薄層色譜法(TLC)的規(guī)范化技術(shù)要求薄層色譜法(TLC)的規(guī)范化技術(shù)要求11.什么是薄層色譜法？系將適宜的固定相(吸附劑或載體)涂布于玻璃板、塑料或鋁基上，使成一均勻薄層，待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法在同板上所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進行掃描，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。1.什么是薄層色譜法？系將適宜的固定相(吸附劑2薄層色譜(ThinLayerChromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。薄層色譜(ThinLayerChromatography3因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行藥物合成反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件4TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大5薄層色譜的特點：

靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預(yù)處理簡單、設(shè)備簡單。由于這些特點，薄層色譜在實際工作中的應(yīng)用十分廣泛。薄層色譜的特點：

靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便6一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇7I0I2I1前沿原點

薄層板示意圖I0I2I1前沿原點薄8比移值：Rf=組分移動距離溶劑前沿移動距離Rx=樣品Rf值參照物的Rf值相對比移值：比移值：Rf=組分移動距離溶劑前沿移動距離Rx=樣品Rf值92.儀器與材料薄層板點樣器展開容器顯色設(shè)備色譜檢視裝置2.儀器與材料薄層板102.1薄層板2.1.1薄層板分類預(yù)制薄層板和自制薄層板(制備方法)普通薄層板和高效薄層板(分離效果)正相薄層板和反相薄層板(流動相極性)硅膠、硅膠F254、氧化鋁、纖維素、聚酰胺薄層板和C18鍵合相、氨基鍵合相、腈基鍵合相、二醇基鍵合相薄層板(固定相類型分類)2.1薄層板2.1.1薄層板分類112.1薄層板2.1.2自制薄層板:須能保證色譜質(zhì)量；對薄層板需特別處理和化學改性可用；節(jié)約成本。玻璃板要求：表面光潔、平整，厚1-2mm，潔凈。規(guī)格：10cm×10cm、10cm×15cm、10cm×20cm、20cm×20cm2.1薄層板2.1.2自制薄層板:須能保證色122.1薄層板最常用固定相：⑴硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254；⑵氧化鋁；⑶硅澡土；⑷纖維素；⑸聚酰胺等。吸附劑直徑10-40μm黏合劑：10%-15%煅石膏、0.2%-0.5%羧甲基纖維素鈉、淀粉、有機高分子聚合物、特殊要求可用緩沖液、稀堿液等。2.1薄層板最常用固定相：⑴硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、132.2點樣器毛細管微量注射器半自動及全自動點樣器2.2點樣器毛細管142.3展開容器專用平底或雙槽展開缸、蓋能密閉特殊水平展開缸2.3展開容器專用平底或雙槽展開缸、蓋能密閉152.4顯色設(shè)備噴霧顯色：玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，用壓縮氣體可使試劑呈均勻細霧狀噴出浸漬顯色蒸氣熏蒸顯色2.4顯色設(shè)備噴霧顯色：玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，用壓縮氣體可162.5色譜檢視裝置可見紫外三用儀裝置可見紫外光源及相應(yīng)濾光片的暗箱拍攝圖像的設(shè)備2.5色譜檢視裝置可見紫外三用儀173.操作方法3.1薄層板制備自制方法：硅膠：1份固定相加3份水---研磨混合---涂布---晾干---活化---備用；纖維素：與水1：5或6；聚酰胺：與水1：4，或與甲醇1：3薄層板活化：硅膠、氧化鋁、硅澡土：110℃、30分鐘；纖維素：105℃、30分鐘；聚酰胺：60－80℃、30分鐘3.操作方法3.1薄層板制備18用涂布器制板的要點：玻璃板要清潔；調(diào)漿要均勻；涂布后的薄層板應(yīng)低溫緩慢干燥。自制薄板要求：表面均勻、平整、光滑，無麻點、無氣泡、無破損、無污染。薄層厚薄對Rf值影響：硅膠G板當厚低于150μm時，Rf值隨薄層的減低而增大，可變性大；板厚250μm，Rf改變不顯著。用涂布器制板的要點：玻璃板要清潔；調(diào)漿要均勻；涂布后的薄層板19薄層層析操作要點鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。薄層層析操作要點鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)20研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。

