微生物控制常識微生物控制常識1國外消毒行業(yè)狀況美國的消毒產(chǎn)品主要是含氯化合物、過氧化物、季銨鹽化合物歐洲的消毒產(chǎn)品主要是酚類化合物、醛類化合物、季銨鹽化合物，限制使用過氧化物，禁止使用含氯化合物日本只使用含氯化合物、過氧化物，氧化電位水，允許使用季銨鹽國外消毒行業(yè)狀況美國的消毒產(chǎn)品主要是含氯化合物、過氧化物、季2國內(nèi)外消毒產(chǎn)品的差異消毒技術(shù)標準不一樣區(qū)分消毒產(chǎn)品的方法不一樣使用過程的控制不一樣國內(nèi)外消毒產(chǎn)品的差異消毒技術(shù)標準不一樣3國家對消毒藥品或器械的管理根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》、《中華人民共和國傳染病防治法實施辦法》和《消毒管理辦法》的有關規(guī)定，在中華人民共和國境內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營、使用和檢驗消毒產(chǎn)品的組織，醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場所，所使用的消毒藥品或器械必須經(jīng)中華人民共和國衛(wèi)生部批準，并按批準使用的范圍和方法在消毒中使用。中華人民共和國衛(wèi)生部規(guī)定消毒藥、械按其性能特點，可在物體表面、環(huán)境、水體、織物等范圍內(nèi)使用。所有消毒藥、械的許可批件均可按產(chǎn)品名稱或批件號在衛(wèi)生部官方網(wǎng)站上查詢。國家對消毒藥品或器械的管理根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》4消毒和滅菌的區(qū)別消毒是指將傳播媒介上的病原微生物清除或殺滅，使其達到無害化。滅菌是指將傳播媒介上一切微生物全部清除或殺滅，特別是抗力最強的細菌芽孢。消毒和滅菌的區(qū)別消毒是指將傳播媒介上的病原微生物清除或殺滅，5消毒劑的效能劃分高效消毒劑：指可殺滅一切細菌繁殖體（包括分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子等，對細菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定殺滅作用，達到高水平消毒要求的制劑。中效消毒劑：指可殺滅分枝桿菌、真菌、病毒、及細菌繁殖體等微生物，達到消毒要求的制劑。低效消毒劑：指僅可殺滅細菌繁殖體和親脂病毒，達到消毒要求的制劑。消毒劑的效能劃分高效消毒劑：指可殺滅一切細菌繁殖體（包括分枝6消毒劑（Disinfectant）：能夠破壞有害細菌（但不是孢子）生長的一類化學或物理試劑。由于其毒性而通常僅作用于非生命物質(zhì)。殺菌劑（Antiseptic）：能夠破壞微生物并且適用于皮膚消毒（低毒性的）的一類化學物質(zhì)。抑菌劑（Bacteriocide):使細菌致死抑菌（Bacteriostatic）:抑制任何細菌的增長殺孢子劑（Sporicide）:使孢子致死殺真菌劑（Fungicide）:殺死真菌的試劑熏蒸（Fumigation）:用消毒劑的蒸氣進行消毒的過程。通常用于封閉的環(huán)境如房間或隔離箱滅菌（Sanitisation）:降低微生物污染水平的過程，可以通過化學試劑或物理過程（如：氯，加熱，紫外燈）實現(xiàn)這一過程消毒劑的基本定義消毒劑（Disinfectant）：能夠破壞有害細菌（但不是7化學主份類別舉例醛類殺孢子劑2％戊二醛醇類一般消毒劑，抗菌/病毒70%異丙醇、75％酒精含氯和次氯酸鈉殺孢子劑0.5%次氯酸鈉酚類一般消毒劑500μg/g氯甲酚、氯二甲酚臭氧殺孢子劑8％氣體重量過氧化氫氣態(tài)滅菌劑，液體殺孢子劑，抗菌劑4μg/g，10％～25％溶液，3％溶液替代縮二胍抗菌劑0.5%氯己定（洗必泰）過氧乙酸液態(tài)/氣態(tài)滅菌劑0.2%，1μg/g環(huán)氧乙烷氣態(tài)滅菌劑600μg/g季銨鹽類一般消毒劑，抗菌劑200μg/g苯扎氯銨（潔爾滅）β-丙內(nèi)酯殺孢子劑100μg/g化學主份類別舉例醛類殺孢子劑2％戊二醛醇類一般消毒劑，抗菌/8各種微生物對消毒劑的抵抗力目前認為，微生物對消毒因子的敏感性，從低到高的排列順序為：1.親脂病毒（有脂質(zhì)膜的病毒），例如乙肝病毒、流感病毒等2.細菌繁殖體3.真菌4.親水病毒（沒有脂質(zhì)包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)病毒等5.分枝桿菌，例如炭疽桿菌芽孢、龜分枝桿菌等6.細菌芽孢，例如炭疽桿菌芽孢、枯草桿菌芽孢等7.朊病毒（感染性蛋白質(zhì)）各種微生物對消毒劑的抵抗力目前認為，微生物對消毒因子的敏感性9常規(guī)的消毒手段1.低熱消毒法（巴斯德消毒法）：至今國內(nèi)外仍然廣泛應用于對牛奶、對血清或者是對一些醫(yī)療器械的消毒。2.熱力滅菌：在所有的可利用的消毒滅菌方法中，熱力滅菌是一種應用最早，效果最可靠，使用最廣泛的方法，熱可以滅活一切微生物，包括細菌繁殖體，真菌，病毒和抵抗力最強的芽孢，并且加熱時溫度越高，殺傷力越大。因此，熱力滅菌不僅廣泛應用于醫(yī)學消毒滅菌，而且工業(yè)滅菌上也深受重視。3.過濾滅菌：以物理阻留的方法，去除介質(zhì)中的微生物，主要用于液體和氣體物質(zhì)的潔凈消毒處理。如微孔濾膜除菌4.微波殺菌：紫外線等5.化學消毒：次氯酸鈉，碳酸，乙醇，臭氧，環(huán)氧乙烷等常規(guī)的消毒手段1.低熱消毒法（巴斯德消毒法）：至今國內(nèi)外仍然10安全、低殘留，對設備或表面盡可能無腐蝕性，對產(chǎn)品無毒，無污染宜與常規(guī)使用的清潔劑相容，水中溶解度高符合需要控制微生物的類型和數(shù)量本身及其使用濃度的溶液穩(wěn)定水的硬度，有機物或其他物質(zhì)對其消毒效力影響小。消毒劑選擇的一般原則安全、低殘留，對設備或表面盡可能無腐蝕性，對產(chǎn)品無毒，無污染11濃度：并非濃度越高消毒效力越好，應按照供應商提供的信息配制合理的消毒劑濃度污染程度：包括生物負荷及類型pH：不同類型的消毒劑有不同的最佳pH使用范圍溫度：通常消毒劑效力雖溫度升高而增加，但也有例外，如次氯酸不適合于高溫使用水的硬度或金屬離子：一些消毒劑的效力會因金屬離子或硬水而下降配方：許多消毒劑的乙醇溶液消毒效力會非常高。螯合劑和緩沖鹽也可以提高消毒劑的效力接觸時間：保證充分的接觸時間確保消毒劑效力影響消毒劑效力的主要因素濃度：并非濃度越高消毒效力越好，應按照供應商提供的信息配制合12消毒劑在選擇時應根據(jù)抗菌譜選擇安全性高，低毒的產(chǎn)品消毒劑的效力會受到溶液濃度，pH值，生物污染水平，接觸表面材質(zhì)等多種因素影響小結(jié)消毒劑在選擇時應根據(jù)抗菌譜選擇安全性高，低毒的產(chǎn)品小結(jié)13從2010版GMP看無菌更衣與除菌過濾要求從2010版GMP看無菌更衣14無菌更衣1.新版GMP對無菌更衣的要求2.無菌更衣過程3.人員培訓與確認無菌更衣1.新版GMP對無菌更衣的要求15各環(huán)節(jié)降低污染的措施人、機、料、法、環(huán)五方面各環(huán)節(jié)降低污染的措施人、機、料、法、環(huán)五方面16人員潔凈區(qū)內(nèi)的人數(shù)應當嚴加控制，檢查和監(jiān)督應當盡可能在無菌區(qū)生產(chǎn)的潔凈區(qū)外進行。人員潔凈區(qū)內(nèi)的人數(shù)應當嚴加控制，檢查和監(jiān)督應當盡可能在無菌區(qū)17生產(chǎn)管理當無菌生產(chǎn)正在進行時，應當特別注意減少潔凈區(qū)內(nèi)的各種活動。應當減少人員走動，避免劇烈活動散發(fā)過多的微粒和微生物。由于所穿工作服的特性，環(huán)境的溫濕度應當保證操作人員的舒適性。來自人員的污染占整個生產(chǎn)污染的比例？生產(chǎn)管理當無菌生產(chǎn)正在進行時，應當特別注意減少潔凈區(qū)內(nèi)的各種18人員第二十三條應當按照操作規(guī)程更衣和洗手，盡可能減少對潔凈區(qū)的污染或?qū)⑽廴疚飵霛崈魠^(qū)。人員第二十三條應當按照操作規(guī)程更衣和洗手，盡可能減少對潔凈19從新版GMP看

