實(shí)驗(yàn)六細(xì)菌生化特性試驗(yàn)

揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院12/7/2022實(shí)驗(yàn)原理各種細(xì)菌在其新陳代謝中，由于利用營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力有所差異，排泄的代謝產(chǎn)物亦不同，所以利用這點(diǎn)進(jìn)行生化試驗(yàn)，可達(dá)到鑒定細(xì)菌種的目的，尤其在鑒定腸道桿菌時(shí)，生化試驗(yàn)是極其常用的一種方法。一、目的要求學(xué)習(xí)常用的生化實(shí)驗(yàn)方法；掌握大腸桿菌與沙門氏菌的主要生化特點(diǎn)。個(gè)體為桿狀散在或成對(duì)G－沙門氏菌是一大群寄生于人和動(dòng)物腸道內(nèi)、生化特性和抗原結(jié)構(gòu)相似，G－，兼性厭氧的無(wú)芽胞直桿菌。在醫(yī)學(xué)、獸醫(yī)和公共衛(wèi)生上均十分重要：絕大多數(shù)沙門氏菌對(duì)人和動(dòng)物有致病性；能致人和動(dòng)物多種不同臨床表現(xiàn)的沙門氏菌?。蝗祟愂澄镏卸镜闹饕≡?。三、實(shí)驗(yàn)材料常規(guī)接種工具：接種棒、酒精燈等革蘭氏染色液、玻片、滴管等菌種:大腸桿菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）沙門氏菌的普通瓊脂（或麥康凱）培養(yǎng)物（1個(gè)/組）大腸桿菌、沙門氏菌的鄧亨氏蛋白胨水培養(yǎng)物；大腸桿菌、沙門氏菌的葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)物。培養(yǎng)基：三糖鐵斜面（1支/人）生化管：葡、乳、麥、甘、蔗、H2S、尿、枸（1套/人）試劑：吲哚試劑、M.R試劑、V-P試劑等三糖鐵瓊脂接種挑取待試菌菌落穿刺接種三糖鐵底部并涂布于斜面；置37℃培養(yǎng)。葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門氏菌大腸桿菌沙門氏菌置37℃培養(yǎng)吲哚試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL鄧亨氏蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d；靜置分層后，沿試管壁加入吲哚試劑1mL；上層變?yōu)榧t色者為陽(yáng)性反應(yīng)。乙醚混勻分層吲哚試劑陽(yáng)性陰性吲哚試驗(yàn)原理蛋白質(zhì)中的色氨酸有些細(xì)菌如大腸埃希氏菌吲哚對(duì)位二甲基氨基苯甲醛+玫瑰吲哚紅色①試劑配方一：對(duì)二甲基氨基苯甲醛 1g無(wú)水乙醇 95mL濃鹽酸 20mL②試劑配方二：對(duì)二甲基氨基苯甲醛5g戊醇（或異戊醇）75mL濃鹽酸 25mL先用乙醇溶解試劑后加鹽酸，避光保存。M.R試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于5mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入幾滴試劑；變紅色者為陽(yáng)性反應(yīng)，桔紅到黃色則為陰性。M.R試劑陽(yáng)性陰性V-P試驗(yàn)接種大腸桿菌或沙門氏菌于1mL葡萄糖蛋白胨水中，置37℃培養(yǎng)3-5d）；于培養(yǎng)物中加入0.5mLV-P甲液；隨后加V-P乙液0.5mL，輕搖；靜置10-15min。15min內(nèi)變紅者為陽(yáng)性。V-P甲液V-P乙液陽(yáng)性陰性M.R試劑V-P試劑甲基紅0.02g95％酒精60mL蒸餾水40mL甲液：α萘酚酒精溶液（α萘酚5g無(wú)水乙醇100mL）乙液：KOH溶液（KOH40g，水100ml）將甲液和乙液分裝棕色瓶中，于4-10℃保存。五、結(jié)果觀察大腸桿菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)普通瓊脂：形成圓形、光滑、濕潤(rùn)、半透明、灰白色菌落，直徑約2~3mm；麥康凱：瓊脂上形成紅色菌落較大的菌落。沙門氏菌的生長(zhǎng)表現(xiàn)普通瓊脂：生長(zhǎng)不良；麥康凱：瓊脂上形成灰白色菌落。三糖鐵瓊脂斜面產(chǎn)堿（紅色）底部產(chǎn)酸（黃色）產(chǎn)氣－H2S＋反應(yīng)模式表示：K／A＋(－)；＋(－)生化管接種培養(yǎng)葡乳麥甘蔗H2S尿枸葡乳麥甘蔗H2S尿枸大腸桿菌沙門氏菌⊕⊕⊕⊕⊕/-－－－⊕－⊕⊕－＋

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吲哚、M.R、V-P試驗(yàn)結(jié)果大腸桿菌沙門氏菌吲哚試驗(yàn)M.R試驗(yàn)V-P試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)