質(zhì)量控制在保證疫苗的安全性和有效性中的作用

中國藥品生物制品檢定所疫苗的適適用人群群接種人群群:-以健康康人為適適用人群群-兒童疫苗的分分類使用目的的，主要要分為預(yù)防性疫疫苗，是是目前主主要的疫疫苗治療性疫疫苗預(yù)防性疫疫苗又可可分為活疫苗：：麻疹、、風(fēng)疹、、腮腺炎炎、乙腦腦、OPV等滅活疫苗苗：狂犬犬、流感感、IPV等重組疫苗苗：乙肝肝、HPV等亞單位和和組份疫疫苗：流流感亞單單位疫苗苗，多糖糖類疫苗的兩兩個要素素安全性適用人群群為健康康人群，，因此，，安全性性為首要要考慮的的要素本報告中中安全性性只涉及及質(zhì)量控控制保證證疫苗的的安全性性，不涉及疫苗苗內(nèi)在原原因產(chǎn)生生的副反反應(yīng)問題題。有效性有效性是是指應(yīng)用用該疫苗苗后，使使個體達(dá)達(dá)到預(yù)防防感染該該病原的能力由于疫苗苗主要由由病原體體或大分分子物質(zhì)質(zhì)（蛋白白、多糖糖等）組組成，存存在較多多的可變變因素。。在生產(chǎn)產(chǎn)過程中中進行嚴(yán)嚴(yán)格的質(zhì)質(zhì)量控制制有助于于保證疫疫苗的安安全性和和有效性性，另外外，保證證疫苗質(zhì)質(zhì)量的連連續(xù)性。。疫苗的質(zhì)質(zhì)量控制制涉及疫疫苗生產(chǎn)產(chǎn)的全過過程，遵遵守GMP原則則，符合合藥典中中通則和和個論的的要求。。第一部分分：疫苗苗質(zhì)量控控制中的的安全性性考考慮要要點第二部分分：疫苗苗質(zhì)量控控制中的的有效性性考考慮要要點內(nèi)容容一，起始始原材料料，須符符合藥典典中要求求，重點點考慮：：1.生生產(chǎn)用菌菌毒種：：例：減毒毒活疫苗苗，毒種種的安全全性考慮慮要點包包括：神經(jīng)毒力力（猴體體試驗或或其它敏敏感動物物）毒種傳代代穩(wěn)定性性（突變變、返祖祖），結(jié)結(jié)合有效效性制訂訂毒種代代次2.生產(chǎn)產(chǎn)用基質(zhì)質(zhì)原代細(xì)胞胞：重點點為外源源因子、、逆轉(zhuǎn)錄錄酶等因因素生產(chǎn)活疫疫苗時，，應(yīng)來自自SPF級動物物傳代細(xì)胞胞：制訂訂細(xì)胞庫庫，對外外源因子子、致瘤瘤性檢定定（限定定代次））人二倍體體細(xì)胞：：鑒別、、核型檢檢查等雞胚：制制備毒種種或活疫疫苗時應(yīng)應(yīng)為SPF級雞雞胚第一部分分：疫苗苗質(zhì)量控控制中的的安全性性考慮起始原材材料質(zhì)量量控制3.動動物原性性材料牛血清、、胰酶等等，進行行必要的的外源因因子檢測測，不允允許從瘋瘋牛病疫疫區(qū)進口口此類原原材料4.其其它材料料4.1化化學(xué)試試劑（滅滅活、裂裂解、純純化、穩(wěn)穩(wěn)定劑等等）應(yīng)使用藥藥用級例：某企企業(yè)的穩(wěn)穩(wěn)定劑成成份導(dǎo)致致異常毒毒性不過過關(guān)4.2生生產(chǎn)用用水4.3抗抗生素素，嚴(yán)禁使用用青霉素素或β-內(nèi)酰胺類類抗生素素將來要求求在細(xì)胞胞維持液液中不得得添加抗抗生素

國產(chǎn)疫苗苗中慶大大霉素檢檢測結(jié)果果疫苗名稱批號結(jié)果（ug/ml）麻疹200805130146麻疹200805060142麻腮200805030170MMR200805050180風(fēng)疹200805130248麻風(fēng)200805100246麻疹20080512－10.037麻疹20080609－90.021流感－0.0001國產(chǎn)疫苗苗中卡那那霉素檢檢測結(jié)果果疫苗名稱批號結(jié)果（ug/ml）水痘200807010281水痘200807020282水痘2008080944.4水痘2008090993.6MMR20080702011.6MMR20080709015.5二、生產(chǎn)產(chǎn)過程中中控制，，必須符符合GMP原則則1.