除菌過濾工藝及驗證從新版GMP看

除菌過濾工藝及驗證20滅菌方法基本要求第八章設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用含石棉的過濾器。過濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應、釋放物質(zhì)或吸附作用而對產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。第四十二條進入無菌生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)氣體（如壓縮空氣、氮氣，但不包括可燃性氣體）均應經(jīng)過除菌過濾，應當定期檢查除菌過濾器和呼吸過濾器的完整性。生物制品附錄第二十五條管道系統(tǒng)、閥門和呼吸過濾器應當便于清潔和滅菌。宜采用在線清潔、在線滅菌系統(tǒng)。密閉容器（如發(fā)酵罐）的閥門應當能用蒸汽滅菌。呼吸過濾器應為疏水性材質(zhì)，且使用效期應當經(jīng)驗證。第四十七條培養(yǎng)基宜在線滅菌。向發(fā)酵罐或反應罐中通氣以及添加培養(yǎng)基、酸、堿、消泡劑等成分所使用的過濾器宜在線滅菌。滅菌方法基本要求21第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：（一）可最終滅菌的產(chǎn)品不得以過濾除菌工藝替代最終滅菌工藝。如果藥品不能在其最終包裝容器中滅菌，可用0.22μm（更小或相同過濾效力）的除菌過濾器將藥液濾入預先滅菌的容器內(nèi)。由于除菌過濾器不能將病毒或支原體全部濾除，可采用熱處理方法來彌補除菌過濾的不足。（二）應當采取措施降低過濾除菌的風險。宜安裝第二只已滅菌的除菌過濾器再次過濾藥液，最終的除菌過濾濾器應當盡可能接近灌裝點。（三）除菌過濾器使用后，必須采用適當?shù)姆椒⒓磳ζ渫暾赃M行檢查并記錄。常用的方法有起泡點試驗、擴散流試驗或壓力保持試驗。（四）過濾除菌工藝應當經(jīng)過驗證，驗證中應當確定過濾一定量藥液所需時間及過濾器二側(cè)的壓力。任何明顯偏離正常時間或壓力的情況應當有記錄并進行調(diào)查，調(diào)查結(jié)果應當歸入批記錄。（五）同一規(guī)格和型號的除菌過濾器使用時限應當經(jīng)過驗證，一般不得超過一個工作日。風險設計完整性驗證時限與反復使用第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：風險22不同滅菌工藝的無菌保證能力過度殺滅法Fo>1210-6熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以殺滅微生物作為實現(xiàn)無菌的手段殘存概率法Fo>810-6熱穩(wěn)定性一般產(chǎn)品工藝過程將防止產(chǎn)品被耐熱菌污染放在首位,而不是僅依賴最終滅菌去消除污染流通蒸汽法不計算Fo0.1%熱不穩(wěn)定產(chǎn)品以無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾）為基礎，加熱是除菌過濾的補充手段除菌過濾法LRV>70.1%不能加熱的產(chǎn)品LRV=logreductionvalue過濾對數(shù)下降值,一般上游為107下游為1，則LRV=7不同滅菌工藝的無菌保證能力過度殺Fo>12熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品殘滅菌工藝選擇的決策樹

產(chǎn)品是否可以121℃濕熱滅菌15分鐘

產(chǎn)品是否可以濕熱滅菌F0≥8分鐘，達到SAL≤10－6產(chǎn)品處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾（四）使用無菌組分配制和灌封（一）使用高壓滅菌鍋121℃15分鐘（三）無菌過濾和無菌加工結(jié)合使用否是否是否是（二）使用濕熱滅菌F0≥8分鐘滅菌工藝選擇的決策樹產(chǎn)品是否可以121℃濕熱滅菌15分鐘除菌過濾的風險過濾前料液的生物負荷過濾器的選擇風險與驗證困難過濾工藝的操作與控制過濾系統(tǒng)的設計與滅菌驗證除菌過濾的風險過濾前料液的生物負荷應該在什么時候做完整性測試?滅菌前？

滅菌后，過濾前使用前？

過濾后？應該在什么時候做完整性測試?什么時候檢測完整性？FDA對無菌過濾工藝的指南 正常情況下,濾器應在過濾前，即組裝好后，且滅菌后執(zhí)行完整性檢測.非常重要的是:在過濾后對濾器進行完整性檢測,從而查看濾器是否泄漏和膜已破損.

