高效液相色譜儀驗證報告15/15高效液相色譜儀驗證報告驗證類別：□首次驗證□再驗證設(shè)備名稱：高效液相色譜儀設(shè)備型號：設(shè)備編號：1、概述高效液相色譜法（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）是使用高壓輸液泵將流動相泵入到裝有填充劑的色譜柱，注入的供試品被流動相帶入柱內(nèi)進行分離后，各成分先后進入檢測器，用記錄儀或數(shù)據(jù)處理裝置記錄色譜圖并進行數(shù)據(jù)處理，得到測定結(jié)果。高效液相色譜儀由輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成。2、目的檢查并確認型高效液相色譜儀運行性能符合要求。3、職責(zé)3.1驗證小組：包含使用部門、設(shè)備工程部、質(zhì)量保證部、質(zhì)量控制部。3.1.1負責(zé)儀器驗證方案的起草及方案的培訓(xùn)。3.1.2負責(zé)制定符合實際及有效的設(shè)備操作規(guī)程。3.1.3負責(zé)對儀器驗證的方案及報告審核。3.1.4負責(zé)儀器驗證檢測方法的建立，并對取樣和分析方法進行驗證。3.1.5負責(zé)樣品的采集、分析及報告。3.1.6負責(zé)儀器驗證的執(zhí)行及操作記錄的填寫。3.1.7參與儀器驗證中的偏差調(diào)查。3.1.8起草驗證報告，并由驗證委員會審核、批準。3.2驗證委員會3.2.1負責(zé)驗證方案的審核。3.2.2負責(zé)資源的調(diào)配。3.2.3負責(zé)驗證報告的審核和批準。3.3質(zhì)量保證部:負責(zé)對驗證過程進行監(jiān)督檢查和驗證文件的存檔。4、相關(guān)文件文件名稱/文件存放位置文件編碼/文件版本號高效液相色譜法操作規(guī)程操作說明書、安裝手冊和維修手冊中華人民共和國藥典2010年版二部5、驗證方法和步驟5.1驗證方法整個驗證過程分為單個部件的驗證和整機驗證。驗證時一般先驗證泵、柱溫箱、自動進樣器的性能，接著是檢測器的性能，最后是整機的性能驗證。5.2驗證步驟5.2.1輸液泵泵流量設(shè)定值誤差SS、流量穩(wěn)定性誤差SR的檢定將儀器的輸液系統(tǒng)，進樣器、色譜柱和檢測器聯(lián)接好，以甲醇為流動相，流量設(shè)為1.0mL/min，按說明書啟動儀器，待壓力平穩(wěn)后保持10分鐘，按表1設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確地收集，稱重。按式(1)、式(2)計算SS和SR。表1流量設(shè)定值（mL/min）0.51.02.0測量次數(shù)333流動相收集時間（min）1055SS＝(Fm－FS)/FS×100%……(1)SR＝(Fmax－Fmin)/F×100%……(2)式中：SS——流量設(shè)定值誤差(％)；SR——流量穩(wěn)定性誤差(％)；Fm＝(W2－W1)/ρT·t，流量實測值(mL/min)；W2——容量瓶＋流動相的重量(g)；W1——容量瓶的重量(g)；FS——流量設(shè)定值(mL/min)；ρT——實驗溫度下流動相的密度(g/cm3)；t——收集流動相的時間(min)；Fmax——同一組測量中流量最大值(mL/min)；Fmin——同一組測量中流量最小值(mL/min)；F——同一組測量值的算術(shù)平均值(mL/min)。輸液泵泵流量設(shè)定值誤差SS、流量穩(wěn)定性誤差SR的檢定記錄見附件一由測試結(jié)果可知：輸液泵泵流量設(shè)定值誤差SS、流量穩(wěn)定性誤差SR均符合規(guī)定5.2.2柱溫箱柱箱溫度設(shè)定值誤差ΔTS和控溫穩(wěn)定性TC的檢定將數(shù)字溫度計探頭固定在柱溫箱內(nèi)，選擇35℃和45℃進行檢定。按儀器說明書操作，通電升溫，待溫度穩(wěn)定后，記下溫度計讀數(shù)并開始計時，以后每隔10min記錄一次讀數(shù)，共計7次，求出平均值。平均值與設(shè)定值之差為ΔTS，7次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性TC。柱溫箱柱箱溫度設(shè)定值誤差ΔTS和控溫穩(wěn)定性TC的檢定原始記錄見附件二。