實驗九

常見病原菌的病原學檢查

實驗目的要求1、掌握常見病原菌的主要生物學性狀2、熟悉常見病原菌有關的鑒定方法主要內(nèi)容：病原性球菌腸道桿菌一、葡萄球菌（一）葡萄球菌的形態(tài)、染色和血平板上的生長情況材料：1、菌種：金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌培養(yǎng)物2、培養(yǎng)基：血平板3、其他：無菌生理鹽水、載玻片、革蘭染液方法：1、分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：分別取三種葡萄球菌培養(yǎng)物，用分離劃線方法接種血平板，37℃培養(yǎng)18-24h以后觀察結果。2、革蘭染色、觀察形態(tài)學特征：取葡萄球菌培養(yǎng)物少許涂片，革蘭染色、鏡檢。結果觀察1、菌落觀察2、形態(tài)學觀察（二）葡萄球菌生化反應

葡萄球菌觸酶試驗：

(-)(+)H2o2H2oo2氧化氫酶+菌種：葡萄球菌培養(yǎng)物試劑：3%過氧化氫方法：見右圖結果：見右圖二、腸道桿菌（一）腸道桿菌的形態(tài)、染色及在選擇培養(yǎng)基上的生長情況材料：1、菌種：糞便標本或大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌培養(yǎng)物2、培養(yǎng)基：SS平板、EMB3、其他：無菌生理鹽水、載玻片、革蘭染液伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基（ＥＭＢ）選擇培養(yǎng)原理：此培養(yǎng)基為弱選擇性培養(yǎng)基。以伊紅美蘭作指示劑．（１）大腸桿菌分解乳糖產(chǎn)酸時染上伊紅，因為伊紅和美蘭結合所以菌落不是紅色而呈現(xiàn)紫黑色，且有金屬光澤(大腸桿菌)或棕色(產(chǎn)氣桿菌)，扁平混濁，而較大邊緣色淡的菌落。（２）致病菌的菌落為無色半透明、園形，中等大小，邊緣整齊的菌落，在靠近大腸桿菌的可疑菌落往往呈現(xiàn)淡蘭色。結果觀察1、菌落觀察2、形態(tài)學觀察SS平板沙門氏菌：無色透明菌落，有黑色中心

志賀氏菌：無色透明菌落。SS或EMB培養(yǎng)基生長現(xiàn)象觀察大腸桿菌傷寒桿菌痢疾桿菌變形桿菌SS菌落的形態(tài)特征EMB菌落的形態(tài)特征腸道桿菌形態(tài)學觀察（二）腸道桿菌生化反應及動力試驗

材料：1、菌種：大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、變形桿菌培養(yǎng)物2、培養(yǎng)基：克氏雙糖斜面培養(yǎng)基、生化反應管、半固體培養(yǎng)基3、其他：接種環(huán)、接種針、酒精燈等?？耸想p糖斜面培養(yǎng)基生化反應原理該培養(yǎng)基含葡萄糖與乳糖的比例為1:10，并含硫酸亞鐵和指示劑酚紅。大腸桿菌發(fā)酵乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，所以上層呈黃色，直立段有氣泡存在．腸道病原菌不能發(fā)酵乳糖，只能發(fā)酵葡萄糖，分解葡萄糖產(chǎn)酸，使PH下降，因斜面部分先呈現(xiàn)黃色，由于葡萄糖含量少，所生之酸接觸空氣而氧化，又因細苗的生長利用含氮物質生成堿性化合物，所以斜面部分后來又變成紅色．由于直立段(底層)呈厭氧狀態(tài)，細菌發(fā)酵葡萄糖所生的酸不被氧化，所以一直呈黃色。大腸桿菌產(chǎn)氣，有動力(沿穿刺線向周圍擴散生長)傷寒桿菌有動力，而痢疾桿菌則沒有動力．某些細菌如變形桿菌，乙型副傷寒桿菌能分解培養(yǎng)基中含硫氨基酸（如胱氨酸）產(chǎn)生硫化氫、硫化氫與硫酸亞鐵中的亞鐵離子結合形成黑色的硫化鐵，而痢疾桿菌不產(chǎn)生硫化鐵．生化反應管原理（2）糖發(fā)酵試驗，細菌具有多種酶系統(tǒng)能分解糖類，產(chǎn)酸產(chǎn)氣。不同的細菌對各種糖類的分解不同，因而可以利用糖發(fā)酵進行各種細菌(特別是腸道細菌)的鑒別。大腸桿菌能發(fā)酵乳糖、葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣。志賀痢疾桿菌、沙門氏菌、變形桿菌不分解乳糖，但能分解葡萄糖產(chǎn)酸。宋內(nèi)氏痢疾桿菌遲緩發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，能分解葡萄糖產(chǎn)酸。生化反應管原理（3）硫化氫試驗：某些細菌能分解培養(yǎng)基中硫氨基酸（如胱胺酸）產(chǎn)生硫化氫、硫化氫與硫酸亞鐵中的亞鐵離子結合形成黑色的硫化鐵，變形桿菌，乙型副傷寒桿菌能產(chǎn)生硫化鐵痢疾桿菌不產(chǎn)生硫化鐵。

結果觀察大腸桿菌傷寒桿菌痢疾桿菌變形桿菌克氏雙糖鐵葡萄糖乳糖硫化氫動力尿素H2S生化反應管葡萄糖乳糖+結果觀察大腸桿菌傷寒桿菌痢疾桿菌變形桿菌克氏雙糖鐵葡萄糖乳糖硫化氫動力尿素H2S