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文檔簡介

金黃色葡萄球菌的檢測方法簡介一·生物學(xué)特性(1)典型的金黃色葡萄球菌為球型,直徑0.8μm左右,顯微鏡下排列成葡萄串狀。金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛,大多數(shù)無莢膜,革蘭氏染色陽性。金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高,在普通培養(yǎng)基上生長良好,需氧或兼性厭氧,最適生長溫度37°C,最適生長pH7.4。平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起,直徑1-2mm。檢測方法1.紙片法2.免疫學(xué)方法3.分子生物學(xué)方法4.直接平板計數(shù)法

一.紙片法

目前廣泛應(yīng)用的一種方法

用紙片、膜、膠片等作為培養(yǎng)基載體,將特定的培養(yǎng)基和顯色物質(zhì)附著在上面,通過觀察微生物在測試片上面的生長、顯色來測定食品中微生物。采用快速測試片檢測具有顯著的優(yōu)點:a.可測定少量檢品,不需要配制試劑,不需要大量的玻璃器皿,操作簡便迅速b.易于消毒保存,便于運輸攜帶方便,價格低廉;c.除紙片外無其他任何廢液廢物,大大減少了工作量;d.可以在取樣時同時接種,結(jié)果更能反映當(dāng)時樣本中真實細(xì)菌數(shù),防止延長接種時間時細(xì)菌繁殖造成的污染。技術(shù)優(yōu)點:操作簡單使用方便,避免了繁瑣的操作。技術(shù)缺點:用時間比較長,無法準(zhǔn)確定性及計數(shù)。

此方法現(xiàn)在應(yīng)用于快速檢測領(lǐng)域,美國3M公司Petrifilm為載體的測試片應(yīng)用最為廣泛。但其也存在一些問題:Petrifilm測試片上覆蓋了一層薄膜,當(dāng)樣品粘液過多時會出現(xiàn)菌落的擴(kuò)散和融合,影響計數(shù);Petrifilm測試片面積較小,當(dāng)菌量大于250cfu時,準(zhǔn)確計數(shù)較困難;待測樣品中含有的某些有機(jī)物可能使顯色減緩。使目視效果下降,導(dǎo)致計數(shù)偏低。

金黃色葡萄球菌特異的抗原能激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)的特異性抗體。在免疫檢測中,可利用單克隆抗體檢測金黃色葡萄球菌的特異抗原也可利用金黃色葡萄球菌抗原檢測體內(nèi)產(chǎn)生的特異抗體,兩種方法均能判斷機(jī)體的感染狀況。(1)抗原抗體技術(shù)分析:

抗原抗體技術(shù)是免疫技術(shù)中的核心部分,對于金黃色葡萄球菌檢測全菌免疫篩選抗體是很困難的事情,現(xiàn)在目前市場有的大多都是對金黃色葡萄球菌毒素類進(jìn)行免疫得到的抗體(2)免疫學(xué)方法技術(shù)分析:

上述免疫學(xué)技術(shù)應(yīng)用最多的是酶聯(lián)免疫技術(shù)和膠體金側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)。

酶聯(lián)免疫技術(shù)廣泛應(yīng)用于實驗室檢測,由于一次可以檢測多個樣本,此技術(shù)多用于體外診斷,目前也廣泛用于食品安全。(酶聯(lián)免疫吸附劑測定法,簡稱酶聯(lián)免疫法,或者ELISA法)三分子生物學(xué)方法

金黃色葡萄球菌的致病力強(qiáng)弱主要取決于其產(chǎn)生的毒素和侵襲性酶分子生物學(xué)方法的技術(shù)主要分為:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)和實時熒光定量PCR(rtPCR)技術(shù)、生物芯片技術(shù)、測序技術(shù)。分子生物學(xué)檢測技術(shù)由于檢測方法復(fù)雜,需要儀器設(shè)備及專業(yè)人員操作,對實驗室環(huán)境有要求,檢測成本高等因素,目前該技術(shù)沒有廣泛應(yīng)用。通過不斷的研究和總結(jié)金黃色葡萄球菌快速增殖的環(huán)境和條件,在增菌液中進(jìn)行擴(kuò)增,使菌數(shù)達(dá)到膠體金的檢測

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