中藥制劑中各類(lèi)化學(xué)成分分析中藥制劑中第一節(jié)生物堿類(lèi)成分分析第一節(jié)生物堿類(lèi)成分分析生物堿

*生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物堿成分的制劑常選生物堿為檢測(cè)指標(biāo)*一般具有強(qiáng)烈的生理活性，不少還有毒性，臨床使用須十分慎重生物堿*生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物（一）生物堿在植物界的分布

1、發(fā)育較低級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很少；

2、發(fā)育較高級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很廣：①裸子植物：如麻黃科麻黃屬、松柏科松屬等;②被子植物(單子葉)：如百合科、石蒜科等；③被子植物(雙子葉)：如毛茛科、罌粟科、木蘭科、小檗科等；3、生物堿類(lèi)型越特殊，其分布的植物類(lèi)群越窄（一）生物堿在植物界的分布（二）生物堿的存在形式1、主要存在形式：①游離堿；②鹽類(lèi)；③酰胺類(lèi)；④N-氧化物；⑤氮雜縮醛類(lèi)；⑥烯胺、亞胺等.2、形成鹽類(lèi)的酸：草酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸與硝酸等（二）生物堿的存在形式（三）生物堿的分類(lèi)

*來(lái)源分類(lèi)：鴉片生物堿、麥角生物堿

*化學(xué)分類(lèi)：托品烷生物堿，異喹啉生物堿

*生源結(jié)合化學(xué)分類(lèi)：鳥(niǎo)氨酸系，賴(lài)氨酸系，苯丙氨酸和酪氨酸系，色氨酸系，鄰氨基苯甲酸系，組氨酸系（三）生物堿的分類(lèi)黃連小檗堿、藥根堿、巴馬丁、黃連堿黃柏小檗堿、藥根堿、木蘭花堿麻黃麻黃堿、偽麻黃堿、去甲麻黃堿、甲基麻黃堿馬錢(qián)子馬錢(qián)子堿、偽馬錢(qián)子堿、番木鱉堿（士的寧）偽番木鱉堿制川烏烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿延胡索延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片堿、黃連堿苦參苦參堿、槐定堿、槐果堿、氧化苦參堿山豆根苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿金雀花堿防己粉防己堿、防己諾林堿、輪環(huán)藤酚堿、木蘭堿黃連小檗堿、藥根堿、巴馬丁、黃連堿二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征含N雜環(huán)，含N側(cè)鏈二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征含N雜環(huán)，含N側(cè)鏈吡啶類(lèi)毒芹、煙草喹啉類(lèi)金雞鈉異喹啉類(lèi)黃連、罌粟、嗎啡吲哚類(lèi)番木鱉、毒扁豆咪唑類(lèi)毛果蕓香嘌呤類(lèi)茶葉托烷類(lèi)顛茄、洋金花、古柯其他麻黃、烏頭、秋水仙按氮原子所在基本母核的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類(lèi)吡啶類(lèi)毒芹、煙草按氮原子所在基本母核的化學(xué)結(jié)生物堿類(lèi)成分分析課件（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）顏色多數(shù)無(wú)色如

小檗堿藥根堿共軛體系長(zhǎng)、有助色團(tuán)的可呈色（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）顏色多（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶性固體有些小分子的呈液態(tài)（煙堿、檳榔堿)麻黃堿具有揮發(fā)性咖啡因具有升華性檳榔堿煙堿咖啡因麻黃堿（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶性固體有些小分子的呈液態(tài)（煙堿、2.溶解性難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑2.溶解性難溶于水易溶于水例鹽酸嗎啡Ch.P.（2010）

【性狀】本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中幾乎不溶。例鹽酸麻黃堿Ch.P.（2010）

【性狀】本品在水中易溶，在乙醇中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。液體生物堿和一些小分子固體生物堿既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑例鹽酸嗎啡例鹽酸小檗堿Ch.P.（2010）

【性狀】本品在熱水中溶解，在水或乙醇中微溶，在三氯甲烷中極微溶解，在乙醚中不溶。季銨型生物堿易溶于水、難溶于鹽酸溶液；季銨型生物堿鹽難溶于水例鹽酸小檗堿3.沉淀反應(yīng)H+常用生物堿沉淀劑碘化汞鉀、碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、氯化金、氯化汞、鐵氰化鉀、硅鎢酸、磷鎢酸、磷鉬酸苦味酸、四苯硼鈉、雷氏鹽（硫氰酸鉻鹽）3.沉淀反應(yīng)H+常用生物堿沉淀劑沉淀劑沉淀顏色K2HgI4KBiI4I2-KIH3PO4·12MoO3苦味酸白↓黃↓橙↓褐-暗褐↓藍(lán)↓（NH3·H2O）黃白黃↓沉淀劑沉4.顯色反應(yīng)常用顯色劑硫酸、硝酸、甲醛硫酸、釩硫酸、鉬硫酸、氯酸鉀、三氯化鐵、香草醛、對(duì)二甲氨基苯甲醛4.顯色反應(yīng)常用顯色劑例鹽酸罌粟堿Ch.P.（2010）