一般認為過濾前后的常規(guī)性完整性檢測是現(xiàn)行GMP的要求.EUGMP對于已滅菌的濾器的完整性檢測應該在使用前和使用后立即執(zhí)行,例如泡點,擴散流及壓力保持試驗.什么時候檢測完整性？FDA對無菌過濾工藝的指南 測試起泡點的方法沖洗加壓增加壓力直到連續(xù)起泡在下游出現(xiàn)測試起泡點的方法沖洗加壓增加壓力直到連續(xù)起泡在擴散流測試方法上游壓力壓縮空氣下游監(jiān)測氣流速度擴散流測試方法上游壓力壓縮空氣下游監(jiān)測氣流速度水浸入法測試02.6bar02.6barPatmPatm02.6bar02.6bar01020Time(min.)裝上干的濾芯在上游充滿水加壓并保持測量壓力衰減壓力導致折疊式濾膜進一步壓縮—現(xiàn)象是有一定的水流水浸入法測試02.6bar02.6barPatmPatm完整性測試失敗處理措施替換過濾柱并且退回膜去分析再濕潤過濾器，使用兩倍于初次濕潤壓或沖洗量或浸泡時間或者使用高壓差在過濾器兩邊再測試過濾器是否通過測試完整性測試評估是否改變否是使用前是否邊緣失敗是否你能否重裝過濾柱用標準程序重裝和沖洗過濾器記錄價值和程序能否再測試是否使用后測試在使用前還是使用后是否邊緣失敗沖洗過濾器，使用兩倍沖洗量或者浸泡時間再測試過濾器是否通過測試沖洗過濾器，使用兩倍于初次濕潤壓或者使用高壓在過濾器兩邊記錄價值和程序完整性測試評估是否接近規(guī)范值70/30異丙醇潤濕，檢測是否是否否是完整性測試失敗處理措施替換過濾柱并且退回膜去分析再濕潤過濾器為什么要進行完整性測試?除菌工藝需要：濾器性能過濾線的設計與濾器滅菌完整性測試標準的確定法規(guī)要求及貿(mào)易需要出口認證（FDA，COS,EDMF）SFDA檢查除菌工藝需要：法規(guī)中認可的兩類完整性測試方法分類測試名稱測試實施者破壞性細菌挑戰(zhàn)測試制造商非破壞性起泡點測試，擴散測試制造商及使用者法規(guī)中認可的兩類完整性測試方法分類測試名稱測試實施者破壞性細滅菌方法第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：（五）同一規(guī)格和型號的除菌過濾器使用時限應當經(jīng)過驗證，一般不得超過一個工作日。滅菌方法第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求其他章節(jié)中對過濾的要求其他章節(jié)中對過濾的要求設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用含石棉的過濾器。過濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應、釋放物質(zhì)或吸附作用而對產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用過濾器析出物評估在注射劑管理委員會的15及26號報告中描述了過濾器析出物評估方法。了解析出物水平有利于：決定過濾器預先沖洗體積決定過濾器能否用于小體積過濾（無法沖淡和稀釋析出物）直接灌裝（這時第一瓶的析出物含量最高）考慮使用兩種方法：_在實際藥物中的析出物_用溶劑來模擬，檢測析出物

過濾器析出物評估在注射劑管理委員會的15及26號報告中描述了設備第四十二條進入無菌區(qū)生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)用氣體（如壓縮空氣、氮氣，但不包括可燃性氣體）均應經(jīng)過除菌過濾，應當定期檢查除菌過濾器和呼吸過濾器的完整性。設備第四十二條進入無菌區(qū)生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)用氣體（無菌工藝模擬試驗--培養(yǎng)基灌裝無菌工藝模擬試驗主要內(nèi)容1.培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點3.結(jié)果解釋和偏差調(diào)查主要內(nèi)容1.培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求新版GMP微生物控制常識課件歐盟滅菌工藝決策樹能否121℃，15分鐘濕熱滅菌能否采用F0≥8的濕熱滅菌，以達到SAL≤10-6121℃，15分鐘濕熱滅菌能否對藥液除菌過濾無菌原料，無菌配制，無菌灌封是否藥液除菌過濾及無菌灌封否否是是采用F0≥8的濕熱滅菌，以達到SAL≤10-6歐盟滅菌工藝決策樹能否121℃，15分鐘濕熱滅菌能否采用F0無菌工藝模擬試驗定義無菌工藝模擬試驗ProcessSimulationTesting（PST）培養(yǎng)基灌裝MediaFill采用培養(yǎng)基代替藥品進行無菌灌裝對無菌工藝進行驗證。此模擬工藝稱之為“培養(yǎng)基灌裝”。無菌工藝模擬試驗定義無菌工藝模擬試驗進行培養(yǎng)基灌裝的目的驗證一個無菌工藝對無菌工藝過程無菌保證水平的綜合評估（設備、人員、操作、滅菌過程、生產(chǎn)環(huán)境等）對無菌操作人員進行資格確認確認進行重大變更后對無菌工藝的影響作為問題調(diào)查的手段綜合反映生產(chǎn)線整體的無菌保證情況，無體現(xiàn)具體某批產(chǎn)品或某個產(chǎn)品的無菌性進行培養(yǎng)基灌裝的目的驗證一個無菌工藝培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率初始驗證：每班次連續(xù)做3批驗證隨后每半年針對不同班次/工藝進行一次再驗證所有日常操作人員每年都必須參加至少一次培養(yǎng)基灌裝驗證空氣凈化系統(tǒng)、設備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應當重復進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率初始驗證：每班次連續(xù)做3批驗證培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率影響無菌灌裝過程中無菌保證水平的重大變更需要進行培養(yǎng)基灌裝判斷：灌裝層流改造膠塞進料裝置變更終端無菌過濾器改變位置滅菌程序變更培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率影響無菌灌裝過程中無菌保證水平的重大變更培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應當足以保證評價的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應當至少等于產(chǎn)品的批量批次量<5000瓶，全批量批次量>5000瓶，通常5000~10000瓶手工灌裝VS隔離器無菌生產(chǎn)工藝跨班次生產(chǎn)，大批量生產(chǎn)培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應當足以保證評價的有效性。灌裝速度、瓶子尺寸、灌裝量原則速度慢，產(chǎn)品暴露時間長；速度快，有時造成較多的干擾瓶子大（包括敞口大?。?，灌裝速度慢盡量按產(chǎn)品實際灌裝體積或更多，體積應能充分接觸所有表面、并足夠支持微生物生長舉例：多規(guī)格的瓶子-最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格;最小的瓶子規(guī)格，最快的速度單一規(guī)格的瓶子–正?；蚵月俣裙嘌b速度、瓶子尺寸、灌裝量原則49最長允許的灌裝時間（如考察操作人員疲勞操作風險）有代表性的正常性操作活動的數(shù)量、種類和復雜性，非常規(guī)的干擾和各類突發(fā)事件（如維修、灌裝中斷等）凍干過程生產(chǎn)線速度和模具的規(guī)格最差條件挑戰(zhàn)49最長允許的灌裝時間（如考察操作人員疲勞操作風險）最差條件50人員數(shù)量及其活動，換班，休息，更衣等具有代表性數(shù)量的無菌操作（如添加容器，密封件，無菌原料成分）或者轉(zhuǎn)移設備無菌連接和拆卸取樣操作各個工藝步驟的最長持續(xù)時間挑戰(zhàn)最差條件挑戰(zhàn)50人員數(shù)量及其活動，換班，休息，更衣等最差條件挑戰(zhàn)51應當根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基TSB或FTM（澄清）某些情況下應該考慮使用厭氧性培養(yǎng)基應該進行促菌生長實驗標準菌株環(huán)境分離菌培養(yǎng)基選擇51應當根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的52在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃下7天(培養(yǎng)細菌)確保其內(nèi)壁和瓶塞充分接觸培養(yǎng)基培養(yǎng)基促生長試驗應由有資質(zhì)的人員進行檢查無缺損的瓶均應該培養(yǎng)，任何不作培養(yǎng)的瓶子都應說明不作培養(yǎng)的原因要進行物料平衡計算培養(yǎng)及讀數(shù)52在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設備的驗證狀態(tài)確認經(jīng)過重大維修或變更后進行了生產(chǎn)線的運行確認或性能確認參與培養(yǎng)基灌裝的人員接受了培訓無菌操作潔凈室行為微生物基礎知識培養(yǎng)基灌裝方案明文規(guī)定的工藝過程及最差條件培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設備的驗證狀態(tài)確認培養(yǎng)基灌裝方案設計分析工藝流程，確定風險因素繪制流程圖通過分析確定可能造成產(chǎn)品污染的風險因素

