第七章革蘭陰性球菌

李向陽

奈瑟菌屬（Neisseria）

布蘭漢菌屬（Branhamella）概述“伯杰鑒定細(xì)菌學(xué)手冊”第9版將奈瑟菌屬和布蘭漢菌屬歸于群4，將奈瑟菌屬、莫拉菌屬、金氏菌屬和不動桿菌屬都?xì)w于奈瑟菌科奈瑟菌屬中的淋病奈瑟菌（N.gonorrhoeae）、腦膜炎奈瑟菌（N.meningitidis）以及莫拉菌屬中的卡他莫拉菌（M.catarrhalis）是主要的致病菌。目前對卡他莫拉菌是歸屬尚未定論二、腦膜炎奈瑟菌臨床意義寄居于人的鼻咽腔、口腔粘膜上，通過呼吸道分泌物或空氣微滴核而傳播。流行性腦脊髓膜炎冬末春初，多為學(xué)齡兒童、青少年感染后多為隱性感染，少數(shù)可發(fā)展為菌血癥或敗血癥，進(jìn)而累及腦、脊髓膜，形成化膿性腦膜炎可出現(xiàn)嚴(yán)重的臨床癥狀如發(fā)熱、頭痛、腦膜刺激癥陽性、甚至休克和DIC等；菌血癥和細(xì)菌的損傷作用使約半數(shù)患者出現(xiàn)皮下瘀斑腦膜炎奈瑟菌臨床意義盡管可以在鼻咽部形成帶菌狀態(tài)，但侵襲性的腦膜炎奈瑟菌感染多為新近感染，急性發(fā)病，發(fā)病時機體內(nèi)缺乏殺菌抗體。主要致病物質(zhì)是脂多糖依據(jù)莢膜多糖的抗原成分可分為：A、B、C、……等13個血清群，我國A群占95.8%，其余為B、C等群。淋病奈瑟菌臨床意義淋病的病原菌主要通過性接觸直接感染在分娩時通過產(chǎn)道感染新生兒臨床表現(xiàn)為：單純性淋病盆腔炎口咽部和肛門直腸淋病淋菌性結(jié)膜炎播散性淋病致病物質(zhì)包括菌毛、外膜蛋白、蛋白水解酶、脂多糖和鐵調(diào)節(jié)蛋白1．形態(tài)革蘭陰性雙球菌直徑0.6~1.5μm形似雙腎或咖啡豆樣，凹面相對無動力，無芽胞，某些菌種形成莢膜三、生物學(xué)特性3．生化特性氧化酶陽性，觸酶陽性（除延長奈瑟菌外）對糖分解能力、硝酸鹽還原能力和DNA合成酶不同，常作為菌種間的鑒別依據(jù)奈瑟菌屬DNA中G+Cmol%為46~54四、微生物檢驗標(biāo)本直接檢查直接涂片檢查腦脊液直接或經(jīng)離心后取沉淀涂片皮膚瘀點滲出液涂片革蘭染色后顯微鏡下見白細(xì)胞內(nèi)外的革蘭陰性雙球菌，可報告“檢出革蘭陰性雙球菌，疑似腦膜炎奈瑟菌”。有助于流行性腦脊髓膜炎早期診斷抗原檢查通常用膠乳凝集試驗和其他凝集試驗包括A、C、Y、W125血清型的多價抗體和血清型B抗體檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合涂片和培養(yǎng)結(jié)果，抗原檢測陽性結(jié)果可作出快速、推測性診斷分離培養(yǎng)鑒定

腦脊液標(biāo)本接種在巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板咽拭子或鼻咽拭子接種在選擇性培養(yǎng)基上如改良的Thayer-Martin(MTM)、GC-Lect、NewYorkCity(NCY)等培養(yǎng)基血液標(biāo)本經(jīng)增菌培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后，移種至巧克力瓊脂或羊血瓊脂平板上置5%~7%CO235℃孵育，每隔24h觀察平板鑒定初步確定為奈瑟菌屬直徑1~2mm，灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落涂片革蘭染色見陰性雙球菌氧化酶試驗陽性進(jìn)一步進(jìn)行葡萄糖和麥芽糖發(fā)酵試驗陽性、其他糖類發(fā)酵陰性可確定為腦膜炎奈瑟菌用分型血清確定血清型別平板上沒有發(fā)現(xiàn)菌落需繼續(xù)觀察72h后無菌生長可報告為陰性（二）淋病奈瑟菌1．檢驗程序2．標(biāo)本采集

陰道和宮頸分泌物用無菌塑料棒滌綸拭子，伸入陰道后穹隆或?qū)m頸內(nèi)1cm處停留10~15秒時間，蘸取采集尿道分泌物棄去前段膿性分泌物，留取后段作為標(biāo)本尿液直腸肛拭標(biāo)本廢棄第一根污染棉簽，用第二根棉簽醮取的分泌物新生兒結(jié)膜炎時應(yīng)采取眼結(jié)膜表面分泌物4．分離培養(yǎng)與鑒定選擇培養(yǎng)基如MTM，Martin-Lewis（ML），或NYC置于5%CO2氣體條件下35~37℃孵育每隔24h觀察平板（1）形態(tài)和生化學(xué)鑒定可疑菌落直徑0.5~1mm，灰褐色、光滑、半透明呈露滴狀凸起的菌落確認(rèn)將菌落涂片，革蘭染色見革蘭陰性雙球菌氧化酶和觸酶試驗陽性葡萄糖發(fā)酵試驗陽性，其它糖類陰性培養(yǎng)需觀察72h后無菌生長可報告為陰性。（3）分子生物學(xué)鑒定檢測靶片段的基因隱蔽性質(zhì)粒、染色體基因探針、抗淋病奈瑟菌胞嘧啶DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因、透明蛋白(opa)基因、菌毛DNA探針、rRNA基因探針和porA假基因。基因探針雜交、核酸擴增第二節(jié)卡他莫拉菌卡他莫拉菌（M.catarrhalis）又稱為卡他布蘭漢菌（Branhamaceae

catarrhalis）可存在于健康人群的上呼吸道近十年來報道導(dǎo)致中耳炎、鼻竇炎、慢性阻塞性肺炎在免疫抑制和ICU的患者可導(dǎo)致菌血癥是社區(qū)呼吸道感染的主要病原體之一。

卡他莫拉菌培養(yǎng)及鑒定在血液瓊脂或巧克力瓊脂平板上生長良好35℃24h孵育后菌落直徑1~3mm，灰白色、光滑，用接種環(huán)推菌落可將整個菌