵塞系統(tǒng)統(tǒng)或劃傷傷泵柱塞塞。所以以流動相相、樣品品使用前前必須用用0.445μm微孔孔濾膜過過濾；流流動相并并先經(jīng)脫脫氣處理理后使用用。停泵泵后決不不允許緩緩沖洗脫脫液滯留留在系統(tǒng)統(tǒng)中，須須用經(jīng)過過濾后的的新鮮純純化水進(jìn)進(jìn)行清洗洗，并保保證將緩緩沖劑沖沖洗干凈凈。111.如如果泵閉閉置在22天以上上，應(yīng)將將甲醇注注滿液相相系統(tǒng)，以以避免水水溶劑系系統(tǒng)中可可能存在在微生物物的繁殖殖。112.色色譜柱保保存時應(yīng)應(yīng)使填充充劑處在在潤濕狀狀態(tài)，兩兩端密塞塞。反相相柱（如如十八烷烷基硅烷烷鍵合硅硅膠柱）可可在甲醇醇中保存存；正相相柱（如如硅膠柱柱）可在在正己烷烷中保存存等。113.決決不能使使用鹽酸酸溶液。一一般來說說，任何何濃度的的鹵化物物都會腐腐蝕未經(jīng)經(jīng)鈍化的的不銹鋼鋼材料。114.盡盡量避免免使用在在電化學(xué)學(xué)過程中中引起腐腐蝕的金金屬離子子。應(yīng)避避免的典典型金屬屬離子有有錳、鉻鉻、鋅、銅銅、鎳、鉬鉬、鐵。九、允許差差含含量測定定的精度度，除另另有規(guī)定定外，其其相對標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差差應(yīng)不大大于2..0%。第四章氣相色色譜法一、原理氣氣相色譜譜法的流流動相為為氣體，稱稱為載氣氣；色譜譜柱分為為填充柱柱和毛細(xì)細(xì)管柱兩兩種。填填充柱內(nèi)內(nèi)裝吸附附劑、高高分子多多孔小球球或涂漬漬固定液液的載體體；毛細(xì)細(xì)管柱內(nèi)內(nèi)壁涂漬漬或交聯(lián)聯(lián)固定液液。注入入進(jìn)樣口口的供試試品被加加熱氣化化，并被被載氣帶帶入色譜譜柱，在在柱內(nèi)各各成分被被分離后后先后進(jìn)進(jìn)入檢測測器，色色譜信號號用記錄錄儀或數(shù)數(shù)據(jù)處理理器記錄錄。二、適用范范圍氣氣相色譜譜法是一一種分離離分析方方法，適適用于含含揮發(fā)性性或經(jīng)裂裂解、衍衍生化等等能氣化化的藥品品及多組組分混合合物的定定性、定定量分析析。中國國藥典主主要用于于原料藥藥中殘留留溶劑、揮揮發(fā)性雜雜質(zhì)的檢檢查，制制劑中含含有乙醇醇量的測測定以及及具有一一定揮發(fā)發(fā)性原料料藥及其其制劑的的含量測測定。三、儀器氣氣相色譜譜儀主要要由氣路路系統(tǒng)、進(jìn)進(jìn)樣系統(tǒng)統(tǒng)、色譜譜柱、檢檢測器、記記錄器、顯顯示器及及數(shù)據(jù)處處理機(jī)（或或兼有組組分收集集系統(tǒng)）等等組成。使使用時應(yīng)應(yīng)按儀器器的說明明書進(jìn)行行操作。四、對儀器器的一般般要求11.除另另有規(guī)定定外，載載氣為氮氮氣；色色譜柱為為填充柱柱或毛細(xì)細(xì)管柱，填填充柱的的材質(zhì)為為不銹鋼鋼或玻璃璃，載體體用直徑徑為0..25～～0.118mmm、0..18～～0.115mmm或0..15～～0.1125mmm經(jīng)酸酸洗并硅硅烷化處處理的硅硅藻土或或高分子子多孔小小球；常常用玻璃璃或彈性性石英毛毛細(xì)管柱柱的內(nèi)徑徑為0..20mmm或0.332mmm。進(jìn)樣樣口溫度度應(yīng)高于于柱溫330～550℃；進(jìn)樣樣量一般般不超過過數(shù)微升升；柱徑徑越細(xì)進(jìn)進(jìn)樣量應(yīng)應(yīng)越少。