灌裝時間干擾活動（時間、次數(shù)、種類包括停機、維修、調(diào)整）凍干過程設備裝配（如灌裝前的裝機）人員數(shù)量及其活動無菌操作（如各種無菌部件操作、產(chǎn)品轉(zhuǎn)移）不同班次輪換，著裝更換生產(chǎn)中出現(xiàn)的無菌管道連接無菌樣品取樣灌裝速度重量檢查容器密閉性（大小、種類、與設備匹配程度）某些特殊操作（如進行清潔前的操作）培養(yǎng)基灌裝方案設計分析工藝流程，確定風險因素灌裝時間不同班灌裝過程流程圖灌裝部件裝配管道排液正式灌裝灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員進出班次輪換設置灌裝參數(shù)停機維修環(huán)境監(jiān)測收集轉(zhuǎn)移凍干壓塞暫存壓蓋人員操作人員操作時間時間風險因素灌裝速度灌裝時間長短干擾操作及次數(shù)人員數(shù)量停機操作……轉(zhuǎn)移操作時間暫存位置時間時間灌裝過程流程圖灌裝部件裝配管道灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員干擾操作任何進入A級區(qū)的操作都為干擾操作，應包括所有類型的干擾操作常規(guī)的（灌裝線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測）非常規(guī)的（設備故障，灌裝線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）數(shù)量：干擾的次數(shù)應該不少于正常生產(chǎn)時發(fā)生的次數(shù)干擾操作任何進入A級區(qū)的操作都為干擾操作，應包括所有類型的干人員人數(shù)：模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)活動：最多換班次數(shù)，不同時間段（日班和中夜班），進行正常操作頻率：無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次成功的培養(yǎng)基灌裝人員人數(shù)：模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)測計劃，綜合形成書面方案如何制定環(huán)境監(jiān)測計劃其他一些因素的考慮方案的批準制定培養(yǎng)基灌裝過程的微生物負荷的監(jiān)控計劃,便于偏差調(diào)查環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)測計劃，綜合形成書面方案環(huán)境監(jiān)控方案應用風險評估的方法確定關鍵監(jiān)控點給產(chǎn)品構(gòu)成最大風險的位置，如產(chǎn)品暴露位置、直接接觸表面人員按實際需要選擇合適的監(jiān)測方法空氣浮游菌沉降菌接觸碟/棉簽法合理制定控制標準體現(xiàn)全面監(jiān)控、動態(tài)監(jiān)控環(huán)境監(jiān)控方案應用風險評估的方法確定關鍵監(jiān)控點干熱隧道膠塞漏斗灌裝站風險點-產(chǎn)品暴露區(qū)域瓶子裸露區(qū)灌裝站區(qū)域膠塞裸露區(qū)至凍干機干熱隧道膠塞漏斗灌裝站風險點-產(chǎn)品暴露區(qū)域至凍干機干熱隧道膠塞漏斗灌裝站例如：在左、中、右各設置一個連續(xù)粒子監(jiān)測點在灌裝站左右設置兩個浮游菌取樣點在左、中、右各設置一個沉降菌取樣點在軌道、灌裝針頭、膠塞盤各處設置多個表面取樣點可以參考ISO14644干熱隧道膠塞漏斗灌裝站例如：63文件記錄：過程控制檢測和實驗室檢測結(jié)果環(huán)境和人員監(jiān)測結(jié)果設備功能（批報警記錄，過濾器完整性測試）人員干擾操作、偏差、中斷等--發(fā)生時間和持續(xù)時間培養(yǎng)基報廢記錄生產(chǎn)線清場記錄過程錄像培養(yǎng)基灌裝過程記錄63文件記錄：培養(yǎng)基灌裝過程記錄64無菌生產(chǎn)區(qū)域管道系統(tǒng)凍干機過程中的培養(yǎng)基泄漏培養(yǎng)基的撤出和報廢培養(yǎng)基灌裝過程/灌裝前不得故意設計不具代表性的大清場、消毒應當采取措施保證驗證不能對生產(chǎn)造成不良影響培養(yǎng)基灌裝結(jié)束后的清場和清洗64無菌生產(chǎn)區(qū)域培養(yǎng)基灌裝結(jié)束后的清場和清洗培養(yǎng)基灌裝的接受標準培養(yǎng)基模擬試驗的目標是零污染，應當遵循以下原則：灌裝數(shù)量少于5000支時，不得檢出污染品；2.灌裝數(shù)量在5000至10000時：(1)有1支污染，需進行調(diào)查，并考慮重復培養(yǎng)基灌裝試驗(2)2支污染，需進行調(diào)查，進行再驗證3.灌裝超過10000支時：(1)1支污染，需進行調(diào)查(2)2支污染，需進行調(diào)查，進行再驗證4.發(fā)生任何微生物污染時，均應進行調(diào)查。培養(yǎng)基灌裝的接受標準培養(yǎng)基模擬試驗的目標是零污染，應當遵循以培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查當培養(yǎng)基灌裝出現(xiàn)陽性結(jié)果時，不管是否符合合格標準，都必須進行調(diào)查，科學評估工藝的可靠性以及上市產(chǎn)品可能存在的風險。發(fā)現(xiàn)任何陽性結(jié)果樣品均屬應進行調(diào)查。分離到的微生物應鑒別到種。調(diào)查過程中應詳細分析可能的產(chǎn)生陽性結(jié)果的原因。對于超出標準的結(jié)果，應當在調(diào)查清楚原因后再次進行培養(yǎng)基灌裝。培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查當培養(yǎng)基灌裝出現(xiàn)陽性結(jié)果時，不管是否符合合格培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查在明確糾偏行動前，需考慮暫停生產(chǎn)。在工藝重新確認前的產(chǎn)品不得放行。在本次培養(yǎng)基灌裝之后生產(chǎn)的到下一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品都需要被進行回顧，評估其無菌失敗的風險。在該次培養(yǎng)基灌裝和上一次成功的培養(yǎng)基灌裝之間的產(chǎn)品也需要被進行回顧，評估其無菌失敗的風險。必要時，需制定糾偏和預防性措施，并進行工藝的重新確認。培養(yǎng)結(jié)果陽性調(diào)查污染調(diào)查舉例

發(fā)現(xiàn)污染瓶的調(diào)查應該從人、機、料、法、環(huán)各個方面進行調(diào)查。（1）生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)測數(shù)據(jù)（粒子、浮游菌、沉降碟等）（2）對人員的監(jiān)測結(jié)果（3）高效過濾器的完整性檢測數(shù)據(jù)（4）層流臺性能數(shù)據(jù)（氣流流速、壓差記錄等）（5）生產(chǎn)房間監(jiān)控數(shù)據(jù)（空氣流向、工作臺面氣流方向速度）（6）人員培訓情況，操作資質(zhì)和能力（7）干擾模擬的執(zhí)行情況（8）無菌室生產(chǎn)用具和其他相關物品的滅菌儲存情況污染調(diào)查舉例發(fā)現(xiàn)污染瓶的調(diào)查應該從人、機、料、法污染調(diào)查舉例

