抗原是指能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答而生成抗體和致敏淋巴細(xì)胞等免疫應(yīng)答產(chǎn)物，并能與之發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)。

抗體是在抗原物質(zhì)的刺激下，由漿細(xì)胞產(chǎn)生的,能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合，并具有多種生物學(xué)功能的球蛋白。通常，人們又將抗體稱(chēng)為免疫球蛋白

[血清學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)

]抗原的基本性質(zhì)。（1）異源物質(zhì)：在正常情況下，只有異體物質(zhì)進(jìn)入體內(nèi)才可能具有免疫原性。一般說(shuō)，這種異體物質(zhì)必須是動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生抗體的細(xì)胞所未接觸過(guò)的異物；不同種屬的異體抗原稱(chēng)之為異種抗原。同種間不同個(gè)體的某些成分，也有一定的抗原性，此類(lèi)同種動(dòng)物不同個(gè)體的抗原稱(chēng)之為異體抗原。在特殊情況下，自身組織也會(huì)產(chǎn)生免疫原性而導(dǎo)致自身免疫病，此類(lèi)抗原稱(chēng)之為自身抗原?？乖幕拘再|(zhì)2）分子物質(zhì)：抗原的免疫原性與分子量的大小密切相關(guān)，通常情況下，具有免疫原性的物質(zhì)，分子量須在10000以上。因大分子的膠體物質(zhì)在體內(nèi)留存時(shí)間越長(zhǎng)，越有利于持續(xù)刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫。分子量小于5000的物質(zhì)，免疫原性往往很弱；分子量在1000以下的小分子物質(zhì)為半抗原，通常沒(méi)有免疫原性，但與載體結(jié)合后可以獲得免疫原性?？乖幕拘再|(zhì)3）特異性：抗原與抗體或致敏淋巴細(xì)胞的結(jié)合具有高度的特異性，如布氏桿菌病的抗體只能和布氏桿菌抗原結(jié)合發(fā)生反應(yīng)，不能與結(jié)核菌抗原結(jié)合起反應(yīng)。這種特異性是由抗原分子表面具有特殊立體構(gòu)型、有免疫活性的化學(xué)基因——抗原決定簇。若兩種自然物質(zhì)之間含有部分相同的抗原決定簇，就會(huì)產(chǎn)生抗原交叉反應(yīng)。即由A抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，與已有相應(yīng)決定簇的B抗原結(jié)合；而由B抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體，也能與有相應(yīng)決定簇的抗原結(jié)合。這種交叉反應(yīng)可以存在于不同物質(zhì)之間，也可以存在于同抗原的不同決定簇之間。

1、初次反應(yīng)：抗原初次進(jìn)入機(jī)體后，需要經(jīng)過(guò)一定的潛伏期，才產(chǎn)生抗體，其長(zhǎng)短與抗原的性質(zhì)有關(guān)，如菌苗等顆粒性經(jīng)過(guò)5~7天血液中出現(xiàn)抗體，類(lèi)毒素等血液性抗原，則在2~3周才有抗體出現(xiàn)。初次反應(yīng)產(chǎn)生的抗體少，持續(xù)的時(shí)間也短。2、再次反應(yīng)：機(jī)體當(dāng)再次接受相同抗原注射后，經(jīng)過(guò)陰性期后，抗體大量增加。比初次高達(dá)100-1000倍。血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)

1、抗原抗體的結(jié)合具有特異性

在血清學(xué)反應(yīng)中，只有抗原（或抗體）和相應(yīng)的抗體（或抗原）才能結(jié)合。

2、抗原抗體是分子表面的結(jié)合

并且是可逆的。

抗原抗體發(fā)生結(jié)合后，復(fù)合物相當(dāng)穩(wěn)定，但是有可逆性。經(jīng)分離后重新得到的抗原或抗體的性質(zhì)仍不改變。

[血清學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)

]血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)

3、抗原抗體按一定的分子比例結(jié)合

只有在分子比例合適時(shí)才會(huì)出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。若兩者比例不合適，即抗體過(guò)?；蚩乖^(guò)剩，都不能形成大塊復(fù)合物，因而不能出現(xiàn)可見(jiàn)反應(yīng)。在結(jié)合中，一般認(rèn)為抗原是多價(jià)的，抗體是二價(jià)的。4、高敏感性

[血清學(xué)檢驗(yàn)基礎(chǔ)知識(shí)

]大腸桿菌兔免疫血清的制備

[目的與內(nèi)容]目的：學(xué)習(xí)和掌握免疫血清的制備方法，為凝集反應(yīng)和沉淀反應(yīng)準(zhǔn)備凝集素和沉淀素。內(nèi)容：抗大腸桿菌血清(凝集素)的制備。[實(shí)驗(yàn)材料和用具

]體重2~3kg的健康家兔（雄）、大腸桿菌(E.coli)斜面菌種。牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基、0.3%甲醛液(用0.85%生理鹽水配制)、75%酒精棉球、碘酒棉球、消毒干棉球；細(xì)菌比濁標(biāo)準(zhǔn)管、無(wú)菌吸管、無(wú)菌注射器(5mL、20mL)、注射針頭(5號(hào)，B19)、無(wú)菌試管、裝有玻璃珠的無(wú)菌血清瓶、解剖用具(解剖臺(tái)、兔頭夾、止血鉗、解剖刀、眼科剪刀、鑷子、動(dòng)脈夾等)、雙面刀片、絲線(xiàn)、玻璃管、膠管、離心機(jī)及無(wú)菌離心管、普通冰箱、超凈工作臺(tái)、水浴箱。[操作步驟