研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過213.2點樣形狀：圓點狀、窄細條狀點樣位置：距底邊1-1.5cm、點與點以不影響檢出為宜一般不少于0.8cm、圓點直徑不大于0.3cm、條帶寬0.5-1.0cm高效板間距可適當縮小3.2點樣形狀：圓點狀、窄細條狀22點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干。

點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣233.3展開以直立展開為多展開劑用量：展開后仍留有三分之二以上體積為宜；浸入展開劑的深度以距原點0.5cm為宜；展開距離：8-15cm溶劑蒸氣預(yù)飽和：15-30分鐘3.3展開以直立展開為多24展開劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑。混合不均勻和沒有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標移液管，移液管應(yīng)符合計量認證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的。

展開劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使25混合展開劑通常不能重復使用：⑴低沸點物質(zhì)蒸發(fā)比高沸點多⑵濕度變化⑶其中一種溶劑被優(yōu)先吸附⑷各組分間可能發(fā)生相互作用⑸吸附劑中雜質(zhì)不斷流出引起組成改變混合展開劑通常不能重復使用：26展開系統(tǒng)的飽和

一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應(yīng)該盡量輕、快

展開系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，27溫濕度的控制

溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。

溫濕度的控制溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫283.4顯色與檢視有色物：可直接日光下檢視熒光物：365nm紫外燈下觀察熒光色譜無色物：噴霧顯色劑、或進行適宜處理顯色紫外吸收物：用熒光板在254nm紫外燈下觀察熒光淬滅物形成色譜3.4顯色與檢視有色物：可直接日光下檢視29由于通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最為重要的，因此對它進行略詳?shù)慕榻B。薄層掃描儀的基本結(jié)構(gòu)及主要功能基本是相同的，每臺儀器都包括光源、分光器、檢測器、數(shù)據(jù)處理及信號輸出幾個部分。由于通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最30典型的檢測方法是吸收檢測法，其基本測定原理為，用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上進行整個斑點或被斑點反射的光束，根據(jù)光束被斑點吸收后強度的變化來確定組分的含量。薄層色譜法的優(yōu)點特別適合我國國情，已成為許多實驗室不可缺少的分離手段。該方法在科研、教學、臨床、生產(chǎn)等各個領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用，分離對象也無所不包。典型的檢測方法是吸收檢測法，其基本測定原理為，用一束長寬可以31顯色劑的要求：⑴至少可以把微克級的被分離物質(zhì)顯示出來；⑵能給出一個確定的顯示區(qū)域；⑶顯示區(qū)域有一定的穩(wěn)定性。顯色劑的要求：32顯色劑可以分成兩大類：一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑；另一類是根據(jù)化合物分類或特殊官能團設(shè)計的專屬性顯色劑。顯色劑可以分成兩大類：33常用通用顯色劑：①硫酸常用的有四種溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液與0.5-1.5mol／L硫酸銨溶液，噴后110oC烤15min，不同有機化合物顯不同顏色。常用通用顯色劑：34

常用通用顯色劑：②0.5％碘的氯仿溶液對很多化合物顯黃棕色。③中性0.05％高錳酸鉀溶液易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。

常用通用顯色劑：35常用通用顯色劑：④堿性高錳酸鉀試劑還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。溶液I：1％高錳酸鉀溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸鈉溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合應(yīng)用。常用通用顯色劑：④堿性高錳酸鉀試劑還原性化合物在淡紅色背36常用通用顯色劑：⑤酸性高錳酸鉀試劑噴1.6％高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時注意防止爆炸)，噴后薄層于180oC加熱15～20min。