檢檢測器為為氫火焰焰離子化化檢測器器，檢測測溫度一一般高于于柱溫，并并不得低低于1000℃，以免免水氣凝凝結(jié)，通通常為2250～～3500℃。22.藥典典正文中中各品種種項下規(guī)規(guī)定的條條件，除除檢測器器種類、固固定液品品種及特特殊指定定的色譜譜柱材料料不得任任意改變變外，其其余如色色譜柱內(nèi)內(nèi)徑、長長度、載載體牌號號、粒度度、固定定液涂布布濃度、載載氣流速速、柱溫溫、進(jìn)樣樣量、檢檢測器的的靈敏度度等，均均可適當(dāng)當(dāng)改變，以以適應(yīng)具具體品種種并符合合系統(tǒng)適適用性試試驗的要要求。一一般色譜譜圖約于于30分分鐘內(nèi)記記錄完畢畢。五、系統(tǒng)適適用性試試驗同同高效液液相色譜譜法項下下規(guī)定。六、測定法法11.同同高效液液相色譜譜法項下下規(guī)定。用用氣相色色譜法進(jìn)進(jìn)行定量量分析時時，應(yīng)盡盡量采用用內(nèi)標(biāo)法法為宜。同同時也要要注意進(jìn)進(jìn)樣技術(shù)術(shù)的熟練練，因內(nèi)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)與供試試品成分分的蒸氣氣壓不同同，則蒸蒸氣壓高高的進(jìn)樣樣量也會會較多。故故選擇測測定用內(nèi)內(nèi)標(biāo)物質(zhì)質(zhì)時，除除應(yīng)考慮慮內(nèi)標(biāo)峰峰的保留留時間應(yīng)應(yīng)與被測測成分相相近，無無雜質(zhì)峰峰重疊，尚尚要考慮慮其蒸氣氣壓是否否近似。22.氣相相色譜法法手工進(jìn)進(jìn)樣量不不易精確確控制，特特別應(yīng)注注意留針針時間和和室溫的的影響。七、允許差差含含量測定定的精度度，除另另有規(guī)定定外，其其相對標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)偏差差應(yīng)不大大于2..0%。第五章旋光度度測定法法一、定義偏偏振光透透過長11dm并并每1mml中含含有旋光光性物質(zhì)質(zhì)1g的溶溶液，在在一定波波長與溫溫度下測測得的旋旋光度稱稱為比旋旋度。測測定比旋旋度（或或旋光度度）可以以區(qū)別或或檢查某某些藥品品的純雜雜程度，亦亦可用以以測定含含量。二、原理當(dāng)當(dāng)一單色色光（鈉鈉光譜的的D線即即5899.3nnm）通通過起偏偏鏡產(chǎn)生生直線偏偏振光向向前進(jìn)行行，當(dāng)通通過裝有有含有某某些光學(xué)學(xué)活性（即即旋光性性）的化化合物液液體的測測定管時時，偏振振光的平平面（偏偏振面）就就會向左左或向右右旋轉(zhuǎn)一一定的角角度，即即該旋光光性物質(zhì)質(zhì)的旋光光度。其其值可以以從自動動示數(shù)盤盤上直接接讀出。偏偏振光透透過長11dm并并每1mml中含含有旋光光性物質(zhì)質(zhì)1g的的溶液，在在一定波波長與溫溫度下測測得的旋旋光度稱稱為比旋旋度。α對對液體供供試品[αα]eq\o(\s\up5(),\s\do3())=———-ld1000α對對固體供供試品[αα]eq\o(\s\up5(),\s\do3())=————lc式中[[α]eq\o(\s\up5(),\s\do3())為比旋旋度；D為為鈉光譜譜的D線線；t為為測定時時的溫度度；l為測定管管長度，ddm；α為測得的的旋光度度；d為液體的的相對密密度；c為每1000mll溶液中中含有被被測物質(zhì)質(zhì)的重量量，g（按按干燥品品或無水水物計算算）。三、測定方方法11.