化學原料藥質量研究

及原始記錄常見問題討論

余立yuliyy8716@特性研究-理化、穩(wěn)定性對照品研究-標化、校正因子方法研究-建立、驗證原料藥研究的特點

雜質研究-工藝、殘留溶劑1432建立標準時要考慮的問題Growth200820072006200520042003200220012000常見研究誤區(qū)以及供參考的經驗和體會

新版藥典動態(tài)對化學原料藥質量研究的影響

研發(fā)原始記錄中常見問題及改進建議

主要討論內容Clicktoedittitlestyle雜質控制微粒控制安全性控制注射劑所用的原輔料應從來源及工藝等生產環(huán)節(jié)進行嚴格控制并應符合注射用的質量要求。標準增項雜質譜的比較供注射用原料質控變化重點提示雜質控制力度大幅度提高

未修訂品種有關物質（常規(guī)）增項增指標嚴限度改方法TLC→HPLC等度→梯度理論板數(shù)→分離度特定雜質增訂單列項鹽酸阿糖胞苷項目2005年版2010年版含量限度97.0％～103.0％98.0%～102.0%鑒別3項3+1項（+HPLC）檢查干燥失重干燥失重溶液的澄清度與顏色含氯量有關物質梯度、校正、3個特定雜質殘留溶劑熾灼殘渣和重金屬含量測定UV吸收系數(shù)法HPLC外標法*性狀項下還有熔點和比旋度項，第一次飛躍第二次飛躍純度控制雜質控制雜質譜控制有關物質的研究

－雜質質控理念的變遷雜質譜的定義ImpurityProfile

（雜質譜）:Adescriptionoftheidentifiedandunidentifiedimpuritiespresentinadrugsubstance.對存在于藥品中所有已知雜質和未知雜質的總的描述。

