茶葉生物技術(shù)

Tea

Biotechnology李遠(yuǎn)華茶葉生物技術(shù)TeaBiotechnology第一章緒論主要內(nèi)容生物技術(shù)概念；生物技術(shù)的分類及其特點；茶葉生物技術(shù)的內(nèi)容及其特點；茶葉生物技術(shù)的研究現(xiàn)狀；酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；我國茶葉生物技術(shù)研究的展望；生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響。第一章緒論主要內(nèi)容

國際經(jīng)濟(jì)合作及發(fā)展組織(IECDO)將生物技術(shù)定義為應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)的原理，依靠生物作用劑的作用將物料進(jìn)行加工以提供產(chǎn)品或用于為社會服務(wù)的技術(shù)。內(nèi)容可分為細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、基因工程和蛋白質(zhì)工程。

特別是現(xiàn)代生物技術(shù)正在推動新的科技革命的形成，基因組學(xué)、后基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、干細(xì)胞技術(shù)和組織工程學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)、體細(xì)胞克隆、生物芯片、基因治療、生物藥物等技術(shù)將發(fā)揮主導(dǎo)作用。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點國際經(jīng)濟(jì)合作及發(fā)展組織(IECDO)將生物技術(shù)定義為

20世紀(jì)60年代末英國劍橋大學(xué)化學(xué)系對茶樹幼莖切片的培養(yǎng)，探討咖啡因合成途徑。20世紀(jì)70年代Y·Takino和G·W·Sanderson等以及施兆鵬分別研究了單寧酶和果膠酶提高速溶茶制率、減少冷后渾及改善速溶茶湯色。利用發(fā)酵技術(shù)開發(fā)具有特殊風(fēng)味及營養(yǎng)保健功效的新型茶葉制品如紅茶菌、茶酒。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點20世紀(jì)60年代末英國劍橋大學(xué)化學(xué)系對茶樹幼莖切片的

雖然茶葉生物技術(shù)研究起步較晚，但進(jìn)展較快，當(dāng)前已是茶學(xué)學(xué)科的一個熱點，特別是基因工程技術(shù)在茶葉中應(yīng)用取得了突飛猛進(jìn)，茶葉基因的分離轉(zhuǎn)化，茶樹基因組學(xué)研究等，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹生物學(xué)與資源利用國家重點實驗室、浙江大學(xué)茶葉研究所等都取得了可喜成就。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點雖然茶葉生物技術(shù)研究起步較晚，但進(jìn)展較快，當(dāng)前

茶葉生物技術(shù)是茶學(xué)與生物技術(shù)結(jié)合的交叉學(xué)科，是利用生物技術(shù)來解決茶產(chǎn)業(yè)面臨問題。

茶葉生物技術(shù)綜合了微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、植物生理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、基因工程、細(xì)胞工程、微生物工程、生化工程、生物工程下游技術(shù)、發(fā)酵工程設(shè)備以及茶學(xué)等多學(xué)科知識，它的特點具有典型的智力密集型產(chǎn)業(yè)，高投入、高風(fēng)險和高科技人才，具有研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化周期長、對資源依賴性強(qiáng)和對人才實驗操作技能要求高等特征。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點茶葉生物技術(shù)是茶學(xué)與生物技術(shù)結(jié)合的交叉學(xué)科，是利用生

我國茶葉生物技術(shù)研發(fā)應(yīng)由積極跟蹤為主轉(zhuǎn)變?yōu)樽灾鲃?chuàng)新為主，切實提高自主創(chuàng)新能力，拉近與其他學(xué)科生物技術(shù)研究水平的差距，使我國擁有一批具有自主知識產(chǎn)權(quán)的專利與標(biāo)準(zhǔn)；由單一技術(shù)突破為主轉(zhuǎn)變?yōu)閱我患夹g(shù)突破與多項技術(shù)的集成相結(jié)合，全面提高我國茶葉生物技術(shù)及產(chǎn)業(yè)的整體水平；由立足國內(nèi)市場轉(zhuǎn)變?yōu)槊嫦驀H市場，充分發(fā)揮我國是世界茶葉原產(chǎn)地優(yōu)勢，加速茶產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化、市場化、國際化進(jìn)程；由研究開發(fā)為主，轉(zhuǎn)變?yōu)檠芯块_發(fā)與產(chǎn)業(yè)化協(xié)調(diào)，加速培育新的茶葉經(jīng)濟(jì)增長點。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點我國茶葉生物技術(shù)研發(fā)應(yīng)由積極跟蹤為主轉(zhuǎn)變?yōu)樽灾鲃?chuàng)新為

從事茶葉生物技術(shù)，必須了解和掌握國家生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)政策、知識產(chǎn)權(quán)及生物工程安全條例等有關(guān)政策和法規(guī)。學(xué)好茶葉生物技術(shù)，能夠成為從事茶學(xué)與生物技術(shù)有關(guān)的應(yīng)用研究、技術(shù)開發(fā)、生產(chǎn)管理和行政管理等工作的高級專門人才。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點從事茶葉生物技術(shù)，必須了解和掌握國家生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)政策植物生物技術(shù)可從其研究對象上分為三個層次，即分子水平上的植物基因工程技術(shù)、細(xì)胞及亞細(xì)胞水平上的植物細(xì)胞工程技術(shù)以及器官水平上的植物組織培養(yǎng)技術(shù)。

植物生物技術(shù)在植物繁殖方面已取得了巨大的成功，但由于種種原因，茶葉生物技術(shù)的許多研究目前還遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他作物。目前應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域的生物技術(shù)主要有酶工程、基因工程、細(xì)胞工程、微生物工程等。

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望植物生物技術(shù)可從其研究對象上分為三個層次，即分子水平

（一）酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

茶葉酶工程的重要內(nèi)容是利用酶的高效生物催化功能，促進(jìn)茶葉內(nèi)不利及無效成分的有益轉(zhuǎn)化，改善茶葉的色香味形及營養(yǎng)價值等綜合品質(zhì)。

目前主要有多酚氧化酶、果膠酶、多糖水解酶、單寧酶、蛋白酶、β-葡萄糖苷酶、纖維素酶等酶制劑已應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（一）酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國

多酚氧化酶主要用于催化茶葉中多酚類氧化生成茶黃素和茶紅素，同時使香氣前體物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)氧化，產(chǎn)生各種香氣成分，形成紅茶基本風(fēng)味。付贏萱等利用多酚氧化酶進(jìn)行為期18d普洱茶渥堆發(fā)酵，茶多酚、茶褐素等成分的變化差異顯著，且在酶濃度為1.6U/g、3.2U/g時，普洱茶達(dá)到了陳年普洱茶品質(zhì)，湯色深橙紅色、明亮，滋味醇厚回甘。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望多酚氧化酶主要用于催化茶葉中多酚類氧化生成茶黃素

蛋白酶主要用于降解茶葉中蛋白質(zhì)而生成各種氨基酸，從而改善茶葉的香氣和鮮爽度，在紅碎茶加工中添加蛋白酶可使氨基酸、茶紅素含量提高，茶褐素明顯下降，滋味增強(qiáng)，湯色變亮，香氣變好；夏季綠茶加工過程中添加木瓜蛋白酶(Papain)能明顯提高茶湯中氨基酸的含量，從而有效降低夏茶的苦澀味。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望蛋白酶主要用于降解茶葉中蛋白質(zhì)而生成各種氨基酸，β-葡萄糖苷酶是將茶鮮葉中香氣前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化成游離態(tài)香氣成分的關(guān)鍵酶，從茶葉中提取的β-葡萄糖苷酶粗品可使夏季烘青綠茶中香葉醇的含量提高1～3倍，明顯改善夏季綠茶香氣。另有研究表明：外源單寧酶、果膠酶的加入能有效提高微濾功效和微濾液的生化得率，加酶微濾的平均膜通量提高30ml/min；同時，微濾中的水浸出物、茶多酚、氨基酸、咖啡堿、糖、兒茶素的得率都有較大提高。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望β-葡萄糖苷酶是將茶鮮葉中香氣前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化成游離