生生產(chǎn)條件件嚴(yán)格控控制，例例如：1.1活活疫苗苗培養(yǎng)溫溫度：OPV疫疫苗中溫溫度升高高時，病病毒容易易返祖，，導(dǎo)致猴猴體神經(jīng)經(jīng)毒力試試驗不過過關(guān)。1.2滅滅活溫溫度及時時間：對對滅活疫疫苗至關(guān)關(guān)重要，，尤其是是采用野野毒株生生產(chǎn)疫苗苗時。1955年發(fā)生生在美國國的“卡卡特門””事件，，未充分分滅活的的脊灰疫疫苗導(dǎo)致致60名名兒童和和89名名接觸者者發(fā)生脊脊髓灰質(zhì)質(zhì)炎。1.3病病毒裂裂解劑濃濃度、溫溫度及時時間：流流感裂解解不充分分，在小小年齡兒兒童中導(dǎo)導(dǎo)致副反反應(yīng)增加加1.4純純化設(shè)設(shè)備及條條件：防防止純化化能力下下降后增增加疫苗苗的副反反應(yīng)三、生產(chǎn)產(chǎn)材料產(chǎn)產(chǎn)生的殘殘留物質(zhì)質(zhì)檢測1.傳傳代細(xì)胞胞的外源源DNA殘留量量考慮DNA殘留留量考慮殘留留DNA片段大大小2.傳傳代細(xì)胞胞的宿主主蛋白殘殘留量安全性考考慮制品純度度考慮正在建立立Vero細(xì)胞胞殘留蛋蛋白含量量檢測方方法3.原原代細(xì)胞胞宿主成成份如：雞胚胚卵清蛋蛋白4.內(nèi)內(nèi)毒素來源：生生產(chǎn)材料料中含有有，容器器具引入入

總的來講講，制品品純度越越高，上上述殘留留成份越越少，疫疫苗的安安全性越越高企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果(Ave±2SD)總蛋白(ug/ml)卵清蛋白(ng/ml)企業(yè)的結(jié)果檢定所結(jié)果總蛋白卵清蛋白總蛋白卵清蛋白1≤400≤2000244.2±26.62.5±0.8175.8±2.828.3±61.82≤500≤750361.3±36.1551.0±102.3320.7±11.7583.3±115.73≤440≤1000193.0±26.9200.0±0.0212.0±43.5241.0±21.14≤300≤500238.6±16.3337.7±65.9162.2±7.1452.3±39.85≤300≤250248.5±15.1<125199.5±18.6130.9±57.56≤420≤1000281.5±31.0364.1±215.5258.9±29.8313.2±145.97≤540≤800345.8±34.522.6±32.5263.0±11.984.7±57.98≤500≤1000315.6±40.4507.6±119.6/401.8±77.69≤500≤1000374.6±57.4469.2±173.5282.3432.0±86.810≤240≤1000220.0322.0-370.012≤600≤400192.2±12.116.9±6.9192.4±29.787.5±60.513≤600≤1000277.1±13.524.4±11.6223.3±31.532.8±7.214/≤2000/200.0±0.0/187.0±37.015100-330≤100145.0±7.1<0.1129.8±0.86.0±0.7流感疫苗苗總蛋白白、卵清清蛋白檢檢驗結(jié)果果分析四、生產(chǎn)產(chǎn)工藝中中引入的的

