淋病奈瑟菌的分子生物學(xué)檢驗(yàn)

目錄淋球菌概述淋病奈瑟菌的基因組結(jié)構(gòu)特征淋病奈瑟菌核酸的檢測(cè)淋病奈瑟菌的耐藥性檢測(cè)分子生物學(xué)檢測(cè)的臨床意義淋球菌淋球菌（gonococci)又名淋病奈瑟菌（NG),是淋病的病原菌。淋球菌革蘭染色陰性，是嚴(yán)格的人體寄生菌，常存在于急性尿道炎與陰道炎的膿性分泌物的白細(xì)胞中，形態(tài)染色類似于腦膜炎球菌。淋病奈瑟菌的基因組結(jié)構(gòu)特征淋病奈瑟菌FA1090菌株是最早被完成測(cè)序研究的淋病奈瑟菌菌株之一染色體DNA長(zhǎng)度為2.15Mbp，其中G+C含量為52.68%。共含有2069個(gè)基因，包括2002個(gè)具有編碼功能的基因和67個(gè)編碼結(jié)構(gòu)性RNAs基因。淋病奈瑟菌的基因組結(jié)構(gòu)特征ChungGT等人在2008年報(bào)道了淋病奈瑟菌新菌株NCCP11945的基因結(jié)構(gòu)組。NCCP11945染色體的DNA長(zhǎng)度為2.23Mbp,據(jù)估計(jì)可以編碼2622個(gè)開(kāi)放性閱讀框。全基因組平均G+C含量為52.4%。這與FA1090菌株相似一、淋病奈瑟菌核酸的檢測(cè)1.聚合酶鏈反應(yīng)：PCR是分子生物學(xué)中最常用檢測(cè)基因的技術(shù)手段，也是淋病奈瑟菌基因診斷中最基本的方法。PCR引物的設(shè)計(jì)應(yīng)選擇與其相應(yīng)的靶基因，多采用：①隱蔽質(zhì)粒cppB基因②16srRNA基因③porA假基因；④編碼外膜蛋白基因(omp基因)⑤opa基因等；⑥胞嘧啶DNA甲基轉(zhuǎn)移酶基因。不同靶基因設(shè)計(jì)引物對(duì)PCR的敏感性和特異性有一定的影響2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)：該技術(shù)是目前臨床檢測(cè)NG的主要分子生物學(xué)技術(shù)。3.連接酶鏈反應(yīng)：用于LCR方法檢測(cè)的NG靶基因主要有opa基因和pilin基因。該法對(duì)于檢測(cè)咽拭子標(biāo)本具有很好的敏感性。4.鏈替代擴(kuò)增技術(shù)：SDA是一種基于酶促反應(yīng)的新的DNA體外等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。目前使用最多的是BectonDikinson公司產(chǎn)生的ProbeTecET，可以同時(shí)對(duì)CT和NG進(jìn)行檢測(cè)。ProbeTecET特異性擴(kuò)增NG染色體PviNg基因，然后用熒光標(biāo)記的探針檢測(cè)其相應(yīng)的DNA靶序列，2小時(shí)可以完成96份標(biāo)本檢測(cè)。與培養(yǎng)法相比具有很高的敏感性和特異性。③porB基因

porB基因可編碼淋球菌的孔蛋白(Porin，與細(xì)菌侵襲力有關(guān)).當(dāng)發(fā)生基因突變時(shí)，孔蛋白對(duì)親水性的抗生素滲透性下降，產(chǎn)生耐藥。④Mtr系統(tǒng)調(diào)控基因

MtrR系統(tǒng)調(diào)控基因的突變會(huì)導(dǎo)致由它編碼的MtrR阻遏蛋白減少消失，Mtr操縱子的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)，使MtrCDE基因表達(dá)增加，編碼的泵蛋白外排活性增強(qiáng)，加大了脂溶性抗生素的排出，使菌體內(nèi)藥物蓄積不足，從而產(chǎn)生耐藥性。⑤erm基因

erm基因編碼erm酶，如果發(fā)生突變，erm基因編碼的酶可使rRNA自動(dòng)甲基化，從而使大環(huán)內(nèi)酯類藥物的作用靶位——核糖體50S亞基蛋白改變，使藥物與靶位的親和力下降引起耐藥。三、分子生物學(xué)檢測(cè)的臨床意義淋病奈瑟菌臨床診斷主要依賴于實(shí)驗(yàn)室對(duì)淋球菌的檢測(cè)，傳統(tǒng)的涂片法簡(jiǎn)單，廉價(jià)，但敏感性低；近年來(lái)出現(xiàn)的新分子生物學(xué)技術(shù)具有較高的特異性和敏感性，大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，在淋病的早期診斷中具有重要臨床意義：1.克服了淋球菌培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn)，提高了臨床樣本檢