空氣中微生物的檢測空氣中微生物的檢測1一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)步驟四、結(jié)果計(jì)算五、結(jié)果評價一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x掌握檢測和計(jì)數(shù)空氣中微生物的基本方法掌握無菌操作技術(shù)和微生物實(shí)驗(yàn)的基本操作學(xué)習(xí)對室內(nèi)空氣進(jìn)行初步的微生物學(xué)評價一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x掌握檢測和計(jì)數(shù)空氣中微生物的基本方法3實(shí)驗(yàn)意義空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污染程度的指標(biāo)。用于醫(yī)院、公共場所等空氣質(zhì)量的評價實(shí)驗(yàn)意義空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污4二、實(shí)驗(yàn)原理1：自然沉降法（沉降平板法）根據(jù)空氣中攜有微生物氣溶膠粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)過24h，37℃溫箱培養(yǎng)計(jì)算出菌落數(shù)。特點(diǎn)：此法簡單方便，但穩(wěn)定性差，直徑1～5μm的粒子在5min中內(nèi)沉降距離有限，使小粒子采集率較低。二、實(shí)驗(yàn)原理1：自然沉降法（沉降平板法）52.撞擊法Anderson采樣器原理：多級篩孔型采樣器由6個帶有微細(xì)針孔的金屬撞擊盤構(gòu)成，盤下放置有培養(yǎng)基的平皿，每個圓盤上有400個環(huán)形排列小孔，由上到下孔徑逐漸減小。氣流從頂罩進(jìn)第一級，較小的粒子會由于動量不足隨氣流繞過平皿進(jìn)入下一級。經(jīng)過6次撞擊后，可把絕大部分微生物采下。2.撞擊法6Anderson采樣器（FA-1型）Anderson采樣器（FA-1型）7各級撞擊盤捕獲粒子范圍及孔徑大?、瘢海?μm孔徑1.18㎜Ⅱ：4.7~7μm孔徑0.91㎜Ⅲ：3.3~4.7μm孔徑0.71㎜Ⅳ：2.1~3.3μm孔徑0.53㎜Ⅴ：1.1~2.1μm孔徑0.34㎜Ⅵ：0.65~1.1μm孔徑0.25㎜各級撞擊盤捕獲粒子范圍及孔徑大?、瘢海?μm8各種粒徑大小的菌落易沉降的部位及意義各種粒徑大小的菌落易沉降的部位及意義9特點(diǎn)a.采集粒譜范圍廣，一般在0.2～20μm以上；b.采樣效率高，逃逸少c.微生物存活率高特點(diǎn)103.濾過法：使一定量的空氣通過吸附劑（滅菌生理鹽水），然后培養(yǎng)吸附劑中的細(xì)菌，計(jì)算出菌落數(shù)。4.液體撞擊法：和固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流方式將空氣中的微生物粒子采集在小體積的液體中，適用于高濃度的空氣微生物采樣。3.濾過法：使一定量的空氣通過吸附劑（滅菌生理鹽水），然后培11三、實(shí)驗(yàn)步驟1.自然沉降法配制瓊脂培養(yǎng)基（已做）↓培養(yǎng)皿暴露空氣中5min/10min↓37℃溫箱培養(yǎng)24h↓計(jì)數(shù)和結(jié)果評價三、實(shí)驗(yàn)步驟1.自然沉降法12采樣布點(diǎn)原則a.根據(jù)室內(nèi)面積進(jìn)行對角線或者梅花式均勻布點(diǎn)，小于50m2的房間應(yīng)設(shè)3個點(diǎn)，50～100m2設(shè)3～5個；100m2以上至少5個點(diǎn)b.采樣高度和人呼吸高度一致（1.2～1.5m）c.采樣點(diǎn)應(yīng)避開風(fēng)口，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m,采樣時關(guān)閉門窗，減少人員走動采樣布點(diǎn)原則132.撞擊法調(diào)整采樣器高度為呼吸帶高度于1.2～1.5m↓將平皿依次放入圓盤，固定并做好標(biāo)記↓接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.3L/min↓采樣5min/10min后，取出平皿，經(jīng)過24h，37℃培養(yǎng)，計(jì)數(shù)2.撞擊法14分組：4個同學(xué)一組，分別采用自然沉降法和Anderson采樣器，采樣時間設(shè)為5min和10min，比較兩種采樣方法的結(jié)果。