常用通用顯色劑：⑤酸性高錳酸鉀試劑噴1.6％高錳酸鉀濃硫37常用通用顯色劑：⑥酸性重鉻酸鉀試劑噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶液，必要時150oC烤薄層。⑦5％磷鉬酸乙醇溶液噴后120oC烘烤，還原性化合物顯藍色，再用氨氣薰，則背景變?yōu)闊o色。⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑還原性物質(zhì)顯藍色，再噴2mol／L鹽酸溶液，則藍色加深。溶液I：1％鐵氰化鉀溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化鐵溶液；臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。常用通用顯色劑：⑥酸性重鉻酸鉀試劑噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶38專屬性顯色劑由于化合物種類繁多，因此專屬性顯色劑也是很多的，現(xiàn)將在各類化合物中最常用的顯色劑列舉如下：專屬性顯色劑39烴類①硝酸銀／過氧化氫檢出物：鹵代烴類。溶液：硝酸銀O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀釋至200ml，再加30％過氧化氫1滴。方法：噴后置未過濾的紫外光下照射；結(jié)果：斑點呈暗黑色。

烴類40②熒光素／溴檢出物：不飽和烴。溶液：I．熒光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。方法：先噴(I)，然后置含溴蒸氣容器內(nèi)，熒光素轉(zhuǎn)變?yōu)樗匿鍩晒馑?曙紅)，熒光消失，不飽和烴斑點由于溴的加成，阻止生成曙紅而保留熒光，多數(shù)不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。②熒光素／溴41③四氯鄰苯二甲酸酐檢出物：芳香烴。溶液：2％四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10：1)的溶液。方法：噴后置紫外光下觀察。③四氯鄰苯二甲酸酐42④甲醛／硫酸檢出物：多環(huán)芳烴。溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。④甲醛／硫酸43(2)醇類①3，5一二硝基苯酰氯檢出物：醇類。溶液：I．2％本品甲苯溶液；Ⅱ．0.5％氫氧化鈉溶液；Ⅲ．O.002％羅丹明溶液。方法：先噴(I)，在空氣中干燥過夜，用蒸氣薰2min，將紙或薄層通過試液(Ⅱ)30s，噴水洗，趁濕通過(Ⅲ)15s，空氣干燥，紫外燈下觀察。(2)醇類44②硝酸鈰銨檢出物：醇類。溶液：I．1％硝酸鈰銨的0.2mol／L硝酸溶液；Ⅱ．N,N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1．5m1)混合液中，用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。②硝酸鈰銨45③香草醛／硫酸檢出物：高級醇、酚、甾類及精油。溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。方法：噴后于120oC加熱至呈色最深。③香草醛／硫酸46④二苯基苦基偕肼’檢出物：醇類、萜烯、羰基、酯與醚類。溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。方法：噴后于110oC加熱5～lOmin。結(jié)果：紫色背景呈黃色斑點。④二苯基苦基偕肼’47(3)醛酮類①品紅／亞硫酸檢出物：醛基化合物。溶液：I．0.01%品紅溶液，通入二氧化硫直至無色；Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。方法：將I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀釋至l00ml。(3)醛酮類48②鄰聯(lián)茴香胺檢出物：醛類、酮類。溶液：本品乙酸飽和溶液。②鄰聯(lián)茴香胺49③2，4-二硝基苯肼檢出物：醛基、酮基及酮糖。溶液：I．0.4％本品的2mol／L鹽酸溶液；Ⅱ．本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加濃鹽酸lml。方法：噴溶液I或Ⅱ后，立即噴鐵氰化鉀的2mol／L鹽酸溶液。結(jié)果：飽和酮立即呈藍色；飽和醛反應(yīng)慢，呈橄欖綠色；不飽和羰基化合物不顯色。③2，4-二硝基苯肼50(4)含氮化合物①FCNP(硝普鈉／鐵氰化物)試劑檢出物：脂肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲與硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。溶液：10％氫氧化鈉溶液、10％硝普鈉溶液、10％鐵氰化鉀溶液與水按1：1：1：3混合，在室溫至少放置20min，冰箱保存數(shù)周，用前將混合液與丙酮等體積混合。(4)含氮化合物51②Dragendorff(碘化鉍鉀試劑)試劑檢出物：芳香族含氮化合物，如生物堿類、抗心律不齊藥物。溶液：I．堿式硝酸鉍0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；Ⅱ．碘化鉀8g溶于水20ml中。將上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作為儲備液，用前取儲備液lml、冰醋酸2ml與水l0ml混合。結(jié)果：呈橘紅色斑點。②Dragendorff(碘化鉍鉀試劑)試劑52③4-甲基傘形酮檢出物：含氮雜環(huán)化合物。溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。方法：噴板后置25％氨水蒸氣的容器中,取出后于紫外燈(365nm)下觀察。③4-甲基傘形酮533.5記錄按一定比例記錄薄層結(jié)果光學照片電子圖像掃描儀記錄相應(yīng)色譜圖3.5記錄按一定比例記錄薄層結(jié)果544.測定法4.1鑒別適宜濃度對照品與供試品溶液同板點樣、展開、檢視，供試品溶液所顯主斑點的大小、顏色深淺與位置應(yīng)與對照品溶液的斑點一致。4.2限量檢查⑴采用對照品對照或?qū)φ掌废♂寣φ眨虎朴械牟捎秒s質(zhì)斑點與稀釋供試品的主斑點比較4.測定法4.1鑒別適宜濃度對照品與供試品溶液同板點樣555.薄層分析重復性影響因素吸附劑的性質(zhì)樣品因素展開槽的氣氛薄層厚度點樣大小溶劑雜質(zhì)、數(shù)量粘合劑影響5.薄層分析重復性影響因素吸附劑的性質(zhì)56薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件57薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件58薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件59薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件60薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件61薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件62薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件63薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件64薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件65薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件66