CompanyLogo名詞解釋已鑒定雜質IdentifiedImpurity特定雜質SpecifiedImpurity潛在雜質PotentialImpurity雜質譜ImpurityProfile已確證了結構特征的雜質在質量標準中規(guī)定檢查并有自己限度標準的雜質。已鑒定或未鑒定按照理論推測在生產或貯藏過程中可能產生的雜質，實際產品中不一定存在存在于藥品中的雜質組成或模式Clicktoedittitlestyle選擇最優(yōu)多種互補結構確證比較雜質的數(shù)與量，一致或基本一致，物質基礎相同決定可否橋接已上市藥品的安全有效性結果雜質譜比較雜質譜的比較新方法分析方法的有有效性（氨芐芐西林鈉/舒巴坦鈉）原方法中國抗生素雜雜志，2009，34：734在對各國藥典典方法比較的的基礎上確定定分析方法項目原研廠標準擬定標準EP7.0USP34JP15含量限度按干燥品計算，每1mg的效價不得少于150單位按干燥品計算，每1mg的效價不得少于150單位按干燥品計算，每1mg效價不得少于150I.U.（非口服制劑），每1mg效價不得少于120I.U.（口服制劑按干燥品計算，每1mg中效價不得少于180USP肝素單位每1mg的效價不得少于110單位。性狀白色或類白色的粉末，有引濕性白色或類白色的粉末，極具引濕性白色或幾乎白色的粉末，有適度的引濕性白色到灰棕色的粉末或顆粒溶解度在水中易溶在水中易溶，在乙醚中不溶在水中易溶在水中溶解，在乙醚中不溶比旋度不小于+35°(40mg/ml,水)應不小于+50°(40mg/ml,水)鑒別1、電泳法2、鈉鹽1、電泳法2、鈉鹽A、具有抗凝血作用B、比旋度C、電泳法：D.鈉鹽A、H-NMRB、IC法C、抗Xa/抗IIa：D、鈉鹽酸堿度5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）5.5～8.0（0.10g到10ml水）5.0～7.5（0.10g到10ml水）6.0～8.0雜質譜的比較較－多種互補補不同色譜系統(tǒng)統(tǒng)（流動相、、色譜柱、波波長）不同檢測器（（uv、DAD）不同原理的方方法-分離或檢測雜質譜的比較較－多種互補補柱串聯(lián)技術適用于溶解度度無明顯差異異但電荷上有有明顯差異的的難分離物質質，通過將一一根SCX（陽離子交換換）短柱與一一根MGⅡC18長柱串聯(lián)就可可以簡單達到到將其分離的的目的。原理：有電荷差異的的被分離物質質進入色譜柱柱串聯(lián)系統(tǒng)后后，帶正電荷荷的物質（通通常是堿性物物質）會由于于SCX短柱的離子交交換作用而被被保留在短柱柱中，而帶負負電荷的物質質（通常為酸酸性物質）與與中性物質則則會毫無阻礙礙的通過短柱柱進入C18長柱中，從而而成功分離；；然后由于MGⅡC18長柱中疏水性性基團間的相相互作用而對對中性物質有有強保留作用用，但對帶負負電荷物質無無強保留作用用，這樣帶負負電荷物質與與中性物質也也簡單被分開開了如果為了讓峰峰形更好，各各峰間分離更更開，還可在在陽離子交換換短柱與C18長柱前接一根根NH2短柱（它可與與陰離子發(fā)生生交換作用）），進行三根根串聯(lián)，也可可以使帶負電電荷的酸性物物質與中性物物質達到更好好的分離效果果。雜質揮發(fā)性雜質有機雜質無機雜質殘留溶劑其它RP-HPLC不同檢測器ICP-MS離子色譜互補方法HPCEHPTLCGC-MSHS-GC梯度洗脫HPGPC顏色控制雜質譜分析的的基本途經新雜質的研究究－藥物雜質的的可能來源1.原料：紅霉素A、紅霉素B、紅霉素C、紅霉素D、紅霉素E、紅霉素F、阿奇霉素B、阿奇霉素C、阿奇霉素E、阿奇霉素F2.中間體：紅霉素A肟（Z）、6，9-亞胺醚、氮紅紅霉素A、紅霉素A肟（E）、紅霉素C肟（E）、9，11-亞胺醚、紅霉霉素C6，9-亞胺醚、紅霉霉素A內酰胺3.副產物：紅霉素-N-氧化物、N-去甲基紅霉素素A、N-去甲基阿奇霉霉素A、氨基阿奇霉素素A、N-甲?；?N去甲基阿奇霉霉素A、N-去甲基-N-苯磺酰基阿奇奇霉素、阿奇霉霉素N-氧化物、3’-去（二甲氨基基）-3’,4’-去氫阿奇霉素素、O-甲苯磺?；t霉素素肟、紅霉素素Z肟重排物、氮氮紅霉素11，12-硼酸酯、N，N-去二甲基N-甲?；⑵婷姑顾谹、丙基阿奇霉霉素、3’-N，N-去二甲基氨基基-酮基阿奇霉素A、阿奇霉素11，12-硼酸酯4.降解產物：去克拉克定糖糖阿奇霉素A、去克拉克定定糖氮紅霉素素、紅霉素8，9-脫水-6，9-半縮酮、紅霉霉素6，9：9，12-螺縮酮阿奇霉素中可可能存在的雜雜質：37種CompanyLogo結構確證常用用的方法熱分析Ｘ－粉末衍射核磁元素分析質譜紫外紅外模擬色譜圖實際色譜圖毒性快速評價價平臺斑馬魚毒性快速評價價平臺，對雜雜質的胚胎毒毒性、神經毒毒性，心臟毒毒性等進行評評價。優(yōu)點：雜質用量少無需知道雜質質結構實驗周期短（3－4天一個周期））藥物耳毒性檢檢測利用一種特殊殊染料對斑馬馬魚幼體頭部部耳蝸區(qū)神經經丘毛細胞的的染色，檢測測毛細胞的存存活狀態(tài)，來來判斷檢測物物的耳毒性。。