（9）微生物鑒定結(jié)果，以幫助確定來源（10）清潔消毒流程的執(zhí)行情況（11）設備儀器的校驗結(jié)果（12）生產(chǎn)前后產(chǎn)品過濾器的泄露測試數(shù)據(jù)（13）生產(chǎn)過程發(fā)生的偏差（14）設備的CIP/SIP的情況（15）生產(chǎn)線和培養(yǎng)基灌裝的歷史數(shù)據(jù)分析污染調(diào)查舉例（9）微生物鑒定結(jié)果，以幫助確定來源污染調(diào)查舉例根據(jù)調(diào)查分析確定可能引起污染的原因，針對性制定有效措施。所有調(diào)查行動、改進措施和結(jié)果都應當形成正式文件記錄。污染調(diào)查舉例根據(jù)調(diào)查分析確定可能引起污染的原因，針對性制定有培養(yǎng)基灌裝失效培養(yǎng)基灌裝試驗結(jié)果被認作無效的情況不應該頻繁發(fā)生，更不能直接將失敗的培養(yǎng)基灌裝結(jié)果視為無效在符合明確的書面規(guī)程要求的情況下才能做出試驗無效的判定，此時，應給出支持文件并充分說明理由，并且在實際生產(chǎn)中遇到類似情況時也應同樣處理。失效=無測試注意:如果不可接受的情況發(fā)生，最好先停止培養(yǎng)基灌裝，再判斷是否是失效.培養(yǎng)基灌裝失效培養(yǎng)基灌裝試驗結(jié)果被認作無效的情況不應該頻繁發(fā)培養(yǎng)基灌裝失效以下是可能造成培養(yǎng)基灌裝失效結(jié)果的問題:培養(yǎng)基促生長試驗失敗在無菌生產(chǎn)區(qū)域的物理條件發(fā)生問題(例如斷電、HEPA發(fā)生泄漏)培養(yǎng)基灌裝過程中一些違反規(guī)程的操作，這些操作可能造成批生產(chǎn)中止/報廢培養(yǎng)基灌裝可能因為上述的任何一個或所有類似其他原因造成失效,這些問題可能造成灌裝的中止或失效。但是，培養(yǎng)基灌裝中止的事件需要有詳細的說明記錄。培養(yǎng)基灌裝失效以下是可能造成培養(yǎng)基灌裝失效結(jié)果的問題:培養(yǎng)基灌裝是對無菌工藝過程無菌保證水平的綜合評估，目標是零污染。培養(yǎng)基灌裝是對無菌工藝過程無菌保證水平的綜合評估，目標是零污謝謝！謝謝！微生物控制常識微生物控制常識75國外消毒行業(yè)狀況美國的消毒產(chǎn)品主要是含氯化合物、過氧化物、季銨鹽化合物歐洲的消毒產(chǎn)品主要是酚類化合物、醛類化合物、季銨鹽化合物，限制使用過氧化物，禁止使用含氯化合物日本只使用含氯化合物、過氧化物，氧化電位水，允許使用季銨鹽國外消毒行業(yè)狀況美國的消毒產(chǎn)品主要是含氯化合物、過氧化物、季76國內(nèi)外消毒產(chǎn)品的差異消毒技術(shù)標準不一樣區(qū)分消毒產(chǎn)品的方法不一樣使用過程的控制不一樣國內(nèi)外消毒產(chǎn)品的差異消毒技術(shù)標準不一樣77國家對消毒藥品或器械的管理根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》、《中華人民共和國傳染病防治法實施辦法》和《消毒管理辦法》的有關規(guī)定，在中華人民共和國境內(nèi)生產(chǎn)、經(jīng)營、使用和檢驗消毒產(chǎn)品的組織，醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)以及傳染病疫源地和其他一切需要消毒的場所，所使用的消毒藥品或器械必須經(jīng)中華人民共和國衛(wèi)生部批準，并按批準使用的范圍和方法在消毒中使用。中華人民共和國衛(wèi)生部規(guī)定消毒藥、械按其性能特點，可在物體表面、環(huán)境、水體、織物等范圍內(nèi)使用。所有消毒藥、械的許可批件均可按產(chǎn)品名稱或批件號在衛(wèi)生部官方網(wǎng)站上查詢。國家對消毒藥品或器械的管理根據(jù)《中華人民共和國傳染病防治法》78消毒和滅菌的區(qū)別消毒是指將傳播媒介上的病原微生物清除或殺滅，使其達到無害化。滅菌是指將傳播媒介上一切微生物全部清除或殺滅，特別是抗力最強的細菌芽孢。消毒和滅菌的區(qū)別消毒是指將傳播媒介上的病原微生物清除或殺滅，79消毒劑的效能劃分高效消毒劑：指可殺滅一切細菌繁殖體（包括分枝桿菌）、病毒、真菌及其孢子等，對細菌芽孢（致病性芽孢菌）也有一定殺滅作用，達到高水平消毒要求的制劑。中效消毒劑：指可殺滅分枝桿菌、真菌、病毒、及細菌繁殖體等微生物，達到消毒要求的制劑。低效消毒劑：指僅可殺滅細菌繁殖體和親脂病毒，達到消毒要求的制劑。消毒劑的效能劃分高效消毒劑：指可殺滅一切細菌繁殖體（包括分枝80消毒劑（Disinfectant）：能夠破壞有害細菌（但不是孢子）生長的一類化學或物理試劑。由于其毒性而通常僅作用于非生命物質(zhì)。殺菌劑（Antiseptic）：能夠破壞微生物并且適用于皮膚消毒（低毒性的）的一類化學物質(zhì)。抑菌劑（Bacteriocide):使細菌致死抑菌（Bacteriostatic）:抑制任何細菌的增長殺孢子劑（Sporicide）:使孢子致死殺真菌劑（Fungicide）:殺死真菌的試劑熏蒸（Fumigation）:用消毒劑的蒸氣進行消毒的過程。通常用于封閉的環(huán)境如房間或隔離箱滅菌（Sanitisation）:降低微生物污染水平的過程，可以通過化學試劑或物理過程（如：氯，加熱，紫外燈）實現(xiàn)這一過程消毒劑的基本定義消毒劑（Disinfectant）：能夠破壞有害細菌（但不是81化學主份類別舉例醛類殺孢子劑2％戊二醛醇類一般消毒劑，抗菌/病毒70%異丙醇、75％酒精含氯和次氯酸鈉殺孢子劑0.5%次氯酸鈉酚類一般消毒劑500μg/g氯甲酚、氯二甲酚臭氧殺孢子劑8％氣體重量過氧化氫氣態(tài)滅菌劑，液體殺孢子劑，抗菌劑4μg/g，10％～25％溶液，3％溶液替代縮二胍抗菌劑0.5%氯己定（洗必泰）過氧乙酸液態(tài)/氣態(tài)滅菌劑0.2%，1μg/g環(huán)氧乙烷氣態(tài)滅菌劑600μg/g季銨鹽類一般消毒劑，抗菌劑200μg/g苯扎氯銨（潔爾滅）β-丙內(nèi)酯殺孢子劑100μg/g化學主份類別舉例醛類殺孢子劑2％戊二醛醇類一般消毒劑，抗菌/82各種微生物對消毒劑的抵抗力目前認為，微生物對消毒因子的敏感性，從低到高的排列順序為：1.親脂病毒（有脂質(zhì)膜的病毒），例如乙肝病毒、流感病毒等2.細菌繁殖體3.真菌4.親水病毒（沒有脂質(zhì)包膜的病毒），例如甲型肝炎病毒、脊髓灰質(zhì)病毒等5.分枝桿菌，例如炭疽桿菌芽孢、龜分枝桿菌等6.細菌芽孢，例如炭疽桿菌芽孢、枯草桿菌芽孢等7.朊病毒（感染性蛋白質(zhì)）各種微生物對消毒劑的抵抗力目前認為，微生物對消毒因子的敏感性83常規(guī)的消毒手段1.低熱消毒法（巴斯德消毒法）：至今國內(nèi)外仍然廣泛應用于對牛奶、對血清或者是對一些醫(yī)療器械的消毒。2.熱力滅菌：在所有的可利用的消毒滅菌方法中，熱力滅菌是一種應用最早，效果最可靠，使用最廣泛的方法，熱可以滅活一切微生物，包括細菌繁殖體，真菌，病毒和抵抗力最強的芽孢，并且加熱時溫度越高，殺傷力越大。因此，熱力滅菌不僅廣泛應用于醫(yī)學消毒滅菌，而且工業(yè)滅菌上也深受重視。3.過濾滅菌：以物理阻留的方法，去除介質(zhì)中的微生物，主要用于液體和氣體物質(zhì)的潔凈消毒處理。如微孔濾膜除菌4.微波殺菌：紫外線等5.化學消毒：次氯酸鈉，碳酸，乙醇，臭氧，環(huán)氧乙烷等常規(guī)的消毒手段1.低熱消毒法（巴斯德消毒法）：至今國內(nèi)外仍然84安全、低殘留，對設備或表面盡可能無腐蝕性，對產(chǎn)品無毒，無污染宜與常規(guī)使用的清潔劑相容，水中溶解度高符合需要控制微生物的類型和數(shù)量本身及其使用濃度的溶液穩(wěn)定水的硬度，有機物或其他物質(zhì)對其消毒效力影響小。消毒劑選擇的一般原則安全、低殘留，對設備或表面盡可能無腐蝕性，對產(chǎn)品無毒，無污染85濃度：并非濃度越高消毒效力越好，應按照供應商提供的信息配制合理的消毒劑濃度污染程度：包括生物負荷及類型pH：不同類型的消毒劑有不同的最佳pH使用范圍溫度：通常消毒劑效力雖溫度升高而增加，但也有例外，如次氯酸不適合于高溫使用水的硬度或金屬離子：一些消毒劑的效力會因金屬離子或硬水而下降配方：許多消毒劑的乙醇溶液消毒效力會非常高。螯合劑和緩沖鹽也可以提高消毒劑的效力接觸時間：保證充分的接觸時間確保消毒劑效力影響消毒劑效力的主要因素濃度：并非濃度越高消毒效力越好，應按照供應商提供的信息配制合86消毒劑在選擇時應根據(jù)抗菌譜選擇安全性高，低毒的產(chǎn)品消毒劑的效力會受到溶液濃度，pH值，生物污染水平，接觸表面材質(zhì)等多種因素影響小結(jié)消毒劑在選擇時應根據(jù)抗菌譜選擇安全性高，低毒的產(chǎn)品小結(jié)87從2010版GMP看無菌更衣與除菌過濾要求從2010版GMP看無菌更衣88無菌更衣1.新版GMP對無菌更衣的要求2.無菌更衣過程3.人員培訓與確認無菌更衣1.新版GMP對無菌更衣的要求89各環(huán)節(jié)降低污染的措施人、機、料、法、環(huán)五方面各環(huán)節(jié)降低污染的措施人、機、料、法、環(huán)五方面90人員潔凈區(qū)內(nèi)的人數(shù)應當嚴加控制，檢查和監(jiān)督應當盡可能在無菌區(qū)生產(chǎn)的潔凈區(qū)外進行。人員潔凈區(qū)內(nèi)的人數(shù)應當嚴加控制，檢查和監(jiān)督應當盡可能在無菌區(qū)91生產(chǎn)管理當無菌生產(chǎn)正在進行時，應當特別注意減少潔凈區(qū)內(nèi)的各種活動。應當減少人員走動，避免劇烈活動散發(fā)過多的微粒和微生物。由于所穿工作服的特性，環(huán)境的溫濕度應當保證操作人員的舒適性。來自人員的污染占整個生產(chǎn)污染的比例？生產(chǎn)管理當無菌生產(chǎn)正在進行時，應當特別注意減少潔凈區(qū)內(nèi)的各種92人員第二十三條應當按照操作規(guī)程更衣和洗手，盡可能減少對潔凈區(qū)的污染或?qū)⑽廴疚飵霛崈魠^(qū)。人員第二十三條應當按照操作規(guī)程更衣和洗手，盡可能減少對潔凈93從新版GMP看

