免疫治療

immunotherapy免疫治療

immunotherapy免疫治療的概念針對機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫功能，根據(jù)免疫學(xué)原理，利用物理、化學(xué)和生物學(xué)的收到人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療疾病目的的措施。免疫治療的概念針對機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫功能，根據(jù)免疫學(xué)原理，免疫治療的類型根據(jù)對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響分為：免疫增強(qiáng)療法(immunostimulationtherapy)免疫抑制療法(immunosuppressiontherapy)根據(jù)治療特異性分為：特異性免疫治療(specificimmunotherapy)非特異性免疫治療(non-specific~)根據(jù)治療所用制劑分為：主動免疫治療(active~)被動免疫治療(passive~)Ab

Ag

CK

Cells

drug免疫治療的類型根據(jù)對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響分為：根據(jù)治療特異性分（一）免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法

1．免疫增強(qiáng)療法用途：治療免疫功能低下的疾病種類：非特異性免疫增強(qiáng)劑、疫苗、抗體或淋巴細(xì)胞過繼免疫療法、細(xì)胞因子療法。2．免疫抑制療法用途：治療免疫功能亢進(jìn)的疾病種類：非特異性免疫抑制劑、淋巴細(xì)胞及其表面分子的抗體、誘導(dǎo)免疫耐受的疫苗。

（一）免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法（二）主動免疫治療和被動免疫治療1．主動免疫治療（activeimmunotheraphy）原理：給免疫應(yīng)答健全的機(jī)體輸入抗原性的疫苗或免疫佐劑，激活或增強(qiáng)免疫應(yīng)答，使機(jī)體自身產(chǎn)生抵抗疾病的能力。制劑：疫苗；瘤苗、卡介苗、短小棒狀桿菌等。2．被動免疫治療（passiveimmunotheraphy）又稱過繼免疫治療adoptiveimmunotheraphy

原理：將對疾病有免疫力的供者的免疫應(yīng)答產(chǎn)物轉(zhuǎn)移給其他個體或自體細(xì)胞體外經(jīng)處理后回輸自身→治療疾病

制劑：抗體、小分子免疫肽（如轉(zhuǎn)移因子、胸腺肽）、免疫效應(yīng)細(xì)胞等。（二）主動免疫治療和被動免疫治療（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療

1．特異性免疫治療（1）主動特異性免疫治療原理：利用Ag誘導(dǎo)機(jī)體對該特定Ag的刺激產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答或免疫耐受，達(dá)到治療的目的。特點：見效慢、維持時間長。（2）被動特異性免疫治療原理：直接向機(jī)體輸入特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)物，使機(jī)體立即獲得針對某一抗原的應(yīng)答或耐受。特點：見效快、維持時間短。（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療

（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療2．非特異性免疫治療范圍：廣，包括非特異性免疫增強(qiáng)劑或免疫抑制劑的應(yīng)用。特點：作用無特異性；對機(jī)體免疫功能可廣泛抑制；易致不良反應(yīng)。（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療一、抗體為基礎(chǔ)的免疫治療一、抗體為基礎(chǔ)的免疫治療種類

免疫血清

（第一代）

抗菌、抗病毒、抗毒素，胎盤（丙種）球蛋白，ALG

應(yīng)用限制：動物來源（制備、純化、免疫原性），病原變異、傳播疾?。ㄈ嗽矗?/p>

單克隆抗體

（第二代）

抗細(xì)胞表面分子單抗、抗CKs單抗、 抗體導(dǎo)向藥物治療

應(yīng)用限制：鼠源性（純化）免疫原性差（腫瘤）種類

基因工程抗體（第三代）

將Ig各片段編碼基因，人為拼接成Ig編碼基因 （VDJC、VJC）（重組DNA技術(shù)）并讓其在原 核或真核細(xì)胞大量表達(dá)嵌合抗體、人源化抗體、完全人源化抗體 單鏈抗體、雙價抗體基因工程抗體（第三代）(一）免疫血清：來自免疫動物或人體的血清成分是多克隆抗體。1、抗毒素antitoxin2、丙種球蛋白（r-globulin）：胎盤球蛋白、人血漿丙種球蛋白3、人特異性免疫球蛋白4、抗菌免疫血清5、抗病毒免疫血清6、抗T細(xì)胞丙種球蛋白免疫治療課件（二）抗體1、多克隆抗體（免疫血清）（1）抗毒素血清（antitoxicserum）性質(zhì)：馬血清用途：治療和緊急預(yù)防外毒素所致疾病。常用制劑：白喉抗毒素、破傷風(fēng)抗毒素等。（2）胎盤（丙種）球蛋白（placentalγ–globulin）用途：預(yù)防麻疹、傳染性肝炎等，治療丙種球蛋白缺乏癥。常用制劑：胎盤球蛋白、人血清丙種球蛋白。特點：由于地區(qū)和人群免疫情況不同，制劑中所含抗體種類及數(shù)量不盡相同。（3）人特異性免疫球蛋白來源：恢復(fù)期病人、含高效價特異性抗體的供血者接受類毒素和疫苗免疫者的血漿（二）抗體1、多克隆抗體（免疫血清）（二）抗體（4）抗菌免疫血清（antibacterialimmuneserum）種類：抗鼠疫、抗炭疽、抗痢疾、抗百日咳等抗菌血清。特點：防治效果不顯著，現(xiàn)已被磺胺類、抗生素所代替。（5）抗病毒免疫血清（antiviralimmuneserum）種類：抗麻疹免疫血清、抗狂犬病免疫血清、抗乙型腦炎免疫血清等。特點：預(yù)防作用顯著，治療效果不明顯，因不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)殺死病毒。（6）抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白（anti-lymphocyteγ–globulin，ALG）制備：用T淋巴細(xì)胞免疫動物的免疫血清，經(jīng)提純制成作用：在補(bǔ)體協(xié)同下溶解T淋巴細(xì)胞，使外周血中T淋巴細(xì)胞減少。用途：預(yù)防移植排斥、治療某些自身免疫病。（二）抗體（4）抗菌免疫血清（antibacteriali（二）單克隆抗體(monoclonalantibody)特異性強(qiáng)，靶向性好，應(yīng)用廣泛（二）單克隆抗體(monoclonalantibody)單抗類藥物的類型：1、抗細(xì)胞表面分子的單抗：2、抗細(xì)胞因子的單抗：3、抗體導(dǎo)向藥物：抗-CD3單抗，用于GVHD和HVGD的治療抗IL-1、抗TNFa單抗治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、Crohn病放射（131I，125I）免疫耦聯(lián)物、化學(xué)（甲氨蝶呤）免疫耦聯(lián)物、免疫毒素（蓖麻毒素、白喉毒素）耦聯(lián)物單抗類藥物的類型：1、抗細(xì)胞表面分子的單抗：2、抗細(xì)胞因子的（二）抗體2、單克隆抗體（1）抗細(xì)胞表面分子的單抗用途：人CD3單抗——移植排斥反應(yīng)；人CD4單抗——預(yù)防移植排斥反應(yīng)；治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥等。（2）抗細(xì)胞因子單抗用途：抗IL-1、TNF單抗——中和作用，減輕炎癥反應(yīng)。治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥性疾病。