梁靖等研究纖維素酶的加入量、酶解溫度、酶解時間對速溶茶提取率的影響，結(jié)果顯示，使用纖維素酶可以有效提高速溶茶的提取率，其最佳工藝參數(shù)為酶量0.15U/mL、溫度45℃、時間60min。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望梁靖等研究纖維素酶的加入量、酶解溫度、酶解時間對

譚淑宜等研究了果膠酶提取和蛋白酶提取分別對紅碎茶和綠茶提取液中茶多酚、氨基酸、咖啡堿及水浸出物含量的影響，結(jié)果表明，果膠酶對紅碎茶和綠茶的提取均有一定的效果，水浸出物含量均有所提高；紅碎茶和綠茶經(jīng)蛋白酶提取，其提取液中氨基酸提取率分別比對照高196.8%和72.8%，可見蛋白酶有利于提高速溶茶滋味品質(zhì)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望譚淑宜等研究了果膠酶提取和蛋白酶提取分別對紅碎茶速溶茶：維素酶和果膠酶、木瓜蛋白酶，提高提取率及品質(zhì)。茶濃縮汁生產(chǎn)：單寧酶茶飲料渾濁、沉淀：單寧酶

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望速溶茶：維素酶和果膠酶、木瓜蛋白酶，提高提取率及品質(zhì)。第2節(jié)纖維素酶和半纖維素酶屬于多糖水解酶類，可催化纖維素水解成小分子的糖類物質(zhì)，從而增加茶湯的甜醇度蛋白酶可將茶葉中的蛋白質(zhì)水解成各種氨基酸，不僅能改善茶葉的香氣和鮮爽度，而且可減少不溶性的復(fù)合物產(chǎn)生

提高茶湯的質(zhì)量酵母菌分泌的胞外酶，可使茶葉中含量較高的茶多酚、蛋白質(zhì)、碳水化合物發(fā)生一系列的化學(xué)反應(yīng)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望纖維素酶和半纖維素酶屬于多糖水解酶類，可催化纖維于春花等研究了外源酶對普洱生茶浸提液品質(zhì)的影響，結(jié)果顯示三種酶對茶褐素氧化貢獻(xiàn)由大到小分別為漆酶、蛋白酶、單寧酶；三種酶最優(yōu)配比為：0.15%、0.05%、0.03%，此條件下，茶多酚含量28.71%，與酶處理前試樣比較降低了8.45%，可溶性糖、氨基酸、茶褐素含量分別為11.97%、3.58%、8.60%，是酶處理前的3.49倍、1.10倍、4.32倍。

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望于春花等研究了外源酶對普洱生茶浸提液品質(zhì)的影響酶技術(shù)在渥堆發(fā)酵中的應(yīng)用研究愈來愈多，其目的主要是為了縮短發(fā)酵周期及改善茶葉品質(zhì)。單寧酶、蛋白酶、多酚氧化酶等復(fù)合酶制劑處理普洱茶樣后可以明顯改變內(nèi)含成分含量，進(jìn)而改善茶葉品質(zhì)。在夏季金觀音鮮葉萎凋過程中添加纖維素酶、木瓜蛋白酶與木聚糖酶能顯著提高茶紅素、茶黃素和水浸出物，其中添加纖維素酶的效果最好，可使茶黃素含量達(dá)到0.57%，茶紅素含量達(dá)10.93%，水浸出物含量達(dá)34.53%。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望酶技術(shù)在渥堆發(fā)酵中的應(yīng)用研究愈來愈多，其目的主要

（二）基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

1.DNA分子標(biāo)記技術(shù)優(yōu)勢：①不受實驗組織類型不同和發(fā)育時間等方面的影響，實驗個體的任何組織器官在各種時期都可能進(jìn)行分析實驗。②可完全不受環(huán)境因素的影響。環(huán)境的改變不能決定DNA的結(jié)構(gòu)，即DNA的核苷酸序列是固定不變的。③標(biāo)識的數(shù)目龐大，可覆蓋全部的基因組。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（二）基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉④遺傳多態(tài)性高，因此具有大量變異的等位基因，也各不相同。⑤有很多標(biāo)識為共顯性，可有效的辨別出純合DNA型及雜合DNA型，收集全部的DNA遺傳信息。⑥D(zhuǎn)NA分子標(biāo)記技術(shù)更加簡單、快捷、自動化。⑦通過實驗提取出的DNA，在合適條件下能長時間的進(jìn)行保存，這在進(jìn)行物種或者基因的起源及決定性的鑒定上有利。應(yīng)用：茶樹的親緣關(guān)系鑒別、遺傳多樣性分析、分子遺傳圖譜的構(gòu)建、種質(zhì)資源的分子鑒定等方面。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望④遺傳多態(tài)性高，因此具有大量變異的等位基因，也各不相同。第2SSR(SimpleSequenceRepeats)標(biāo)記是近年來發(fā)展起來的一種以特異引物PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)，也稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA),是一類由幾個核苷酸（一般為1~6個）為重復(fù)單位組成的長達(dá)幾十個核苷酸的串聯(lián)重復(fù)序列。每個SSR兩側(cè)的序列一般是相對保守的單拷貝序列。AFLP（Amplifiedfragmentlengthpolymorphism）技術(shù)是由Zabeau等于1993年發(fā)明的分子標(biāo)記技術(shù)。AFLP是基于PCR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA限制性酶切片段，并結(jié)合了RFLP和PCR技術(shù)特點，具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、假陽性低、所需模板DNA量少等特點，非常適合在分子生物學(xué)基礎(chǔ)相對薄弱的茶樹研究中應(yīng)用。該技術(shù)以錨定的微衛(wèi)星DNA為引物，在SSR序列的3’或5’端加錨2．4個隨機(jī)核苷酸，在PCR反應(yīng)中，錨定引物可以引起特定位點退火，導(dǎo)致與錨定引物互補(bǔ)的間隔不太大的重復(fù)序列間DNA片斷進(jìn)行PCR擴(kuò)增第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望SSR(SimpleSequenceRepRFLP和RAPD技術(shù)。RFLP是發(fā)展最早的DNA標(biāo)記技術(shù)。RFLP是指基因型之間限制性片段長度的差異，這種差異是由限制性酶切位點上堿基的插入、缺失、重排或點突變所引起的。RAPD技術(shù)是1990年發(fā)明并發(fā)展起來的，RAPD是建立在PCR(PolymeraseChainReaction)基礎(chǔ)之上的一種可對整個未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個人工合成的隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列(通常為10個堿基對)為引物，在熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)作用下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望RFLP和RAPD技術(shù)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀I(lǐng)SSR(inter-simplesequencerepeat)即簡單重復(fù)區(qū)間序列標(biāo)記是一種新型的分子標(biāo)記技術(shù)，它是用錨定的SSR(simplesequencerepeats)為引物，采用PCR技術(shù)對位于SSR之間的DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增的分子標(biāo)記技術(shù)。ISSR技術(shù)具有重復(fù)性好、多態(tài)性高和操作簡單的特點，是一種評價物種間遺傳多樣性和親緣關(guān)系的有效方法，目前已被廣泛應(yīng)用于植物品種鑒定、基因定位、指紋圖譜繪制等方面研究中。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望ISSR(inter-simplesequencere2.基因克隆和表達(dá)自1994年Takeuchi等報道了第一條茶樹基因CHS（查爾酮合成酶）序列以來，茶樹基因克隆表達(dá)取得了較快的發(fā)展。