下圖中紅色圈圈示耳蝸區(qū)域域；給藥組中中紅色箭頭示示給藥后毛細細胞減少，黃黃色圈示給藥藥后1神經丘消失。。給藥后系統(tǒng)對照組（（正常幼體））增設有效項目目指標加強安安全性監(jiān)控結合藥品的制制法和工藝特特點，以及雜雜質的特殊性設立特色有針對性性檢測項目，最最大限度解決決安全隱患。。人尿制品增加加乙肝表面抗原原檢查：如尿激酶、尿促促性素、絨促促性素、烏司司他丁等重組品種增加加菌體蛋白殘留留量、外源性性DNA殘留量如重組人生長激激素、重組人人胰島素等。含不飽和脂肪肪酸的品種增增加甲氧基苯胺值值檢查：如多烯酸乙酯（（P272）等。增設有有效項項目指指標-甲氧基基苯胺胺值含有不飽和和脂肪肪酸的藥物物在生生產和和貯藏藏過程程中易易被氧氧化，，初級級氧化化產物物一般般不穩(wěn)穩(wěn)定，，又可可進一一步生生成醛類等化合合物，，而甲甲氧基基苯胺胺值（（也稱稱p-茴香胺胺值））就是是ISO推薦的的一種種對此此類降降解產產物進進行評評價的的手段段，歐歐洲藥藥典附附錄2.5.36收載了了此測測定方方法。。藥物物的甲甲氧基基苯胺胺值越越高，，說明明其劣劣變程程度越越嚴重重。測定原原理：：甲氧基基苯胺胺與醛反應生生成醇醇胺，，醇胺胺脫水水生成成的醛亞胺胺可采用用紫外外-可見分分光光光度法法在350nm波長處處測定定。增設有有效項項目指指標-甲氧基基苯胺胺值注意：：甲氧基基苯胺胺試劑劑為無無色結結晶，，具有有一定定毒性性，使使用時時應避免免接觸觸皮膚膚，一旦旦失誤誤，需需用水水沖洗洗15分鐘以以上。。甲氧氧基苯苯胺的的冰醋醋酸溶溶液不不穩(wěn)定定，需當天天配制制使用用。以異異辛烷烷作空空白做做基線線校正正時，，如果果測得得的甲甲氧基基苯胺胺冰醋醋酸溶溶液的的吸光光度超超過了了0.2，則則需需重重新新配配制制試試劑劑。。供試試品品溶溶液液中中加加入入0.25％的的4-甲氧氧基基苯苯胺胺冰冰醋醋酸酸溶溶液液后后應應注注意意避光光，在在350nm波長長處處的的吸吸光光度度隨隨時時間間的的延延長長緩緩慢慢增增加加，，需需準準確確放放置置10分鐘鐘后后測測定定，，盡盡量量減減小小誤誤差差。。本試試驗驗受受水水分分影影響響較較大大，，樣樣品品及及試試劑劑中中水水分分的的存存在在會會導導致致反反應應不不完完全全，，測測定定值值偏偏低低，，當當樣樣品品中中水水分分含含量量超超過過0.1%時，，可可按按10g樣品品加加1～2g無水水硫硫酸酸鈉鈉的比比例例脫脫除除水水分分后后測測定定。。另另外外，，應應取取用用新開開啟啟包包裝裝的供供試試品品。。2-乙基基己己酸酸β-內酰酰胺胺類類抗抗生生素素對生生產產工工藝藝過過程程中中使使用用2-乙基基己己酸酸的原原料料，，增增加加此此項項檢檢查查，，采采用用氣氣相相色色譜譜法法測測定定；；方方法法增增訂訂為為附附錄錄－－2010年版版藥藥典典二二部部（（附附錄錄ⅦL）；；如:頭孢孢地地嗪嗪鈉鈉、、頭頭孢孢呋呋辛辛鈉鈉、、頭頭孢孢孟孟多多酯酯鈉鈉、、氨氨芐芐西西林林鈉鈉等。。2-乙基基己己酸酸勘誤誤：：β-內酰酰胺胺類類抗抗生生素素對生生產產工工藝藝過過程程中中使使用用2-乙基基己己酸酸的原原料料，，增增加加此此項項檢檢查查，，采采用用氣氣相相色色譜譜法法測測定定；；方方法法增增訂訂為為附附錄錄－－2010年版版藥藥典典二二部部（（附附錄錄ⅦL）；；如:頭孢孢地地嗪嗪鈉鈉、、頭頭孢孢呋呋辛辛鈉鈉、、頭頭孢孢孟孟多多酯酯鈉鈉、、氨氨芐芐西西林林鈉鈉等。?？闭`誤：：目前前中中國國不不僅僅接接受受了了ICH對化化學學藥藥品品中中殘殘留留溶溶劑劑控控制制的的理理念念，，而而且且結結合合中中國國國國情情，，建建立立了了具具有有中中國國特特色色的的殘殘留留溶溶劑劑檢檢查查方方法法。?！吨袊鴩幩幍涞洹?005版中中，，對對殘殘留留溶溶劑劑的的分分類類及及限限度度標標準準已已經經與與ICH的要要求求完完全全一一致致，，但但僅僅在在附附錄錄中中作作為為原原則則性性統(tǒng)統(tǒng)一一要要求求。?！吨袊鴩幩幍涞洹?010版中中，，原原料料藥藥要要求求在在各各論論項項下下根根據(jù)據(jù)其其生生產產工工藝藝制制定定殘殘留留溶溶劑劑檢檢查查方方法法抗生素原原料藥幾幾乎所有有品種均均在各論論項下增增訂了詳詳細的殘殘留溶劑劑檢查方方法從附錄走走向各論論殘留溶劑劑如：頭孢孢泊肟酯酯殘留溶劑劑照照殘留溶溶劑測定定法（附附錄ⅧP）測定。。甲醇、乙乙腈、丙丙酮、二二氯甲烷烷、異丙丙醇、丁丁酮、乙乙酸乙酯酯、四氫氫呋喃、、乙酸丁丁酯、1,2-二氯乙烷烷、乙酸酸異丙酯酯、苯、、四氯化化碳、環(huán)環(huán)己烷、、二氧六六環(huán)、甲甲基異丁丁基酮、、吡啶、、甲苯色譜條件件與系統(tǒng)統(tǒng)適用性性試驗略略內標溶液液的制備備取取正丙醇醇適量，，用二甲甲基亞砜砜稀釋制制成每1ml中約含200μμg的溶液，，作為內內標溶液液。殘留溶劑劑殘留溶劑劑檢查方方法及驗驗證