【鑒別】（3）取本品5mg，加甲醛硫酸試液1ml，溶液應(yīng)無(wú)色或顯淡黃色，漸漸變成深玫瑰紅色，最后變成紫色（嗎啡或嗎啡的酯化物立即顯紫色或紫堇色）。例鹽酸罌粟堿N.....5.堿性影響堿性強(qiáng)弱因素電子雜化方式電效應(yīng)立體結(jié)構(gòu)N.....5.堿性影響堿性強(qiáng)弱因素電子雜化方式（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞四氫異喹啉異喹啉腈＞＞＞（pKb4.5）（pKb8.6）（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞四氫異喹啉異喹啉腈＞＞＞（（2）電效應(yīng)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系電效應(yīng)（誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)）氮原子上電子云密度↑堿性↑氮原子上電子云密度↓堿性↓（2）電效應(yīng)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系電效應(yīng)（誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)）氮原甲胺氨＞（pKb3.4）（pKb4.25）甲胺氨＞（pKb3.4）（pKb4.25）去甲麻黃堿苯異丙胺＞（pKb4.2）（pKb5.0）去甲麻黃堿苯異丙胺＞（pKb4.2）（pKb5.0）奎寧pKb29.7pKb15.07奎寧pKb29.7pKb15.07茶堿咖啡因（弱酸性）（pKb14.15）茶堿咖啡因（弱酸性）（pKb14.15）嗎啡（兩性）鹽酸嗎啡（兩性）鹽酸（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系利血平（pKa6.07）（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系利血平（pKa6.07）6.紫外吸收特征延胡索乙素6.紫外吸收特征延胡索乙素7.旋光性

多數(shù)具有旋光性（l）鹽酸麻黃堿、硫酸奎寧、氫溴酸山莨菪堿（d）鹽酸偽麻黃堿、硫酸奎尼丁（dl）硫酸阿托品7.旋光性多數(shù)具有旋光性（l）鹽酸麻黃堿、硫酸三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)H+麻黃堿不能與生物堿沉淀劑反應(yīng)→↓三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋例馬錢(qián)子散Ch.P.（2010）

【處方】馬錢(qián)子（沙燙）適量（含士的寧8.0g），地龍93.5g?！捐b別】取本品1g，加濃氨試液數(shù)滴及三氯甲烷10ml，浸泡數(shù)小時(shí)，濾過(guò)，取濾液1ml蒸干，殘?jiān)酉←}酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴,即生成黃棕色沉淀。例馬錢(qián)子散Ch.P.（2010）

TLC法是Ch.P.中藥制劑常用鑒別方法，大多用硅膠為吸附劑1.TLC法（二）色譜法鑒別

硅膠是弱酸性吸附劑，會(huì)吸附生物堿，用中性展開(kāi)劑時(shí)，Rf小，并會(huì)產(chǎn)生斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象TLC法是Ch.P.中藥制劑常用1.TLC

防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（例堿性氧化鋁）B.用硅膠鋪板時(shí)加堿液（例氫氧化鈉）A.展開(kāi)劑中加入堿性試劑（例氨水、二乙胺、吡啶）防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（例堿性氧化鋁苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬(wàn)氏牛黃清心丸Ch.P.（2010）苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬(wàn)氏牛為黃色熒光斑點(diǎn)為黃色熒光斑點(diǎn)游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解士的寧對(duì)照品馬錢(qián)子堿對(duì)照品鹽酸麻黃堿對(duì)照品三氯甲烷-乙醇-環(huán)己烷(3:1:1)例九分散Ch.P .（20 10）

【處方】馬錢(qián)子粉，麻黃，乳香（制），沒(méi)藥（制）稀碘化鉍鉀茚三酮顯色游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解士的寧對(duì)照品三氯甲烷-乙醇2.PC法（Ch.P.應(yīng)用不多）顯色方法熒光生物堿沉淀劑

（不宜用H2SO4）2.PC法（Ch.P.應(yīng)用不多）顯色方法3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同時(shí)進(jìn)行3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同四、含量測(cè)定化學(xué)方法重量法容量法儀器方法光譜法色譜法總生物堿→單體生物堿四、含量測(cè)定化學(xué)方法重量法總生物堿→單體生物堿生物堿類(lèi)成分供試液常用制備方法