Misakokato等首次對咖啡堿合成酶(TCS)進(jìn)行了純化，并對其相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行了研究，且成功地克隆了咖啡堿合成酶基因，是目前茶界發(fā)表最高檔次的一篇研究論文。發(fā)表在MISAKOKATO,KOUICHIMIZUNO，ALANCROZIER.Caffeinesynthasegenefromtealeaves[J].Nature，2000，406(6799):956-957。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

李遠(yuǎn)華研究咖啡堿合成酶基因mRNA在葉片柵欄組織中表達(dá)信號強(qiáng)。（作者李遠(yuǎn)華，江昌俊，宛曉春，茶樹咖啡堿合成酶基因mRNA表達(dá)的研究，茶葉科學(xué)，2004，1）

李遠(yuǎn)華對咖啡堿合成酶基因表達(dá)與定位，是在武漢大學(xué)博士后期間進(jìn)行，“茶樹咖啡堿合成酶基因的表達(dá)及定位分析”，資助編號：20060390833，中國博士后科學(xué)基金資助項目，研究結(jié)果發(fā)表：Yuan-HuaLi,WeiGu,andShengYe.ExpressionandLocationofCaffeineSynthaseinTeaPlants，RussianJournalofPlantPhysiology（SCI）,54(5):698–701,2007。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

李遠(yuǎn)華、王朝霞、楊順利、江昌俊等2001開始從茶樹中獲得了與茶葉香氣形成有關(guān)β-葡萄糖苷酶基因(李遠(yuǎn)華博士論文：茶樹β-葡萄糖苷酶基因克隆、表達(dá)和分布定位，Camelliasinensisbeta-1,3-glucosidasemRNA,GenBank,Accessionno.,AF537127)。

李遠(yuǎn)華研究了茶樹β-葡萄糖苷酶cDNA克隆與原核表達(dá)、茶樹β-葡萄糖苷酶基因mRNA表達(dá)的研究、茶樹β-葡萄糖苷酶基因的定位原位擴(kuò)增研究。研究β-葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶樹葉片柵欄組織、葉主脈的薄壁組織表達(dá)；不同品種之間的表達(dá)位置基本相似，但表達(dá)信號卻有差異。（有關(guān)研究論文以表在：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，茶葉科學(xué)）第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)茶樹基因的分離和克隆是茶樹生物技術(shù)研究的重要內(nèi)容之一，也是茶樹種質(zhì)資源改良和利用以及茶樹生物反應(yīng)器研究的基礎(chǔ)。李遠(yuǎn)華等采用SSH技術(shù)分析了VA菌根處理后福鼎大白茶根系基因差異表達(dá)情況，克隆了HMGR基因（GenBank，登錄號KJ946250）、GAGP基因（GenBank，登錄號KJ946251）、Actin基因(GenBank,登錄號KJ946252)，并進(jìn)行了表達(dá)分析。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

武夷學(xué)院第一個，也是福建省茶葉界第一個國家自然科學(xué)基金和結(jié)題項目：VA菌根促進(jìn)茶樹生長的轉(zhuǎn)錄譜分析和相關(guān)候選基因克隆，項目批準(zhǔn)號：31070613，已結(jié)題（結(jié)題號：99982635-1878），國家自然科學(xué)基金面上項目，2011-2013，李遠(yuǎn)華主持。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

茶葉中還有一些很重要基因：多酚氧化酶基因，茶氨酸合成酶基因等。日本人研究的茶樹β-櫻草糖苷酶基因并發(fā)表在美國植物生理學(xué)期刊，也是重要一個成果。

茶樹基因組研究也取得了成果：中科院昆明植物所、云南農(nóng)大等（高立志、盛軍等人，2017年）從“云抗10號”約3.02Gbp；安徽農(nóng)大、深圳華大基因組中心等（宛曉春、韋朝領(lǐng)等人，2018年）研究“舒茶早”約3.0Gbp，在美國國家科學(xué)院院刊PNAS發(fā)表，是中國茶界第一篇這么高水平研究論文。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀

（三）細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

細(xì)胞工程就是人為地改變或創(chuàng)造細(xì)胞的遺傳性狀，在體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞群體，為生物個體或株系提供所需產(chǎn)品的工程技術(shù)。目前應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域的主要有細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、染色體轉(zhuǎn)移及細(xì)胞代謝物的生產(chǎn)等。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（三）細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉生

在20世紀(jì)80年代，Kato等從愈傷組織中誘導(dǎo)再生植株，研究表明，只有在帶莖表層的組織上，誘導(dǎo)的愈傷組織才能分化出不定芽，在后面的繼代培養(yǎng)中生長發(fā)育良好，且莖段縱切的分化率比橫切的高。Akulaa等通過茶樹莖段誘導(dǎo)體細(xì)胞胚發(fā)生，建立了一套較完整的茶樹再生體系，在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生不定胚，之后在1/2濃度大量元素、完全的MS培養(yǎng)基濃度微量元素和維生素的MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)體胚，誘導(dǎo)率達(dá)60%。Kato以幼葉為外植體材料，將其置于不同濃度的2，4-D培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在葉的基部能直接或通過胚性愈傷組織誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚，通過細(xì)胞組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)體細(xì)胞胚起源于葉片中脈。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望在20世紀(jì)80年代，Kato等從愈傷組織中誘導(dǎo)

茶樹花藥培養(yǎng)獲得植株，是我國茶界當(dāng)時突破性一個成果：

福建農(nóng)學(xué)院亞熱帶果樹研究所園藝植物組織培養(yǎng)育種研究室陳振光教授（園藝系副主任）等經(jīng)過近十年的研究,成功地從茶樹花藥中誘導(dǎo)出根、莖、葉完整的植株,并先后將試管苗移植于大田,成活了30株。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望茶樹花藥培養(yǎng)獲得植株，是我國茶界當(dāng)時突破性一個

目前大部分的栽培品種都是通過常規(guī)的育種方法從群體品種中選育而來，而常規(guī)的育種方法主要是通過植株表現(xiàn)型的差異進(jìn)行蹄選，這種方法對于質(zhì)量性狀來說一般是有效的，但數(shù)量性狀在茶樹性狀中占主導(dǎo)地位，而數(shù)量性狀易受外界環(huán)境和茶樹生理周期的影響，很難在早期進(jìn)行鑒定，以傳統(tǒng)育種方法選育出一個優(yōu)良新品種，至少需要20年的時間，很難滿足現(xiàn)階段快速培育新品種的需求。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望目前大部分的栽培品種都是通過常規(guī)的育種方法從群

在植物組織培養(yǎng)合成茶氨酸的研究中，日本學(xué)者已證實，向培養(yǎng)基中添加前體物質(zhì)鹽酸乙胺時，可大幅度提高愈傷組織中的茶氨酸合成量。利用茶樹細(xì)胞培養(yǎng)生物合成法生產(chǎn)兒茶素具有不受地域季節(jié)限制、不與傳統(tǒng)飲料茶葉爭原料、便于產(chǎn)業(yè)化等優(yōu)點，因而受到了國內(nèi)外的重視。成浩等對此進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，證實茶樹培養(yǎng)細(xì)胞在一定的條件下能夠保持其次生代謝產(chǎn)物的合成能力，而且可通過培養(yǎng)基組分調(diào)節(jié)等方法大幅度提高兒茶素含量。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望在植物組織培養(yǎng)合成茶氨酸的研究中，日本學(xué)者已證實利用組織培養(yǎng)進(jìn)行植物繁殖，因其具有繁殖系數(shù)高、易保持親本的優(yōu)良性狀等優(yōu)點，將在茶樹育種研究及茶葉生產(chǎn)實際中具有廣闊的應(yīng)用前景。孫仲序等進(jìn)行了山東茶樹良種組織培養(yǎng)及繁殖能力的研究，結(jié)果表明，通過組織培養(yǎng)獲得的茶苗移栽成活率達(dá)85%，一個外植體經(jīng)3次繼代培養(yǎng)可繁殖47棵苗。