由測試結(jié)果可知：ΔTS為0℃，TC值為0.1℃結(jié)論：符合規(guī)定5.2.3自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定取1.5ml進樣瓶裝入1ml水，用天平精密稱定其重量，然后置于自動進樣器上讓其進樣10次，每次50μl。進樣完成后再精密稱定其重量，由重量差計算進樣量準確度。自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定原始記錄見附件三。由測試結(jié)果可知：進樣量準確度為0.36%。結(jié)論：符合規(guī)定5.2.4檢測器的檢定5.2.4.1檢測器基線噪聲和基線漂移的測定取C18色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，檢測器波長設(shè)定為254nm,開機預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后（約60min）記錄基線60min，從30min內(nèi)基線上讀出噪音值；從60min基線上讀出基線漂移值。檢測器基線噪聲和基線漂移的測定記錄見附件四由測試結(jié)果可知：基線噪音為0.265×10－5AU，基線漂移為0.312×10－4AU/h結(jié)論：符合規(guī)定5.2.4.2檢測器最小檢測濃度的測定取C18色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，檢測器波長設(shè)定為254nm,開機預(yù)熱，待儀器穩(wěn)定后取1×10-7g/ml的萘/甲醇溶液進樣20μl，記錄色譜圖，由色譜峰峰高和基線噪聲峰峰高計算最小檢測濃度CL。公式如下：CL=(2×Nd×C)/H式中CL——最小檢測濃度，g/ml；Nd——基線噪聲峰峰高，mm；C——標準溶液濃度，g/ml；H——標準溶液峰峰高，mm。檢測器的檢定原始記錄見附件四。由測試結(jié)果可知：檢測器最小檢測濃度為：0.0925×10－7g/mL(萘的甲醇溶液)5.2.5整機性能的檢定取C18色譜柱，以100%甲醇為流動相，流量為1.0ml/min，檢測器波長設(shè)定為254nm（當選用萘?xí)r）或272nm（當選用咖啡因時）,柱溫設(shè)定為40℃。開機預(yù)熱待儀器穩(wěn)定后取0.1mg/ml的萘/甲醇溶液或0.02mg/ml的咖啡因甲醇溶液進樣10μl，連續(xù)進樣6次，記錄其峰面積和保留時間，以保留時間計算其定性測量重復(fù)性誤差，以峰面積計算其定量測定重復(fù)性誤差。整機性能的檢定原始記錄見附件五。由測試結(jié)果可知：定性測量重復(fù)性誤差為：0.3%定量測定重復(fù)性誤差為：0.1%結(jié)論：符合規(guī)定6.驗證結(jié)果分析和綜合評價驗證部件驗證項目合格標準驗證結(jié)果結(jié)論輸液泵 流量設(shè)定值誤差SS0.5ml/min:＜5%1.0ml/min:＜3%2.0ml/min:＜2%0.04%0.3%0.02%符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定流量穩(wěn)定性誤差SR 0.5ml/min:＜3%；1.0ml/min:＜2%；2.0ml/min:＜2%0.6%0.4%0.04%符合規(guī)定符合規(guī)定符合規(guī)定柱溫箱柱箱溫度設(shè)定值誤差ΔTS＜±2℃0.0℃符合規(guī)定柱箱控溫穩(wěn)定性TC≤1℃0.1℃符合規(guī)定自動進樣器進樣量準確度誤差≤±2%0.36%符合規(guī)定檢測器基線噪聲≤2×10－5AU0.265×10－5AU符合規(guī)定最小檢測濃度≤1×10－7g/mL(萘的甲醇溶液)0.0925×10－7g/mL符合規(guī)定基線漂移≤5×10－4AU/h0.312×10－4AU/h符合規(guī)定整機性能定性測量重復(fù)性誤差RSD≤0.5%0.3%符合規(guī)定定量測量重復(fù)性誤差RSD≤1.0%0.1%符合規(guī)定結(jié)論：該儀器經(jīng)驗證，泵、柱溫箱、自動進樣器、檢測器及整機的性能均符合規(guī)定。可用于日常檢驗。