多根據(jù)生物堿堿性（可與酸成鹽）及溶解性（多數(shù)游離生物堿易溶于低極性有機(jī)溶劑難溶于水，生物堿鹽易溶于水和極性有機(jī)溶劑），固體制劑可先用醇類(lèi)提取，提取液濃縮后加酸溶解，濾過(guò)酸不溶物，酸水液調(diào)pH9以上，加三氯甲烷萃取，萃取液濃縮至適量。液體制劑（固體制劑亦可）可直接堿化后用三氯甲烷提取，濃縮。如果雜質(zhì)多，可將濃縮液通過(guò)氧化鋁柱等凈化。生物堿類(lèi)成分供試液常用制備方法（二）酸堿滴定法*酸堿滴定法*非水堿量法（一）重量法（二）酸堿滴定法*酸堿滴定法*非水堿量法（一）重量法例

昆明山海棠片Ch.P.（2010）

【含量測(cè)定】取本品60片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約7g，精密稱(chēng)定，置200ml錐形瓶中，加硅藻土1.4g，混勻，加乙醇70ml，加熱回流40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾渣加乙醇50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液（1→100）30ml，置水浴上攪拌使溶解，放冷，濾過(guò)，例昆明山海棠片殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml），合并濾液于分液漏斗中，加氨試液使溶液呈堿性，用乙醚振搖提取4次（40ml、30ml、25ml、20ml），合并乙醚液，用水振搖洗滌2次，每次10ml，乙醚液濾過(guò)，醚液置已在100℃干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在低溫水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)?00℃干燥至恒重，稱(chēng)定重量，計(jì)算，即得。殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20例顛茄酊Ch.P（2005）

【含量測(cè)定】精密量取本品100ml，蒸至約10ml，如有沉淀析出，可加乙醇適量使溶解，用0.1mol/L硫酸溶液10ml分次洗滌容器，合并洗液，用三氯甲烷分次振搖提取，每次10ml，至三氯甲烷層無(wú)色，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml振搖洗滌，洗液并入酸液中，加過(guò)量的濃氨試液使成堿性，迅速用三氯甲烷分次振搖提取，至生物堿提盡。如發(fā)生乳化現(xiàn)象，可加乙醇數(shù)滴，每次得到的三氯甲烷液均用同一的水10ml洗滌，例顛茄酊棄去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，并在80℃干燥2小時(shí)，殘?jiān)尤燃淄?ml，必要時(shí)，微熱使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，置水浴上加熱，除去三氯甲烷，放冷，加甲基紅指示液1～2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）。本品每1ml含生物堿以莨菪堿計(jì)，應(yīng)為0.28~0.32mg。棄去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，471.測(cè)定方法（二）非水堿量法（1）原理＋471.測(cè)定方法（二）非水堿量法（1）原理＋48（2）方法溶劑冰醋酸、醋酐滴定液

HClO4（0.1mol/L）指示終點(diǎn)電位法結(jié)晶紫48（2）方法溶劑冰醋酸、醋酐492.適用范圍Kb10-8

～10-10

冰醋酸Kb10-10

～10-12

冰醋酸+醋酐Kb＜10-12

醋酐弱堿（Kb＜10-8）492.適用范圍Kb10-8～10-1050氫鹵酸鹽的含量測(cè)定酸性較強(qiáng)排除氫鹵酸干擾方法難解離50氫鹵酸鹽的含量測(cè)定酸性較強(qiáng)排除氫鹵酸干擾方法難解離（三）光譜法1.直接測(cè)定法

適用于藥味較少、干擾不大的制劑（三）光譜法1.直接測(cè)定法適用于藥味較少、2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷氏鹽比色法（4）異羥肟酸鐵比色法2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)B.影響因素pH↓H++In-→HIn*

酸性染料以分子狀態(tài)存在pH↑BH+→B＋H+*

生物堿游離，進(jìn)入有機(jī)相*沒(méi)有足夠的H+與生物堿結(jié)合a.水相的最適pH值B.影響因素pH↓H++In-→優(yōu)點(diǎn)*與離子對(duì)形成氫鍵，提取率高*不與水相混溶

*

A樣大b.有機(jī)溶劑的選擇常用三氯甲烷優(yōu)點(diǎn)b.有機(jī)溶劑的選擇常用三氯甲烷c.酸性染料的選擇要求

*與有機(jī)堿定量結(jié)合

*所成離子對(duì)在有機(jī)溶劑中溶解度大，且有較高的吸光度

*染料不溶或難溶于有機(jī)溶劑常用

溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、甲基橙c.酸性染料的選擇要求*與有機(jī)堿定量結(jié)合 常用d.水分的影響干擾*使有機(jī)相混濁，A↑