！

除正文已已明確列列有“殘殘留溶劑劑”檢查查的品種種必須依依法進行行檢查外外，其他他未在““殘留溶溶劑”項項下明確確列出的的有機溶溶劑與未未在正文文中列有有此項的的品種，，如生產產過程中中引入或或產品中中殘留有有機溶劑劑，均應應按附錄錄“殘留溶溶劑測定定法”檢查并應應符合相相應溶劑劑的規(guī)定定檢測方法法進行了了相應的的調整：：頂空進樣樣甲烷氣氣體，記記錄死時時間(t0)頂空進樣樣供試品品溶液，，記錄色色譜圖，，按公式式計算諸諸色譜峰峰的保留留時間(tR)相對于參參考物質質保留時時間(t’’R)的相對調調整保留留時間(Relativeadjustmentretentiontime，RART)法替代RRT法tR為組分的的保留時時間;t’R為參比物物的保留留時間。。t0為甲烷保留時間間。殘留溶劑劑檢測方法法選擇：：直接進樣樣？頂空空進樣？？限度比比較？對對照品法法？標準準加入法法？內標標？外標標？驗證項目目確定：回收試驗驗？最低低定量限限？最低低檢測限限？線性性？耐用用性試驗驗？原始始記記錄錄較較常常發(fā)發(fā)現(xiàn)現(xiàn)的的問問題題連帶帶問問題題：：按無無水水無無溶溶劑劑計計算算殘留留溶溶劑劑方方法法建建立立、、驗驗證證與與常常見見問問題題高聚聚物物凝膠膠色色譜譜法法（（2010年版版新新增增的的19個標標準準））原料制劑頭孢唑肟鈉注射用頭孢唑肟鈉頭孢替唑鈉注射用頭孢替唑鈉頭孢尼西鈉注射用頭孢尼西鈉頭孢噻吩鈉注射用頭孢噻吩鈉磺芐西林鈉注射用磺芐西林鈉阿洛西林鈉注射用阿洛西林鈉美洛西林鈉注射用美洛西林鈉氯唑西林鈉注射用氯唑西林鈉苯唑西林鈉注射用苯唑西林鈉普魯卡因青霉素高聚聚物物2010版：：品品種種增增加加,方法法多多元元化化1、自自填填柱柱和和商商品品玻玻璃璃柱柱：：填填料料常常用用葡聚聚糖糖凝凝膠膠G-10（SephadexG10）；；短短柱柱子子的的使使用用，，減減少少分分離離時時間間2、商商品品凝凝膠膠柱柱TSK-GELG2000SWXL：頭頭孢孢地地嗪嗪（（北北京京所所））3、ODS柱，，聚聚合合物物-氨芐芐西西林林鈉鈉舒舒巴巴坦坦鈉鈉（（浙浙江江所所)4、柱柱切切換換（中中檢檢所所）），，實實現(xiàn)現(xiàn)凝凝膠膠色色譜譜與與反反相相色色譜譜的的統(tǒng)一一高聚聚物物鹽酸酸頭頭孢孢替替安安聚聚合合物物分分析析方方法法的的比比較較SephadexG-10系統(tǒng)TSK-GelG2000swxl系統(tǒng)0.8ml/min供注射用原料料可見異物檢檢查頭孢他啶：取本品5份，每份3.0g，加1%碳酸鈉溶液（（經0.45μm濾膜濾過）溶解，依法檢檢查（附錄ⅨH），應符合規(guī)規(guī)定。頭孢地嗪鈉：：取本品5份，每份2.0g，分別加微粒檢查用水水溶解，依法檢檢查（附錄ⅨH），應符合規(guī)規(guī)定。有些品種如堿堿性藥物與玻玻璃容器久置置起反應，產產生白點、白白塊和玻璃屑屑有些品種如甲甲硝唑等與重重金屬發(fā)生反反應產生不溶溶物有些品種如喹喹諾酮類藥物物對金屬設備備產生腐蝕，，易有金屬屑屑有些品種如胰胰島素等提取取的生化大分分子易產生蛋蛋白沉淀有些品種如頭頭孢噻肟鈉等等成鹽不完全全，溶解度太太低，產生白白點、白塊引發(fā)不合格的的部分原因供注射用原料料不溶性微粒粒檢查頭孢他啶：取本品3份，加1%碳酸鈉溶液（（經0.45μm濾膜濾過）溶溶解制成每1ml中含30mg的溶液，依法法檢查（附錄錄ⅨC），每1g樣品中含10μm以上的微粒不不得過6000個，含25μm以上的微粒不不得過600個。頭孢曲松鈉：：取本品3份，加微粒檢查用水水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法法檢查（附錄錄ⅨC），每1g樣品中含10μm以上的微粒不不得過6000個，含25μm以上的微粒不不得過600個。供注射用的原原料藥增加不不溶性微粒檢檢查以保證制制劑能符合注注射劑的要求求由于光阻法測測定結果僅與與一定濃度范范圍內樣品溶溶液成正比，，故標準給出出了不溶性微微粒檢查供試品溶液濃濃度制劑最多有11個規(guī)格，均按每1g樣品中含10μm以上的微粒不不得過6000粒，含25μm以上微粒不得得過600粒；強化不溶性微微粒等項目控控制強化不溶溶性微粒粒等項目目控制供注射用用原料不不溶性微微粒檢查查可見異物物/不溶性微微粒檢查查原始記錄錄問題不詳細無趨勢缺方法摸摸索及分分析原始記錄錄建議控制生產產環(huán)境和和過程中中的污染染-外源異物物考察藥物物與容器器的兼容容性-內源異物物考察活性性成分的的穩(wěn)定性性以及與與溶劑/添加物的的穩(wěn)定性性-內源異物物深刻理解解“藥品的質質量源于于設計”認真做好好處方研究究/工藝驗證證和穩(wěn)定定性考察察！可見異物物檢查的的目的標準統(tǒng)一一、規(guī)范范、明確確、嚴謹謹