（二）抗體2、單克隆抗體（二）抗體2、單克隆抗體（3）抗體導(dǎo)向藥物治療由導(dǎo)向部分（mAb）和藥物（化療藥物、毒素、同位素）兩部分組成。

放射免疫療法同位素+mAb

抗體導(dǎo)向藥物療法化療藥物+mAb

免疫毒素療法毒素+mAb（二）抗體2、單克隆抗體tumorprodrugdrugtoxinradioisotope

Enzyme單抗治療圖tumorprodrugdrugtoxinradioisotImmunotoxin:Antibody-ToxinConjugateImmunotoxin:Antibody-ToxinCoTumorcellenzyme抗體與酶分子偶聯(lián)prodrugdrugenzymeTumorcellenzyme抗體與酶分子偶聯(lián)prodr誘發(fā)人抗小鼠反應(yīng)(ＨＡＭＡ，humananti-murineantibody)可降低抗體效果，甚至造成人體損傷半衰期較短,可較快被清除而影響療效在人體中常不能有效激活補(bǔ)體和Ｆｃ受體相關(guān)的效應(yīng)系統(tǒng)鼠源性單抗用于人體治療存在的主要問題有誘發(fā)人抗小鼠反應(yīng)(ＨＡＭＡ，humananti-murin怎樣制作人源化單抗？采取什么方法？怎樣制作人源化單抗？采取什么方法？通過DNA重組和蛋白質(zhì)工程技術(shù)，在基因水平上進(jìn)行切割、拼接或修飾，重新組裝成新的抗體分子。特異性強(qiáng)、人源化、均一性強(qiáng)、可批量生產(chǎn)。（三）基因工程抗體（geneticengineeringantibody）（三）基因工程抗體（geneticengineering（1）嵌合抗體(鼠-人嵌合抗體)

（chimericantibody）構(gòu)成：鼠源性抗體的V區(qū)＋人抗體的C區(qū)（2）人源化抗體（CDR移植抗體）（CDRgraftedantibody）構(gòu)成：小鼠抗體CDR序列取代人源抗體CDR序列。（3）完全人源抗體構(gòu)成：將人Ig基因轉(zhuǎn)染小鼠，刺激產(chǎn)生人抗體，

經(jīng)雜交瘤技術(shù)大量產(chǎn)生制備。（4）小分子抗體

Ig被酶水解產(chǎn)生含有H鏈和L鏈V區(qū)的片段有結(jié)合抗原的能力。這些片段大小僅為抗體的1/3~1/12，故稱為小分子抗體。小分子抗體也可以相互結(jié)合或與適當(dāng)?shù)呐潴w結(jié)合。（5）雙特異性抗體雙特異性抗體（bispecificantibody，BsAb）又稱雙功能抗體（bifunctionantibody，BfAb），構(gòu)成：一個Ig的兩個抗原結(jié)合部位可分別與兩種不同的抗原表位結(jié)合。（1）嵌合抗體(鼠-人嵌合抗體)基因工程抗體的類型：1、人-鼠嵌合抗體（chimericantibody）：鼠源性抗體V區(qū)+人抗體C區(qū)，也可將IgG2b轉(zhuǎn)換成IgG1或IgG3，提高Ab的細(xì)胞毒性在基因水平上將小鼠的Ig可變區(qū)與人的Ig恒定區(qū)嵌合在一起，所產(chǎn)生的抗體含有70-80%的人Ig分子的序列基因工程抗體的類型：1、人-鼠嵌合抗體（chimerica人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈嵌合載體L鏈嵌合載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞啟動子Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略免疫球蛋白H鏈嵌合載體L鏈?zhǔn)骎H鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞人-鼠嵌合基因工程抗體鼠VH鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞人-鼠嵌合基因工程抗體2、人源化抗體（humanizedantibody）：將鼠源性抗體的CDR區(qū)序列連接至人抗體框架，也稱為（CDR-graftedantibody），更進(jìn)一步減少鼠抗體的成分免疫治療課件嵌合抗體、CDR移植抗體的比較嵌合抗體、CDR移植抗體的比較FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：