*

帶入水相染料，A↑排除*加脫水劑（無(wú)水Na2SO4）

*用濾紙過(guò)濾d.水分的影響干擾*使有機(jī)相混濁，A↑排除*加脫水（2）苦味酸鹽比色法苦味酸（三硝基苯酚）（2）苦味酸鹽比色法苦味酸（三硝基苯酚）例萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定buffer等量拌勻甲醇提取揮干溶解、定容溶解鹽酸小檗堿對(duì)照品法例萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定buffer等量（3）雷氏鹽比色法A.原理生物堿在一定pH溶液中能成為BH+，可與雷氏鹽的陰離子

[Cr(NH3)2(SCN)4]-結(jié)合成為單鹽或

雙鹽沉淀，只要測(cè)得雷氏鹽的吸光度，即可計(jì)算生物堿的含量硫氰酸鉻銨NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]·H2O（3）雷氏鹽比色法A.原理生物檳榔堿結(jié)構(gòu)中只含有1個(gè)N，與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較小檳榔堿結(jié)構(gòu)中只含有1個(gè)N，與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影奎寧酸性較小，生成單鹽酸性較大，生成雙鹽與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較大奎寧酸性較小，生成單鹽與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較利血平堿性較小酸性較大或小均生成單鹽利血平堿性較小小檗堿結(jié)構(gòu)中有幾個(gè)季銨N，與幾分子沉淀劑結(jié)合小檗堿結(jié)構(gòu)中有幾個(gè)季銨N，與幾分子沉淀劑結(jié)合B.測(cè)定方法直接法H+(定量過(guò)量)剩余法H+生物堿雷氏鹽剩余的雷氏鹽B.測(cè)定方法直接法H+(定量過(guò)量)剩余法H+生物堿剩余的例產(chǎn)婦康顆粒中益母草總生物堿含量測(cè)定定容超聲蒸干成鹽、溶解攪拌H+(定量過(guò)量)過(guò)濾鹽酸水蘇堿對(duì)照品對(duì)照法Ch.P（2000）（測(cè)定剩余雷氏鹽）例產(chǎn)婦康顆粒中益母草總生物堿含量測(cè)定定容超聲蒸干成鹽（4）異羥肟酸鐵比色法Fe3+/3紅色水解A（4）異羥肟酸鐵比色法Fe3+/3紅色水解AOR－C－ORH2NOHOR－C－NH－OHFe3+/3H+OR－C－NH－OFe3+/3紅色OR－C－OH水解OR－C－ORH2NOHOR－C－NH－OHFe3+/3H+例附子注射液中酯型生物堿含量測(cè)定烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)曲線法A525nm游離提取蒸干溶解定容OH-例附子注射液中酯型生物堿含量測(cè)定烏頭堿標(biāo)準(zhǔn)曲線法A5（四）色譜法1.TLCS法（四）色譜法1.TLCS法例九分散中士的寧的含量測(cè)定Ch.P（2000）點(diǎn)樣

λS=254nmλR=325nm游離提取成鹽游離提取揮干CHCl3士的寧對(duì)照品對(duì)照法例九分散中士的寧的含量測(cè)定Ch.P（2002.HPLC法固定相硅膠-C4或C8或C18流動(dòng)相甲醇-水或乙腈-水RP-HPLC2.HPLC法固定相硅膠-C4或C8或C18RP-OHOHOHOH應(yīng)注意

固定相Si-OH的復(fù)蓋率復(fù)蓋率越高，分離效果越好

通常硅膠上Si-OH數(shù)量約為6~8/nm2。在硅膠上直接鍵合烷基，平均鍵合量4/nm2，C4可得到最佳復(fù)蓋，而C18只有2/nm2應(yīng)注意固定相Si-OH的復(fù)蓋率復(fù)蓋率越高，分離效果越復(fù)蓋率小，易引起拖尾，解決方法（1）改進(jìn)流動(dòng)相

A.加抑制劑（三乙胺）掩蔽Si-OH基C.調(diào)整流動(dòng)相的pH值

改變流動(dòng)相離子強(qiáng)度及促進(jìn)離子對(duì)相互作用B.加季銨鹽（溴化四甲基胺）復(fù)蓋率小，易引起拖尾，解決方法（1）改進(jìn)流動(dòng)相掩蔽Si-OHD.加離子對(duì)試劑

當(dāng)生物堿在酸性條件下以陽(yáng)離子存在時(shí)，離子對(duì)試劑的陰離子與之形成中性離子對(duì)，掩蔽了生物堿的堿性基團(tuán)，使其不與Si-OH作用（辛烷磺酸鈉或十二烷基磺酸鈉）D.加離子對(duì)試劑當(dāng)生物堿在酸性條件下以陽(yáng)離（2）改進(jìn)固定相B.對(duì)固定相采取封尾技術(shù)

