第1節(jié)DNA重組技術(shù)的

基本工具第一章基因工程（人工、體外操作、分子水平、定向改造生物性狀）

蘇云金桿菌含有一種可以合成毒蛋白的基因。讓細(xì)菌的毒蛋白基因在棉花細(xì)胞中表達(dá)，可培育出抵抗棉鈴蟲害的抗蟲棉。蘇云金桿菌毒蛋白（Bt基因）（供體細(xì)胞）（受體細(xì)胞）（Bt基因）1.1基本工具一、“分子手術(shù)刀”——限制酶主要來源：原核生物Ⅰ

基因工程

切割外源DNA，自身防御尋根問底p4左限制酶的種類與命名：現(xiàn)在已經(jīng)從約300種微生物中分離出了約4000種限制酶。EcoRⅠSmaⅠ粘質(zhì)沙雷氏桿菌（Serratiamarcesens）大腸桿菌（EscherichiacoliR）練習(xí)：流感嗜血桿菌(Haemophilusinfluenzae)的d菌株中先后分離到3種限制酶，則分別命名為:HindⅠ、HindⅡ、HindⅢDNA雙鏈（脫氧核苷酸鏈）AAATGCTATTCGADNA（脫氧核糖核酸）堿基磷酸二酯鍵脫氧核糖磷酸脫氧核苷酸1.1基本工具一、“分子手術(shù)刀”——限制酶主要來源：原核生物作用特點(diǎn)：作用位點(diǎn)：AAATGCTATTCGAⅠ識(shí)別雙鏈DNA分子特定的（脫氧）核苷酸序列并切割磷酸二酯鍵

基因工程

DNA雙鏈（脫氧核苷酸鏈）EcoRⅠ（在G與A之間切割）黏性末端中軸線AAATGCTATTCGA磷酸二酯鍵EcoRⅠ（在G與A之間切割）SmaⅠ（在G與C之間切割）黏性末端平末端中軸線中軸線

回文序列圖1-3切割DNA分子時(shí)產(chǎn)生的兩種不同末端（箭頭表示酶的切割位置）作用結(jié)果1.1基本工具二、“分子縫合針”——DNA連接酶E·coliDNA連接酶T4DNA連接酶來源功能大腸桿菌T4噬菌體恢復(fù)磷酸二酯鍵只能連接黏性末端能連接黏性末端和平末端(效率較低)相同點(diǎn)差別Ⅰ

基因工程

EcoRⅠ切此位點(diǎn)EcoRⅠ切此位點(diǎn)雙鏈斷開不同來源的DNA片段結(jié)合圖1-4DNA分子的切割和連接E·coliDNA連接酶尋根問底DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎?為什么?1)只能將單個(gè)核苷酸連接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯鍵形成磷酸二酯鍵1)在兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵2)以一條DNA鏈為模板，將單個(gè)核苷酸通過磷酸二酯鍵連接成一條互補(bǔ)的DNA鏈2)將DNA雙鏈上的兩個(gè)缺口同時(shí)連接起來，不需要模板DNA分子磷酸二酯鍵形成黏性末端或平末端磷酸二酯鍵形成重組DNA分子DNA分子片段基因工程DNA復(fù)制《導(dǎo)》p2EcoRⅠ切此位點(diǎn)EcoRⅠ切此位點(diǎn)雙鏈斷開不同來源的DNA片段結(jié)合圖1-4DNA分子的切割和連接E·coliDNA連接酶DNA分子磷酸二酯鍵形成黏性末端或平末端脫氧核苷酸磷酸二酯鍵形成重組DNA分子DNA分子片段磷酸二酯鍵形成新的DNA分子DNA分子氫鍵形成單鏈DNA分子基因工程DNA復(fù)制《導(dǎo)》p21.1基本工具三、“分子運(yùn)輸車”——運(yùn)載體種類：條件：