劉德華等以茶樹腋芽、葉為外植體進(jìn)行培養(yǎng)分化出大量胚狀體、芽，并獲得再生植株。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望利用組織培養(yǎng)進(jìn)行植物繁殖，因其具有繁殖系數(shù)高、易保持

（四）發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

發(fā)酵工程是生物工程技術(shù)的重要組成部分，是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的重要環(huán)節(jié)，是一門利用微生物的生長快、生長條件簡單、代謝途徑特殊等特點，采用工程菌株來生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的工程技術(shù)。由于它以培養(yǎng)微生物為主，所以又稱為微生物工程。發(fā)酵工程技術(shù)是應(yīng)用于茶葉上最早的生物技術(shù)，我國傳統(tǒng)的黑茶加工中的渥堆過程就是通過微生物分泌的胞外酶及釋放的微生物促使茶葉中內(nèi)含物發(fā)生復(fù)雜的變化，從而形成黑茶特有的品質(zhì)風(fēng)味。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（四）發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉生

吳謙等以綠茶為主要原料，取汁后使用酵母輕度發(fā)酵，研制出清澈透明，清涼爽口的發(fā)酵茶。潘立元等在綠茶茶湯中接種羅氏酵母，研制出酒精度低、口感醇和具有一定保健作用的綠茶汽酒。龔加順等利用優(yōu)勢菌種黑曲霉發(fā)酵曬青綠茶過程中，主要成分的變化規(guī)律表明，隨著發(fā)酵時間的延長，主要的化學(xué)品質(zhì)成分含量均發(fā)生了明顯變化，而且可在短時間內(nèi)生產(chǎn)熟普洱茶，其理化成分含量可達(dá)到陳年普洱茶的水平。

丘曉紅等在茶湯中接入木醋桿菌和酵母菌，發(fā)酵生產(chǎn)出營養(yǎng)豐富的細(xì)菌纖維素茶飲料。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望吳謙等以綠茶為主要原料，取汁后使用酵母輕度發(fā)酵，研

康燕山等在普洱茶發(fā)酵中，添加了幾種外源酶(纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶)及外源酵母，結(jié)果表明，外源酶及外源酵母的添加對普洱茶發(fā)酵過程中成分變化影響顯著。劉澤森等采用雙蒸雙壓、冷發(fā)酵2種不同發(fā)酵方式處理六堡茶，考察其對六堡成品茶品質(zhì)及內(nèi)含物質(zhì)的影響。分析表明，不同處理的六堡茶茶多酚、氨基酸、咖啡堿、水浸出物、茶紅素、茶褐素均有極顯著差異，其感官和理化成分都表現(xiàn)出不同的產(chǎn)品特點，雙蒸雙壓處理的六堡茶發(fā)酵程度、物質(zhì)轉(zhuǎn)化程度均低于冷發(fā)酵處理。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望康燕山等在普洱茶發(fā)酵中，添加了幾種外源酶(纖維素

曹冠華等將篩選出的根霉、黑曲霉和青霉按1：1：1比例制成發(fā)酵劑，添加1%的量進(jìn)行普洱茶渥堆發(fā)酵，得到了較好的發(fā)酵效果。趙龍飛等認(rèn)為普洱茶發(fā)酵是多種微生物作用以及茶葉內(nèi)含物質(zhì)在酶和濕熱的作用下，發(fā)生酶促和非酶促反應(yīng)的過程，其中酵母菌在這個過程中對不同風(fēng)味陳香的形成發(fā)揮著重要作用。在濕熱條件和酶的作用下，茶葉中的碳水化合物即糖類逐漸被轉(zhuǎn)化，為酵母菌的生長和繁殖提供營養(yǎng)，促進(jìn)其分解作用的進(jìn)行。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望曹冠華等將篩選出的根霉、黑曲霉和青霉按1：1：1

梁名志等報道指出，通過人工接種酵母、黑曲霉和青霉這三種微生物進(jìn)行固態(tài)發(fā)酵的發(fā)酵產(chǎn)品具有較好的滋味、湯色、香氣等感官品質(zhì)，同自然渥堆發(fā)酵茶樣相比，該工藝下茶多酚和水浸出物含量優(yōu)越，在藥用功能方面，防治努南氏綜合癥和胃癌的效果較好。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望

王朝霞等用RT-PCR法擴(kuò)增出一204bp的cDNA特異片段，然后通過3′/5′RACE的方法，分別擴(kuò)增出3′端和5′端的序列，從而獲得茶樹巰基蛋白酶抑制劑基因的cDNA全長序列，所得序列全長627bp，編碼l01個氨基酸。該基因若能成功轉(zhuǎn)入茶樹，并高效表達(dá)，將有望抗茶麗紋象甲、茶籽象甲、綠鱗象甲等害蟲，這將有望解決制約我國茶葉出口的農(nóng)藥殘留問題。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望展望：1、利用酶的高效生物催化特性，幾乎可按照人們的意愿“塑造”茶葉品質(zhì)，因此酶技術(shù)是解決茶葉品質(zhì)問題及開發(fā)茶葉新產(chǎn)品的有效途徑，尤其是對茶氨酸合成酶、多酚氧化酶及β-葡萄糖苷酶等幾種與茶葉品質(zhì)密切相關(guān)的酶的研究更應(yīng)重視。2、利用基因工程技術(shù)研究確定兒茶素、茶氨酸等茶葉保健功能成分的目的基因，然后將其轉(zhuǎn)入某些工程苗，采用發(fā)酵工程技術(shù)進(jìn)行高效生產(chǎn)，這種基因工程和發(fā)酵工程等技術(shù)的綜合研究，將為茶葉保健功能成分的開發(fā)利用開辟新的道路。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望展望：第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望3、DNA分子標(biāo)記技術(shù)將在茶樹種質(zhì)資源研究領(lǐng)域有更廣泛的用途和前景。如ACGM標(biāo)記，能夠探知親緣關(guān)系較近的物種間的同源基因的功能，對于茶樹這種遺傳背景復(fù)雜，且基因序列研究較少的物種，可以通過一些和茶樹親緣關(guān)系較近且功能基因研究較多的物種進(jìn)行ACGM標(biāo)記，找到一些新的功能基因。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望3、DNA分子標(biāo)記技術(shù)將在茶樹種質(zhì)資源研究領(lǐng)域有更廣泛的用4、近紅外光譜技術(shù)（NearInfrared，NIR）是一種高效快速的現(xiàn)代分析技術(shù)，它綜合運用了計算機(jī)技術(shù)、光譜技術(shù)和化學(xué)計量學(xué)等多個學(xué)科的最新研究成果。NIR技術(shù)已嘗試應(yīng)用于茶葉含水量、咖啡堿、茶多酚、茶黃素和茶紅素、總氮量、纖維素、茶葉抗氧化活性等方面的快速檢測；NIR技術(shù)還應(yīng)用于茶葉等級、茶葉種類、茶葉真?zhèn)蔚确矫娴呐袆e上；此外，NIR技術(shù)在茶鮮葉質(zhì)量評價（嫩度、勻凈度和新鮮度）上和茶鮮葉產(chǎn)地判別上也進(jìn)行了嘗試。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望4、近紅外光譜技術(shù)（NearInfrared，NIR）是一圖表1：2017年12月農(nóng)業(yè)部等9部門關(guān)于認(rèn)定中國特色農(nóng)產(chǎn)品優(yōu)勢區(qū)名單（第一批）第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響圖表1：2017年12月農(nóng)業(yè)部等9部門關(guān)于認(rèn)定中國特色農(nóng)產(chǎn)品第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響1、在茶葉加工領(lǐng)域，應(yīng)用生物技術(shù)，可以創(chuàng)造出更多的經(jīng)濟(jì)效益。茶葉加工中應(yīng)用酶工程技術(shù)，利用酶如多酚氧化酶、單寧酶、纖維素酶、果膠酶、蛋白酶、淀粉酶等高效生物催化功能，促進(jìn)茶葉內(nèi)不利及無效成分的有益轉(zhuǎn)化，改善茶葉的色香味形品質(zhì)及營養(yǎng)價值等綜合品質(zhì)。發(fā)酵工程技術(shù)應(yīng)用于茶葉上，我國傳統(tǒng)的黑茶加工中的渥堆過程就是通過微生物分泌的胞外酶及釋放的微生物促使茶葉中內(nèi)含物發(fā)生復(fù)雜的變化，從而形成黑茶特有的品質(zhì)風(fēng)味。第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響1、在茶葉加工領(lǐng)域，應(yīng)用生物技術(shù)，可以創(chuàng)造出更多的經(jīng)濟(jì)效益。2、在茶葉深加工領(lǐng)域，研制具有廣譜、高效、無毒的純天然的茶葉生物防腐、保鮮劑，保持新鮮茶葉所具有的色、香、味、形，生產(chǎn)出符合消費者需要的天然、新鮮、健康和安全茶葉。茶葉富含茶多酚、咖啡堿、氨基酸、茶多糖、維生素、芳香類物質(zhì)等生物活性成分而具有抑菌、抗病毒、防癌抗癌等保健功能，可以利用細(xì)胞培養(yǎng)法進(jìn)行生產(chǎn)。3、發(fā)酵技術(shù)用于茶葉綜合利用，茶葉下腳料可發(fā)酵生產(chǎn)木糖酶和過氧化物酶等多種酶制劑，用固體發(fā)酵法可從低檔茶葉及茶渣中制取高蛋白質(zhì)飼料等。第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響2、在茶葉深加工領(lǐng)域，研制具有廣譜、高效、無毒的純天然的茶葉4、應(yīng)用生物芯片技術(shù)，能夠準(zhǔn)確、快速對茶樹基因、蛋白質(zhì)、核酸等生理活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)、功能、機(jī)理等進(jìn)行檢測和分析，能夠進(jìn)行快速、準(zhǔn)確地檢測和分析茶葉品質(zhì)因子和農(nóng)藥殘留等安全指標(biāo)。應(yīng)用基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)，可以從更高水平來系統(tǒng)研究茶樹的功能與結(jié)構(gòu)，創(chuàng)新茶樹優(yōu)良種質(zhì)和提供優(yōu)質(zhì)原料，為茶產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展、茶葉效益提升創(chuàng)出一條嶄新路子。第3節(jié)生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響4、應(yīng)用生物芯片技術(shù)，能夠準(zhǔn)確、快速對茶樹基因、蛋白質(zhì)、核酸茶葉生物技術(shù)