殘留留物質(zhì)檢檢測1.培培養(yǎng)基中中成份::不使用用人血清清,可用用人血白白蛋白2.牛牛血清殘殘留(致致敏物質(zhì)質(zhì))3.生生產(chǎn)工藝藝中采用用的化學(xué)學(xué)試劑滅活劑：：甲醛等等滅活試試劑裂解劑：：Tween80,TritonX100,乙乙醚等防腐劑：：硫柳汞汞，苯酚酚，2--苯氧乙乙醇佐劑：氫氫氧化鋁鋁特點：大大多數(shù)為為限度實實驗?zāi)承z測測項目為為生產(chǎn)過過程中的的控制，，或在原原液中進進行檢測測，在成成品中不不含有檢檢測項目目，企業(yè)業(yè)應(yīng)建立立可靠的的檢測方方法并進進行充分分驗證。。如乙醚醚檢測，，如采用用人工嗅嗅覺法則則不可靠靠，而HPLC或氣相相法則更更加準(zhǔn)確確。異常毒性性試驗與與疫苗的的安全性性異常毒性性試驗主主要用于于檢測疫疫苗中與與制品無無關(guān)的任任何毒性性，如錯錯誤添加加、混淆淆等導(dǎo)致致的明顯顯的毒性性。限于劑量量和動物物數(shù)量，，該試驗驗不能充充分反應(yīng)應(yīng)或代替替疫苗的的安全性性。歐美美國家要要求工藝藝驗證后后，一般般不再進進行該項項目常規(guī)規(guī)檢測。。疫苗中的的不安全全因素在在大量人人群使用用時得以以體現(xiàn)只有進行行嚴(yán)格的的生產(chǎn)過過程控制制，采用用可靠、、準(zhǔn)確的的檢測方方法才能能保證疫疫苗的安安全性我國在異異常毒性性檢測中中發(fā)現(xiàn)一一些問題題，如疫疫苗稀釋釋液滲透透壓或凍凍干保護護劑成份份導(dǎo)致的的注射后后瞬間反反應(yīng)。疫苗的有有效性研發(fā)階段段：主要要依賴于于臨床試試驗，在在雙盲、、隨機對對照試驗驗中確定定生產(chǎn)階段段：依靠靠嚴(yán)格的的生產(chǎn)和和質(zhì)量控控制保證證疫苗質(zhì)質(zhì)量（包包括有效效性）的的連續(xù)性性第二部分分：疫苗苗質(zhì)量控控制中的的有有效性考考慮要點點1.生生產(chǎn)用菌菌毒種：：核心問問題1.1與與預(yù)防防疾病的的對應(yīng)關(guān)關(guān)系：不不同血清清型1.2菌菌毒毒株的免免疫原性性：藥典典中規(guī)定定對主種種子進行行免疫原性檢查查，多數(shù)數(shù)活疫苗苗規(guī)定在在人體中中檢查。。如：麻疹疹毒株主主種子批批，接種種健康易易感兒童童至少30名，，抗體陽陽轉(zhuǎn)率不低低于95％。1.3毒毒種傳傳代次數(shù)數(shù)：尤其其是減毒毒活疫苗苗，不同同代次的的免疫原性有有差別。。例如：：OPV疫苗，，毒種傳傳代次數(shù)數(shù)有嚴(yán)格限定定。1.4毒毒種保保藏條件件，一般般為凍干干或低溫溫保藏。。2.生生產(chǎn)用基基質(zhì)傳代細(xì)胞胞和人二二倍體細(xì)細(xì)胞應(yīng)建建立細(xì)胞胞庫系統(tǒng)統(tǒng)，有效效保證生生產(chǎn)疫苗苗質(zhì)量的的連續(xù)性性。3.生生產(chǎn)中控控制培養(yǎng)條件件：培養(yǎng)養(yǎng)基、血血清等的的細(xì)胞增增殖能力力收獲次數(shù)數(shù)：限定定收獲次次數(shù)，細(xì)細(xì)胞老化化導(dǎo)致繁繁殖的病病毒滴度度變化中間品的的保藏條條件：防防止抗原原聚合，，病毒滴滴度下降降包裝材料料：抗原原吸附在在容器上上疫苗有效效性的保保證鑒別試驗驗：證明為本本疫苗，，防止混混淆，尤尤其是多多價疫苗苗有效成份份含量1.活活疫苗滴滴度：盡盡量采用用凍干劑劑型，液液體疫苗苗時需有有合適的的保護劑劑例如：OPV液液體疫苗苗中添加加1mol/L的MgCl,--20°C凍存保藏藏2.滅滅活疫苗苗中抗原原含量采用可靠靠的方法法準(zhǔn)確測測定：基基于抗原原抗體的的含量測測定采用用平行線線法效期末標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)：臨臨床試驗驗確定的的抗原含含量放行標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)：結(jié)合合穩(wěn)定性性考核數(shù)數(shù)據(jù)在效效期末標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)上適適當(dāng)增加加抗原含量，保保證效期期末標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)例如：流流感疫苗苗中有效效成份標(biāo)標(biāo)示量為為15ug/劑劑,穩(wěn)穩(wěn)定性考考核一年年下降2ug//劑,則則企業(yè)業(yè)放行標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)為為17//劑。。