打開開穩(wěn)壓電電源開關(guān)關(guān)，稍等等片刻，俟俟電壓表表指針穩(wěn)穩(wěn)定地指指示在2220VV處。22.打開開旋光儀儀電源開開關(guān)，經(jīng)經(jīng)5分鐘鐘鈉光燈燈發(fā)光穩(wěn)穩(wěn)定后再再工作。33.扳上上直流開開關(guān)，若若直流開開關(guān)扳上上后，燈燈熄滅，則則再將直直流開關(guān)關(guān)上下重重復(fù)扳動動1到22次，使使鈉燈在在直流下下點亮為為正常。44.將測測定管用用供試品品所用的的溶劑沖沖洗3～～4遍，緩緩緩注入入適量溶溶劑。55.測定定管中若若有氣泡泡，應(yīng)先先將氣泡泡浮在凸凸頸處，通通光面兩兩端的霧霧狀液滴滴，應(yīng)用用擦鏡紙紙揩干。66.測定定管螺帽帽不宜旋旋得過緊緊，以免免產(chǎn)生應(yīng)應(yīng)力，影影響讀數(shù)數(shù)。77.將測測定管放放入樣品品室，測測定管安安放時，應(yīng)應(yīng)注意標(biāo)標(biāo)記的位位置和方方向，蓋蓋上箱蓋蓋。88.打開開示數(shù)，調(diào)調(diào)節(jié)零位位手輪，使使旋光示示值為零零。99.取出出測定管管，將空空白溶液液倒出，用用供試品品溶液沖沖洗3～～4遍，將將供試品品溶液緩緩緩注入入測定管管，用擦擦鏡紙擦擦凈測定定管，特特別要擦擦凈兩端端的通光光面，按按相同的的位置和和方向正正確地放放入樣品品室內(nèi)，蓋蓋好箱蓋蓋。110.示示數(shù)盤將將轉(zhuǎn)出該該樣品的的旋光度度。示數(shù)數(shù)盤上紅紅色示值值為左旋旋（－），黑黑色示值值為右旋旋（＋）。111.逐逐次按下下復(fù)測按按鈕，重重復(fù)讀取取旋光度度3次，取取3次的的平均值值作為測測定結(jié)果果。112.如如果樣品品超過測測量范圍圍，儀器器在±45處處自動停停止，此此時取出出測定管管，按一一下復(fù)測測按鈕開開關(guān)，儀儀器即轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)回零位位。113.鈉鈉燈在直直流供電電系統(tǒng)出出現(xiàn)故障障不能使使用時，儀儀器也可可在鈉燈燈交流供供電的情情況下測測試。但但儀器的的性能可可能略有有降低。114.測測定完畢畢后，取取出測定定管，將將測定管管用純化化水洗凈凈。應(yīng)晾晾干，防防塵保存存。115.關(guān)關(guān)閉“示數(shù)”開關(guān)，示示數(shù)盤復(fù)復(fù)原。116.關(guān)關(guān)閉“直流”及“電源”開關(guān)。117.關(guān)關(guān)閉穩(wěn)壓壓電源開開關(guān)，關(guān)關(guān)閉總電電源開關(guān)關(guān)。118.罩罩好防塵塵罩，填填寫操作作記錄。四、注意事事項11.中國國藥典220000年版二二部規(guī)定定，用鈉鈉光譜的的D線（5589..3nmm）測定定旋光度度，除另另有規(guī)定定外，測測定管長長度為11dm（如如使用其其他管長長，應(yīng)進(jìn)進(jìn)行換算算），測測定溫度度為200℃。22.配制制溶液及及測定時時,均應(yīng)應(yīng)調(diào)節(jié)溫溫度至220±0.55℃（或各各藥品項項下規(guī)定定的溫度度）。33.供試試的液體體或固體體物質(zhì)的的溶液應(yīng)應(yīng)不顯渾渾濁或含含有混懸懸的小粒粒。如有有上述情情況時，應(yīng)應(yīng)預(yù)先濾濾過，并并棄去初初濾液。44.