Tea

Biotechnology李遠(yuǎn)華茶葉生物技術(shù)TeaBiotechnology第一章緒論主要內(nèi)容生物技術(shù)概念；生物技術(shù)的分類及其特點；茶葉生物技術(shù)的內(nèi)容及其特點；茶葉生物技術(shù)的研究現(xiàn)狀；酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用；我國茶葉生物技術(shù)研究的展望；生物技術(shù)對茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的影響。第一章緒論主要內(nèi)容

國際經(jīng)濟(jì)合作及發(fā)展組織(IECDO)將生物技術(shù)定義為應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)的原理，依靠生物作用劑的作用將物料進(jìn)行加工以提供產(chǎn)品或用于為社會服務(wù)的技術(shù)。內(nèi)容可分為細(xì)胞工程、酶工程、發(fā)酵工程、基因工程和蛋白質(zhì)工程。

特別是現(xiàn)代生物技術(shù)正在推動新的科技革命的形成，基因組學(xué)、后基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、干細(xì)胞技術(shù)和組織工程學(xué)、系統(tǒng)生物學(xué)、植物轉(zhuǎn)基因技術(shù)、體細(xì)胞克隆、生物芯片、基因治療、生物藥物等技術(shù)將發(fā)揮主導(dǎo)作用。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點國際經(jīng)濟(jì)合作及發(fā)展組織(IECDO)將生物技術(shù)定義為

20世紀(jì)60年代末英國劍橋大學(xué)化學(xué)系對茶樹幼莖切片的培養(yǎng)，探討咖啡因合成途徑。20世紀(jì)70年代Y·Takino和G·W·Sanderson等以及施兆鵬分別研究了單寧酶和果膠酶提高速溶茶制率、減少冷后渾及改善速溶茶湯色。利用發(fā)酵技術(shù)開發(fā)具有特殊風(fēng)味及營養(yǎng)保健功效的新型茶葉制品如紅茶菌、茶酒。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點20世紀(jì)60年代末英國劍橋大學(xué)化學(xué)系對茶樹幼莖切片的

雖然茶葉生物技術(shù)研究起步較晚，但進(jìn)展較快，當(dāng)前已是茶學(xué)學(xué)科的一個熱點，特別是基因工程技術(shù)在茶葉中應(yīng)用取得了突飛猛進(jìn)，茶葉基因的分離轉(zhuǎn)化，茶樹基因組學(xué)研究等，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所、安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)茶樹生物學(xué)與資源利用國家重點實驗室、浙江大學(xué)茶葉研究所等都取得了可喜成就。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點雖然茶葉生物技術(shù)研究起步較晚，但進(jìn)展較快，當(dāng)前

茶葉生物技術(shù)是茶學(xué)與生物技術(shù)結(jié)合的交叉學(xué)科，是利用生物技術(shù)來解決茶產(chǎn)業(yè)面臨問題。

茶葉生物技術(shù)綜合了微生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、遺傳學(xué)、植物生理學(xué)、生物化學(xué)、分子生物學(xué)、基因工程、細(xì)胞工程、微生物工程、生化工程、生物工程下游技術(shù)、發(fā)酵工程設(shè)備以及茶學(xué)等多學(xué)科知識，它的特點具有典型的智力密集型產(chǎn)業(yè)，高投入、高風(fēng)險和高科技人才，具有研發(fā)和產(chǎn)業(yè)化周期長、對資源依賴性強(qiáng)和對人才實驗操作技能要求高等特征。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點茶葉生物技術(shù)是茶學(xué)與生物技術(shù)結(jié)合的交叉學(xué)科，是利用生

我國茶葉生物技術(shù)研發(fā)應(yīng)由積極跟蹤為主轉(zhuǎn)變?yōu)樽灾鲃?chuàng)新為主，切實提高自主創(chuàng)新能力，拉近與其他學(xué)科生物技術(shù)研究水平的差距，使我國擁有一批具有自主知識產(chǎn)權(quán)的專利與標(biāo)準(zhǔn)；由單一技術(shù)突破為主轉(zhuǎn)變?yōu)閱我患夹g(shù)突破與多項技術(shù)的集成相結(jié)合，全面提高我國茶葉生物技術(shù)及產(chǎn)業(yè)的整體水平；由立足國內(nèi)市場轉(zhuǎn)變?yōu)槊嫦驀H市場，充分發(fā)揮我國是世界茶葉原產(chǎn)地優(yōu)勢，加速茶產(chǎn)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化、市場化、國際化進(jìn)程；由研究開發(fā)為主，轉(zhuǎn)變?yōu)檠芯块_發(fā)與產(chǎn)業(yè)化協(xié)調(diào)，加速培育新的茶葉經(jīng)濟(jì)增長點。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點我國茶葉生物技術(shù)研發(fā)應(yīng)由積極跟蹤為主轉(zhuǎn)變?yōu)樽灾鲃?chuàng)新為