典型型項目-無菌檢查查方法無菌檢查查是藥物物安全性性風險控控制的重重要項目目之一，，但具體體檢查方方法以前前標準中中均不給給出，由由檢驗者者自己摸摸索?？箍股仃栮栃跃x選用不注注意抗菌菌譜，存存在試驗驗的有效效性、一一次成功功率等問問題對每個品品種均要要求經過過驗證，，確定樣樣品使用用的最適適宜方法（直接接接種法？？薄膜過過濾法）），最佳佳溶解方式式、最佳沖洗液、沖洗方式式、敏感的的陽性對照照菌等操作關關鍵因素素，并將將上述內內容按統(tǒng)統(tǒng)一規(guī)范范格式在在質量標標準中單單獨立項項表述詳詳細。供注射用用原料無無菌檢查查供注射用用原料無無菌檢查查頭孢呋辛辛鈉：取本品3份，加1%碳酸鈉溶溶液（經經0.45μm濾膜濾過過）溶解解制成每1ml中含30mg的溶液，，依法檢檢查（附附錄ⅨC），每1g樣品中含含10μm以上的微微粒不得得過6000個，含25μm以上的微微粒不得得過600個。頭孢曲松松鈉：取本品3份，加微粒檢查查用水溶解并制制成每1ml中含50mg的溶液，，依法檢檢查（附附錄ⅨC），每1g樣品中含含10μm以上的微微粒不得得過6000個，含25μm以上的微微粒不得得過600個。無菌檢查查方法規(guī)規(guī)范表述述方式舉舉例氧氟沙星星氯化鈉鈉注射液液：無菌取本品，，經薄膜膜過濾法法處理，，用0.1%無菌蛋白白胨水溶溶液分次次沖洗（（每膜不不少于500ml），每管管培養(yǎng)基基中加入入0.1mol/L硫酸錳溶溶液1ml，以大腸腸埃希菌菌為陽性性對照菌菌，依法法檢查（（附錄ⅪH），應符符合規(guī)定定。乙酰谷酰酰胺注射射液：無菌取本品，，經薄膜膜過濾法法處理，，用0.1%無菌蛋白白胨水溶溶液分次次沖洗（（每膜不不少于100ml），以金金黃色葡葡萄球菌菌為陽性性對照菌菌，依法法檢查（（附錄ⅪH），應符符合規(guī)定定。注射劑制制劑通則則變化重重點提示示純度要高高、雜質質要少、、生物負荷要低＊從源頭頭控制雜雜質的數(shù)數(shù)和量、、染菌的的數(shù)和量量、熱原原或細菌菌內毒素素重點品種種為營養(yǎng)養(yǎng)性、無無抑菌性性、制劑劑有注射射劑型注射劑用用原料注注重數(shù)量量口服原料料也要限限定菌屬屬種類（（沙門氏氏菌）原料藥微微生物限限度檢查查注射劑制制劑通則則變化重重點提示示胰島素（（制劑為為注射劑劑）取本品0.2g,依法檢查（（附錄ⅪJ），每1g中含細菌數(shù)數(shù)不得過300個。胰酶（制劑劑為口服制制劑，來源源于動物提提?。┤”酒?依法檢查（（附錄ⅪJ），每1g供試品中細細菌數(shù)不得得過10000個，霉菌和和酵母菌總總數(shù)不得過過100個。并不得得檢出大腸腸埃希菌；；每10g供試品中不不得檢出沙門菌。原料藥微生生物限度檢檢查注射劑制劑劑通則變化化重點提示示必要時應增設相應應的安全性性檢查，如如異常毒性性、過敏反反應、溶血血與凝聚、、降壓物質質、熱原或或細菌內毒毒素等因為有些藥藥物成分復復雜、組分分結構不清清晰（如多多組分抗生生素動物來來源提取的的生化藥等等）、采用用化學手段段難于監(jiān)控控雜質異常毒性：：有可能污污染生物毒性物質的品種種（發(fā)酵）過敏反應：：有可能污污染異源蛋白或未知過敏敏反應物質質的品種降壓物質：：有可能污污染組胺、、類組胺樣樣物質的品品種（腐敗）供注射用原原料安全性性檢查增設有效項項目指標加加強安全性性監(jiān)控用化學手段段不能控制制組成、雜雜質無法控控制的生物物來源品種種均增加了了異常毒性、、過敏反應應等動物試驗驗：如硫酸魚精蛋蛋白等硫酸魚精蛋蛋白魚精蛋白主主要存在于于魚類的成成熟精巢組組織中，與與DNA緊密結合在在一起，以以核精蛋白白的形式存存在。它是是一種小而而簡單的球球形堿性蛋蛋白質，分分子量在1萬以下，由由30個左右的氨氨基酸組成成，其中2/3以上是精氨氨酸，幾乎乎不含芳香香族氨基酸酸。吸光度參參照BP2008/EP6.0增訂。根據(jù)據(jù)本品組成成，如果純純化步驟將將核酸和雜雜蛋白均去去除的話，，在260280nm的波長范圍圍內吸光度度應很小，，但考察結結果遠遠超超過BP2008/EP6.0所規(guī)定的0.1。峰1.縮宮素；峰峰2.