除菌過濾工藝及驗證從新版GMP看

除菌過濾工藝及驗證94滅菌方法基本要求第八章設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用含石棉的過濾器。過濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應、釋放物質(zhì)或吸附作用而對產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。第四十二條進入無菌生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)氣體（如壓縮空氣、氮氣，但不包括可燃性氣體）均應經(jīng)過除菌過濾，應當定期檢查除菌過濾器和呼吸過濾器的完整性。生物制品附錄第二十五條管道系統(tǒng)、閥門和呼吸過濾器應當便于清潔和滅菌。宜采用在線清潔、在線滅菌系統(tǒng)。密閉容器（如發(fā)酵罐）的閥門應當能用蒸汽滅菌。呼吸過濾器應為疏水性材質(zhì)，且使用效期應當經(jīng)驗證。第四十七條培養(yǎng)基宜在線滅菌。向發(fā)酵罐或反應罐中通氣以及添加培養(yǎng)基、酸、堿、消泡劑等成分所使用的過濾器宜在線滅菌。滅菌方法基本要求95第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：（一）可最終滅菌的產(chǎn)品不得以過濾除菌工藝替代最終滅菌工藝。如果藥品不能在其最終包裝容器中滅菌，可用0.22μm（更小或相同過濾效力）的除菌過濾器將藥液濾入預先滅菌的容器內(nèi)。由于除菌過濾器不能將病毒或支原體全部濾除，可采用熱處理方法來彌補除菌過濾的不足。（二）應當采取措施降低過濾除菌的風險。宜安裝第二只已滅菌的除菌過濾器再次過濾藥液，最終的除菌過濾濾器應當盡可能接近灌裝點。（三）除菌過濾器使用后，必須采用適當?shù)姆椒⒓磳ζ渫暾赃M行檢查并記錄。常用的方法有起泡點試驗、擴散流試驗或壓力保持試驗。（四）過濾除菌工藝應當經(jīng)過驗證，驗證中應當確定過濾一定量藥液所需時間及過濾器二側(cè)的壓力。任何明顯偏離正常時間或壓力的情況應當有記錄并進行調(diào)查，調(diào)查結(jié)果應當歸入批記錄。（五）同一規(guī)格和型號的除菌過濾器使用時限應當經(jīng)過驗證，一般不得超過一個工作日。風險設計完整性驗證時限與反復使用第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：風險96不同滅菌工藝的無菌保證能力過度殺滅法Fo>1210-6熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品以殺滅微生物作為實現(xiàn)無菌的手段殘存概率法Fo>810-6熱穩(wěn)定性一般產(chǎn)品工藝過程將防止產(chǎn)品被耐熱菌污染放在首位,而不是僅依賴最終滅菌去消除污染流通蒸汽法不計算Fo0.1%熱不穩(wěn)定產(chǎn)品以無菌生產(chǎn)工藝（除菌過濾）為基礎，加熱是除菌過濾的補充手段除菌過濾法LRV>70.1%不能加熱的產(chǎn)品LRV=logreductionvalue過濾對數(shù)下降值,一般上游為107下游為1，則LRV=7不同滅菌工藝的無菌保證能力過度殺Fo>12熱穩(wěn)定性好的產(chǎn)品殘滅菌工藝選擇的決策樹