胺化物料液點板胺化物料液由醚化物反應(yīng)成胺化物。胺化物料液點板主要控制未反應(yīng)的醚化物，圖中胺化物爬較高，醚化物在下端中間位置

胺化物料液點板胺化物料液由醚化物反應(yīng)成胺化物67

主反應(yīng)液為醚化物料液，其由單酯反應(yīng)成醚化物。主反應(yīng)液點板主要控制未反應(yīng)的單酯，圖中醚化物爬較高，醚化物在下端中間位置

主反應(yīng)液為醚化物料液，其由單酯反應(yīng)成醚化物。主反應(yīng)液點板68薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件69薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件70薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件71薄層色譜法(TLC)的規(guī)范化技術(shù)要求薄層色譜法(TLC)的規(guī)范化技術(shù)要求721.什么是薄層色譜法？系將適宜的固定相(吸附劑或載體)涂布于玻璃板、塑料或鋁基上，使成一均勻薄層，待點樣、展開后，與適宜的對照物按同法在同板上所得的色譜圖對比，并可用薄層掃描儀進行掃描，用以進行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。1.什么是薄層色譜法？系將適宜的固定相(吸附劑73薄層色譜(ThinLayerChromatography)常用TLC表示，又稱薄層層析，屬于固－液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點。一方面適用于小量樣品（幾到幾十微克，甚至0.01μg）的分離；另一方面若在制作薄層板時，把吸附層加厚，將樣品點成一條線，則可分離多達500mg的樣品。薄層色譜(ThinLayerChromatography74因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外，在進行藥物合成反應(yīng)時，常利用薄層色譜觀察原料斑點的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

薄層色譜法(TLC)講稿(xin)課件75TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大的靈活性，流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1－0.7之間并達到較好的分離，與此對應(yīng)的是流動相要有適當?shù)膹姸群徒M成。流動相強度越大，溶質(zhì)Rf值越大，但很可能降低分離能力；另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物、根據(jù)相似相溶原理，要使用多元溶劑體系。TLC與HPLC相比，一個突出的優(yōu)點就是流動相的選擇具有更大76薄層色譜的特點：

靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便、同時分離多個樣品、樣品預(yù)處理簡單、設(shè)備簡單。由于這些特點，薄層色譜在實際工作中的應(yīng)用十分廣泛。薄層色譜的特點：

靈敏度及分辨率高、分離快速、操作方便77一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個二元溶劑體系，通過調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值，適合的Rf值找到后，再尋求極性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個，以這三個組成為三點組成一個三角形，則可看到：三角形頂點是二元體系，邊是三元體系，三角形內(nèi)是四元體系，并且極性一致，可根據(jù)幾何原理得出任一點組成，這種方法較為直觀，也較簡單。一般展開劑體系選擇如下：根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇78I0I2I1前沿原點