三氯叔丁醇醇，其余均為雜雜質峰縮宮素注射射液HPLC檢查色譜圖編號單個最大雜質（%）總雜質（%）18.928.328.333.339.224.748.325.056.727.666.122.175.520.089.431.299.331.0109.431.31117.333.31217.532.61317.632.5148.523.6158.024.7163.720.4178.429.8188.229.7198.129.7增設有效項項目指標加加強安全性性監(jiān)控成分復雜、、雜質無法法控制但質質量與顏色色相關度高高的品種增增加溶液的顏色色，如糜蛋白酶等。溶液顏色檢檢查的目的的溶液顏色自身性質純度雜質含量-簡易、直觀觀、快速、、綜合的對對有色雜質質進行檢查查穩(wěn)定性差質量與顏色色聯(lián)系緊密密的安全性要求求高用儀器定量量測雜質困困難注射劑用原料僅在紫外區(qū)查雜質成分復雜變質就變色色檢查顏色的的品種適宜進行溶溶液的顏色色檢查的原原料建立方法時時要考慮的的問題溶劑濃度穩(wěn)定性臨床安全性需需要工藝生產能力力同類產品水平平溶液的顏色制訂限度時要要考慮的問題題主成分純度雜質的含量穩(wěn)定性數(shù)據(jù)臨床安全性需需要工藝生產能力力同類產品水平平顏色的限度應用色差計轉轉換進口藥注注冊標準-舉例溶液的顏色取本品0.5g，加水10ml溶解后，溶液液應無色；如如顯色，與同同體積的比色色液（取棕紅紅色貯備液1.8ml加8.2ml水，混勻）比比較（中國藥藥典2010年版二部附錄錄ⅨA第一法），不不得更深。色差計法應用用舉例說明：企業(yè)標準按EP檢查，規(guī)定“與B5號標準比色液液（EP第5版2.2.2溶液的顏色））比較不得更更深”。因EP標準比色液從從三原色開始始就與中國藥藥典不同，如如按此檢查會會有困難，故故采用色差計計進行了對比比測定，結果果EP的B5號標準比色液液的色差值（（△E*=3.58）與中國藥典典BR3號（△E*=3.19）和BR4號（△E*=4.46）的中值（3.82）較為接近，，約相當于BR3.5號。因BR3號是取棕紅色色貯備液1.5ml加8.5ml水，BR4號是取棕紅色色貯備液2.0ml加8.0ml水配制而成，，所以本次復復核將棕紅色色貯備液1.8ml加8.2ml水配制了專用用比色液，該該比色液的△△E*為3.64，與EPB5號標準比色液液的色差值幾幾乎一致，按按此轉換限度度既不改變質質控原有水平平，又方便在在國內檢驗。。應用色差計轉轉換進口藥注注冊標準-舉例藥典采用現(xiàn)代代分析技術舉舉例由于某些藥物物組成的復雜雜性，特別是是一些生物大大分子藥物，，使用傳統(tǒng)的的分析方法已已經不能滿足足當前的質控控需要，2010年版藥典逐漸漸改用現(xiàn)代分分析技術。首次運用毛細管電泳法法注射用抑肽酶酶：檢查兩個個特定雜質注射用鹽酸頭頭孢吡肟：方法1-毛細管電泳法法N-甲基吡咯烷方法2-HPLC法（羧基柱，，電導檢測））毛細管電泳法法檢查特定雜雜質抑肽酶由上海海藥檢所起草草，參考USP增訂去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶和去丙丙氨酸抑肽酶酶檢查項色譜條件：石石英毛細管分分離柱，毛細細管溫度：30℃，電極液：磷磷酸二氫鉀溶溶液；分離壓壓：12KV；波長：214nm結果：去丙氨氨酸抑肽酶RT為0.99，去丙氨酸-去甘氨酸-抑肽酶RT為0.98，兩相關物間間分離度1.40，去丙氨酸-抑肽酶與抑肽肽酶間分離度度1.24、抑肽酶拖尾尾因子1.8抑肽酶SDS凝膠電泳圖本品系自牛胰胰或肺中提取取、純化制得得的肽酶抑制制劑。采用SDS凝膠電泳的方方法抑肽酶的的有關物質，，結果如圖所所示，都只有有一個條帶。?？赡苁且蛛碾拿负陀嘘P物物質的分子量量相差不大，，使用凝膠電電泳不能將其其分離藥典采用現(xiàn)代代分析技術舉舉例首次運用柱串聯(lián)技術-抑肽酶參照USP32用三根TSK柱串聯(lián)檢查高高分子蛋白質質。采用分子子排阻色譜法法，用三根色色譜柱串聯(lián)（（TSK-G4000SWXL柱）柱溫35℃，流速1.0ml/min,二聚體RT0.9，與主峰分離離度1.4，主峰拖尾因因子0.91。