抗-CD20單抗（rituxinmab，利妥昔單抗），是針對CD20抗原的人鼠嵌合型單抗，通過介導(dǎo)ADCC、CDC殺傷腫瘤細(xì)胞。治療B細(xì)胞淋巴瘤抗Her-2單抗（trastuzumab，曲妥珠單抗），人源化單抗，治療Her-2（EGFR）表達(dá)高的乳腺癌Herceptin(抗體名稱)人源化抗體乳腺癌cellHER-2FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：Herceptin賽尼哌Zenapax。是靶向CD25抗原的人源化單抗，是第一個無嚴(yán)重不良反應(yīng)的免疫抑制劑，適應(yīng)癥為預(yù)防無高度免疫的同種異體腎移植患者的器官排斥反應(yīng)，與環(huán)孢素和皮質(zhì)固醇的免疫抑制劑合用。FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：抗TNFa單抗（infliximab，英夫利昔單抗），是一種特異性阻斷TNF-α的人鼠嵌合型單抗，屬TNF拮抗劑，治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、Crohn病賽尼哌Zenapax。是靶向CD25抗原的人源化單抗，F(xiàn)DA目前有數(shù)百種抗腫瘤特異性MAb進(jìn)入臨床試驗。尤其在抗血癌領(lǐng)域MAb取得了很大成功。由于完整的Ab分子不易滲透進(jìn)實體瘤、透過血腦屏障，也不能口服，限制了其應(yīng)用。如何解決這個問題？目前有數(shù)百種抗腫瘤特異性MAb進(jìn)入臨床試驗。如何解決這個3.小分子抗體酶解法：量？純度？3.小分子抗體酶解法：量？純度？（4）小分子抗體

Ig被酶水解產(chǎn)生含有H鏈和L鏈V區(qū)的片段有結(jié)合抗原的能力。這些片段大小僅為抗體的1/3~1/12，故稱為小分子抗體。小分子抗體也可以相互結(jié)合或與適當(dāng)?shù)呐潴w結(jié)合。根據(jù)結(jié)構(gòu)，可將小分子抗體分為4類。1．Fab段構(gòu)成：VH、CH1＋L鏈2．單域抗體和最小識別單位構(gòu)成：單域抗體（singledomainantibody）

VH或VL

最小識別單位（minimalrecognitionunit，MRU）

單個CDR3．Fv片段：構(gòu)成：VH＋VL4．單鏈抗體（singlechainantibody，SCA）或單鏈Fv（ScFv）構(gòu)成：VL-不同的連接物-VH→多肽鏈特點：分子量小，穿透力強(qiáng)和體內(nèi)清除快。（4）小分子抗體基因工程技術(shù)是當(dāng)今較為成熟的技術(shù)！基因工程技術(shù)是當(dāng)今較為成熟的技術(shù)！免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈表達(dá)載體L鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞PrVHCH1PrVLCL抗體分泌細(xì)胞VHVLCL-S-S-CH1Fab抗體分子的制備免疫球蛋白H鏈表達(dá)載體L鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞Pr分別構(gòu)建載體L鏈表達(dá)載體H鏈表達(dá)載體PrVH

PrVL抗體分泌細(xì)胞VHVL-S-S-

Fv小分子抗體的制備分別構(gòu)建載體L鏈表H鏈表PrVH3、小分子抗體：Fab段、Fv片段1/3抗體1/6抗體Fv結(jié)構(gòu)示意圖antigenbindingfragment,Fabvariabledomainfragment,Fv3、小分子抗體：Fab段、Fv片段1/3抗體1/6抗體Fv結(jié)3、小分子抗體：單域抗體(single-domainantibody,sdAb)、單鏈抗體單域抗體單鏈抗體(scFv)VH或VL單一結(jié)構(gòu)域組成1/12抗體由接頭將VH-VL連接成一條鏈。1/6抗體sdAb最初是從軟骨魚和駱駝科動物中克隆到有無輕鏈、單一重鏈可變區(qū)保留完整的抗原結(jié)合活性。具有分子小、穩(wěn)定性高、體內(nèi)組織滲透性好、可溶性好、易表達(dá)、抗原識別表位獨特的特性。3、小分子抗體：單域抗體單鏈抗體(scFv最小識別單位、雙特異性抗體最小識別單位、雙特異性抗體免疫治療課件4、抗體庫技術(shù)抗體庫技術(shù)產(chǎn)生的三項技術(shù)基礎(chǔ)RT-PCR：能夠克隆全套抗體可變區(qū)基因抗體基因片段在大腸桿菌的功能性表達(dá)噬菌體展示技術(shù)（phagedisplay)●