薄層板示意圖I0I2I1前沿原點薄79比移值：Rf=組分移動距離溶劑前沿移動距離Rx=樣品Rf值參照物的Rf值相對比移值：比移值：Rf=組分移動距離溶劑前沿移動距離Rx=樣品Rf值802.儀器與材料薄層板點樣器展開容器顯色設(shè)備色譜檢視裝置2.儀器與材料薄層板812.1薄層板2.1.1薄層板分類預(yù)制薄層板和自制薄層板(制備方法)普通薄層板和高效薄層板(分離效果)正相薄層板和反相薄層板(流動相極性)硅膠、硅膠F254、氧化鋁、纖維素、聚酰胺薄層板和C18鍵合相、氨基鍵合相、腈基鍵合相、二醇基鍵合相薄層板(固定相類型分類)2.1薄層板2.1.1薄層板分類822.1薄層板2.1.2自制薄層板:須能保證色譜質(zhì)量；對薄層板需特別處理和化學改性可用；節(jié)約成本。玻璃板要求：表面光潔、平整，厚1-2mm，潔凈。規(guī)格：10cm×10cm、10cm×15cm、10cm×20cm、20cm×20cm2.1薄層板2.1.2自制薄層板:須能保證色832.1薄層板最常用固定相：⑴硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、硅膠HF254；⑵氧化鋁；⑶硅澡土；⑷纖維素；⑸聚酰胺等。吸附劑直徑10-40μm黏合劑：10%-15%煅石膏、0.2%-0.5%羧甲基纖維素鈉、淀粉、有機高分子聚合物、特殊要求可用緩沖液、稀堿液等。2.1薄層板最常用固定相：⑴硅膠G、硅膠GF254、硅膠H、842.2點樣器毛細管微量注射器半自動及全自動點樣器2.2點樣器毛細管852.3展開容器專用平底或雙槽展開缸、蓋能密閉特殊水平展開缸2.3展開容器專用平底或雙槽展開缸、蓋能密閉862.4顯色設(shè)備噴霧顯色：玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，用壓縮氣體可使試劑呈均勻細霧狀噴出浸漬顯色蒸氣熏蒸顯色2.4顯色設(shè)備噴霧顯色：玻璃噴霧瓶或?qū)Ｓ脟婌F器，用壓縮氣體可872.5色譜檢視裝置可見紫外三用儀裝置可見紫外光源及相應(yīng)濾光片的暗箱拍攝圖像的設(shè)備2.5色譜檢視裝置可見紫外三用儀883.操作方法3.1薄層板制備自制方法：硅膠：1份固定相加3份水---研磨混合---涂布---晾干---活化---備用；纖維素：與水1：5或6；聚酰胺：與水1：4，或與甲醇1：3薄層板活化：硅膠、氧化鋁、硅澡土：110℃、30分鐘；纖維素：105℃、30分鐘；聚酰胺：60－80℃、30分鐘3.操作方法3.1薄層板制備89用涂布器制板的要點：玻璃板要清潔；調(diào)漿要均勻；涂布后的薄層板應(yīng)低溫緩慢干燥。自制薄板要求：表面均勻、平整、光滑，無麻點、無氣泡、無破損、無污染。薄層厚薄對Rf值影響：硅膠G板當厚低于150μm時，Rf值隨薄層的減低而增大，可變性大；板厚250μm，Rf改變不顯著。用涂布器制板的要點：玻璃板要清潔；調(diào)漿要均勻；涂布后的薄層板90薄層層析操作要點鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)拖動或停頓造成的層紋；過稀，水蒸發(fā)后，板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1：2～3，硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。薄層層析操作要點鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠，板容易出現(xiàn)91研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過拿起研棒時勻漿下滴的情況來判斷，越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外，也影響板涂層的厚度，進一步影響上樣量。涂層薄，點樣易過載；涂層厚，顯色不那么明顯。通常，板的質(zhì)量對薄層鑒別的影響不是很大，影響最大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。