]1、抗原的制備(1)取37℃恒溫培養(yǎng)24h的LB大腸桿菌斜面。(2)每支斜面菌種中加入5mL0.3%甲醛液，小心地把菌苔洗下制成菌液。(3)用無(wú)菌清潔吸管，吸取以上菌液，注入裝有玻璃珠的無(wú)菌瓶?jī)?nèi)，振蕩10~25min，分散菌塊制成菌懸液。(4)將含菌懸液的血清瓶置于60℃的水浴箱中水浴1h，并不時(shí)搖動(dòng)，把菌殺死。(5)將菌懸液重新接種至牛肉膏蛋白胨斜面培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)24～48h，如有菌生長(zhǎng)，則要在60℃水溫中再處理。若無(wú)菌生長(zhǎng)則進(jìn)行OD值測(cè)定其含菌量。2、免疫：選擇2～3kg健康免，從耳緣靜脈采血2mL，分離出血清。該血清與準(zhǔn)備免疫用的抗原進(jìn)行凝集反應(yīng)，以檢查有無(wú)天然凝集素。如沒(méi)有或只有極微量時(shí)，該動(dòng)物便可用來(lái)免疫。[操作步驟

]耳緣靜脈注射。將家兔放在家兔固定箱內(nèi)，一手輕輕拿起耳朵，用碘酒棉花球在耳外側(cè)邊緣靜脈處消毒，然后用酒精棉球涂擦，并用手指輕輕彈幾下靜脈血管，使其擴(kuò)張。消毒細(xì)菌懸液瓶塞后，用無(wú)菌注射器及5號(hào)針頭吸取菌液，沿著靜脈平行方向刺入靜脈血管，并慢慢注入菌液，注射完畢，用干棉球按壓住注射處，然后撥出針頭，并壓迫血管注射處片刻，以防止血液向外溢出。[操作步驟]4、試血：通常于最后一次注射后7~11d，從兔耳緣靜脈抽取2mL血，分離析出血清，用試管凝集反應(yīng)測(cè)定抗血清效價(jià)。效價(jià)合格即可大量采血，如效價(jià)不高，可繼續(xù)注射抗原免疫，提高效價(jià)。[操作步驟]5、采血：采血分為心臟采血和頸動(dòng)脈放血。心臟采血：使免疫家兔仰臥于臺(tái)上，四肢固定。用左手探明心臟博動(dòng)最明顯處，用碘酒棉球與酒精棉球消毒后，右手握消毒過(guò)的20mL注射器和B19號(hào)針頭，在上述部位的肋骨間隙與胸部呈45°角刺入心臟，微微抽取針筒，此時(shí)可發(fā)現(xiàn)血液涌入注射器中便可徐徐抽取血液。2.5kg家兔一次可取血20~30mL。取血完畢后，用消毒棉球按壓進(jìn)針處迅速撥出針頭，進(jìn)針處用棉球繼續(xù)壓住。并馬上將所采的血液注入無(wú)菌大試管內(nèi)，斜放，待血液凝固后，置于37℃恒溫箱中30min，使血清充分析出，然后放入4~6C冰箱中。[操作步驟]頸動(dòng)脈采血：將免疫家兔固定于兔臺(tái)上，用少量乙醚麻醉，剪去頸部的毛，然后用碘酒棉球和酒精棉球消毒。沿正中線(xiàn)將頸部皮膚切開(kāi)到鎖骨間，撥開(kāi)肌膜，暴露出氣管，在氣管深側(cè)處找到搏動(dòng)的頸動(dòng)脈。小心地將頸動(dòng)脈和迷走神經(jīng)剝離分開(kāi)4~5cm。用鑷子拉出頸動(dòng)脈，用絲線(xiàn)扎緊血管的離心端，在血管的向心端用止血鉗夾住。然后用眼科剪在絲線(xiàn)與止血鉗之間的血管上剪一個(gè)V型小切口，將彎咀眼科鑷自切口插入，使其張開(kāi)，同時(shí)將一小玻管插入，用絲線(xiàn)扎緊，以防玻管脫漏。玻管另一端接入一條膠管，膠管通入大試管(或大離心管)內(nèi)，然后將止血鉗慢慢松開(kāi)，使血液流入試管，直至動(dòng)物死亡，無(wú)血液流出為止。。[操作步驟](4)抗血清分離與保存：取凝固血液于4000r/min，離心20min，獲得抗血清(即凝集素)。加入石炭酸或硫柳汞使其濃度分別達(dá)到0.5%或0.01%。測(cè)定抗血清的效價(jià)后，封好瓶口，貼好標(biāo)簽，注明抗血清名稱(chēng)、效價(jià)及日期，置冰箱保存?zhèn)溆?。由于每個(gè)動(dòng)物對(duì)免疫反應(yīng)不同，產(chǎn)生的抗體效份有高有低，所以在制備抗血清時(shí)至少免疫兩只家兔。如須保留該免疫動(dòng)物，剛采取心臟直接取血