人體脂肪MSCs培養(yǎng)與分離方法課件_第1頁
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文檔簡介

人體脂肪間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)與分離方法：1.獲取成人脂肪組織，使用手術(shù)吸脂的方式獲得目標(biāo)脂肪組織。2.將使用吸脂手術(shù)取得的脂肪組織通過D-Hank’s

把麻醉和血細胞洗滌干凈。3.洗滌后用

0.075%的

I

型膠原酶

37

攝氏度今晚哪里發(fā)生了？但是看他們的表情，都是一臉的輕松無事消化一小時。4.將未消化組織使用

100

目篩網(wǎng)過濾掉。5.室溫、1400

轉(zhuǎn)/min、離心十分鐘，將上清今晚哪里發(fā)生了？但是看他們的表情，都是一臉的輕松無事7.離心收集細胞。人體骨髓間充質(zhì)干細胞的分離方法：1.無菌采集健康志愿者骨髓

5-10

毫升裝入無菌肝素管中。

2.用一支無菌離心管，裝入

D-Hank’s

稀釋后的骨髓液調(diào)整骨髓濃度為

107/毫升并計數(shù)。今晚哪里發(fā)生了？但是看他們的表情，都是一臉的輕松無事3.另外取一支清潔的離心管，將上面獲得的骨髓液細胞核恢復(fù)至室溫的Ficoll淋巴細胞以1：1

的比例混合，添加時操作要仔細不能破壞界面。4.將配好后的離心管置入離心機中，室溫、1500

轉(zhuǎn)/min、離心二十分鐘。5.將離心管取出后，保證無菌操作仔細吸取間充質(zhì)干細胞（MSC）的接種和擴增培養(yǎng)：1.用

2×106/毫升的密度接種細胞，放入CO25%的培養(yǎng)箱中

37

攝氏度培養(yǎng)。的胰酶常規(guī)消化。4.細胞按照

1:3

的比例進行傳代，第

2

或第3

代細胞可以用于實驗中。

2.經(jīng)過擴增培養(yǎng)特別十二小時后，進行下一步成肌誘導(dǎo)培養(yǎng)。培養(yǎng)液成份：DMEM、2%FCS、5%馬血清（horseserum，HS）、50μ

M

氫化可的松（hydrocortisone）和

100μ

g/ml

青霉素及今晚哪里發(fā)生了？但是看他們的表情，都是一臉的輕松無事100U/ml

硫酸鏈霉素。3.每三天半量換該誘導(dǎo)液。內(nèi)皮誘導(dǎo)：1.用Matrigel(factorreduced，BDBioscience)包被

24

孔培養(yǎng)板。

2.按

5×104

個細胞/孔接種間充質(zhì)干細胞。今晚哪里發(fā)生了？但是看他們的表情，都是一臉的輕松無事3.配制內(nèi)皮誘導(dǎo)液：

M199、

2%FBS、

50ng/mlVEGF、10ng/mlbFGF

和

100

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