人源抗體的制備●抗體性能的改良●

不經(jīng)免疫制備抗體抗體庫技術(shù)的應(yīng)用4、抗體庫技術(shù)抗體庫技術(shù)產(chǎn)生的三項技術(shù)基礎(chǔ)RT-PCR：抗體藥物的臨床應(yīng)用單克隆抗體基因工程抗體破傷風(fēng)抗血清、蛇毒抗血清等抗腫瘤(鼠,人-鼠)抗腫瘤,自身免疫病抗血清抗體藥物的臨床應(yīng)用單克隆抗體基因工程抗體破傷風(fēng)抗血清、蛇毒抗二、抗原為基礎(chǔ)的免疫治療治療性疫苗（therapeuticvaccine）1、增強(qiáng)免疫應(yīng)答2、誘導(dǎo)免疫耐受二、抗原為基礎(chǔ)的免疫治療治療性疫苗（therapeutic（一）以抗原表位的形式進(jìn)行的免疫治療HSP能與多種肽結(jié)合，形成HSP-肽復(fù)合物，能激活多個CTL克隆，因此HSP被稱為“伴侶抗原肽（chaperoneantigenicpeptide）

抗原表位8-12個aa，易降解。與載體結(jié)合制成疫苗。前體條件：需已知抗原肽序列。

（一）以抗原表位的形式進(jìn)行的免疫治療HSP能與多種肽結(jié)合，形（二）以抗原分子或片段的形式進(jìn)行的免疫治療重組抗原疫苗：重組HBV表面抗原疫苗、Pre-S2疫苗；重組HPV疫苗等DNA疫苗：誘導(dǎo)對MBP（髓磷脂堿性蛋白）的免疫耐受，治療小鼠EAE（人類MS）重組病毒疫苗：編碼有效免疫原的基因插入減毒病毒（痘苗病毒、腺病毒），接種后體內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生抗原。轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因插入可食用植物細(xì)胞中。（二）以抗原分子或片段的形式進(jìn)行的免疫治療重組抗原疫苗：重組三、細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療1、細(xì)胞因子療法2、細(xì)胞因子阻斷療法3、細(xì)胞因子基因療法三、細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療采用細(xì)胞因子及其拮抗劑進(jìn)行的免疫治療

細(xì)胞因子補(bǔ)充和添加療法：

常應(yīng)用重組細(xì)胞因子作為生物應(yīng)答調(diào)變劑治療腫瘤、感染、造血障礙等疾病。

細(xì)胞因子阻斷和拮抗療法：

主要用于治療自身免疫性疾病、移植排斥、感染性體克等。

細(xì)胞因子基因療法：

將細(xì)胞因子或其受體基因?qū)塍w內(nèi)，使其在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)并發(fā)揮治療效應(yīng)。目前多項基因療法用于治療惡性腫瘤、感染、自身免疫性疾病。采用細(xì)胞因子及其拮抗劑進(jìn)行的免疫治療

（一）細(xì)胞因子療法——

應(yīng)用重組細(xì)胞因子作為藥物IFNα、β、γ抗腫瘤細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN、TNFα、GM-CSF促進(jìn)造血細(xì)胞因子GM-CSF、G-CSF、EPO（一）細(xì)胞因子療法——

免疫治療課件（二）細(xì)胞因子阻斷療法——

阻斷細(xì)胞因子與其受體結(jié)合或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)重組可溶性I型TNF受體（solubleTNFreceptorI，sTNFRI）：治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、感染性休克solubleIL-1receptor，sIL-1R：抑制移植排斥反應(yīng)、實驗性自身免疫病sTGFβRII：阻斷TGFβ介導(dǎo)的免疫抑制和致纖維化作用TNF單抗IL-1RA（IL-1receptorantagonist，IL-1受體拮抗劑）（二）細(xì)胞因子阻斷療法——

（三）細(xì)胞因子基因療法——

體內(nèi)持續(xù)表達(dá)CK或CKR解決CK半衰期短、副作用大的問題細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)染免疫效應(yīng)細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干細(xì)胞（三）細(xì)胞因子基因療法——

四、細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療1、造血干細(xì)胞移植2、免疫效應(yīng)細(xì)胞療法3、DC療法四、細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療（一）造血干細(xì)胞移植——

促進(jìn)免疫重建，恢復(fù)造血功能骨髓移植外周血干細(xì)胞移植臍血干細(xì)胞移植（一）造血干細(xì)胞移植——

（二）免疫效應(yīng)細(xì)胞療法——

抗腫瘤、抗病毒感染NK（naturalkillercell）LAK（lymphokineactivatedkillercell）：IL-2活化的PBMC（NK）CIK（cytokineinducedkillercell）：anti-CD3McAb、IL-2、IFN-γ、TNF-α聯(lián)合活化的PBMC（NKT）TIL（tumorinfiltratinglymphocyte）：IL-2活化的腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞，特異性殺傷，MHC限制（二）免疫效應(yīng)細(xì)胞療法——

（三）ＤＣ療法將腫瘤抗原、抗原多肽、腫瘤提取物載荷于抗原提呈細(xì)胞；免疫腫瘤患者；激活抗腫瘤免疫反應(yīng)。（三）ＤＣ療法將腫瘤抗原、抗原多肽、腫瘤提取物載荷于抗原提呈（四）腫瘤疫苗（tumorvaccine）活瘤苗：不經(jīng)滅活、危險；減毒或滅活瘤苗：放射線照射、化療藥物、高低溫處理；抑制生長能力，保留其免疫原性；異構(gòu)的瘤苗：過碘乙酸鹽、神經(jīng)氨酸酶、病毒感染等修飾；增強(qiáng)免疫原性。（四）腫瘤疫苗（tumorvaccine）活瘤苗：不經(jīng)滅活五、免疫調(diào)節(jié)劑1、免疫增強(qiáng)劑2、免疫抑制劑五、免疫調(diào)節(jié)劑（一）免疫增強(qiáng)劑免疫因子：轉(zhuǎn)移因子（transferfactor）、免疫核糖核酸（immuneRNA，iRNA）、胸腺肽（thymicpeptide）、IFN、TNF化學(xué)合成藥物：左旋咪唑（levamisole）、異丙肌苷（isoprinosine）微生物制劑：BCG、CP、CpGODN中藥制劑（一）免疫增強(qiáng)劑免疫因子：轉(zhuǎn)移因子（transferfac采用免疫增強(qiáng)劑進(jìn)行的免疫治療

