ICS 65.020.30B43備案：60856-2018 DB63B43青 海 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB63/T1692—2018八眉豬細(xì)管凍精生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程2018-09-25發(fā)布 2018-12-01實(shí)施青海省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局 發(fā)布DB63/T1692DB63/T1692—2018II前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由青海省農(nóng)牧廳提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：青海省家畜改良中心。、DB63/T1692DB63/T1692—2018PAGEPAGE6八眉豬細(xì)管凍精生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程范圍本規(guī)程適用于八眉豬細(xì)管凍精的生產(chǎn)。GB4143牛冷凍精液GB/T5458液氮生物容器NY/T2823八眉豬種公豬應(yīng)符合NY/T2823要求，三代系譜清楚。28.45kgkgA3531E11IU。1h~2h。2~3器械37℃恒溫箱、17器具保溫集精杯、過(guò)濾膜、比色皿、錐形瓶、載玻片、蓋玻片、離心管、燒杯、量筒、0.25ml細(xì)管、提筒、試管、細(xì)管剪。160℃恒溫60min0.25ml75采精場(chǎng)所保持安靜，地面保持清潔衛(wèi)生，采精前應(yīng)噴灑0.1%高錳酸鉀進(jìn)行消毒。1000ml37g1.250.6g、1.25g0.075g15min0.6g11000ml11g14.8g24.2g，150.6g1g冷凍稀釋液I向錐形瓶中加入800ml冷凍基礎(chǔ)液、200ml新鮮卵黃，攪拌均勻，置于17℃?zhèn)溆?。冷凍稀釋液II向錐形瓶中加入940ml冷凍稀釋液I液、60ml甘油，攪拌均勻，置于5℃?zhèn)溆?。向錐形瓶中加入1000ml雙蒸水，分別稱取葡萄糖50g、二水檸檬酸鈉3g、乙二胺四乙酸1g，溶解于雙蒸水中，攪拌均勻，用定性濾紙過(guò)濾至另一錐形瓶中，濾液煮沸15min，待溫度降至常溫。采精0.01后備種公豬每周采精一次，成年種公豬每周可采精兩次。從37準(zhǔn)備3737℃水浴鍋待常溫保37精液為乳白色，無(wú)皮毛等異物，略帶腥味。體積將精液倒入量杯內(nèi)直讀精液體積。精液體積≥100ml。用移液槍吸取3960l生理鹽水于比色皿中，再吸取40l精液，同生理鹽水混合均勻，用密度測(cè)定儀測(cè)定精子密度。每毫升精液精子密度≥1×108個(gè)。取一小滴精液于載玻片，加蓋蓋玻片在帶有38℃恒溫裝置的顯微鏡下檢查精子活力和畸形率。精子活力≥60%，精子畸形率≤15%。用37℃常溫保存稀釋液按1︰1的比例等溫稀釋精液，將混合液放入17℃恒溫箱待其溫度降至17℃，并于72h內(nèi)完成凍精。將常溫稀釋后的混合液倒入50ml離心管中，在17℃、重力800g的條件下離心12min，吸取上清液于量筒，直讀體積。離心后精子總數(shù)按式（1）計(jì)算：式中：n—最終精子總數(shù)，單位為個(gè)；

n(1)ρ—每毫升精液精子密度，單位為個(gè)；v1—精液體積，單位為毫升（ml）。離心后沉淀精子體積按式（2）計(jì)算：vv1v2

(2)式中：v—精子體積，單位為毫升（ml）；v1—精液體積，單位為毫升（ml）；v2—上清液體積，單位為毫升（ml）。保證最終每毫升精液中精子密度≥3×108個(gè)，最終稀釋后精液總量按式（3）計(jì)算：sn3 (3)式中：s—最終精液總量，單位為毫升（ml）；n—最終精子總數(shù)，單位為個(gè)。冷凍稀釋液I液和II液添加量按式（4）計(jì)算：式中：

a1a2

sv2

(4)a1—冷凍稀釋液I液添加量，單位為毫升（ml）；a2—冷凍稀釋液II液添加量，單位為毫升（ml）；s—最終精液總量，單位為毫升（ml）；v—精子體積，單位為毫升（ml）。用17℃的冷凍稀釋液I6.3175℃冰箱平衡25II5℃的精液。冷凍稀釋液I液和II液添加量按照6.5.4計(jì)算。細(xì)管為無(wú)毒、耐低溫的專用塑料管，0.25ml劑型，保證清潔、無(wú)菌。封裝在4℃低溫柜中采用細(xì)管封裝一體機(jī)通過(guò)計(jì)算機(jī)程序控制，進(jìn)行灌裝、封口、打印標(biāo)識(shí)。細(xì)管標(biāo)識(shí)清晰，信息齊全，包括凍精產(chǎn)地、品種、凍精生產(chǎn)日期、豬號(hào)。上架封裝后的細(xì)管整齊的碼放在專用細(xì)管架上。冷凍4℃~1℃（降溫速率2℃/min），共1min30s；1℃~-25℃（降溫速率30℃/min），共2min24s；-25℃~-14030/min）6min12s；-14030。3838383838方法見(jiàn)本標(biāo)準(zhǔn)的6.2.4?；盍Α?0%的細(xì)管凍精作為初檢合格品妥善貯存。包裝用無(wú)菌紗布袋包裝，包裝應(yīng)在-140℃以下環(huán)境中進(jìn)行。標(biāo)記包裝袋外應(yīng)進(jìn)行明顯標(biāo)記。注明公豬號(hào)、生產(chǎn)日期、數(shù)量、精子活力。貯存GB/T54585。每季度每頭公豬細(xì)管凍精型式檢驗(yàn)不少于一次，檢驗(yàn)方法按照GB4143進(jìn)行。出站時(shí)