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圓二色性光譜及其應(yīng)用(CircularDichroism,CD)光學(xué)活性分子對(duì)左、右圓偏光的吸收率的差值1、自然光*光具有波、粒二象性,是橫電磁波。只有橫波才有偏振現(xiàn)象:光矢量的振動(dòng)方向與光的傳播方向垂直,在垂直于光傳播方向的平面內(nèi),有不同的振動(dòng)方向。*由于感光作用都是E引起的,因而,將E作為光矢量。-*振動(dòng)面:E與光傳播方向組成的平面。從統(tǒng)計(jì)規(guī)律上說(shuō),自然光的光振動(dòng):在垂直于光速的平面上遍布所有方向,沿各方向振動(dòng)的光矢量呈對(duì)稱(chēng)分布,相應(yīng)光矢量的振幅(光強(qiáng)度)相等。超高壓短弧血E:在高壓純凈蠱氣中放電發(fā)光。(1)高亮度的點(diǎn)光源;日光色。色溫接近6000K;在可乳光區(qū)連續(xù)光譜:高顯色性,顯色指數(shù)>95;在整個(gè)壽命期內(nèi)維持光色特性;高電弧穩(wěn)定性;熱重啟能力:啟動(dòng)后即能達(dá)到接訴最大光輸出:電弧光斑小、易聚光。El梯BI偏旅*I2、光的偏振雙折射現(xiàn)象:一束光射入各向異性晶體后有兩束折射光。尼科耳棱鏡。在生物樣品中,肌肉纖維、骨骼和牙齒等具有各向異性,淀粉粒、染色體和紡錘體等具有雙折射性,因此被用于組織細(xì)胞的化學(xué)研究OrdinaryRayOrdinaryRayNicolPolarizingPrism名稱(chēng)折射定律折射率傳播方向
尋常光(0光)遵守對(duì)于晶體一切方向都具有相同的折射率在入射面內(nèi)非常光不遵守折射率隨方向而變化不定在入射面內(nèi)(e光)o光和e光光的吸收和圓二o光和e光光的吸收和圓二irculardichroism,CD)、n、、n、n軌道)。如果電子吸收了外界的能量,它就從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài)能級(jí)。如果所有的躍遷僅在基態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)和第激發(fā)態(tài)之間,吸收光譜將是很狹窄而不連續(xù)的譜線。由于分子的價(jià)電子躍遷總伴隨著振動(dòng)和轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)的躍遷,所以,紫外分光光度計(jì)測(cè)定物質(zhì)的吸收光譜,雖然有一最大吸收峰值,但都是具有波長(zhǎng)寬度并相對(duì)平滑的曲線。宀氨基幽期?可見(jiàn)光區(qū):各種氨基酸都沒(méi)有光吸收。-紫外光區(qū):只有芳香族色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有吸收。-氨基酸分子內(nèi)的紫外生色基團(tuán):U引喙基、酚徑基、苯基、二硫鍵肽的圓二色譜*活性肽構(gòu)象與其生理功能的關(guān)系?肽的構(gòu)象也是蛋白質(zhì)構(gòu)象的一種模型。*肽的圓二色性為研究肽在溶液中的構(gòu)象提供了重要信息。Far-UV(250-170nm)SecondaryStructure:a-helix,P-sheet,P-turn,randomTertiaryStructureClass:all-a,a+B,a/B,all-?,all-pilNear-UV但20?250nm):aromaticsidechainNear-UV~Near-infrared但00-1000nm):、咪哇基和竣基等。coloredproteins芳香氨基酸殘基及二硫鍵處于不對(duì)稱(chēng)微環(huán)境時(shí),在近紫外區(qū)表現(xiàn)出CD信號(hào)丄苯丙氨酸(phenylalanine,Phe):255、261和268nm附近;丄酪氨酸(tyrosine,Tyr):277nm左右;丄色氨酸(tryptophan,Trp):279、284和291nm附近;MainCDfeaturesofprotein2ndarystructures-band(nm)+band(nm)a-helix222192208B-sheet216195B-turn220-230(weak)180-190(strong)205polyproIIhelix190210-230weakRandomcoil2002123、估算蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)含量?jī)H適合含量較高的蛋白質(zhì)!%aHehx=一⑷込-°°°°33000十4000未知結(jié)構(gòu)的蛋白的CD信號(hào)?將測(cè)得的CD曲線與標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合。xa+xb+xc=1.0qt=xaqa+xbqb+xcqc
?改變xa、xb和xc,使qt與樣本曲線最佳擬合(最小二乘法,leastsquaresminimization)?CDsignalofaproteindependsonits2ndarystructure(MagneticCircularDichroism,MCD)?磁性材料對(duì)
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