3.制制品的裝裝量：附附加量保保證可抽抽出體積積流感疫苗苗血凝素素趨勢圖圖重組乙型型肝炎疫疫苗穩(wěn)定性：：原液和半半成品：：制訂儲儲藏條件件下的效效期成品：進進行穩(wěn)定定性檢查查對凍干減減毒活疫疫苗：熱熱穩(wěn)試驗驗，熱穩(wěn)穩(wěn)后滴度度達(dá)到效效期末標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)水分含量量測定：：水分含含量影響響穩(wěn)定性性，應(yīng)低低于藥典典中標(biāo)準(zhǔn)準(zhǔn)效力試驗驗參考品品：效力試驗驗是疫苗苗有效性性的核心心，基于于生物活活性測定定方法的的高變異異性，在在效力測測定時必必須包含含有明確確含量標(biāo)標(biāo)示（以以及變異異范圍））的參考考品，以以便：1.證證明該次次測定有有效2.對對待測樣樣品進行行標(biāo)定3.監(jiān)監(jiān)測效力力試驗方方法和參參考品的的變化趨趨勢若企業(yè)采采用自制制參考品品，應(yīng)對對國際參參考品或或國家參參考品進進行校正正，采用用多次測測定數(shù)值值進行統(tǒng)統(tǒng)計分析析，確定定含量及及變異范范圍，并并保藏在在合適條條件下，，制訂參參考品的的趨勢圖圖，監(jiān)測測參考品品的變化化。脊灰國家家參考品品滴定趨趨勢圖疫苗有效效性總結(jié)結(jié)臨床試驗驗確定包括：劑劑量探索索免疫原性性：有替替代指標(biāo)標(biāo)時保護效果果：最有有說服力力的證據(jù)據(jù)上市后監(jiān)監(jiān)測：大大量人群群應(yīng)用后后的實際際效果生產(chǎn)中進進行控制制保證疫疫苗的有有效性包括：保保證生產(chǎn)產(chǎn)的連續(xù)續(xù)性準(zhǔn)確的效效力試驗驗方法穩(wěn)定性定義生物制品品批簽發(fā)發(fā)，是指指國家對對疫苗類類制品、、血液制制品、用用于血源源篩查的的體外生生物診斷斷試劑以以及國家家藥品管管理當(dāng)局局規(guī)定的的其他生生物制品品，每批批制品出出廠上市市或進口口時實行行強制性性資料審審查、實實驗室檢檢驗后決決定是否否簽發(fā)上上市的管管理制度度。生物制品品批簽發(fā)發(fā)是一項項重要的的科學(xué)的的生物制制品管理理制度。。－國家食食品藥品品監(jiān)督管管理局第第11號令：生生物制品品批簽發(fā)發(fā)管理辦辦法生物制品品批簽發(fā)發(fā)我國實行行批簽發(fā)發(fā)的法律律基礎(chǔ)中華人民民共和國國藥品管管理法（（第四十十一條））中華人民民共和國國藥品管管理法實實施條例例（第三三十九條條）疫苗流通通及預(yù)防防接種管管理條例例(第十七條條)生物制品品批簽發(fā)發(fā)管理辦辦法進口藥品品管理辦辦法生物制品品批簽發(fā)發(fā)生物制品品批簽發(fā)發(fā)批簽發(fā)產(chǎn)產(chǎn)品的銷銷售《疫苗流通通和預(yù)防防接種管管理條例例》第十七條條規(guī)定:疫苗生產(chǎn)產(chǎn)企業(yè)、、疫苗批批發(fā)企業(yè)業(yè)在銷售售疫苗時時，應(yīng)提提供由藥藥品檢驗驗機構(gòu)依依法簽發(fā)發(fā)的生物物制品每每批檢驗驗合格或或者審核核批準(zhǔn)證證明復(fù)印印件，并并加蓋企企業(yè)印章章。