從事茶葉生物技術(shù)，必須了解和掌握國家生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)政策、知識產(chǎn)權(quán)及生物工程安全條例等有關(guān)政策和法規(guī)。學(xué)好茶葉生物技術(shù)，能夠成為從事茶學(xué)與生物技術(shù)有關(guān)的應(yīng)用研究、技術(shù)開發(fā)、生產(chǎn)管理和行政管理等工作的高級專門人才。第1節(jié)茶葉生物技術(shù)及其特點從事茶葉生物技術(shù)，必須了解和掌握國家生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)政策植物生物技術(shù)可從其研究對象上分為三個層次，即分子水平上的植物基因工程技術(shù)、細(xì)胞及亞細(xì)胞水平上的植物細(xì)胞工程技術(shù)以及器官水平上的植物組織培養(yǎng)技術(shù)。

植物生物技術(shù)在植物繁殖方面已取得了巨大的成功，但由于種種原因，茶葉生物技術(shù)的許多研究目前還遠(yuǎn)遠(yuǎn)落后于其他作物。目前應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域的生物技術(shù)主要有酶工程、基因工程、細(xì)胞工程、微生物工程等。

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望植物生物技術(shù)可從其研究對象上分為三個層次，即分子水平

（一）酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

茶葉酶工程的重要內(nèi)容是利用酶的高效生物催化功能，促進(jìn)茶葉內(nèi)不利及無效成分的有益轉(zhuǎn)化，改善茶葉的色香味形及營養(yǎng)價值等綜合品質(zhì)。

目前主要有多酚氧化酶、果膠酶、多糖水解酶、單寧酶、蛋白酶、β-葡萄糖苷酶、纖維素酶等酶制劑已應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（一）酶工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國

多酚氧化酶主要用于催化茶葉中多酚類氧化生成茶黃素和茶紅素，同時使香氣前體物質(zhì)發(fā)生偶聯(lián)氧化，產(chǎn)生各種香氣成分，形成紅茶基本風(fēng)味。付贏萱等利用多酚氧化酶進(jìn)行為期18d普洱茶渥堆發(fā)酵，茶多酚、茶褐素等成分的變化差異顯著，且在酶濃度為1.6U/g、3.2U/g時，普洱茶達(dá)到了陳年普洱茶品質(zhì)，湯色深橙紅色、明亮，滋味醇厚回甘。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望多酚氧化酶主要用于催化茶葉中多酚類氧化生成茶黃素

蛋白酶主要用于降解茶葉中蛋白質(zhì)而生成各種氨基酸，從而改善茶葉的香氣和鮮爽度，在紅碎茶加工中添加蛋白酶可使氨基酸、茶紅素含量提高，茶褐素明顯下降，滋味增強(qiáng)，湯色變亮，香氣變好；夏季綠茶加工過程中添加木瓜蛋白酶(Papain)能明顯提高茶湯中氨基酸的含量，從而有效降低夏茶的苦澀味。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望蛋白酶主要用于降解茶葉中蛋白質(zhì)而生成各種氨基酸，β-葡萄糖苷酶是將茶鮮葉中香氣前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化成游離態(tài)香氣成分的關(guān)鍵酶，從茶葉中提取的β-葡萄糖苷酶粗品可使夏季烘青綠茶中香葉醇的含量提高1～3倍，明顯改善夏季綠茶香氣。另有研究表明：外源單寧酶、果膠酶的加入能有效提高微濾功效和微濾液的生化得率，加酶微濾的平均膜通量提高30ml/min；同時，微濾中的水浸出物、茶多酚、氨基酸、咖啡堿、糖、兒茶素的得率都有較大提高。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望β-葡萄糖苷酶是將茶鮮葉中香氣前體物質(zhì)轉(zhuǎn)化成游離

梁靖等研究纖維素酶的加入量、酶解溫度、酶解時間對速溶茶提取率的影響，結(jié)果顯示，使用纖維素酶可以有效提高速溶茶的提取率，其最佳工藝參數(shù)為酶量0.15U/mL、溫度45℃、時間60min。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望梁靖等研究纖維素酶的加入量、酶解溫度、酶解時間對

譚淑宜等研究了果膠酶提取和蛋白酶提取分別對紅碎茶和綠茶提取液中茶多酚、氨基酸、咖啡堿及水浸出物含量的影響，結(jié)果表明，果膠酶對紅碎茶和綠茶的提取均有一定的效果，水浸出物含量均有所提高；紅碎茶和綠茶經(jīng)蛋白酶提取，其提取液中氨基酸提取率分別比對照高196.8%和72.8%，可見蛋白酶有利于提高速溶茶滋味品質(zhì)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望譚淑宜等研究了果膠酶提取和蛋白酶提取分別對紅碎茶速溶茶：維素酶和果膠酶、木瓜蛋白酶，提高提取率及品質(zhì)。茶濃縮汁生產(chǎn)：單寧酶茶飲料渾濁、沉淀：單寧酶

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望速溶茶：維素酶和果膠酶、木瓜蛋白酶，提高提取率及品質(zhì)。第2節(jié)纖維素酶和半纖維素酶屬于多糖水解酶類，可催化纖維素水解成小分子的糖類物質(zhì)，從而增加茶湯的甜醇度蛋白酶可將茶葉中的蛋白質(zhì)水解成各種氨基酸，不僅能改善茶葉的香氣和鮮爽度，而且可減少不溶性的復(fù)合物產(chǎn)生

提高茶湯的質(zhì)量酵母菌分泌的胞外酶，可使茶葉中含量較高的茶多酚、蛋白質(zhì)、碳水化合物發(fā)生一系列的化學(xué)反應(yīng)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望纖維素酶和半纖維素酶屬于多糖水解酶類，可催化纖維于春花等研究了外源酶對普洱生茶浸提液品質(zhì)的影響，結(jié)果顯示三種酶對茶褐素氧化貢獻(xiàn)由大到小分別為漆酶、蛋白酶、單寧酶；三種酶最優(yōu)配比為：0.15%、0.05%、0.03%，此條件下，茶多酚含量28.71%，與酶處理前試樣比較降低了8.45%，可溶性糖、氨基酸、茶褐素含量分別為11.97%、3.58%、8.60%，是酶處理前的3.49倍、1.10倍、4.32倍。

第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望于春花等研究了外源酶對普洱生茶浸提液品質(zhì)的影響酶技術(shù)在渥堆發(fā)酵中的應(yīng)用研究愈來愈多，其目的主要是為了縮短發(fā)酵周期及改善茶葉品質(zhì)。單寧酶、蛋白酶、多酚氧化酶等復(fù)合酶制劑處理普洱茶樣后可以明顯改變內(nèi)含成分含量，進(jìn)而改善茶葉品質(zhì)。在夏季金觀音鮮葉萎凋過程中添加纖維素酶、木瓜蛋白酶與木聚糖酶能顯著提高茶紅素、茶黃素和水浸出物，其中添加纖維素酶的效果最好，可使茶黃素含量達(dá)到0.57%，茶紅素含量達(dá)10.93%，水浸出物含量達(dá)34.53%。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望酶技術(shù)在渥堆發(fā)酵中的應(yīng)用研究愈來愈多，其目的主要