例鍵合后用三甲基氯硅烷（TMCS）作封尾處理，減少殘余羥基，增加單體覆蓋率A.選用碳鏈較短鍵合相硅膠填料

例

C4或C8（2）改進(jìn)固定相B.對(duì)固定相采取封尾技術(shù)A.選用碳鏈較短例舒風(fēng)定痛丸中士的寧含量測(cè)定流動(dòng)相正己烷-二氯甲烷-無(wú)水甲醇-三乙胺47.547.550.4例燒傷止痛膏中小檗堿含量測(cè)定流動(dòng)相乙腈-0.045mol/LKH2PO4（pH5.0）4357含0.013mol/L十二烷基硫酸鈉例舒風(fēng)定痛丸中士的寧含量測(cè)定流動(dòng)相正己烷-二3.GC法*適用于揮發(fā)性、遇熱穩(wěn)定生物堿類(lèi)*生物堿鹽在約325℃急速加熱下即游離，故分離測(cè)得的均為游離生物堿*提取、純化時(shí)應(yīng)避免加熱3.GC法*適用于揮發(fā)性、遇熱穩(wěn)定生物堿類(lèi)*生物堿鹽在中藥制劑中各類(lèi)化學(xué)成分分析中藥制劑中第一節(jié)生物堿類(lèi)成分分析第一節(jié)生物堿類(lèi)成分分析生物堿

*生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物堿成分的制劑常選生物堿為檢測(cè)指標(biāo)*一般具有強(qiáng)烈的生理活性，不少還有毒性，臨床使用須十分慎重生物堿*生物體內(nèi)含氮有機(jī)化合物，堿性一、概述含生物（一）生物堿在植物界的分布

1、發(fā)育較低級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很少；

2、發(fā)育較高級(jí)的植物類(lèi)群中生物堿分布很廣：①裸子植物：如麻黃科麻黃屬、松柏科松屬等;②被子植物(單子葉)：如百合科、石蒜科等；③被子植物(雙子葉)：如毛茛科、罌粟科、木蘭科、小檗科等；3、生物堿類(lèi)型越特殊，其分布的植物類(lèi)群越窄（一）生物堿在植物界的分布（二）生物堿的存在形式1、主要存在形式：①游離堿；②鹽類(lèi)；③酰胺類(lèi)；④N-氧化物；⑤氮雜縮醛類(lèi)；⑥烯胺、亞胺等.2、形成鹽類(lèi)的酸：草酸、檸檬酸、鹽酸、硫酸與硝酸等（二）生物堿的存在形式（三）生物堿的分類(lèi)

*來(lái)源分類(lèi)：鴉片生物堿、麥角生物堿

*化學(xué)分類(lèi)：托品烷生物堿，異喹啉生物堿

*生源結(jié)合化學(xué)分類(lèi)：鳥(niǎo)氨酸系，賴(lài)氨酸系，苯丙氨酸和酪氨酸系，色氨酸系，鄰氨基苯甲酸系，組氨酸系（三）生物堿的分類(lèi)黃連小檗堿、藥根堿、巴馬丁、黃連堿黃柏小檗堿、藥根堿、木蘭花堿麻黃麻黃堿、偽麻黃堿、去甲麻黃堿、甲基麻黃堿馬錢(qián)子馬錢(qián)子堿、偽馬錢(qián)子堿、番木鱉堿（士的寧）偽番木鱉堿制川烏烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿延胡索延胡索乙素、延胡索甲素、原阿片堿、黃連堿苦參苦參堿、槐定堿、槐果堿、氧化苦參堿山豆根苦參堿、氧化苦參堿、槐果堿金雀花堿防己粉防己堿、防己諾林堿、輪環(huán)藤酚堿、木蘭堿黃連小檗堿、藥根堿、巴馬丁、黃連堿二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征含N雜環(huán)，含N側(cè)鏈二、結(jié)構(gòu)特征與理化性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特征含N雜環(huán)，含N側(cè)鏈吡啶類(lèi)毒芹、煙草喹啉類(lèi)金雞鈉異喹啉類(lèi)黃連、罌粟、嗎啡吲哚類(lèi)番木鱉、毒扁豆咪唑類(lèi)毛果蕓香嘌呤類(lèi)茶葉托烷類(lèi)顛茄、洋金花、古柯其他麻黃、烏頭、秋水仙按氮原子所在基本母核的化學(xué)結(jié)構(gòu)分類(lèi)吡啶類(lèi)毒芹、煙草按氮原子所在基本母核的化學(xué)結(jié)生物堿類(lèi)成分分析課件（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）顏色多數(shù)無(wú)色如