生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑（BRM）

能增強(qiáng)、促進(jìn)或調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的生物或非生物制劑。微生物制劑：有卡介苗和短小棒狀桿菌

化學(xué)合成藥物：這類藥物有左旋咪唑和西咪替丁

中藥制劑：如香菇、靈芝、黃芪、人參、刺五加

上述免疫增強(qiáng)劑能非特異增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。采用免疫增強(qiáng)劑進(jìn)行的免疫治療（二）免疫抑制劑抗-CD3單抗、抗-CD25單抗激素制劑化學(xué)合成藥真菌代謝產(chǎn)物天然藥物反義技術(shù)（二）免疫抑制劑抗-CD3單抗、抗-CD25單抗經(jīng)常不斷地學(xué)習(xí),你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量StudyConstantly,AndYouWillKnowEverything.TheMoreYouKnow,TheMorePowerfulYouWillBe學(xué)習(xí)總結(jié)62經(jīng)常不斷地學(xué)習(xí),你就什么都知道。你知道得越多,你就越有力量學(xué)結(jié)束語當(dāng)你盡了自己的最大努力時，失敗也是偉大的，所以不要放棄，堅持就是正確的。WhenYouDoYourBest,FailureIsGreat,SoDon'TGiveUp,StickToTheEnd演講人：XXXXXX時間：XX年XX月XX日

63結(jié)束語63免疫治療

immunotherapy免疫治療

immunotherapy免疫治療的概念針對機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫功能，根據(jù)免疫學(xué)原理，利用物理、化學(xué)和生物學(xué)的收到人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能，達(dá)到治療疾病目的的措施。免疫治療的概念針對機(jī)體低下或亢進(jìn)的免疫功能，根據(jù)免疫學(xué)原理，免疫治療的類型根據(jù)對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響分為：免疫增強(qiáng)療法(immunostimulationtherapy)免疫抑制療法(immunosuppressiontherapy)根據(jù)治療特異性分為：特異性免疫治療(specificimmunotherapy)非特異性免疫治療(non-specific~)根據(jù)治療所用制劑分為：主動免疫治療(active~)被動免疫治療(passive~)Ab

Ag

CK

Cells

drug免疫治療的類型根據(jù)對機(jī)體免疫應(yīng)答的影響分為：根據(jù)治療特異性分（一）免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法

1．免疫增強(qiáng)療法用途：治療免疫功能低下的疾病種類：非特異性免疫增強(qiáng)劑、疫苗、抗體或淋巴細(xì)胞過繼免疫療法、細(xì)胞因子療法。2．免疫抑制療法用途：治療免疫功能亢進(jìn)的疾病種類：非特異性免疫抑制劑、淋巴細(xì)胞及其表面分子的抗體、誘導(dǎo)免疫耐受的疫苗。

（一）免疫增強(qiáng)療法和免疫抑制療法（二）主動免疫治療和被動免疫治療1．主動免疫治療（activeimmunotheraphy）原理：給免疫應(yīng)答健全的機(jī)體輸入抗原性的疫苗或免疫佐劑，激活或增強(qiáng)免疫應(yīng)答，使機(jī)體自身產(chǎn)生抵抗疾病的能力。制劑：疫苗；瘤苗、卡介苗、短小棒狀桿菌等。2．被動免疫治療（passiveimmunotheraphy）又稱過繼免疫治療adoptiveimmunotheraphy

原理：將對疾病有免疫力的供者的免疫應(yīng)答產(chǎn)物轉(zhuǎn)移給其他個體或自體細(xì)胞體外經(jīng)處理后回輸自身→治療疾病

制劑：抗體、小分子免疫肽（如轉(zhuǎn)移因子、胸腺肽）、免疫效應(yīng)細(xì)胞等。（二）主動免疫治療和被動免疫治療（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療

1．特異性免疫治療（1）主動特異性免疫治療原理：利用Ag誘導(dǎo)機(jī)體對該特定Ag的刺激產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答或免疫耐受，達(dá)到治療的目的。特點：見效慢、維持時間長。（2）被動特異性免疫治療原理：直接向機(jī)體輸入特異性免疫應(yīng)答產(chǎn)物，使機(jī)體立即獲得針對某一抗原的應(yīng)答或耐受。特點：見效快、維持時間短。（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療

（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療2．非特異性免疫治療范圍：廣，包括非特異性免疫增強(qiáng)劑或免疫抑制劑的應(yīng)用。特點：作用無特異性；對機(jī)體免疫功能可廣泛抑制；易致不良反應(yīng)。（三）特異性免疫治療和非特異性免疫治療一、抗體為基礎(chǔ)的免疫治療一、抗體為基礎(chǔ)的免疫治療種類