（二）基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

1.DNA分子標(biāo)記技術(shù)優(yōu)勢：①不受實驗組織類型不同和發(fā)育時間等方面的影響，實驗個體的任何組織器官在各種時期都可能進(jìn)行分析實驗。②可完全不受環(huán)境因素的影響。環(huán)境的改變不能決定DNA的結(jié)構(gòu)，即DNA的核苷酸序列是固定不變的。③標(biāo)識的數(shù)目龐大，可覆蓋全部的基因組。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（二）基因工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉④遺傳多態(tài)性高，因此具有大量變異的等位基因，也各不相同。⑤有很多標(biāo)識為共顯性，可有效的辨別出純合DNA型及雜合DNA型，收集全部的DNA遺傳信息。⑥D(zhuǎn)NA分子標(biāo)記技術(shù)更加簡單、快捷、自動化。⑦通過實驗提取出的DNA，在合適條件下能長時間的進(jìn)行保存，這在進(jìn)行物種或者基因的起源及決定性的鑒定上有利。應(yīng)用：茶樹的親緣關(guān)系鑒別、遺傳多樣性分析、分子遺傳圖譜的構(gòu)建、種質(zhì)資源的分子鑒定等方面。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望④遺傳多態(tài)性高，因此具有大量變異的等位基因，也各不相同。第2SSR(SimpleSequenceRepeats)標(biāo)記是近年來發(fā)展起來的一種以特異引物PCR為基礎(chǔ)的分子標(biāo)記技術(shù)，也稱為微衛(wèi)星DNA(MicrosatelliteDNA),是一類由幾個核苷酸（一般為1~6個）為重復(fù)單位組成的長達(dá)幾十個核苷酸的串聯(lián)重復(fù)序列。每個SSR兩側(cè)的序列一般是相對保守的單拷貝序列。AFLP（Amplifiedfragmentlengthpolymorphism）技術(shù)是由Zabeau等于1993年發(fā)明的分子標(biāo)記技術(shù)。AFLP是基于PCR技術(shù)擴(kuò)增基因組DNA限制性酶切片段，并結(jié)合了RFLP和PCR技術(shù)特點，具有多態(tài)性高、重復(fù)性好、假陽性低、所需模板DNA量少等特點，非常適合在分子生物學(xué)基礎(chǔ)相對薄弱的茶樹研究中應(yīng)用。該技術(shù)以錨定的微衛(wèi)星DNA為引物，在SSR序列的3’或5’端加錨2．4個隨機(jī)核苷酸，在PCR反應(yīng)中，錨定引物可以引起特定位點退火，導(dǎo)致與錨定引物互補(bǔ)的間隔不太大的重復(fù)序列間DNA片斷進(jìn)行PCR擴(kuò)增第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望SSR(SimpleSequenceRepRFLP和RAPD技術(shù)。RFLP是發(fā)展最早的DNA標(biāo)記技術(shù)。RFLP是指基因型之間限制性片段長度的差異，這種差異是由限制性酶切位點上堿基的插入、缺失、重排或點突變所引起的。RAPD技術(shù)是1990年發(fā)明并發(fā)展起來的，RAPD是建立在PCR(PolymeraseChainReaction)基礎(chǔ)之上的一種可對整個未知序列的基因組進(jìn)行多態(tài)性分析的分子技術(shù)。其以基因組DNA為模板，以單個人工合成的隨機(jī)多態(tài)核苷酸序列(通常為10個堿基對)為引物，在熱穩(wěn)定的DNA聚合酶(Taq酶)作用下，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖或聚丙烯酰胺電泳分離、溴化乙錠染色后，在紫外透視儀上檢測多態(tài)性。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望RFLP和RAPD技術(shù)。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀I(lǐng)SSR(inter-simplesequencerepeat)即簡單重復(fù)區(qū)間序列標(biāo)記是一種新型的分子標(biāo)記技術(shù)，它是用錨定的SSR(simplesequencerepeats)為引物，采用PCR技術(shù)對位于SSR之間的DNA序列進(jìn)行擴(kuò)增的分子標(biāo)記技術(shù)。ISSR技術(shù)具有重復(fù)性好、多態(tài)性高和操作簡單的特點，是一種評價物種間遺傳多樣性和親緣關(guān)系的有效方法，目前已被廣泛應(yīng)用于植物品種鑒定、基因定位、指紋圖譜繪制等方面研究中。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望ISSR(inter-simplesequencere2.基因克隆和表達(dá)自1994年Takeuchi等報道了第一條茶樹基因CHS（查爾酮合成酶）序列以來，茶樹基因克隆表達(dá)取得了較快的發(fā)展。

Misakokato等首次對咖啡堿合成酶(TCS)進(jìn)行了純化，并對其相關(guān)性質(zhì)進(jìn)行了研究，且成功地克隆了咖啡堿合成酶基因，是目前茶界發(fā)表最高檔次的一篇研究論文。發(fā)表在MISAKOKATO,KOUICHIMIZUNO，ALANCROZIER.Caffeinesynthasegenefromtealeaves[J].Nature，2000，406(6799):956-957。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

李遠(yuǎn)華研究咖啡堿合成酶基因mRNA在葉片柵欄組織中表達(dá)信號強(qiáng)。（作者李遠(yuǎn)華，江昌俊，宛曉春，茶樹咖啡堿合成酶基因mRNA表達(dá)的研究，茶葉科學(xué)，2004，1）

李遠(yuǎn)華對咖啡堿合成酶基因表達(dá)與定位，是在武漢大學(xué)博士后期間進(jìn)行，“茶樹咖啡堿合成酶基因的表達(dá)及定位分析”，資助編號：20060390833，中國博士后科學(xué)基金資助項目，研究結(jié)果發(fā)表：Yuan-HuaLi,WeiGu,andShengYe.ExpressionandLocationofCaffeineSynthaseinTeaPlants，RussianJournalofPlantPhysiology（SCI）,54(5):698–701,2007。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

李遠(yuǎn)華、王朝霞、楊順利、江昌俊等2001開始從茶樹中獲得了與茶葉香氣形成有關(guān)β-葡萄糖苷酶基因(李遠(yuǎn)華博士論文：茶樹β-葡萄糖苷酶基因克隆、表達(dá)和分布定位，Camelliasinensisbeta-1,3-glucosidasemRNA,GenBank,Accessionno.,AF537127)。

李遠(yuǎn)華研究了茶樹β-葡萄糖苷酶cDNA克隆與原核表達(dá)、茶樹β-葡萄糖苷酶基因mRNA表達(dá)的研究、茶樹β-葡萄糖苷酶基因的定位原位擴(kuò)增研究。研究β-葡萄糖苷酶基因mRNA主要在茶樹葉片柵欄組織、葉主脈的薄壁組織表達(dá)；不同品種之間的表達(dá)位置基本相似，但表達(dá)信號卻有差異。（有關(guān)研究論文以表在：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報，南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，茶葉科學(xué)）第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)茶樹基因的分離和克隆是茶樹生物技術(shù)研究的重要內(nèi)容之一，也是茶樹種質(zhì)資源改良和利用以及茶樹生物反應(yīng)器研究的基礎(chǔ)。李遠(yuǎn)華等采用SSH技術(shù)分析了VA菌根處理后福鼎大白茶根系基因差異表達(dá)情況，克隆了HMGR基因（GenBank，登錄號KJ946250）、GAGP基因（GenBank，登錄號KJ946251）、Actin基因(GenBank,登錄號KJ946252)，并進(jìn)行了表達(dá)分析。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

武夷學(xué)院第一個，也是福建省茶葉界第一個國家自然科學(xué)基金和結(jié)題項目：VA菌根促進(jìn)茶樹生長的轉(zhuǎn)錄譜分析和相關(guān)候選基因克隆，項目批準(zhǔn)號：31070613，已結(jié)題（結(jié)題號：99982635-1878），國家自然科學(xué)基金面上項目，2011-2013，李遠(yuǎn)華主持。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀2.基因克隆和表達(dá)