小檗堿藥根堿共軛體系長(zhǎng)、有助色團(tuán)的可呈色（二）理化性質(zhì)1.物理性質(zhì)（1）顏色多（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶性固體有些小分子的呈液態(tài)（煙堿、檳榔堿)麻黃堿具有揮發(fā)性咖啡因具有升華性檳榔堿煙堿咖啡因麻黃堿（2）形態(tài)多數(shù)為結(jié)晶性固體有些小分子的呈液態(tài)（煙堿、2.溶解性難溶于水易溶于有機(jī)溶劑易溶于水難溶于有機(jī)溶劑2.溶解性難溶于水易溶于水例鹽酸嗎啡Ch.P.（2010）

【性狀】本品在水中溶解，在乙醇中略溶，在三氯甲烷或乙醚中幾乎不溶。例鹽酸麻黃堿Ch.P.（2010）

【性狀】本品在水中易溶，在乙醇中溶解，在三氯甲烷或乙醚中不溶。液體生物堿和一些小分子固體生物堿既溶于水也可溶于有機(jī)溶劑例鹽酸嗎啡例鹽酸小檗堿Ch.P.（2010）

【性狀】本品在熱水中溶解，在水或乙醇中微溶，在三氯甲烷中極微溶解，在乙醚中不溶。季銨型生物堿易溶于水、難溶于鹽酸溶液；季銨型生物堿鹽難溶于水例鹽酸小檗堿3.沉淀反應(yīng)H+常用生物堿沉淀劑碘化汞鉀、碘化鉍鉀、碘-碘化鉀、氯化金、氯化汞、鐵氰化鉀、硅鎢酸、磷鎢酸、磷鉬酸苦味酸、四苯硼鈉、雷氏鹽（硫氰酸鉻鹽）3.沉淀反應(yīng)H+常用生物堿沉淀劑沉淀劑沉淀顏色K2HgI4KBiI4I2-KIH3PO4·12MoO3苦味酸白↓黃↓橙↓褐-暗褐↓藍(lán)↓（NH3·H2O）黃白黃↓沉淀劑沉4.顯色反應(yīng)常用顯色劑硫酸、硝酸、甲醛硫酸、釩硫酸、鉬硫酸、氯酸鉀、三氯化鐵、香草醛、對(duì)二甲氨基苯甲醛4.顯色反應(yīng)常用顯色劑例鹽酸罌粟堿Ch.P.（2010）

【鑒別】（3）取本品5mg，加甲醛硫酸試液1ml，溶液應(yīng)無(wú)色或顯淡黃色，漸漸變成深玫瑰紅色，最后變成紫色（嗎啡或嗎啡的酯化物立即顯紫色或紫堇色）。例鹽酸罌粟堿N.....5.堿性影響堿性強(qiáng)弱因素電子雜化方式電效應(yīng)立體結(jié)構(gòu)N.....5.堿性影響堿性強(qiáng)弱因素電子雜化方式（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞四氫異喹啉異喹啉腈＞＞＞（pKb4.5）（pKb8.6）（1）氮原子上電子雜化方式的影響＞四氫異喹啉異喹啉腈＞＞＞（（2）電效應(yīng)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系電效應(yīng)（誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)）氮原子上電子云密度↑堿性↑氮原子上電子云密度↓堿性↓（2）電效應(yīng)與堿性強(qiáng)弱的關(guān)系電效應(yīng)（誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)）氮原甲胺氨＞（pKb3.4）（pKb4.25）甲胺氨＞（pKb3.4）（pKb4.25）去甲麻黃堿苯異丙胺＞（pKb4.2）（pKb5.0）去甲麻黃堿苯異丙胺＞（pKb4.2）（pKb5.0）奎寧pKb29.7pKb15.07奎寧pKb29.7pKb15.07茶堿咖啡因（弱酸性）（pKb14.15）茶堿咖啡因（弱酸性）（pKb14.15）嗎啡（兩性）鹽酸嗎啡（兩性）鹽酸（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系利血平（pKa6.07）（3）立體結(jié)構(gòu)與堿性的關(guān)系利血平（pKa6.07）6.紫外吸收特征延胡索乙素6.紫外吸收特征延胡索乙素7.旋光性

多數(shù)具有旋光性（l）鹽酸麻黃堿、硫酸奎寧、氫溴酸山莨菪堿（d）鹽酸偽麻黃堿、硫酸奎尼丁（dl）硫酸阿托品7.旋光性多數(shù)具有旋光性（l）鹽酸麻黃堿、硫酸三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)H+麻黃堿不能與生物堿沉淀劑反應(yīng)→↓三、定性鑒別（一）理化鑒別制劑中某些干擾成分可有假陽(yáng)性反應(yīng)蛋例馬錢(qián)子散Ch.P.（2010）