注意事項(xiàng)：整個過程注意無菌操作。分組：15四、結(jié)果計(jì)算1.自然沉降法根據(jù)奧梅梁斯基建議，面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露于空氣中5min，于37℃溫箱培養(yǎng)24h后所生長的菌落數(shù)相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù)空氣中細(xì)菌數(shù)（cfu/m3）=1000×[(100/A)×(5/t)×(1/10)]×N=50000N/(A×T)A-平板面積（cm2）T-暴露時間（min）N-平均菌落數(shù)（cfu/皿）四、結(jié)果計(jì)算1.自然沉降法162.撞擊法空氣含菌量(cfu/m3)=[六級采樣板的總菌數(shù)（cfu）÷28.3（L/min）×采樣時間（min）]×1000計(jì)算空氣中微生物大小分布：各級微生物粒子數(shù)％=該級菌落數(shù)/六級總菌落數(shù)2.撞擊法17五、結(jié)果評價空氣微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是以細(xì)菌作為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌選用的指標(biāo)是菌落總數(shù)，表示方法為cfu/皿或者cfu/m3我國現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)空氣中實(shí)測細(xì)菌數(shù)和流行病學(xué)觀察結(jié)果為主要依據(jù)。五、結(jié)果評價空氣微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是以細(xì)菌作為標(biāo)準(zhǔn)18室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18883-2002）2500cfu/m3室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18883-2002）191μm孔徑0.N-平均菌落數(shù)（cfu/皿）調(diào)整采樣器高度為呼吸帶高度于1.37℃溫箱培養(yǎng)24h3μm孔徑0.學(xué)習(xí)對室內(nèi)空氣進(jìn)行初步的微生物學(xué)評價接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.特點(diǎn)：此法簡單方便，但穩(wěn)定性差，直徑1～5μm的粒子在5min中內(nèi)沉降距離有限，使小粒子采集率較低。接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.空氣中細(xì)菌數(shù)（cfu/m3）=1000×[(100/A)×(5/t)×(1/10)]×N空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污染程度的指標(biāo)。液體撞擊法：和固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流方式將空氣中的微生物粒子采集在小體積的液體中，適用于高濃度的空氣微生物采樣?！?μm孔徑0.根據(jù)室內(nèi)面積進(jìn)行對角線或者梅花式均勻布點(diǎn)，小于50m2的房間應(yīng)設(shè)3個點(diǎn)，50～100m2設(shè)3～5個；掌握無菌操作技術(shù)和微生物實(shí)驗(yàn)的基本操作根據(jù)奧梅梁斯基建議，面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露于空氣中5min，于37℃溫箱培養(yǎng)24h后所生長的菌落數(shù)相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù)整個過程注意無菌操作。公共場所空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)圖書館、閱覽室的空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣細(xì)菌總數(shù)≤2500cfu/m3（撞擊式），或≤30個/皿（沉降式）娛樂場所的衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣≤4000cfu/m3幼托機(jī)構(gòu)室內(nèi)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)：空氣細(xì)菌菌落數(shù)應(yīng)≤2500cfu/cm3（沉降法）1μm孔徑0.