研磨勻漿的時間，根據(jù)經(jīng)驗來定，與空氣濕度有關(guān)，一般通過923.2點樣形狀：圓點狀、窄細條狀點樣位置：距底邊1-1.5cm、點與點以不影響檢出為宜一般不少于0.8cm、圓點直徑不大于0.3cm、條帶寬0.5-1.0cm高效板間距可適當縮小3.2點樣形狀：圓點狀、窄細條狀93點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣管。這樣，點的斑點較小，展開的色譜圖分離度好，顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好，樣品溶液含水量大，點樣斑點擴散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點好樣的薄層板用電吹風的熱風吹干或放入干燥器里晾干。

點樣盡量用小的點樣管。如果有足夠的耐性，最好只用1微升的點樣943.3展開以直立展開為多展開劑用量：展開后仍留有三分之二以上體積為宜；浸入展開劑的深度以距原點0.5cm為宜；展開距離：8-15cm溶劑蒸氣預(yù)飽和：15-30分鐘3.3展開以直立展開為多95展開劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使混合液充分混勻，放置，如果分層，取用體積大的一層作為展開劑。絕對不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸，振搖展開缸來配制展開劑?；旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑，會造成層析的完全失敗。各組成溶劑的比例準確度對不同的分析任務(wù)有不同的要求，盡量達到實驗室儀器的最高精確度，比如：取1ml的溶劑，應(yīng)使用1ml的單標移液管，移液管應(yīng)符合計量認證要求，盡管多數(shù)時候這不是必須的。

展開劑配制選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗，強烈振搖使96混合展開劑通常不能重復使用：⑴低沸點物質(zhì)蒸發(fā)比高沸點多⑵濕度變化⑶其中一種溶劑被優(yōu)先吸附⑷各組分間可能發(fā)生相互作用⑸吸附劑中雜質(zhì)不斷流出引起組成改變混合展開劑通常不能重復使用：97展開系統(tǒng)的飽和

一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺，斜架著，蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸，并使薄層板吸附蒸氣達到飽和，防止邊沿效應(yīng)，飽和時間在半個小時左右。展開時難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中，不過對薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大，當然動作應(yīng)該盡量輕、快

展開系統(tǒng)的飽和一般使用的是雙槽的展開缸，一槽用來放展開劑，98溫濕度的控制

溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫度越低分離越好，較難的分離需在低溫下分離，例如人參皂苷。濕度的影響，估計主要是影響薄層板的吸附能力，導致選擇性（容量因子）的變化，濕度應(yīng)根據(jù)實際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜，濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。

溫濕度的控制溫濕度對薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下，通常溫993.4顯色與檢視有色物：可直接日光下檢視熒光物：365nm紫外燈下觀察熒光色譜無色物：噴霧顯色劑、或進行適宜處理顯色紫外吸收物：用熒光板在254nm紫外燈下觀察熒光淬滅物形成色譜3.4顯色與檢視有色物：可直接日光下檢視100由于通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最為重要的，因此對它進行略詳?shù)慕榻B。薄層掃描儀的基本結(jié)構(gòu)及主要功能基本是相同的，每臺儀器都包括光源、分光器、檢測器、數(shù)據(jù)處理及信號輸出幾個部分。由于通常用薄層色譜分析法進行定量分析的過程中，薄層掃描儀是最101典型的檢測方法是吸收檢測法，其基本測定原理為，用一束長寬可以調(diào)節(jié)的一定波長、一定強度的光照射到薄層斑點上進行整個斑點或被斑點反射的光束，根據(jù)光束被斑點吸收后強度的變化來確定組分的含量。薄層色譜法的優(yōu)點特別適合我國國情，已成為許多實驗室不可缺少的分離手段。該方法在科研、教學、臨床、生產(chǎn)等各個領(lǐng)域中廣泛應(yīng)用，分離對象也無所不包。典型的檢測方法是吸收檢測法，其基本測定原理為，用一束長寬可以102顯色劑的要求：⑴至少可以把微克級的被分離物質(zhì)顯示出來；⑵能給出一個確定的顯示區(qū)域；⑶顯示區(qū)域有一定的穩(wěn)定性。顯色劑的要求：103顯色劑可以分成兩大類：一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑；另一類是根據(jù)化合物分類或特殊官能團設(shè)計的專屬性顯色劑。顯色劑可以分成兩大類：104常用通用顯色劑：①硫酸常用的有四種溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液與0.5-1.5mol／L硫酸銨溶液，噴后110oC烤15min，不同有機化合物顯不同顏色。常用通用顯色劑：105