【處方】馬錢(qián)子（沙燙）適量（含士的寧8.0g），地龍93.5g?！捐b別】取本品1g，加濃氨試液數(shù)滴及三氯甲烷10ml，浸泡數(shù)小時(shí)，濾過(guò)，取濾液1ml蒸干，殘?jiān)酉←}酸1ml使溶解，加碘化鉍鉀試液1~2滴,即生成黃棕色沉淀。例馬錢(qián)子散Ch.P.（2010）

TLC法是Ch.P.中藥制劑常用鑒別方法，大多用硅膠為吸附劑1.TLC法（二）色譜法鑒別

硅膠是弱酸性吸附劑，會(huì)吸附生物堿，用中性展開(kāi)劑時(shí)，Rf小，并會(huì)產(chǎn)生斑點(diǎn)拖尾現(xiàn)象TLC法是Ch.P.中藥制劑常用1.TLC

防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（例堿性氧化鋁）B.用硅膠鋪板時(shí)加堿液（例氫氧化鈉）A.展開(kāi)劑中加入堿性試劑（例氨水、二乙胺、吡啶）防止斑點(diǎn)拖尾的措施C.改用其他吸附劑（例堿性氧化鋁苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬(wàn)氏牛黃清心丸Ch.P.（2010）苯-乙酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨126331例萬(wàn)氏牛為黃色熒光斑點(diǎn)為黃色熒光斑點(diǎn)游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解士的寧對(duì)照品馬錢(qián)子堿對(duì)照品鹽酸麻黃堿對(duì)照品三氯甲烷-乙醇-環(huán)己烷(3:1:1)例九分散Ch.P .（20 10）

【處方】馬錢(qián)子粉，麻黃，乳香（制），沒(méi)藥（制）稀碘化鉍鉀茚三酮顯色游離、提取成鹽、提取游離、提取溶解士的寧對(duì)照品三氯甲烷-乙醇2.PC法（Ch.P.應(yīng)用不多）顯色方法熒光生物堿沉淀劑

（不宜用H2SO4）2.PC法（Ch.P.應(yīng)用不多）顯色方法3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同時(shí)進(jìn)行3.HPLC法以tR為定性參數(shù)，對(duì)照品對(duì)照一般與含量測(cè)定同四、含量測(cè)定化學(xué)方法重量法容量法儀器方法光譜法色譜法總生物堿→單體生物堿四、含量測(cè)定化學(xué)方法重量法總生物堿→單體生物堿生物堿類(lèi)成分供試液常用制備方法

多根據(jù)生物堿堿性（可與酸成鹽）及溶解性（多數(shù)游離生物堿易溶于低極性有機(jī)溶劑難溶于水，生物堿鹽易溶于水和極性有機(jī)溶劑），固體制劑可先用醇類(lèi)提取，提取液濃縮后加酸溶解，濾過(guò)酸不溶物，酸水液調(diào)pH9以上，加三氯甲烷萃取，萃取液濃縮至適量。液體制劑（固體制劑亦可）可直接堿化后用三氯甲烷提取，濃縮。如果雜質(zhì)多，可將濃縮液通過(guò)氧化鋁柱等凈化。生物堿類(lèi)成分供試液常用制備方法（二）酸堿滴定法*酸堿滴定法*非水堿量法（一）重量法（二）酸堿滴定法*酸堿滴定法*非水堿量法（一）重量法例

昆明山海棠片Ch.P.（2010）

【含量測(cè)定】取本品60片，除去包衣，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取約7g，精密稱(chēng)定，置200ml錐形瓶中，加硅藻土1.4g，混勻，加乙醇70ml，加熱回流40分鐘，放冷，濾過(guò)，濾渣加乙醇50ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過(guò)，合并濾液，置水浴上蒸干，殘?jiān)欲}酸溶液（1→100）30ml，置水浴上攪拌使溶解，放冷，濾過(guò)，例昆明山海棠片殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20ml、15ml、15ml），合并濾液于分液漏斗中，加氨試液使溶液呈堿性，用乙醚振搖提取4次（40ml、30ml、25ml、20ml），合并乙醚液，用水振搖洗滌2次，每次10ml，乙醚液濾過(guò)，醚液置已在100℃干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在低溫水浴上蒸去乙醚，殘?jiān)?00℃干燥至恒重，稱(chēng)定重量，計(jì)算，即得。殘?jiān)儆名}酸溶液（1→200）同法提取3次（20例顛茄酊Ch.P（2005）