檢定人：復(fù)核人：檢定日期：附件一：泵流量設(shè)定值誤差SS、流量穩(wěn)定性誤差SR的檢定原始記錄液相色譜儀型號及編號：LC-20AT(QC-EM-096)泵型號：LC-20AT流動相：甲醇色譜柱:C18-011檢定人：檢定日期：復(fù)核人：FS0.5ml/min1.0ml/min2.0ml/min第一次第二次第三次第一次第二次第三次第一次第二次第三次W123.230123.242122.990023.794223.056223.523422.844023.560223.6892W227.170527.187526.913527.746426.993227.471430.714231.433531.5590t101010101010101010T262626262626262626ρT0.786960.786960.786960.786960.786960.786960.786960.786960.78696Fm＝(W2－W1)/ρT·t0.5007120.5013470.4985641.0044221.0005591.0033552.0001522.000942.000051SS＝(Fm－FS)/FS×100%0.142320.269391-0.287180.4422080.0559110.3354680.0076240.0470160.002541平均SS0.04%0.3%0.02%F=（Fm1+Fm2+Fm3）/30.5002081.0027792.000381Fmax0.5013471.0044222.00094Fmin0.4985641.0005592.000051SR＝(Fmax－Fmin)/F×100%0.6%0.4%0.04%此項檢定結(jié)論：附件二：柱溫箱柱箱溫度設(shè)定值誤差ΔTS和控溫穩(wěn)定性TC的檢定原始記錄液相色譜儀型號：LC-20AT柱溫箱型號：CTO-10ASvp數(shù)字溫度儀型號：DT300-41T設(shè)定35℃45℃時間讀數(shù)時間讀數(shù)穩(wěn)定時08：4035.009：5045.0第1次08：4235.009：5245.0第2次08：5235.110：0245.0第3次09：0235.010：1245.1第4次09：1235.010：2245.0第5次09：2235.110：3245.0第6次09：3235.010：4245.0第7次09：4235.010：5245.1T平均35.045.0T最大35.145.1T最小35.045.0ΔTS=T平均- T設(shè)定0.00.0TC=T最大-T最小0.10.1此項檢定結(jié)論：檢定人：復(fù)核人：檢定日期：

附件三：自動進樣器進樣量準確度誤差的檢定原始記錄液相色譜儀型號：LC-20AT自動進樣器型號：SIL-20AC；進樣前進樣瓶加水的總重：W1=4.4704g；進樣后進樣瓶加水的總重：W2=3.9702g；檢定溫度：26℃，水的密度ρ0.9968g/ml；進樣量準確度誤差=[(W1-W2)-(50×10×10-3×ρ)]/（50×10×10-3×ρ）×100%=[(4.4704-3.9702)-(50×10×10-3×0.9968)]/（50×10×10-3×0.9968）×100%=0.36%此項檢定結(jié)論：檢定人：復(fù)核人：檢定日期：

附件四：檢測器的檢定原始記錄液相色譜儀型號：LC-20AT檢測器型號：SPD-M20A流動相：100%甲醇流速：1.0ml/min色譜柱：C18-011萘甲醇標準溶液濃度C：1.012×10－7g/mL配制人：配制日期：基線噪聲:Nd=0.265×10－5AU基線漂移:H=0.312×10－4AU/h最小檢測濃度的計算CL=(2×Nd×C)/H=(2×0.0265×1.012×10－7)/0.580=0.0925×10－7g/mL此項檢定結(jié)論：檢定人：復(fù)核人：檢定日期：

附件五：整機性能的檢定原始記錄儀器型號及編號：LC-20AT(QC-EM-096)流動相：甲醇色譜柱：C18-011檢測波長：254nm標準溶液類型：萘/甲醇溶液濃度：0.1012mg/ml配制人：配制時間：定性測定（保留時間）定量測定（峰面積）第一次3.8041331751第二次3.7841333788第三次3.7801333684第四次3.7781333291第五次3.7771333124第六次3.7771332713平均值3.7831333059測量誤差的RSD0.3%0.1%備注：RSD采用EXCEL函數(shù)表格計算此項檢定結(jié)論：檢定人：復(fù)核人：檢定日期：

驗證結(jié)論及評價報告驗證項目驗證結(jié)果結(jié)論：方案人：年月日會簽重要試驗結(jié)果是否完整：完整欠缺不合格試驗結(jié)果可靠性：可靠尚需重試評價結(jié)果：合格不合格會簽人：驗證小組負責(zé)人：年月日驗證報告