免疫血清

（第一代）

抗菌、抗病毒、抗毒素，胎盤（丙種）球蛋白，ALG

應(yīng)用限制：動物來源（制備、純化、免疫原性），病原變異、傳播疾?。ㄈ嗽矗?/p>

單克隆抗體

（第二代）

抗細(xì)胞表面分子單抗、抗CKs單抗、 抗體導(dǎo)向藥物治療

應(yīng)用限制：鼠源性（純化）免疫原性差（腫瘤）種類

基因工程抗體（第三代）

將Ig各片段編碼基因，人為拼接成Ig編碼基因 （VDJC、VJC）（重組DNA技術(shù)）并讓其在原 核或真核細(xì)胞大量表達(dá)嵌合抗體、人源化抗體、完全人源化抗體 單鏈抗體、雙價抗體基因工程抗體（第三代）(一）免疫血清：來自免疫動物或人體的血清成分是多克隆抗體。1、抗毒素antitoxin2、丙種球蛋白（r-globulin）：胎盤球蛋白、人血漿丙種球蛋白3、人特異性免疫球蛋白4、抗菌免疫血清5、抗病毒免疫血清6、抗T細(xì)胞丙種球蛋白免疫治療課件（二）抗體1、多克隆抗體（免疫血清）（1）抗毒素血清（antitoxicserum）性質(zhì)：馬血清用途：治療和緊急預(yù)防外毒素所致疾病。常用制劑：白喉抗毒素、破傷風(fēng)抗毒素等。（2）胎盤（丙種）球蛋白（placentalγ–globulin）用途：預(yù)防麻疹、傳染性肝炎等，治療丙種球蛋白缺乏癥。常用制劑：胎盤球蛋白、人血清丙種球蛋白。特點：由于地區(qū)和人群免疫情況不同，制劑中所含抗體種類及數(shù)量不盡相同。（3）人特異性免疫球蛋白來源：恢復(fù)期病人、含高效價特異性抗體的供血者接受類毒素和疫苗免疫者的血漿（二）抗體1、多克隆抗體（免疫血清）（二）抗體（4）抗菌免疫血清（antibacterialimmuneserum）種類：抗鼠疫、抗炭疽、抗痢疾、抗百日咳等抗菌血清。特點：防治效果不顯著，現(xiàn)已被磺胺類、抗生素所代替。（5）抗病毒免疫血清（antiviralimmuneserum）種類：抗麻疹免疫血清、抗狂犬病免疫血清、抗乙型腦炎免疫血清等。特點：預(yù)防作用顯著，治療效果不明顯，因不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)殺死病毒。（6）抗淋巴細(xì)胞丙種球蛋白（anti-lymphocyteγ–globulin，ALG）制備：用T淋巴細(xì)胞免疫動物的免疫血清，經(jīng)提純制成作用：在補(bǔ)體協(xié)同下溶解T淋巴細(xì)胞，使外周血中T淋巴細(xì)胞減少。用途：預(yù)防移植排斥、治療某些自身免疫病。（二）抗體（4）抗菌免疫血清（antibacteriali（二）單克隆抗體(monoclonalantibody)特異性強(qiáng)，靶向性好，應(yīng)用廣泛（二）單克隆抗體(monoclonalantibody)單抗類藥物的類型：1、抗細(xì)胞表面分子的單抗：2、抗細(xì)胞因子的單抗：3、抗體導(dǎo)向藥物：抗-CD3單抗，用于GVHD和HVGD的治療抗IL-1、抗TNFa單抗治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、Crohn病放射（131I，125I）免疫耦聯(lián)物、化學(xué)（甲氨蝶呤）免疫耦聯(lián)物、免疫毒素（蓖麻毒素、白喉毒素）耦聯(lián)物單抗類藥物的類型：1、抗細(xì)胞表面分子的單抗：2、抗細(xì)胞因子的（二）抗體2、單克隆抗體（1）抗細(xì)胞表面分子的單抗用途：人CD3單抗——移植排斥反應(yīng)；人CD4單抗——預(yù)防移植排斥反應(yīng)；治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥等。（2）抗細(xì)胞因子單抗用途：抗IL-1、TNF單抗——中和作用，減輕炎癥反應(yīng)。治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等慢性炎癥性疾病。

（二）抗體2、單克隆抗體（二）抗體2、單克隆抗體（3）抗體導(dǎo)向藥物治療由導(dǎo)向部分（mAb）和藥物（化療藥物、毒素、同位素）兩部分組成。

放射免疫療法同位素+mAb

抗體導(dǎo)向藥物療法化療藥物+mAb

免疫毒素療法毒素+mAb（二）抗體2、單克隆抗體tumorprodrugdrugtoxinradioisotope

Enzyme單抗治療圖tumorprodrugdrugtoxinradioisotImmunotoxin:Antibody-ToxinConjugateImmunotoxin:Antibody-ToxinCoTumorcellenzyme抗體與酶分子偶聯(lián)prodrugdrugenzymeTumorcellenzyme抗體與酶分子偶聯(lián)prodr誘發(fā)人抗小鼠反應(yīng)(ＨＡＭＡ，humananti-murineantibody)可降低抗體效果，甚至造成人體損傷半衰期較短,可較快被清除而影響療效在人體中常不能有效激活補(bǔ)體和Ｆｃ受體相關(guān)的效應(yīng)系統(tǒng)鼠源性單抗用于人體治療存在的主要問題有誘發(fā)人抗小鼠反應(yīng)(ＨＡＭＡ，humananti-murin怎樣制作人源化單抗？采取什么方法？怎樣制作人源化單抗？采取什么方法？通過DNA重組和蛋白質(zhì)工程技術(shù)，在基因水平上進(jìn)行切割、拼接或修飾，重新組裝成新的抗體分子。特異性強(qiáng)、人源化、均一性強(qiáng)、可批量生產(chǎn)。（三）基因工程抗體（geneticengineeringantibody）（三）基因工程抗體（geneticengineering（1）嵌合抗體(鼠-人嵌合抗體)