每次次測定前前應(yīng)以溶溶劑作空空白校正正，測定定后，再再校正11次，以以確定在在測定時時零點有有無變動動，如第第2次校校正時發(fā)發(fā)現(xiàn)零點點有變動動，則應(yīng)應(yīng)重新測測定旋光光度。55.測定定供試品品與空白白校正，應(yīng)應(yīng)按相同同的位置置和方向向放置測測定管于于儀器樣樣品室，并并注意測測定管內(nèi)內(nèi)不應(yīng)有有氣泡，否否則影響響測定的的準(zhǔn)確度度。66.測定定管使用用后，尤尤其在盛盛放有機(jī)機(jī)溶劑后后,必須須立即洗洗凈，以以免橡皮皮圈受損損發(fā)粘。測測定管每每次洗滌滌后，切切不可置置烘箱中中干燥，以以免發(fā)生生變形，橡橡皮圈發(fā)發(fā)粘。77.測定定管兩端端的通光光面，使使用時須須特別小小心，避避免碰撞撞和觸摸摸，只能能以擦鏡鏡紙揩試試，以防防磨損。應(yīng)應(yīng)保護(hù)其其光亮、清清潔，否否則影響響測定結(jié)結(jié)果。88.測定定管螺帽帽不宜旋旋得過緊緊，以免免產(chǎn)生應(yīng)應(yīng)力，影影響讀數(shù)數(shù)。99.鈉燈燈使用時時間一般般勿連續(xù)續(xù)使用超超過2小小時，并并不宜經(jīng)經(jīng)常開關(guān)關(guān)。當(dāng)關(guān)關(guān)熄鈉燈燈后，如如果要繼繼續(xù)使用用，應(yīng)等等鈉燈冷冷后再開開。110儀器器應(yīng)放置置干燥通通風(fēng)處，防防止潮氣氣侵蝕，鎮(zhèn)鎮(zhèn)流器應(yīng)應(yīng)注意散散熱。搬搬動儀器器應(yīng)小心心輕放，避避免震動動。111.光光源積灰灰或損壞壞，可打打開機(jī)殼殼擦凈或或更換。112.機(jī)機(jī)械部分分摩擦阻阻力增大大，可以以打開后后門板，在在傘形齒齒輪、蝸蝸輪蝸桿桿處加稍稍許鐘油油。113.如如果儀器器發(fā)現(xiàn)停停轉(zhuǎn)或其其它元件件損壞的的故障，應(yīng)應(yīng)按電原原理圖詳詳細(xì)檢查查。第六章pH值的的測定法法一、原理PPHS--2型酸酸度計是是用玻璃璃電極作作為測量量電極，甘甘汞電極極作為參參考電極極，當(dāng)氫氫離子濃濃度發(fā)生生變化時時，玻璃璃電極和和甘汞電電極之間間的電動動勢也隨隨著引起起變化，而而電勢變變化符合合能斯特特方程式式：RTE=Eo--2.330266×———-×pHF式中EE—產(chǎn)生的的電極電電位T—絕對溫溫度Eoo—零電位位F——法拉第第常數(shù)R--氣體常常數(shù)pH—表示被被測溶液液pH值和和內(nèi)溶液液pH值值的差值值PPHS--2型酸酸度計是是利用玻玻璃電極極和甘汞汞電極對對被測溶溶液中不不同酸度度產(chǎn)生的的直流電電勢，輸輸入到一一臺用參參量振蕩蕩深度負(fù)負(fù)反饋的的直流放放大器，以以達(dá)到ppH值指指示的目目的。二、注意事事項11.應(yīng)注注意玻璃璃電極裝裝到電極極夾中時時應(yīng)略高高于甘汞汞電極，以以免球膜膜與試杯杯相碰。22.新使使用或久久放未用用的玻璃璃電極在在使用前前應(yīng)放在在純化水水內(nèi)浸泡泡活化448小時時，平時時也最好好浸泡在在水中，以以便下次次使用時時能迅速速地工作作。33.將甘甘汞電極極的頸端端橡皮塞塞取下，檢檢查飽和和氯化鉀鉀溶液情情況，溶溶液中應(yīng)應(yīng)有氯化化鉀結(jié)晶晶析出，以以確保溶溶液飽和和，太少少應(yīng)予以以添加。使使用前應(yīng)應(yīng)把電極極彎管下下端橡皮皮套除去去。44