公共場所空氣衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)圖書館、閱覽室的20醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB15982－1995）醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（GB15982－1995）211.對兩種方法結(jié)果的比較？2.根據(jù)Anderson采樣器的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算空氣中微生物大小分布：以各級的菌落數(shù)占六級總菌落數(shù)的百分比表示。1.對兩種方法結(jié)果的比較？22兩種方法比較1.沉降法測定的菌落總數(shù)要多，在實(shí)驗(yàn)條件下比撞擊法多24.6％。2.小顆粒含菌粒子在空氣中穩(wěn)定，不易沉降或者漂浮，撞擊法比沉降法更易采集到小粒子。3.沉降法結(jié)果不穩(wěn)定，容易受采樣條件的影響。兩種方法比較1.沉降法測定的菌落總數(shù)要多，在實(shí)驗(yàn)條件下比撞23空氣中微生物的檢測完整版課件24空氣中微生物的檢測空氣中微生物的檢測25一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩?、?shí)驗(yàn)原理三、實(shí)驗(yàn)步驟四、結(jié)果計(jì)算五、結(jié)果評價一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?6一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x掌握檢測和計(jì)數(shù)空氣中微生物的基本方法掌握無菌操作技術(shù)和微生物實(shí)驗(yàn)的基本操作學(xué)習(xí)對室內(nèi)空氣進(jìn)行初步的微生物學(xué)評價一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵饬x掌握檢測和計(jì)數(shù)空氣中微生物的基本方法27實(shí)驗(yàn)意義空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污染程度的指標(biāo)。用于醫(yī)院、公共場所等空氣質(zhì)量的評價實(shí)驗(yàn)意義空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污28二、實(shí)驗(yàn)原理1：自然沉降法（沉降平板法）根據(jù)空氣中攜有微生物氣溶膠粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到瓊脂培養(yǎng)基上，經(jīng)過24h，37℃溫箱培養(yǎng)計(jì)算出菌落數(shù)。特點(diǎn)：此法簡單方便，但穩(wěn)定性差，直徑1～5μm的粒子在5min中內(nèi)沉降距離有限，使小粒子采集率較低。二、實(shí)驗(yàn)原理1：自然沉降法（沉降平板法）292.撞擊法Anderson采樣器原理：多級篩孔型采樣器由6個帶有微細(xì)針孔的金屬撞擊盤構(gòu)成，盤下放置有培養(yǎng)基的平皿，每個圓盤上有400個環(huán)形排列小孔，由上到下孔徑逐漸減小。氣流從頂罩進(jìn)第一級，較小的粒子會由于動量不足隨氣流繞過平皿進(jìn)入下一級。經(jīng)過6次撞擊后，可把絕大部分微生物采下。2.撞擊法30Anderson采樣器（FA-1型）Anderson采樣器（FA-1型）31各級撞擊盤捕獲粒子范圍及孔徑大?、瘢海?μm孔徑1.18㎜Ⅱ：4.7~7μm孔徑0.91㎜Ⅲ：3.3~4.7μm孔徑0.71㎜Ⅳ：2.1~3.3μm孔徑0.53㎜Ⅴ：1.1~2.1μm孔徑0.34㎜Ⅵ：0.65~1.1μm孔徑0.25㎜各級撞擊盤捕獲粒子范圍及孔徑大?、瘢海?μm32各種粒徑大小的菌落易沉降的部位及意義各種粒徑大小的菌落易沉降的部位及意義33特點(diǎn)a.采集粒譜范圍廣，一般在0.2～20μm以上；b.采樣效率高，逃逸少c.微生物存活率高特點(diǎn)343.濾過法：使一定量的空氣通過吸附劑（滅菌生理鹽水），然后培養(yǎng)吸附劑中的細(xì)菌，計(jì)算出菌落數(shù)。4.