疫苗批發(fā)發(fā)企業(yè)經(jīng)經(jīng)營進口口疫苗的的，還應(yīng)應(yīng)當(dāng)提供供進口藥藥品通關(guān)關(guān)單復(fù)印印件，并并加蓋企企業(yè)印章章。疾病預(yù)防防控制機機構(gòu)、接接種單位位在接收收或者購購進疫苗苗時，應(yīng)應(yīng)當(dāng)向疫疫苗生產(chǎn)產(chǎn)企業(yè)、、疫苗批批發(fā)企業(yè)業(yè)索取前前款規(guī)定定的證明明文件，，并保存存至超過過疫苗有有效期2年備查””。我國批簽簽發(fā)實施施過程準(zhǔn)備階段段試行階段段正式實施施階段2001年12月我國開開始試行行批簽發(fā)發(fā)（EPI5種制品））2002年12月頒布了了《生物制品品批簽發(fā)發(fā)管理辦辦法（試試行）》2003年1月15日開始正正式實行行批簽發(fā)發(fā)2004年6月頒布了了《生物制品品批簽發(fā)發(fā)管理辦辦法》2006年1月1日對所有有疫苗實實施批簽簽發(fā)管理理2007年12月31日對所有有血液制制品實施施批簽發(fā)發(fā)管理生物制品品批簽發(fā)發(fā)生物制品品批簽發(fā)發(fā)執(zhí)行批簽簽發(fā)機構(gòu)構(gòu)國家食品品藥品監(jiān)監(jiān)督管理理局主管管全國批批簽發(fā)工工作。由國家藥藥品監(jiān)督督管理當(dāng)當(dāng)局指定定藥品檢檢驗機構(gòu)構(gòu)承擔(dān)批批簽發(fā)檢驗驗和資料料審核。。生物制品品批簽發(fā)發(fā)批簽發(fā)制制品質(zhì)量量執(zhí)行標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)生物制品品批簽發(fā)發(fā)檢驗和和/或資料審審核的標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)行的《中國藥典典》國家食品品藥品監(jiān)監(jiān)督管理理局批準(zhǔn)準(zhǔn)的其他他藥品標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)企業(yè)藥品品注冊標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)進口藥品品注冊標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)同時需提提供制品品生產(chǎn)國國政府的的批簽發(fā)發(fā)合格證證

批簽發(fā)方方式資料審查查資料審查查及實驗驗室檢驗驗樣品檢驗驗全部項目目檢驗部分項目目檢驗生物制品品批簽發(fā)發(fā)批簽發(fā)程程序（1）生產(chǎn)企業(yè)檢驗向授權(quán)省級所申請登記資料審查和現(xiàn)場抽樣資料及樣品中檢所資料審查和檢驗部分樣品留授權(quán)省級所部分檢驗合格證或不合格通知進口批簽簽發(fā)程序序（2）進口報驗口岸藥品監(jiān)督管理局通關(guān)海關(guān)監(jiān)管資料及樣品中檢所資料審查和檢驗口岸藥品檢驗所合格證或不合格通知生物制品品批簽發(fā)發(fā)企業(yè)申請請批簽發(fā)發(fā)時應(yīng)提提供的資資料批準(zhǔn)文件件（下列列其中之之一）藥品批準(zhǔn)準(zhǔn)文號進口藥品品注冊證證或醫(yī)藥藥產(chǎn)品注注冊證體外生物物診斷試試劑批準(zhǔn)準(zhǔn)注冊證證明提交資料料生物制品品批簽發(fā)發(fā)申請表表批制造及及檢驗記記錄摘要要檢驗所需需的同批批號樣品品企業(yè)質(zhì)量量保證部部門負(fù)責(zé)責(zé)人簽字字的質(zhì)量量保證證證明件進口預(yù)防防用疫苗苗類制品品應(yīng)同