（chimericantibody）構(gòu)成：鼠源性抗體的V區(qū)＋人抗體的C區(qū)（2）人源化抗體（CDR移植抗體）（CDRgraftedantibody）構(gòu)成：小鼠抗體CDR序列取代人源抗體CDR序列。（3）完全人源抗體構(gòu)成：將人Ig基因轉(zhuǎn)染小鼠，刺激產(chǎn)生人抗體，

經(jīng)雜交瘤技術(shù)大量產(chǎn)生制備。（4）小分子抗體

Ig被酶水解產(chǎn)生含有H鏈和L鏈V區(qū)的片段有結(jié)合抗原的能力。這些片段大小僅為抗體的1/3~1/12，故稱為小分子抗體。小分子抗體也可以相互結(jié)合或與適當(dāng)?shù)呐潴w結(jié)合。（5）雙特異性抗體雙特異性抗體（bispecificantibody，BsAb）又稱雙功能抗體（bifunctionantibody，BfAb），構(gòu)成：一個Ig的兩個抗原結(jié)合部位可分別與兩種不同的抗原表位結(jié)合。（1）嵌合抗體(鼠-人嵌合抗體)基因工程抗體的類型：1、人-鼠嵌合抗體（chimericantibody）：鼠源性抗體V區(qū)+人抗體C區(qū)，也可將IgG2b轉(zhuǎn)換成IgG1或IgG3，提高Ab的細(xì)胞毒性在基因水平上將小鼠的Ig可變區(qū)與人的Ig恒定區(qū)嵌合在一起，所產(chǎn)生的抗體含有70-80%的人Ig分子的序列基因工程抗體的類型：1、人-鼠嵌合抗體（chimerica人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈嵌合載體L鏈嵌合載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞啟動子Pr鼠VH人CHPr鼠VL人CL人-鼠嵌合抗體基因工程改造策略免疫球蛋白H鏈嵌合載體L鏈?zhǔn)骎H鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞人-鼠嵌合基因工程抗體鼠VH鼠VL人CL人CH抗體分泌細(xì)胞人-鼠嵌合基因工程抗體2、人源化抗體（humanizedantibody）：將鼠源性抗體的CDR區(qū)序列連接至人抗體框架，也稱為（CDR-graftedantibody），更進(jìn)一步減少鼠抗體的成分免疫治療課件嵌合抗體、CDR移植抗體的比較嵌合抗體、CDR移植抗體的比較FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：

抗-CD20單抗（rituxinmab，利妥昔單抗），是針對CD20抗原的人鼠嵌合型單抗，通過介導(dǎo)ADCC、CDC殺傷腫瘤細(xì)胞。治療B細(xì)胞淋巴瘤抗Her-2單抗（trastuzumab，曲妥珠單抗），人源化單抗，治療Her-2（EGFR）表達(dá)高的乳腺癌Herceptin(抗體名稱)人源化抗體乳腺癌cellHER-2FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：Herceptin賽尼哌Zenapax。是靶向CD25抗原的人源化單抗，是第一個無嚴(yán)重不良反應(yīng)的免疫抑制劑，適應(yīng)癥為預(yù)防無高度免疫的同種異體腎移植患者的器官排斥反應(yīng)，與環(huán)孢素和皮質(zhì)固醇的免疫抑制劑合用。FDA已批準(zhǔn)上市的部分嵌合抗體：抗TNFa單抗（infliximab，英夫利昔單抗），是一種特異性阻斷TNF-α的人鼠嵌合型單抗，屬TNF拮抗劑，治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、Crohn病賽尼哌Zenapax。是靶向CD25抗原的人源化單抗，F(xiàn)DA目前有數(shù)百種抗腫瘤特異性MAb進(jìn)入臨床試驗。尤其在抗血癌領(lǐng)域MAb取得了很大成功。由于完整的Ab分子不易滲透進(jìn)實體瘤、透過血腦屏障，也不能口服，限制了其應(yīng)用。如何解決這個問題？目前有數(shù)百種抗腫瘤特異性MAb進(jìn)入臨床試驗。如何解決這個3.小分子抗體酶解法：量？純度？3.小分子抗體酶解法：量？純度？（4）小分子抗體

Ig被酶水解產(chǎn)生含有H鏈和L鏈V區(qū)的片段有結(jié)合抗原的能力。這些片段大小僅為抗體的1/3~1/12，故稱為小分子抗體。小分子抗體也可以相互結(jié)合或與適當(dāng)?shù)呐潴w結(jié)合。根據(jù)結(jié)構(gòu)，可將小分子抗體分為4類。1．Fab段構(gòu)成：VH、CH1＋L鏈2．單域抗體和最小識別單位構(gòu)成：單域抗體（singledomainantibody）