產(chǎn)品是否可以121℃濕熱滅菌15分鐘

產(chǎn)品是否可以濕熱滅菌F0≥8分鐘，達到SAL≤10－6產(chǎn)品處方是否可以通過微生物滯留過濾器過濾（四）使用無菌組分配制和灌封（一）使用高壓滅菌鍋121℃15分鐘（三）無菌過濾和無菌加工結(jié)合使用否是否是否是（二）使用濕熱滅菌F0≥8分鐘滅菌工藝選擇的決策樹產(chǎn)品是否可以121℃濕熱滅菌15分鐘除菌過濾的風險過濾前料液的生物負荷過濾器的選擇風險與驗證困難過濾工藝的操作與控制過濾系統(tǒng)的設計與滅菌驗證除菌過濾的風險過濾前料液的生物負荷應該在什么時候做完整性測試?滅菌前？

滅菌后，過濾前使用前？

過濾后？應該在什么時候做完整性測試?什么時候檢測完整性？FDA對無菌過濾工藝的指南 正常情況下,濾器應在過濾前，即組裝好后，且滅菌后執(zhí)行完整性檢測.非常重要的是:在過濾后對濾器進行完整性檢測,從而查看濾器是否泄漏和膜已破損.

一般認為過濾前后的常規(guī)性完整性檢測是現(xiàn)行GMP的要求.EUGMP對于已滅菌的濾器的完整性檢測應該在使用前和使用后立即執(zhí)行,例如泡點,擴散流及壓力保持試驗.什么時候檢測完整性？FDA對無菌過濾工藝的指南 測試起泡點的方法沖洗加壓增加壓力直到連續(xù)起泡在下游出現(xiàn)測試起泡點的方法沖洗加壓增加壓力直到連續(xù)起泡在擴散流測試方法上游壓力壓縮空氣下游監(jiān)測氣流速度擴散流測試方法上游壓力壓縮空氣下游監(jiān)測氣流速度水浸入法測試02.6bar02.6barPatmPatm02.6bar02.6bar01020Time(min.)裝上干的濾芯在上游充滿水加壓并保持測量壓力衰減壓力導致折疊式濾膜進一步壓縮—現(xiàn)象是有一定的水流水浸入法測試02.6bar02.6barPatmPatm完整性測試失敗處理措施替換過濾柱并且退回膜去分析再濕潤過濾器，使用兩倍于初次濕潤壓或沖洗量或浸泡時間或者使用高壓差在過濾器兩邊再測試過濾器是否通過測試完整性測試評估是否改變否是使用前是否邊緣失敗是否你能否重裝過濾柱用標準程序重裝和沖洗過濾器記錄價值和程序能否再測試是否使用后測試在使用前還是使用后是否邊緣失敗沖洗過濾器，使用兩倍沖洗量或者浸泡時間再測試過濾器是否通過測試沖洗過濾器，使用兩倍于初次濕潤壓或者使用高壓在過濾器兩邊記錄價值和程序完整性測試評估是否接近規(guī)范值70/30異丙醇潤濕，檢測是否是否否是完整性測試失敗處理措施替換過濾柱并且退回膜去分析再濕潤過濾器為什么要進行完整性測試?除菌工藝需要：濾器性能過濾線的設計與濾器滅菌完整性測試標準的確定法規(guī)要求及貿(mào)易需要出口認證（FDA，COS,EDMF）SFDA檢查除菌工藝需要：法規(guī)中認可的兩類完整性測試方法分類測試名稱測試實施者破壞性細菌挑戰(zhàn)測試制造商非破壞性起泡點測試，擴散測試制造商及使用者法規(guī)中認可的兩類完整性測試方法分類測試名稱測試實施者破壞性細滅菌方法第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求：（五）同一規(guī)格和型號的除菌過濾器使用時限應當經(jīng)過驗證，一般不得超過一個工作日。滅菌方法第七十五條非最終滅菌產(chǎn)品的過濾除菌應當符合以下要求其他章節(jié)中對過濾的要求其他章節(jié)中對過濾的要求設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用含石棉的過濾器。過濾器不得因與產(chǎn)品發(fā)生反應、釋放物質(zhì)或吸附作用而對產(chǎn)品質(zhì)量造成不利影響。設備第四十一條過濾器應當盡可能不脫落纖維。嚴禁使用過濾器析出物評估在注射劑管理委員會的15及26號報告中描述了過濾器析出物評估方法。了解析出物水平有利于：決定過濾器預先沖洗體積決定過濾器能否用于小體積過濾（無法沖淡和稀釋析出物）直接灌裝（這時第一瓶的析出物含量最高）考慮使用兩種方法：_在實際藥物中的析出物_用溶劑來模擬，檢測析出物