茶葉中還有一些很重要基因：多酚氧化酶基因，茶氨酸合成酶基因等。日本人研究的茶樹β-櫻草糖苷酶基因并發(fā)表在美國植物生理學(xué)期刊，也是重要一個成果。

茶樹基因組研究也取得了成果：中科院昆明植物所、云南農(nóng)大等（高立志、盛軍等人，2017年）從“云抗10號”約3.02Gbp；安徽農(nóng)大、深圳華大基因組中心等（宛曉春、韋朝領(lǐng)等人，2018年）研究“舒茶早”約3.0Gbp，在美國國家科學(xué)院院刊PNAS發(fā)表，是中國茶界第一篇這么高水平研究論文。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望2.基因克隆和表達(dá)第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀

（三）細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

細(xì)胞工程就是人為地改變或創(chuàng)造細(xì)胞的遺傳性狀，在體外大量培養(yǎng)和繁殖細(xì)胞群體，為生物個體或株系提供所需產(chǎn)品的工程技術(shù)。目前應(yīng)用于茶學(xué)領(lǐng)域的主要有細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、染色體轉(zhuǎn)移及細(xì)胞代謝物的生產(chǎn)等。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（三）細(xì)胞工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉生

在20世紀(jì)80年代，Kato等從愈傷組織中誘導(dǎo)再生植株，研究表明，只有在帶莖表層的組織上，誘導(dǎo)的愈傷組織才能分化出不定芽，在后面的繼代培養(yǎng)中生長發(fā)育良好，且莖段縱切的分化率比橫切的高。Akulaa等通過茶樹莖段誘導(dǎo)體細(xì)胞胚發(fā)生，建立了一套較完整的茶樹再生體系，在培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生不定胚，之后在1/2濃度大量元素、完全的MS培養(yǎng)基濃度微量元素和維生素的MS培養(yǎng)基中誘導(dǎo)體胚，誘導(dǎo)率達(dá)60%。Kato以幼葉為外植體材料，將其置于不同濃度的2，4-D培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在葉的基部能直接或通過胚性愈傷組織誘導(dǎo)出體細(xì)胞胚，通過細(xì)胞組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)體細(xì)胞胚起源于葉片中脈。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望在20世紀(jì)80年代，Kato等從愈傷組織中誘導(dǎo)

茶樹花藥培養(yǎng)獲得植株，是我國茶界當(dāng)時突破性一個成果：

福建農(nóng)學(xué)院亞熱帶果樹研究所園藝植物組織培養(yǎng)育種研究室陳振光教授（園藝系副主任）等經(jīng)過近十年的研究,成功地從茶樹花藥中誘導(dǎo)出根、莖、葉完整的植株,并先后將試管苗移植于大田,成活了30株。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望茶樹花藥培養(yǎng)獲得植株，是我國茶界當(dāng)時突破性一個

目前大部分的栽培品種都是通過常規(guī)的育種方法從群體品種中選育而來，而常規(guī)的育種方法主要是通過植株表現(xiàn)型的差異進(jìn)行蹄選，這種方法對于質(zhì)量性狀來說一般是有效的，但數(shù)量性狀在茶樹性狀中占主導(dǎo)地位，而數(shù)量性狀易受外界環(huán)境和茶樹生理周期的影響，很難在早期進(jìn)行鑒定，以傳統(tǒng)育種方法選育出一個優(yōu)良新品種，至少需要20年的時間，很難滿足現(xiàn)階段快速培育新品種的需求。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望目前大部分的栽培品種都是通過常規(guī)的育種方法從群

在植物組織培養(yǎng)合成茶氨酸的研究中，日本學(xué)者已證實，向培養(yǎng)基中添加前體物質(zhì)鹽酸乙胺時，可大幅度提高愈傷組織中的茶氨酸合成量。利用茶樹細(xì)胞培養(yǎng)生物合成法生產(chǎn)兒茶素具有不受地域季節(jié)限制、不與傳統(tǒng)飲料茶葉爭原料、便于產(chǎn)業(yè)化等優(yōu)點，因而受到了國內(nèi)外的重視。成浩等對此進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究，證實茶樹培養(yǎng)細(xì)胞在一定的條件下能夠保持其次生代謝產(chǎn)物的合成能力，而且可通過培養(yǎng)基組分調(diào)節(jié)等方法大幅度提高兒茶素含量。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望在植物組織培養(yǎng)合成茶氨酸的研究中，日本學(xué)者已證實利用組織培養(yǎng)進(jìn)行植物繁殖，因其具有繁殖系數(shù)高、易保持親本的優(yōu)良性狀等優(yōu)點，將在茶樹育種研究及茶葉生產(chǎn)實際中具有廣闊的應(yīng)用前景。孫仲序等進(jìn)行了山東茶樹良種組織培養(yǎng)及繁殖能力的研究，結(jié)果表明，通過組織培養(yǎng)獲得的茶苗移栽成活率達(dá)85%，一個外植體經(jīng)3次繼代培養(yǎng)可繁殖47棵苗。

劉德華等以茶樹腋芽、葉為外植體進(jìn)行培養(yǎng)分化出大量胚狀體、芽，并獲得再生植株。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望利用組織培養(yǎng)進(jìn)行植物繁殖，因其具有繁殖系數(shù)高、易保持

（四）發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用

發(fā)酵工程是生物工程技術(shù)的重要組成部分，是生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)化的重要環(huán)節(jié)，是一門利用微生物的生長快、生長條件簡單、代謝途徑特殊等特點，采用工程菌株來生產(chǎn)各種有用物質(zhì)的工程技術(shù)。由于它以培養(yǎng)微生物為主，所以又稱為微生物工程。發(fā)酵工程技術(shù)是應(yīng)用于茶葉上最早的生物技術(shù)，我國傳統(tǒng)的黑茶加工中的渥堆過程就是通過微生物分泌的胞外酶及釋放的微生物促使茶葉中內(nèi)含物發(fā)生復(fù)雜的變化，從而形成黑茶特有的品質(zhì)風(fēng)味。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望（四）發(fā)酵工程在茶學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用第2節(jié)我國茶葉生

吳謙等以綠茶為主要原料，取汁后使用酵母輕度發(fā)酵，研制出清澈透明，清涼爽口的發(fā)酵茶。潘立元等在綠茶茶湯中接種羅氏酵母，研制出酒精度低、口感醇和具有一定保健作用的綠茶汽酒。龔加順等利用優(yōu)勢菌種黑曲霉發(fā)酵曬青綠茶過程中，主要成分的變化規(guī)律表明，隨著發(fā)酵時間的延長，主要的化學(xué)品質(zhì)成分含量均發(fā)生了明顯變化，而且可在短時間內(nèi)生產(chǎn)熟普洱茶，其理化成分含量可達(dá)到陳年普洱茶的水平。

丘曉紅等在茶湯中接入木醋桿菌和酵母菌，發(fā)酵生產(chǎn)出營養(yǎng)豐富的細(xì)菌纖維素茶飲料。第2節(jié)我國茶葉生物技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀與展望吳謙等以綠茶為主要原料，取汁后使用酵母輕度發(fā)酵，研

康燕山等在普洱茶發(fā)酵中，添加了幾種外源酶(纖維素酶、半纖維素酶、蛋白酶)及外源酵母，結(jié)果表明，外源酶及外源酵母的添加對普洱茶發(fā)酵過程中成分變化影響顯著。劉澤森等采用雙蒸雙壓、冷發(fā)酵2種不同發(fā)酵方式處理六堡茶，考察其對六堡成品茶品質(zhì)及內(nèi)含物質(zhì)的影響。分析表明，不同處理的六堡茶茶多酚、氨基酸、咖啡堿、水浸出物、茶紅素、茶褐素均有極顯著差異，其感官和理化成分都表現(xiàn)出不同的產(chǎn)品特點，雙蒸雙壓處理的六堡茶發(fā)酵程度、物質(zhì)轉(zhuǎn)化程度均低于