VH或VL

最小識別單位（minimalrecognitionunit，MRU）

單個CDR3．Fv片段：構(gòu)成：VH＋VL4．單鏈抗體（singlechainantibody，SCA）或單鏈Fv（ScFv）構(gòu)成：VL-不同的連接物-VH→多肽鏈特點：分子量小，穿透力強(qiáng)和體內(nèi)清除快。（4）小分子抗體基因工程技術(shù)是當(dāng)今較為成熟的技術(shù)！基因工程技術(shù)是當(dāng)今較為成熟的技術(shù)！免疫球蛋白基因載體的構(gòu)建H鏈表達(dá)載體L鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞PrVHCH1PrVLCL抗體分泌細(xì)胞VHVLCL-S-S-CH1Fab抗體分子的制備免疫球蛋白H鏈表達(dá)載體L鏈表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染細(xì)胞Pr分別構(gòu)建載體L鏈表達(dá)載體H鏈表達(dá)載體PrVH

PrVL抗體分泌細(xì)胞VHVL-S-S-

Fv小分子抗體的制備分別構(gòu)建載體L鏈表H鏈表PrVH3、小分子抗體：Fab段、Fv片段1/3抗體1/6抗體Fv結(jié)構(gòu)示意圖antigenbindingfragment,Fabvariabledomainfragment,Fv3、小分子抗體：Fab段、Fv片段1/3抗體1/6抗體Fv結(jié)3、小分子抗體：單域抗體(single-domainantibody,sdAb)、單鏈抗體單域抗體單鏈抗體(scFv)VH或VL單一結(jié)構(gòu)域組成1/12抗體由接頭將VH-VL連接成一條鏈。1/6抗體sdAb最初是從軟骨魚和駱駝科動物中克隆到有無輕鏈、單一重鏈可變區(qū)保留完整的抗原結(jié)合活性。具有分子小、穩(wěn)定性高、體內(nèi)組織滲透性好、可溶性好、易表達(dá)、抗原識別表位獨特的特性。3、小分子抗體：單域抗體單鏈抗體(scFv最小識別單位、雙特異性抗體最小識別單位、雙特異性抗體免疫治療課件4、抗體庫技術(shù)抗體庫技術(shù)產(chǎn)生的三項技術(shù)基礎(chǔ)RT-PCR：能夠克隆全套抗體可變區(qū)基因抗體基因片段在大腸桿菌的功能性表達(dá)噬菌體展示技術(shù)（phagedisplay)●

人源抗體的制備●抗體性能的改良●

不經(jīng)免疫制備抗體抗體庫技術(shù)的應(yīng)用4、抗體庫技術(shù)抗體庫技術(shù)產(chǎn)生的三項技術(shù)基礎(chǔ)RT-PCR：抗體藥物的臨床應(yīng)用單克隆抗體基因工程抗體破傷風(fēng)抗血清、蛇毒抗血清等抗腫瘤(鼠,人-鼠)抗腫瘤,自身免疫病抗血清抗體藥物的臨床應(yīng)用單克隆抗體基因工程抗體破傷風(fēng)抗血清、蛇毒抗二、抗原為基礎(chǔ)的免疫治療治療性疫苗（therapeuticvaccine）1、增強(qiáng)免疫應(yīng)答2、誘導(dǎo)免疫耐受二、抗原為基礎(chǔ)的免疫治療治療性疫苗（therapeutic（一）以抗原表位的形式進(jìn)行的免疫治療HSP能與多種肽結(jié)合，形成HSP-肽復(fù)合物，能激活多個CTL克隆，因此HSP被稱為“伴侶抗原肽（chaperoneantigenicpeptide）

抗原表位8-12個aa，易降解。與載體結(jié)合制成疫苗。前體條件：需已知抗原肽序列。

（一）以抗原表位的形式進(jìn)行的免疫治療HSP能與多種肽結(jié)合，形（二）以抗原分子或片段的形式進(jìn)行的免疫治療重組抗原疫苗：重組HBV表面抗原疫苗、Pre-S2疫苗；重組HPV疫苗等DNA疫苗：誘導(dǎo)對MBP（髓磷脂堿性蛋白）的免疫耐受，治療小鼠EAE（人類MS）重組病毒疫苗：編碼有效免疫原的基因插入減毒病毒（痘苗病毒、腺病毒），接種后體內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生抗原。轉(zhuǎn)基因植物疫苗：將編碼有效免疫原的基因插入可食用植物細(xì)胞中。（二）以抗原分子或片段的形式進(jìn)行的免疫治療重組抗原疫苗：重組三、細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療1、細(xì)胞因子療法2、細(xì)胞因子阻斷療法3、細(xì)胞因子基因療法三、細(xì)胞因子及其拮抗劑為基礎(chǔ)的免疫治療采用細(xì)胞因子及其拮抗劑進(jìn)行的免疫治療

細(xì)胞因子補(bǔ)充和添加療法：

常應(yīng)用重組細(xì)胞因子作為生物應(yīng)答調(diào)變劑治療腫瘤、感染、造血障礙等疾病。

細(xì)胞因子阻斷和拮抗療法：

主要用于治療自身免疫性疾病、移植排斥、感染性體克等。

細(xì)胞因子基因療法：

將細(xì)胞因子或其受體基因?qū)塍w內(nèi)，使其在體內(nèi)持續(xù)表達(dá)并發(fā)揮治療效應(yīng)。目前多項基因療法用于治療惡性腫瘤、感染、自身免疫性疾病。采用細(xì)胞因子及其拮抗劑進(jìn)行的免疫治療

（一）細(xì)胞因子療法——

應(yīng)用重組細(xì)胞因子作為藥物IFNα、β、γ抗腫瘤細(xì)胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IFN、TNFα、GM-CSF促進(jìn)造血細(xì)胞因子GM-CSF、G-CSF