實(shí)驗(yàn)3環(huán)境微生物的檢測實(shí)驗(yàn)3環(huán)境微生物的檢測實(shí)驗(yàn)3環(huán)境微生物的檢測V:1.0精細(xì)整理，僅供參考實(shí)驗(yàn)3環(huán)境微生物的檢測日期：20xx年X月實(shí)驗(yàn)三環(huán)境微生物的檢測一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.了解周圍環(huán)境中微生物的分布情況。2.懂得無菌操作在微生物實(shí)驗(yàn)中的重要性。3.了解四大類微生物的菌落特征。二、實(shí)驗(yàn)原理在我們周圍的環(huán)境中存在著種類繁多的、數(shù)量龐大的微生物。土壤、江河湖海、塵埃、空氣、各種物體的表面以及人和動物體的口腔、呼吸道、消化道等都存在著各種微生物。由于它們體積微小，人們用肉眼無法觀察到它們個體的存在。但是只要稍加留意，我們就可以在發(fā)霉的面包、朽木上看到某些微生物群體。這些現(xiàn)象表明，自然界只要有微生物可以利用的物質(zhì)和環(huán)境條件，微生物就可以在其上生長繁殖。據(jù)此，我們在實(shí)驗(yàn)室里就可以用培養(yǎng)基來培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)基是用人工配制的、適合微生物生長繁殖和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合養(yǎng)料。其中含有微生物所需要的六大營養(yǎng)要素：碳源、氮源、無機(jī)鹽、生長因子、氣體和水分。此外，根據(jù)不同的微生物的要求，在配制培養(yǎng)基時還需用酸液或堿液調(diào)節(jié)至適宜的pH。配制好的培養(yǎng)基必須進(jìn)行滅菌。所謂滅菌是指采用各類的物理或化學(xué)因素，使物體內(nèi)外的所有微生物喪失其生長繁殖能力的措施。經(jīng)過滅菌后的物體是無菌的。消毒是與滅菌完全不同的概念，它是指用較溫和的物理因素殺死物體表面和內(nèi)部病原微生物的一種常用的衛(wèi)生措施。滅菌的方法較多，廣泛使用的是高溫滅菌，其中最常用的是高壓蒸汽滅菌法。此法是把待滅菌的物品放在一個可密閉的加壓蒸汽滅菌鍋中進(jìn)行的。在1.05kg/cm2的蒸汽壓力下，溫度可達(dá)121℃。一般只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的各種孢子。微生物的接種技術(shù)是生物科學(xué)研究中的一項(xiàng)最基本操作技術(shù)。為了確保純種不被雜菌污染，在整個接種過程中，必須進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作。在實(shí)驗(yàn)過程中必須牢固樹立無菌概念，經(jīng)常保持實(shí)驗(yàn)臺及周圍環(huán)境的清潔，嚴(yán)格無菌操作，避免雜菌的污染，這是保證實(shí)驗(yàn)成功的必要條件。如將微生物接種到適合其生長的固體培養(yǎng)基表面，在適宜的溫度下(一般細(xì)菌37℃：霉菌等28℃)，培養(yǎng)一段時間(一般24~48h)后，少量分散的菌體或孢子就可生長繁殖成肉眼可見的細(xì)胞群體，此即菌落。如平板上的菌落是由單個細(xì)胞(或單個孢子)生長繁殖而成的，就是一個純種細(xì)胞群或克隆；若培養(yǎng)后大量菌落聚集在一起形成的為菌苔。不同種的微生物可形成大小、形態(tài)各異的菌落，根據(jù)微生物菌落形態(tài)的不同，可初步鑒別出四大類微生物：細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌。細(xì)菌的菌落呈圓形、較小而薄、透明或不透明、質(zhì)地“細(xì)膩”，有的具有色澤，有的邊緣不整齊，有的表面濕潤、光滑，有的表面干燥有褶皺。此外，細(xì)菌常因分解含氮化合物而產(chǎn)生臭味。酵母菌的菌落通常比細(xì)菌菌落大，圓形、厚、不透明、色素單一，多為乳白，少數(shù)為橙或紅色。酵母菌因普遍能發(fā)酵含碳有機(jī)物產(chǎn)醇，故菌落多伴有酒香味。防線菌菌落小而致密，或堅(jiān)硬、或呈粉狀。