實(shí)驗(yàn)十一中藥提取成分對(duì)于腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的影響分析

指導(dǎo)教師：唐穎1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇司C合性實(shí)驗(yàn)是通過(guò)細(xì)胞傳代、繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)來(lái)初步檢驗(yàn)中藥中的某活性成分的抗腫瘤活性。2.實(shí)驗(yàn)原理MTT比色法的主要原理是；MTT被活細(xì)胞中線粒體琥珀酸脫氫酶還原后，生成暗藍(lán)色甲躦，甲躦被助溶劑溶解后，可在酶標(biāo)儀上讀取光吸收值(OD)，在一定范圍內(nèi)光吸收值(OD)與活細(xì)胞數(shù)量呈線性關(guān)系。所以可以通過(guò)測(cè)量OD值，間接測(cè)量活細(xì)胞數(shù)量。其他見(jiàn)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的繪制等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容3.實(shí)驗(yàn)材料、用品實(shí)驗(yàn)材料：Hela細(xì)胞，HL-60細(xì)胞等多種腫瘤細(xì)胞及原代培養(yǎng)的正常細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)用品：

試劑：不同濃度梯度的重要某活性成分溶液。MTT（四甲基偶氮唑鹽，5mg/ml溶于PBS），SDS脫色液：0.01mol/LHCl，10%SDS或DTW脫色液：1份TritonX—100溶于3份DMF（N,N-二甲基甲酰胺）中，搖勻，然后加2份去離子水，加檸檬酸至終濃度0.2mol/L，調(diào)pH至5～6。

其他：見(jiàn)細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的繪制等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。4.實(shí)驗(yàn)步驟中藥活性成分的分離、提取劑鑒定；細(xì)胞的傳代培養(yǎng)。檢測(cè)不同濃度梯度的重要活性成分對(duì)腫瘤細(xì)胞及正常細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線的影響（與未加藥物組作對(duì)照）。

方法：MTT法繪制生長(zhǎng)曲線。a制備1ml細(xì)胞懸液?？瞻讓?duì)照以1ml培養(yǎng)基代替細(xì)胞懸液。加入0.1mlMTT于37℃孵育4h，使MTT還原為藍(lán)紫色甲脯結(jié)晶。b加1mlDTW脫色液，37℃至少靜置30min（甚至過(guò)夜），使甲脯顆粒充分溶解。c吸取200μl該溶解液至96孔板孔中，在酶標(biāo)儀上讀取OD值，檢測(cè)波長(zhǎng)570nm，參考波長(zhǎng)630nm。d每隔24h測(cè)量一個(gè)點(diǎn)，每個(gè)點(diǎn)為3個(gè)平行樣品的平均值。5.注意事項(xiàng)每一樣本組實(shí)驗(yàn)應(yīng)重復(fù)三次。MTT法的原理是測(cè)定細(xì)胞線粒體琥珀酸脫氫酶的活性。此法從根本上看是反映細(xì)胞的代謝和增殖活力，而非細(xì)胞數(shù)量。如果想用MTT法間接測(cè)量細(xì)胞數(shù)量，必須先用MTT法作出細(xì)胞數(shù)量和OD值相互關(guān)系的趨勢(shì)線，在線性相關(guān)的范圍內(nèi)可間接測(cè)量細(xì)胞數(shù)量。在需要確知細(xì)胞數(shù)量的場(chǎng)合不宜用MTT法?？山Y(jié)合科研，將課題組項(xiàng)目中研究的一些抑癌活性物質(zhì)作為研究對(duì)象進(jìn)行分析。濃度根據(jù)研究對(duì)象的不同，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)設(shè)定。6.思考題分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，該中藥成分對(duì)于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)是否有作用？請(qǐng)?jiān)O(shè)想一下怎樣進(jìn)一步驗(yàn)證其結(jié)果？謝謝觀看/歡迎下載BYFAITHIMEANAVISIONOFGOODONECHERISHESANDTHEENTHUSIASMTHATPUSHESONETOSEEKI