液體撞擊法：和固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流方式將空氣中的微生物粒子采集在小體積的液體中，適用于高濃度的空氣微生物采樣。3.濾過法：使一定量的空氣通過吸附劑（滅菌生理鹽水），然后培35三、實(shí)驗(yàn)步驟1.自然沉降法配制瓊脂培養(yǎng)基（已做）↓培養(yǎng)皿暴露空氣中5min/10min↓37℃溫箱培養(yǎng)24h↓計(jì)數(shù)和結(jié)果評價三、實(shí)驗(yàn)步驟1.自然沉降法36采樣布點(diǎn)原則a.根據(jù)室內(nèi)面積進(jìn)行對角線或者梅花式均勻布點(diǎn)，小于50m2的房間應(yīng)設(shè)3個點(diǎn)，50～100m2設(shè)3～5個；100m2以上至少5個點(diǎn)b.采樣高度和人呼吸高度一致（1.2～1.5m）c.采樣點(diǎn)應(yīng)避開風(fēng)口，離墻壁距離應(yīng)大于0.5m,采樣時關(guān)閉門窗，減少人員走動采樣布點(diǎn)原則372.撞擊法調(diào)整采樣器高度為呼吸帶高度于1.2～1.5m↓將平皿依次放入圓盤，固定并做好標(biāo)記↓接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.3L/min↓采樣5min/10min后，取出平皿，經(jīng)過24h，37℃培養(yǎng)，計(jì)數(shù)2.撞擊法38分組：4個同學(xué)一組，分別采用自然沉降法和Anderson采樣器，采樣時間設(shè)為5min和10min，比較兩種采樣方法的結(jié)果。注意事項(xiàng)：整個過程注意無菌操作。分組：39四、結(jié)果計(jì)算1.自然沉降法根據(jù)奧梅梁斯基建議，面積為100cm2的平板培養(yǎng)基，暴露于空氣中5min，于37℃溫箱培養(yǎng)24h后所生長的菌落數(shù)相當(dāng)于10L空氣中的細(xì)菌數(shù)空氣中細(xì)菌數(shù)（cfu/m3）=1000×[(100/A)×(5/t)×(1/10)]×N=50000N/(A×T)A-平板面積（cm2）T-暴露時間（min）N-平均菌落數(shù)（cfu/皿）四、結(jié)果計(jì)算1.自然沉降法402.撞擊法空氣含菌量(cfu/m3)=[六級采樣板的總菌數(shù)（cfu）÷28.3（L/min）×采樣時間（min）]×1000計(jì)算空氣中微生物大小分布：各級微生物粒子數(shù)％=該級菌落數(shù)/六級總菌落數(shù)2.撞擊法41五、結(jié)果評價空氣微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是以細(xì)菌作為標(biāo)準(zhǔn)細(xì)菌選用的指標(biāo)是菌落總數(shù)，表示方法為cfu/皿或者cfu/m3我國現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)是根據(jù)空氣中實(shí)測細(xì)菌數(shù)和流行病學(xué)觀察結(jié)果為主要依據(jù)。五、結(jié)果評價空氣微生物衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，是以細(xì)菌作為標(biāo)準(zhǔn)42室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18883-2002）2500cfu/m3室內(nèi)空氣質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB/T18883-2002）431μm孔徑0.N-平均菌落數(shù)（cfu/皿）調(diào)整采樣器高度為呼吸帶高度于1.37℃溫箱培養(yǎng)24h3μm孔徑0.學(xué)習(xí)對室內(nèi)空氣進(jìn)行初步的微生物學(xué)評價接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.特點(diǎn)：此法簡單方便，但穩(wěn)定性差，直徑1～5μm的粒子在5min中內(nèi)沉降距離有限，使小粒子采集率較低。接通電源，開打電源開關(guān)，調(diào)整流量到28.空氣中細(xì)菌數(shù)（cfu/m3）=1000×[(100/A)×(5/t)×(1/10)]×N空氣中細(xì)菌總數(shù)常作為室內(nèi)空氣質(zhì)量和空氣受到微生物性污染程度的指標(biāo)。液體撞擊法：和固體撞擊式采樣器一樣，是利用噴射氣流方式將空氣中的微生物粒子采集在小體積的液體中，適用于高