不少放線菌還產(chǎn)生特殊的土腥味。霉菌菌落大而疏松、或大而緊密。氣生菌絲會發(fā)育形成一定形狀、構(gòu)造和色澤的子實(shí)器官，所以菌落表面往往有肉眼可見的構(gòu)造和顏色。三、實(shí)驗(yàn)材料人體表和空氣中的微生物。四、實(shí)驗(yàn)器材與試劑1.器材恒溫培養(yǎng)箱、無菌平皿、電爐、酒精燈、火柴、無菌棉簽和記號筆。2.試劑牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基、酵母膏葡萄糖培養(yǎng)基(簡稱YPD)、高氏一號培養(yǎng)基和查氏培養(yǎng)基。五、實(shí)驗(yàn)操作=1\*ROMANI.融化培養(yǎng)基將裝有無菌培養(yǎng)基的三角瓶置水浴中煮沸，待培養(yǎng)基融化后取出，當(dāng)冷至50~60℃左右時，進(jìn)行下一步。=2\*ROMANII、倒平板有持皿法和疊皿法，操作要點(diǎn)如下：1.持皿法(1)將無菌培養(yǎng)皿疊放在酒精燈左側(cè)，以便拿取。(2)點(diǎn)燃酒精燈。(3)酒精燈旁，左手握三角瓶底部，傾斜三角瓶，右手旋松棉塞，用右手小指與小尾魚際(即小指邊緣)夾住棉塞并將其拔出(切勿將棉塞放在桌上)，隨之將瓶口在火焰上過一下(不可灼燒，以防爆裂)，以殺死可能沾在瓶口的雜菌。然后將三角瓶從左手換至右手(用拇指、食指和中指拿住三角瓶的底部)。操作中瓶口應(yīng)保持在火焰2~3cm，瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。左手拿起一套平皿，用無名指和小指托住皿底，用中指和拇指夾住皿蓋，食指于皿蓋上為支點(diǎn)，在火焰旁，打開皿蓋，讓三角瓶伸入，隨后倒入培養(yǎng)基。一般倒入15ml左右培養(yǎng)基即可鋪滿整個皿底。蓋上皿蓋，置水平位置待凝。然后將三角瓶移至左手，瓶口在次過火并塞緊瓶蓋。2.疊皿法此法適于在超干凈臺上操作，基本步驟同持皿法。不同之處是左手不必持皿，而是將瓶皿疊放在酒精燈的左側(cè)并靠近火焰。按上述方法用右手拿三角瓶，左手打開最上面的皿蓋，倒入培養(yǎng)基，蓋上皿蓋后即移至水平位置待凝。再依次倒下面的平皿。操作中瓶口始終向著火焰，以防空氣中微生物的污染。=3\*ROMANIII、貼標(biāo)簽待培養(yǎng)基完全凝固后，在皿底帖上標(biāo)簽，注明檢測類型，組別及日期(也可用記號筆書寫在皿底)=4\*ROMANIV、檢測方法環(huán)境中微生物種類多樣，檢測方法也各異，先選幾種列舉如下：1.空氣檢測實(shí)驗(yàn)室空氣中的微生物時，只要打開無菌平板的皿蓋，讓其暴露在空氣中一段時間(5~10min)然后將皿蓋蓋上即可。2.桌面檢測實(shí)驗(yàn)臺桌面微生物是，可用一根無菌棉簽，先在無菌平板的圖4-1含菌棉簽平板劃線示意圖左：開啟皿蓋法右：劃線示意圖一個區(qū)域內(nèi)濕潤和試劃幾下，然后用其擦抹桌面等物體表面，在以此棉簽在平板的另一區(qū)域作來回劃線接種(如圖4-1)。本操作應(yīng)以無菌操作要求進(jìn)行，即在火焰旁用左手拿起平板，用中指無名指和小指托住皿底部，用食指和大拇指夾住皿蓋并開成一縫，右手持棉簽在培養(yǎng)基表面劃線接種，無菌棉簽濕潤和試劑區(qū)可作為無菌對照。3.頭發(fā)移去放在桌面上的無菌平板的皿蓋，是頭發(fā)部位位于平板的上方，并用手指撥動頭發(fā)數(shù)次，在蓋上皿蓋即可。4.手指可用未洗的手指先在無菌平板的培養(yǎng)基一側(cè)(約一半的面積)作劃線接種，并在皿底作好標(biāo)記。然后用肥皂、流水洗手，用洗凈的手指于平板培養(yǎng)基的另一側(cè)作同樣的劃線接種，蓋好皿蓋。待培養(yǎng)后比較兩雜菌生長的情況。5.口腔打開無菌平板培養(yǎng)基的皿蓋，使口對著平板培養(yǎng)基的表面，以咳嗽或打噴嚏的方式接種，然后蓋上皿蓋。=5\*ROMANV、培養(yǎng)將以上各種檢測平板倒置于28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，至下周實(shí)驗(yàn)時觀察并計數(shù)各平板上的菌落數(shù)。=6\*ROMANVI、觀察注意觀察不同類型菌落的大小、外形和顏色等特征，將觀察結(jié)果記錄在實(shí)驗(yàn)