藥典采用現(xiàn)代代分析技術舉舉例柱串串聯(lián)聯(lián)技技術術適用用于于溶解解度度無無明明顯顯差差異異但但電電荷荷上上有有明明顯顯差差異異的難難分分離離物物質質，，通通過過將將一一根根SCX（陽離離子子交交換換）短短柱柱與與一一根根MGⅡⅡC18長柱柱串串聯(lián)聯(lián)就就可可以以簡簡單單達達到到將將其其分分離離的的目目的的。。原理理：：有電電荷荷差差異異的的被被分分離離物物質質進進入入色色譜譜柱柱串串聯(lián)聯(lián)系系統(tǒng)統(tǒng)后后，，帶帶正正電電荷荷的的物物質質（（通通常常是是堿堿性性物物質質））會會由由于于SCX短柱柱的的離離子子交交換換作作用用而而被被保保留留在在短短柱柱中中，，而而帶帶負負電電荷荷的的物物質質（（通通常常為為酸酸性性物物質質））與與中中性性物物質質則則會會毫毫無無阻阻礙礙的的通通過過短短柱柱進進入入C18長柱柱中中，，從從而而成成功功分分離離；；然然后后由由于于MGⅡⅡC18長柱柱中中疏疏水水性性基基團團間間的的相相互互作作用用而而對對中中性性物物質質有有強強保保留留作作用用，，但但對對帶帶負負電電荷荷物物質質無無強強保保留留作作用用，，這這樣樣帶帶負負電電荷荷物物質質與與中中性性物物質質也也簡簡單單被被分分開開了了如果果為為了了讓讓峰峰形形更更好好，，各各峰峰間間分分離離更更開開，，還還可可在在陽陽離離子子交交換換短短柱柱與與C18長柱柱前前接接一一根根NH2短柱柱（它它可可與與陰陰離離子子發(fā)發(fā)生生交交換換作作用用）），，進進行行三三根根串串聯(lián)聯(lián)，，也也可可以以使使帶帶負負電電荷荷的的酸酸性性物物質質與與中中性性物物質質達達到到更更好好的的分分離離效效果果。。藥典典采采用用現(xiàn)現(xiàn)代代分分析析技技術術舉舉例例首次次運運用用肽圖圖分分析析技技術術：根據(jù)據(jù)蛋蛋白白質質、、多多肽肽的的分分子子量量大大小小以以及及氨氨基基酸酸組組成成特特點點，，使使用用專專一一性性較較強強的的蛋蛋白白水水解解酶酶，，一一般般為為肽肽鏈鏈內內切切酶酶，，作作用用于于特特殊殊的的肽肽鏈鏈位位點點將將多多肽肽裂裂解解成成小小片片斷斷，，再再通通過過一一定定的的分分離離檢檢測測手手段段形形成成特特征征性性指指紋紋圖圖譜譜，，用用此此法法進進行行鑒鑒別別，，專專屬屬性性強強，，可可鑒鑒別別僅僅相相差差一一個個氨氨基基酸酸殘殘基基的的不不同同種種屬屬來來源源的的樣樣品品。。如胰島素-采用V8酶解+HPLC法；重組人生生長激素素-采用胰蛋蛋白酶酶酶解+HPLC法獲得肽肽圖進行行鑒別等。胰島素肽肽圖人胰島素素酶解-HPLC肽圖豬胰島素素酶解-HPLC肽圖電泳法-等電聚焦焦水平板板電泳法法瓊脂糖凝凝膠電泳泳法醋酸纖維維素薄膜膜電泳法法紙電泳法法等點聚焦焦水平板板電泳法法聚丙烯酰酰胺凝膠膠電泳法法SDS-聚丙烯酰酰胺凝膠膠電泳法法典型的等等電聚焦焦圖譜重組人生生長激素素（二部部第566頁）用此法做做鑒別純化水、、注射用用水和滅滅菌注射射用水的的增修訂訂純化水、、注射用用水的修修訂增訂：電導率氯化物硫酸鹽鈣鹽二氧化碳碳替代總有機碳碳測定易氧化物物可任選一一項藥典中新新檢驗技技術的應應用藥典附錄錄通用檢檢測方法法變化提提示重金屬檢檢查法：：甲管（標標準）＋＋乙管（（供試品品）+丙管（標標準+供試品））如丙管顏顏色淺于于甲管則則將一法法改為二二法進行行檢查勘誤！第第二法規(guī)規(guī)定乙管管（標準準）中顯顯出的顏顏色與甲甲管（供供試品））比較，，不得更更深。附錄通用檢測測方法中的變變化提示澄清度檢查法法：增加“幾乎澄澄清”的定義義：0.5號～1號溶液顏色檢查查法恢復“無色或或幾乎無色””的定義性狀顏色描述述與顏色檢查查項匹配：原原有些液體制制劑品種顏色色檢查項規(guī)定定“與黃色2號標準比色液液比較，不得得更深”，但但性狀描述為為“無色或幾幾乎無色的澄澄明液體”，，與附錄定義義不匹配，現(xiàn)現(xiàn)修訂為“無色至微黃色色的澄明液體體”。本版藥典中極極個別品種仍仍然存在此問問題！尼莫地平注注射液藥典附錄變化化提示－引濕性試驗指指導原則重金屬檢查法法：pH測定法：不溶性微粒檢檢查法：可見異物檢查查法：滲透壓摩爾濃濃度：2010年版2005年版（1）供試品符合藥品質量標準（2）稱量瓶試驗前一天置25±1℃