過濾器析出物評估在注射劑管理委員會的15及26號報告中描述了設備第四十二條進入無菌區(qū)生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)用氣體（如壓縮空氣、氮氣，但不包括可燃性氣體）均應經(jīng)過除菌過濾，應當定期檢查除菌過濾器和呼吸過濾器的完整性。設備第四十二條進入無菌區(qū)生產(chǎn)區(qū)的生產(chǎn)用氣體（無菌工藝模擬試驗--培養(yǎng)基灌裝無菌工藝模擬試驗主要內(nèi)容1.培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點3.結(jié)果解釋和偏差調(diào)查主要內(nèi)容1.培養(yǎng)基灌裝的技術(shù)要求新版GMP微生物控制常識課件歐盟滅菌工藝決策樹能否121℃，15分鐘濕熱滅菌能否采用F0≥8的濕熱滅菌，以達到SAL≤10-6121℃，15分鐘濕熱滅菌能否對藥液除菌過濾無菌原料，無菌配制，無菌灌封是否藥液除菌過濾及無菌灌封否否是是采用F0≥8的濕熱滅菌，以達到SAL≤10-6歐盟滅菌工藝決策樹能否121℃，15分鐘濕熱滅菌能否采用F0無菌工藝模擬試驗定義無菌工藝模擬試驗ProcessSimulationTesting（PST）培養(yǎng)基灌裝MediaFill采用培養(yǎng)基代替藥品進行無菌灌裝對無菌工藝進行驗證。此模擬工藝稱之為“培養(yǎng)基灌裝”。無菌工藝模擬試驗定義無菌工藝模擬試驗進行培養(yǎng)基灌裝的目的驗證一個無菌工藝對無菌工藝過程無菌保證水平的綜合評估（設備、人員、操作、滅菌過程、生產(chǎn)環(huán)境等）對無菌操作人員進行資格確認確認進行重大變更后對無菌工藝的影響作為問題調(diào)查的手段綜合反映生產(chǎn)線整體的無菌保證情況，無體現(xiàn)具體某批產(chǎn)品或某個產(chǎn)品的無菌性進行培養(yǎng)基灌裝的目的驗證一個無菌工藝培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率初始驗證：每班次連續(xù)做3批驗證隨后每半年針對不同班次/工藝進行一次再驗證所有日常操作人員每年都必須參加至少一次培養(yǎng)基灌裝驗證空氣凈化系統(tǒng)、設備、生產(chǎn)工藝及人員重大變更后，應當重復進行培養(yǎng)基模擬灌裝試驗培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率初始驗證：每班次連續(xù)做3批驗證培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率影響無菌灌裝過程中無菌保證水平的重大變更需要進行培養(yǎng)基灌裝判斷：灌裝層流改造膠塞進料裝置變更終端無菌過濾器改變位置滅菌程序變更培養(yǎng)基灌裝試驗的頻率影響無菌灌裝過程中無菌保證水平的重大變更培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應當足以保證評價的有效性。批量較小的產(chǎn)品，培養(yǎng)基灌裝的數(shù)量應當至少等于產(chǎn)品的批量批次量<5000瓶，全批量批次量>5000瓶，通常5000~10000瓶手工灌裝VS隔離器無菌生產(chǎn)工藝跨班次生產(chǎn)，大批量生產(chǎn)培養(yǎng)基灌裝批量培養(yǎng)基灌裝容器的數(shù)量應當足以保證評價的有效性。灌裝速度、瓶子尺寸、灌裝量原則速度慢，產(chǎn)品暴露時間長；速度快，有時造成較多的干擾瓶子大（包括敞口大?。?，灌裝速度慢盡量按產(chǎn)品實際灌裝體積或更多，體積應能充分接觸所有表面、并足夠支持微生物生長舉例：多規(guī)格的瓶子-最慢的速度，最大的瓶子規(guī)格;最小的瓶子規(guī)格，最快的速度單一規(guī)格的瓶子–正?；蚵月俣裙嘌b速度、瓶子尺寸、灌裝量原則123最長允許的灌裝時間（如考察操作人員疲勞操作風險）有代表性的正常性操作活動的數(shù)量、種類和復雜性，非常規(guī)的干擾和各類突發(fā)事件（如維修、灌裝中斷等）凍干過程生產(chǎn)線速度和模具的規(guī)格最差條件挑戰(zhàn)49最長允許的灌裝時間（如考察操作人員疲勞操作風險）最差條件124人員數(shù)量及其活動，換班，休息，更衣等具有代表性數(shù)量的無菌操作（如添加容器，密封件，無菌原料成分）或者轉(zhuǎn)移設備無菌連接和拆卸取樣操作各個工藝步驟的最長持續(xù)時間挑戰(zhàn)最差條件挑戰(zhàn)50人員數(shù)量及其活動，換班，休息，更衣等最差條件挑戰(zhàn)125應當根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的適用性選擇培養(yǎng)基TSB或FTM（澄清）某些情況下應該考慮使用厭氧性培養(yǎng)基應該進行促菌生長實驗標準菌株環(huán)境分離菌培養(yǎng)基選擇51應當根據(jù)產(chǎn)品的劑型、培養(yǎng)基的選擇性、澄清度、濃度和滅菌的126在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃下7天(培養(yǎng)細菌)確保其內(nèi)壁和瓶塞充分接觸培養(yǎng)基培養(yǎng)基促生長試驗應由有資質(zhì)的人員進行檢查無缺損的瓶均應該培養(yǎng)，任何不作培養(yǎng)的瓶子都應說明不作培養(yǎng)的原因要進行物料平衡計算培養(yǎng)及讀數(shù)52在20-25℃條件下培養(yǎng)7天(培養(yǎng)真菌)，30-35℃2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點2.培養(yǎng)基灌裝的實施要點培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設備的驗證狀態(tài)確認經(jīng)過重大維修或變更后進行了生產(chǎn)線的運行確認或性能確認參與培養(yǎng)基灌裝的人員接受了培訓無菌操作潔凈室行為微生物基礎知識培養(yǎng)基灌裝方案明文規(guī)定的工藝過程及最差條件培養(yǎng)基灌裝的先決條件潔凈室/設備的驗證狀態(tài)確認培養(yǎng)基灌裝方案設計分析工藝流程，確定風險因素繪制流程圖通過分析確定可能造成產(chǎn)品污染的風險因素

灌裝時間干擾活動（時間、次數(shù)、種類包括停機、維修、調(diào)整）凍干過程設備裝配（如灌裝前的裝機）人員數(shù)量及其活動無菌操作（如各種無菌部件操作、產(chǎn)品轉(zhuǎn)移）不同班次輪換，著裝更換生產(chǎn)中出現(xiàn)的無菌管道連接無菌樣品取樣灌裝速度重量檢查容器密閉性（大小、種類、與設備匹配程度）某些特殊操作（如進行清潔前的操作）培養(yǎng)基灌裝方案設計分析工藝流程，確定風險因素灌裝時間不同班灌裝過程流程圖灌裝部件裝配管道排液正式灌裝灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員進出班次輪換設置灌裝參數(shù)停機維修環(huán)境監(jiān)測收集轉(zhuǎn)移凍干壓塞暫存壓蓋人員操作人員操作時間時間風險因素灌裝速度灌裝時間長短干擾操作及次數(shù)人員數(shù)量停機操作……轉(zhuǎn)移操作時間暫存位置時間時間灌裝過程流程圖灌裝部件裝配管道灌裝量檢查添加膠塞處理倒瓶人員干擾操作任何進入A級區(qū)的操作都為干擾操作，應包括所有類型的干擾操作常規(guī)的（灌裝線裝配，稱量調(diào)節(jié)，加膠塞，處理倒瓶，取樣，環(huán)境監(jiān)測）非常規(guī)的（設備故障，灌裝線堵塞，軌道調(diào)節(jié)，拆卸/替換破損的部件）數(shù)量：干擾的次數(shù)應該不少于正常生產(chǎn)時發(fā)生的次數(shù)干擾操作任何進入A級區(qū)的操作都為干擾操作，應包括所有類型的干人員人數(shù)：模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)活動：最多換班次數(shù)，不同時間段（日班和中夜班），進行正常操作頻率：無菌區(qū)工作人員至少每年參與一次成功的培養(yǎng)基灌裝人員人數(shù)：模擬無菌區(qū)可能容納最多的人數(shù)環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)測計劃，綜合形成書面方案如何制定環(huán)境監(jiān)測計劃其他一些因素的考慮方案的批準制定培養(yǎng)基灌裝過程的微生物負荷的監(jiān)控計劃,便于偏差調(diào)查環(huán)境監(jiān)控和微生物限度控制制定環(huán)境監(jiān)