【含量測(cè)定】精密量取本品100ml，蒸至約10ml，如有沉淀析出，可加乙醇適量使溶解，用0.1mol/L硫酸溶液10ml分次洗滌容器，合并洗液，用三氯甲烷分次振搖提取，每次10ml，至三氯甲烷層無(wú)色，合并三氯甲烷液，用0.1mol/L硫酸溶液10ml振搖洗滌，洗液并入酸液中，加過(guò)量的濃氨試液使成堿性，迅速用三氯甲烷分次振搖提取，至生物堿提盡。如發(fā)生乳化現(xiàn)象，可加乙醇數(shù)滴，每次得到的三氯甲烷液均用同一的水10ml洗滌，例顛茄酊棄去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，并在80℃干燥2小時(shí)，殘?jiān)尤燃淄?ml，必要時(shí)，微熱使溶解，精密加硫酸滴定液（0.01mol/L）20ml，置水浴上加熱，除去三氯甲烷，放冷，加甲基紅指示液1～2滴，用氫氧化鈉滴定液（0.02mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相當(dāng)于5.788mg的莨菪堿（C17H23NO3）。本品每1ml含生物堿以莨菪堿計(jì)，應(yīng)為0.28~0.32mg。棄去洗液，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸干，1261.測(cè)定方法（二）非水堿量法（1）原理＋471.測(cè)定方法（二）非水堿量法（1）原理＋127（2）方法溶劑冰醋酸、醋酐滴定液

HClO4（0.1mol/L）指示終點(diǎn)電位法結(jié)晶紫48（2）方法溶劑冰醋酸、醋酐1282.適用范圍Kb10-8

～10-10

冰醋酸Kb10-10

～10-12

冰醋酸+醋酐Kb＜10-12

醋酐弱堿（Kb＜10-8）492.適用范圍Kb10-8～10-10129氫鹵酸鹽的含量測(cè)定酸性較強(qiáng)排除氫鹵酸干擾方法難解離50氫鹵酸鹽的含量測(cè)定酸性較強(qiáng)排除氫鹵酸干擾方法難解離（三）光譜法1.直接測(cè)定法

適用于藥味較少、干擾不大的制劑（三）光譜法1.直接測(cè)定法適用于藥味較少、2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷氏鹽比色法（4）異羥肟酸鐵比色法2.比色法（1）酸性染料比色法（2）苦味酸鹽比色法（3）雷（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)（1）酸性染料比色法+A.原理A有機(jī)溶劑離子對(duì)B.影響因素pH↓H++In-→HIn*

酸性染料以分子狀態(tài)存在pH↑BH+→B＋H+*

生物堿游離，進(jìn)入有機(jī)相*沒(méi)有足夠的H+與生物堿結(jié)合a.水相的最適pH值B.影響因素pH↓H++In-→優(yōu)點(diǎn)*與離子對(duì)形成氫鍵，提取率高*不與水相混溶

*

A樣大b.有機(jī)溶劑的選擇常用三氯甲烷優(yōu)點(diǎn)b.有機(jī)溶劑的選擇常用三氯甲烷c.酸性染料的選擇要求

*與有機(jī)堿定量結(jié)合

*所成離子對(duì)在有機(jī)溶劑中溶解度大，且有較高的吸光度

*染料不溶或難溶于有機(jī)溶劑常用

溴麝香草酚藍(lán)、溴甲酚綠、溴甲酚紫、溴酚藍(lán)、甲基橙c.酸性染料的選擇要求*與有機(jī)堿定量結(jié)合 常用d.水分的影響干擾*使有機(jī)相混濁，A↑

*

帶入水相染料，A↑排除*加脫水劑（無(wú)水Na2SO4）

*用濾紙過(guò)濾d.水分的影響干擾*使有機(jī)相混濁，A↑排除*加脫水（2）苦味酸鹽比色法苦味酸（三硝基苯酚）（2）苦味酸鹽比色法苦味酸（三硝基苯酚）例萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定buffer等量拌勻甲醇提取揮干溶解、定容溶解鹽酸小檗堿對(duì)照品法例萬(wàn)氏牛黃清心丸中黃連總堿的含量測(cè)定buffer等量（3）雷氏鹽比色法A.原理生物堿在一定pH溶液中能成為BH+，可與雷氏鹽的陰離子

[Cr(NH3)2(SCN)4]-結(jié)合成為單鹽或

雙鹽沉淀，只要測(cè)得雷氏鹽的吸光度，即可計(jì)算生物堿的含量硫氰酸鉻銨NH4[Cr(NH3)2(SCN)4]·H2O（3）雷氏鹽比色法A.原理生物檳榔堿結(jié)構(gòu)中只含有1個(gè)N，與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影響較小檳榔堿結(jié)構(gòu)中只含有1個(gè)N，與雷氏鹽反應(yīng)的沉淀組成受pH值的影奎寧酸性較