80±2%環(huán)境中預引濕（3）瓶蓋同條件放置（1）供試品干燥失重或水分符合限度要求（2）稱量瓶沒要求預引濕（3）瓶蓋

沒提及引濕性試驗原原始記錄-容易出現(xiàn)的錯錯誤實驗日期（全全檢合格之后后）實驗時間（24小時）實驗溫度、濕濕度稱量瓶提前放放置記錄藥典附錄變化化提示－鈉鹽的鑒別反反應重金屬檢查法法：pH測定法：不溶性微粒檢檢查法：可見異物檢查查法：滲透壓摩爾濃濃度：2010年版2005年版鈉鹽（1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）取供試品約100mg，置10ml試管中，加水2ml溶解，加15%碳酸鉀溶液2ml，加熱至沸，應不得有沉淀生成；加焦銻酸鉀試液4ml，加熱至沸；置冰水中冷卻，必要時，用玻棒摩擦試管內壁，應有致密的沉淀生成。（替換使用醋酸氧鈾鋅試液的方法）（1）取鉑絲，用鹽酸濕潤后，蘸取供試品，在無色火焰中燃燒，火焰即顯鮮黃色。（2）取供試品的中性溶液，加醋酸氧鈾鋅試液，即生成黃色沉淀。藥典附錄變化化提示－鋅鹽的鑒別反反應重金屬檢查法法：pH測定法：不溶性微粒檢檢查法：可見異物檢查查法：滲透壓摩爾濃濃度：2010年版2005年版鋅鹽（1）取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。（2）取供試品溶液，制成中性或堿性溶液，加硫化鈉試液，即產生白色沉淀。（替換使用硫氰酸汞銨試液的檢查方法）（1）取供試品溶液，加亞鐵氰化鉀試液，即生成白色沉淀；分離，沉淀在稀鹽酸中不溶解。（2）取供試品溶液，以稀硫酸酸化，加0.1％硫酸銅溶液1滴及硫氰酸汞銨試液數(shù)滴，即生成紫色沉淀。重新做考察:取樣量,輔料干擾,延伸-環(huán)境友好Page75碘值、皂化值值、酸值折光率比旋度熔點相對密度餾程吸收系數(shù)黏度凝點物理常數(shù)研究究吸收系數(shù)物理意義為當當溶液濃度為為1%（g/ml）,液層厚度為1cm時的吸光度數(shù)數(shù)值。研究意義及應應用趨勢的改改變原始記錄問題題Page77干燥失重重金屬溶液的澄清度度硫酸鹽酸堿度氯化物水分銨鹽結晶性一般檢查項研研究按照凡例要求求，在標準中中增訂【制法要求】來源于人尿或動物組織，采用提取工藝制備的供注射用的原料藥或直直接與傷口接觸的制劑應在質質量標準中增增加【制法要求】，重申其生產產過程的安全全性要求。供其他劑型用原料（如如口服制劑劑）暫未在在質量標準準中制訂【制法要求】，而由凡例作統(tǒng)一規(guī)范?！局品ㄒ蟆康谋硎鲂问绞嚼?：肝素鈉（（動物組織織提?。┍酒窇獜臋z檢疫合格的的豬或牛腸粘粘膜中提取，生生產過程均均應符合現(xiàn)現(xiàn)行版《藥品生產質質量管理規(guī)規(guī)范》要求。生產產工藝要經病毒滅活活驗證，并能能去除有害害的污染物物，生產過過程中應確確保不被外外來物質污污染。例2：尿促性素素（人尿提提?。┍酒窇獜慕〗】等巳旱牡哪蛑刑崛∪。a過過程應符合合現(xiàn)行版《藥品生產質質量管理規(guī)規(guī)范》要求。本品品在生產過過程中需經經適宜的工工藝方法處處理，以使使任何病毒毒如肝炎病病毒和人免免疫缺陷病病毒等滅活活。例3：凝血酶凍凍干粉（直直接與傷口口接觸的制制劑）本品應從檢檢疫合格的的?；蜇i血血中提取，，生產過程程應符合現(xiàn)現(xiàn)行版《藥品生產質質量管理規(guī)規(guī)范》要求?！兑延袊覙藰藴驶瘜W藥藥品研究技技術指導原原則》在選擇參比比對照時一一般遵循以以下原則：：如原發(fā)廠廠家生產的的產品已在在我國上市市，一般首選原發(fā)廠廠產品作為參比對對照；如不不能獲得原原發(fā)廠產品品，可以考考慮選用研究基礎較較好、臨床床應用較為為廣泛的非原發(fā)廠廠產品作為為參比對照照；也可以以對不同廠廠家生產的的同品種進進行質量對對比，優(yōu)選質量較較好的產品作為為參比對照照。比較研究的標尺尺問題-被仿制藥品品的選擇原原則原研品認可度高首仿品被仿品注意：可比性-貯存時間大大致相同??！真實性–提供發(fā)票、、標簽、批批號或照片片比較研究的標尺尺問題-被仿制藥品品的選擇原原則比較研究的標尺尺問題-購買的對照照品/標準品對照品/標準品權威性真實性準確性-發(fā)票、標簽簽、批號、、分析報告告單、鹽基基/堿基、水分分詳細精制方方法、質量量檢驗報告告標定方法與與結果詳細提取精精制方法、、質量檢驗驗報告、標定定方法與結結果詳細合成精精制方法、、質量檢驗驗報告、標標定方法與與結果純化精制提取精制合成精制比較研究的標尺尺問題-非購買的對對照品/標準品標定者測測定結果（（%）n均值（%）RSD（%）1.98.82%，99.12%，99.18%，99.25%，99.17%599.11%0.17%2.98.96%，99.04%，99.24%，98.98%，98.98%599.04%0.12%3.99.12%，98.94%，99.04%，99.04%，99.18%599.06%0.09%經Corchan檢驗驗，，三三位位標標定定者者的的方差差沒沒有有差差異異，均均來來自自同一一正正態(tài)態(tài)分分布布。用用Dixon法檢檢驗驗15組數(shù)數(shù)據(jù)據(jù)中中的的最最大大值值99.25%，最最小小值值98.82%均非非離群群值值。T1-0.05×S置信信區(qū)區(qū)間間μ=X±±=99.08±±0.068n1/2標定定結結果果的的置