常用通用顯色劑：②0.5％碘的氯仿溶液對很多化合物顯黃棕色。③中性0.05％高錳酸鉀溶液易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。

常用通用顯色劑：106常用通用顯色劑：④堿性高錳酸鉀試劑還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。溶液I：1％高錳酸鉀溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸鈉溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合應(yīng)用。常用通用顯色劑：④堿性高錳酸鉀試劑還原性化合物在淡紅色背107常用通用顯色劑：⑤酸性高錳酸鉀試劑噴1.6％高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時注意防止爆炸)，噴后薄層于180oC加熱15～20min。

常用通用顯色劑：⑤酸性高錳酸鉀試劑噴1.6％高錳酸鉀濃硫108常用通用顯色劑：⑥酸性重鉻酸鉀試劑噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶液，必要時150oC烤薄層。⑦5％磷鉬酸乙醇溶液噴后120oC烘烤，還原性化合物顯藍色，再用氨氣薰，則背景變?yōu)闊o色。⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑還原性物質(zhì)顯藍色，再噴2mol／L鹽酸溶液，則藍色加深。溶液I：1％鐵氰化鉀溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化鐵溶液；臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。常用通用顯色劑：⑥酸性重鉻酸鉀試劑噴5％重鉻酸鉀濃硫酸溶109專屬性顯色劑由于化合物種類繁多，因此專屬性顯色劑也是很多的，現(xiàn)將在各類化合物中最常用的顯色劑列舉如下：專屬性顯色劑110烴類①硝酸銀／過氧化氫檢出物：鹵代烴類。溶液：硝酸銀O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀釋至200ml，再加30％過氧化氫1滴。方法：噴后置未過濾的紫外光下照射；結(jié)果：斑點呈暗黑色。

烴類111②熒光素／溴檢出物：不飽和烴。溶液：I．熒光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。方法：先噴(I)，然后置含溴蒸氣容器內(nèi)，熒光素轉(zhuǎn)變?yōu)樗匿鍩晒馑?曙紅)，熒光消失，不飽和烴斑點由于溴的加成，阻止生成曙紅而保留熒光，多數(shù)不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。②熒光素／溴112③四氯鄰苯二甲酸酐檢出物：芳香烴。溶液：2％四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10：1)的溶液。方法：噴后置紫外光下觀察。③四氯鄰苯二甲酸酐113④甲醛／硫酸檢出物：多環(huán)芳烴。溶液：37％甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。④甲醛／硫酸114(2)醇類①3，5一二硝基苯酰氯檢出物：醇類。溶液：I．2％本品甲苯溶液；Ⅱ．0.5％氫氧化鈉溶液；Ⅲ．O.002％羅丹明溶液。方法：先噴(I)，在空氣中干燥過夜，用蒸氣薰2min，將紙或薄層通過試液(Ⅱ)30s，噴水洗，趁濕通過(Ⅲ)15s，空氣干燥，紫外燈下觀察。(2)醇類115②硝酸鈰銨檢出物：醇類。溶液：I．1％硝酸鈰銨的0.2mol／L硝酸溶液；Ⅱ．N,N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1．5m1)混合液中，用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。②硝酸鈰銨116③香草醛／硫酸檢出物：高級醇、酚、甾類及精油。溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。方法：噴后于120oC加熱至呈色最深。③香草醛／硫酸117④二苯基苦基偕肼’檢出物：醇類、萜烯、羰基、酯與醚類。溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。方法：噴后于110oC加熱5～lOmin。結(jié)果：紫色背景呈黃色斑點。④二苯基苦基偕肼’118(3)醛酮類①品紅／亞硫酸檢出物：醛基化合物。溶液：I．0.01%品紅溶液，通入二氧化硫直至無色；Ⅱ．0.05mol／L氯化汞溶液；Ⅲ．O.05mol／L硫酸溶液。方法：將I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀釋至