第八章

主要農作物的組織培養(yǎng)

以有性雜交為作為指導進行育種，這種方法局限性很大，而且周期長植物組織培養(yǎng)已廣泛應用于植物育種，在單倍體育種、胚培養(yǎng)、體細胞雜交、細胞突變體篩選、遺傳轉化等方面離體無性系的快速繁殖培養(yǎng)無病毒種苗

新品種的選育人工種子和種質的保存。第一節(jié)農作物組織培養(yǎng)的意義、方法與應用

對繁殖系數(shù)低的“名、優(yōu)、新、奇、特”植物品種的推廣，蘭花、安祖花、馬蹄蓮、甘薯、草莓、香蕉、甘蔗、桉樹、非洲菊等經濟植物已開始工廠化生產植物脫毒苗木培育

脫毒后的馬鈴薯、甘薯、甘蔗、香蕉等植物可大幅度提高產量，改善品質，蘭花、水仙、大麗花等觀賞植物脫毒后植株生長勢強，花朵變大，產花量上升，色澤鮮艷植物新品種培育

基因工程育種（抗蟲棉、抗除草劑大豆、玉米），單倍體育種-煙草單育1號、水稻“中花8號”、小麥“京花1號”，遠緣雜交幼胚早期培養(yǎng)，原生質體融合技術，選擇細胞突變體植物種質資源的離體保存

超低溫離體保存植物種質，可節(jié)約大量的人力、物力和土地，還可挽救那些瀕危物種

人工種子

為某些珍稀物種的繁殖以及轉基因植物、自交不親和植物、遠緣雜種的繁殖提供有效的手段第二節(jié)棉花組織培養(yǎng)一、大量元素（20倍）母液(g/L)藥品摩爾濃度（M/L）質量濃度（g/L）5L母液所需質量（g）備注KNO30.3838190

MgSO40.033.8/7.4(MgSO4·7H2O)19/37

KH2PO40.0253.417

CaCl20.066.6/8.8(CaCl2·2H2O)33/44單獨溶解，最后加入二、微量元素（100倍）母液(g/L)

藥品質量濃度(g/L)備注

5倍母液ⅠH3BO33.1加熱助溶MnSO4·4H2O（或MnSO4·H2O）11.15（或8.45）

ZnSO4·7H2O4.3

20倍母液ⅡCoCl2·6H2O0.05

CuSO4·5H2O0.05單獨溶解，最后加入KI1.66

NaMO4·2H2O0.5

微量元素二級母液（即我們平時配培養(yǎng)基時使用的微量）：取上述母液Ⅰ200ml，母液Ⅱ50ml，加蒸餾水定容至1L。鐵鹽母液配制（所用試劑均為國藥產品）B5有機物配制（所用試劑均為sigma產品）藥品摩爾濃度（M/L）質量濃度（g/L）備注FeSO4·7H2O0.012.78

Na2EDTA0.013.73加熱助溶藥品100ml所需質量（g）500ml所需質量（g）備注VB1（硫胺素）15

VB6（鹽酸吡哆醇）0.10.5NaOH助溶VB3（煙酸）0.10.5NaOH助溶加入VB6和VB1后加部分水，再加入VB3，再次加水，容量瓶定容各種激素配制（所用試劑均為sigma產品）

質量濃度（g/L）備注2,4-D0.1無水乙醇助溶6-BA1

NAA1

L-Gly（甘氨酸）2國藥產品肌醇10

IAA0.5

IBA0.5NaOH助溶KT0.5NaOH助溶/鹽酸助溶*NH4NO3165國藥產品愈傷組織的誘導

0.5-1cm的下胚軸切段接種于誘導培養(yǎng)基上，一個皿放25-30段下胚軸。一個月后挑選兩端膨大，生長正常的下胚軸繼代到新的IBA培養(yǎng)基上非胚性愈傷組織的增殖

由于愈傷組織的進一步膨大，一個皿中以20段下胚軸為宜愈傷組織的分化

愈傷組織經繼代（一個月繼代一次）幾次后，有的愈傷組織轉成米粒狀顆粒，將其轉入分化培養(yǎng)基上，進一步分化成胚狀體成苗生根培養(yǎng)

將分化出的小苗繼代到1/2MS培養(yǎng)基中成苗生長培養(yǎng)基上煉苗移栽

將生根良好的小苗揭開三角瓶封口膜，煉苗2-3天，然后移栽到小土缽中，遮蔭緩苗一周左右移栽大田棉花下胚軸組織培養(yǎng)過程棉花下胚軸誘導愈傷過程中胚性愈傷組織的腺體處發(fā)生和外發(fā)生A1：下胚軸外植體；A2-A4：胚性愈傷組織在腺體處發(fā)生；B1：愈傷組織表面的胚性細胞；B2-B4：愈傷組織表面形成胚性組織棉花體細胞胚的單細胞起源和表面發(fā)生A：單細胞原胚、二細胞原胚和四細胞原胚(箭頭所指)；B：具胚柄的多細胞原胚(箭頭所指)；C：具胚柄的體胚；D-G：與愈傷組織粘連的體胚；H-I：游離的體胚棉花單個胚性細胞團培養(yǎng)中體細胞胚的發(fā)生和發(fā)育A：培養(yǎng)當天；B1-B2：培養(yǎng)7d；C1-C3：培養(yǎng)14d；D1-D3：培養(yǎng)21d后出現(xiàn)球形胚；E1-E3：心形胚階段；F1-F3：魚雷形胚階段；G1-G3：子葉胚階段棉花體細胞胚發(fā)育過程中的極性建立和組織分化A：球形胚表皮原形成；B：球形胚內層細胞分裂形成基礎和維管組織；C：內部等軸細胞軸向延長形成的心形胚；D-E：極性的逐步建立和原形成細胞層的分化；F-G：具有清楚的前形成細胞層和極性的魚雷形胚；H：具有子葉原基，芽頂端分生組織、前形成層和根頂端分生組織的魚雷形胚；I：具有Y形微管組織的子葉胚棉花單個胚性細胞團培養(yǎng)中不同發(fā)育階段的體細胞胚A1-A6：球形胚；B1-B6：心形胚；C1-C6：魚雷形胚；D1-D6：子葉胚第三節(jié)水稻花藥和花粉培養(yǎng)目錄研究進展研究過程研究意義前景展望一研究進展1.水稻單倍體獲得途徑

花藥培養(yǎng)、花粉培養(yǎng)胚珠或子房培養(yǎng)（未受精）概念：

單倍體育種：通過花藥、花粉培養(yǎng)獲得單倍體，然后進行染色體加倍，經過選擇、鑒定選育出新品種的途徑?；ㄋ幣囵B(yǎng)：是將花粉發(fā)育至一定階段的花藥接種到人工培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進而分化成植株的技術。

花粉培養(yǎng)：是將花粉從花藥中分離出來,接種到人工培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，以形成花粉胚或愈傷組織進而分化成植株的過程。水稻花培歷史：

?1968年，日本人新關和大野首次通過水稻花藥培養(yǎng)獲得單倍體植株；

?1970年，我國正式開展水稻花藥培養(yǎng)技術研究，并取得良好進展；?截至目前，已有多個品種通過花培途徑獲得。代表成果：天津農科院選育的花育“花育1號”、“花育2號”；中國農科院選育的中花系列；黑龍江農科院水稻所選育的龍粳系列品種。?截至目前，通過花培選育出了很多粳稻品種并大面積的推廣應用。1975-1998共審定26個品種。?秈稻花藥培養(yǎng)難度較大。至20世紀末，共有5個品種通過花培選育。二研究過程1.培養(yǎng)流程2.培養(yǎng)方法3.影響因素4.檢測方法1.培養(yǎng)流程花藥和花粉培養(yǎng)基本流程：預處理花藥（物理或生理逆境）收集具胚性小孢子的花藥，或離心收集胚性小孢子培養(yǎng)（充足的營養(yǎng)、合適的溫光、或條件培養(yǎng)）形成胚狀體胚狀體轉移至固化培養(yǎng)基上”萌發(fā)”形成小植株。選擇合適的供體植株倍性鑒定或染色體加倍2.培養(yǎng)方法花藥培養(yǎng)

1、取材鏡檢，根據(jù)花粉的發(fā)育時期，選取大小適宜的花蕾。

2、消毒

70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％次氯酸鈉溶液中浸泡10-20min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min，無菌水沖洗3-5次。

3、培養(yǎng)固體或液體培養(yǎng)基均可。先進行脫分化培養(yǎng)，至小孢子大量分裂形成胚或愈傷，并突破花藥壁表面，形成突出物（2-3周）；后轉入分化培養(yǎng)基培養(yǎng)，形成小植株。水稻花藥培養(yǎng)由接種至長出愈傷圖花粉培養(yǎng)與花藥不同，花粉培養(yǎng)需進行花粉的分離與純化及特殊的花粉誘導培養(yǎng)。分離和純化方法1、自然散落法(漂浮培養(yǎng)散落小孢子收集法)

將花藥接種在預處理液或液體培養(yǎng)基上，待花粉自動散落后，收集培養(yǎng)。2、擠壓法在燒杯或研缽中擠壓花藥，將花粉擠出后收集培養(yǎng)。3、機械游離（1）磁攪拌法用磁力攪拌器攪拌培養(yǎng)液中的花藥，使花粉游離出來；（2）超速旋切法通過攪拌器中的高速旋轉刀具破碎花蕾、穗子、花藥，使小孢子游離出來（此法應用最廣）。4、小孢子純化對上述方法獲得的小孢子混合物進行分級過篩、梯度離心處理純化小孢子小孢子梯度離心前后比較

梯度離心前（小孢子形態(tài)、活力不一致）30%蔗糖梯度離心后（獲得均一的小孢子群體）花粉培養(yǎng)方式1、平板培養(yǎng)花粉置瓊脂固化培養(yǎng)基上培養(yǎng)。2、液體培養(yǎng)花粉懸浮在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，需震蕩，以利通氣。3、雙層培養(yǎng)花粉置固體-液體雙層培養(yǎng)基上培養(yǎng)。培養(yǎng)基制作方法：先鋪一層瓊脂固體培養(yǎng)基，凝固后，在表面加入少量液體培養(yǎng)基。

4、看護培養(yǎng)

利用花藥或花藥愈傷組織釋放出的活性物質促進花粉小孢子發(fā)育。5、微室培養(yǎng)利用小的蓋玻片和凹穴載玻片形成微室進行花粉培養(yǎng)6、條件培養(yǎng)基培養(yǎng)利用培養(yǎng)過花藥的液體培養(yǎng)基或含失活花藥提取物的培養(yǎng)基上培養(yǎng)?；ㄋ帡l件培養(yǎng)基、子房條件培養(yǎng)等。3.影響因素（1）基因型

植物基因型是影響雄核發(fā)育的最重要的因素之一。同一物種中的不同基因型對小孢子離體誘導反應差異較大。如在水稻中，秈稻花粉培養(yǎng)力遠低于糯稻，且在同一亞種范圍內，不同品種間也存在很大差異。（2）培養(yǎng)基和激素配比選擇

應用于水稻花培的基本培養(yǎng)基種類較多，如N6、馬鈴薯培養(yǎng)基、L8、SK3、土豆培養(yǎng)基、Miller、合5、通用、LS、White、MS、M8和改良M8等。同一材料用不同的培養(yǎng)基培養(yǎng)，表現(xiàn)出不同的花培效果。

培養(yǎng)基

三明市農科所生物技術中心以M8、N6和NB培養(yǎng)基，進行了不同水稻品種材料花培觀察比較試驗，結果從出愈率、綠苗分化率兩者比較，還是M8培養(yǎng)基較適合。馮雙華等用M8、合5和改良M8做基本培養(yǎng)基，以秈型雜交稻兩優(yōu)培九、培兩優(yōu)288、P88S/0293為材料，得出改良M8培養(yǎng)基表現(xiàn)出對不同的基因型材料有較廣的適應性和較強的綠苗誘導作用。激素配比

生長素類一般有2,4-D、NAA、IAA等，細胞分裂素一般有6-BA、KT等。使用傾向：復合激素

馮雙華等提出秈型材料用1.5mg/L2,4-D+1.5mg/LNAA誘導效果較好，2.0mg/L6-BA+0.25mg/LNAA+0.25mg/LIAA分化效果較好。

郭書巧等提出對秈粳交材料2mg/L2,4-D+1mg/LNAA+0.2mg/LKT為最佳的激素誘導配比，2.0mg/L6-BA+0.5mg/LKT分化效果較好。

結論：基因型不同，最適激素配比不同。一般認為，對秈型水稻采用復合激素較好。（3）田間取樣與預處理

取樣時間：晴天8:00~10:00，或16:00~18:00

取穗標準：：穗苞大而不破，劍葉與下一葉的葉枕距為5~10cm為宜

低溫處理：一般認為5~8度條件下，低溫預處理8~10d較好此外，還有其它處理方法：化學物質、射線、離心等。（4）培養(yǎng)條件溫度、光照、密度4.檢測方法1、染色體直接計數(shù)法

通常取根尖、莖尖等分生組織區(qū)進行制片，直接計數(shù)染色體數(shù)目。2、間接鑒定（1）掃描細胞光度儀鑒定（流式細胞儀）主要測定葉片單個細胞中DNA的含量確定細胞的倍性，材料的使用量可少到1cm2。（2）細胞形態(tài)學鑒定法 葉片保衛(wèi)細胞大小、單位面積上的氣孔數(shù)及保衛(wèi)細胞中葉綠體的大小和數(shù)目與倍性具有高度的相關性。（3）植株形態(tài)學鑒定法 單倍體植株瘦弱，葉片窄小，花小柱頭長，花粉粒小，不結實。（4）雜交鑒定法

自交或測交鑒定，看后代分離情況確定二倍體植株是來自小孢子還是體細胞。（5）分子標記鑒定

包括生化標記（如同工酶標記）和分子標記（如RFLP、RAPD、AFLP等）三.研究意義1.縮短育種周期：常規(guī)育種需4-6年獲得純系，而花培僅需一年。供體植株小孢子（n）花培花粉植株（n）雄核發(fā)育自然加倍人工加倍純合植株DH（2n）一年內獲得純系2.提高了目標基因型的選擇效率例子：二倍體供體植株基因型為AaBb，若要從后代中選擇基因為AAbb的純合單株常規(guī)方法：AAbb出現(xiàn)的概率為1/16，并且不能將AAbb與Aabb、aAbb區(qū)分開。

AB

aB

Ab

abAB

AABB AaBB AABb AaBbaB

aABB aaBB aABb aaBbAb

AabB AabB AAbb

Aabbab

aAbB aabB aAbb aabb2.提高了目標基因型的選擇效率例子：二倍體供體植株基因型為AaBb，若要從后代中選擇基因為AAbb的純合單株單倍體方法：AAbb出現(xiàn)的概率為1/4。

單倍體

二倍體

AB-------------------------->AABB

aB---------------------------->aaBB

Ab---------------------------->

AAbb ab---------------------------->

aabb供體親本AaBb花培3.有利于隱性基因控制性狀的選擇4.與生物工程技術結合，對育種學及遺傳基礎研究都有很重要的意義。四.前景展望1.供體植物生長條件的進一步提高和離體培養(yǎng)方法的改進，有可能最終消除或大大減少花培藥養(yǎng)基因型的限制。2.花藥或小孢子培養(yǎng)體系做為基因轉導的靶組織，可以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉化，外源基因在后代中不易丟失或發(fā)生致命的突變，是很有前途的研究領域。

1999，美國洛克菲勒基金會的Toneeson在Science撰文指出，現(xiàn)代生物技術育種的兩大支柱是基因工程育種和與分子標記相結合的加倍單倍體育種（DH育種），后者效率高，成本低，特別適合于發(fā)展中國家的國情。第四節(jié)玉米組織培養(yǎng)主要內容：植物組織培養(yǎng)的意義.玉米組織培養(yǎng)的目的.研究進展.目前玉米組織培養(yǎng)的主要方法.植物組織培養(yǎng)的意義植物組織培養(yǎng)可以生產大量的優(yōu)良無性系.細胞融合可打破種屬間的界限，克服遠緣雜交不親和性障礙.可獲得單倍體、三倍體及其它多倍體、非整倍體.組織培養(yǎng)的植物細胞也成為在細胞水平上分析研究的理想材料.玉米組織培養(yǎng)的目的玉米組織培養(yǎng)的目的是讓外植體能夠高頻率地誘導出愈傷組織，建立高效的體細胞再生體系，為玉米遺傳轉化和細胞工程研究創(chuàng)造有利條件。玉米組織培養(yǎng)的研究回顧Larue在1949年用甜玉米的胚乳作外植體，首次誘出玉米愈傷組織，但未獲得再生植株。1975年，Green和Phillips首次用A188的幼胚作外植體，誘導出二倍體愈傷組織，并再生得到第一株無性系植株。玉米組織培養(yǎng)的研究現(xiàn)狀現(xiàn)在已經能從多種外植體中誘導出愈傷組織，并再生出植株。例如：幼胚、花藥、幼穗等，其中幼胚是最易誘導，也是目前最常用的外植體。玉米組織培養(yǎng)的主要方法（簡介）1、玉米花粉和花藥組織培養(yǎng)玉米花粉和花藥的培養(yǎng)一般可獲取單倍體植物，有利于促進玉米遺傳育種工作的有效進展。2、玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng)

玉米植株的根尖和莖尖分生組織具有良好的分化性能。玉米莖尖和根尖離體培養(yǎng)有利于促進完整玉米植株的生長,并且在取材上不受季節(jié)限制。3、玉米幼胚的組織培養(yǎng)玉米幼胚屬于二倍體，且分生能力較強。幼胚是最易誘導，也是目前最常用的外植體，但幼胚取材的時間受到嚴格的季節(jié)限制。玉米幼胚組織培養(yǎng)的全過程1、準備工作接種室消毒準備誘導培養(yǎng)基（N6+肌醇+L-脯氨酸1.38g/L+蔗糖30g/L+瓊脂7g/L+水解酪蛋白0.5g/L+2,4-D2mg/mL)滅菌2、外體消毒及挑幼胚75%酒精擦玉米外層葉片至超凈工作臺，用75%酒精擦玉米外層葉片，剝一層擦一層至完用刀去掉1/3玉米籽粒挑幼胚接種到準備好的誘導培養(yǎng)基上（暗培養(yǎng)）3、繼代準備繼代培養(yǎng)基(N6+水解酪蛋白0.1g/L+L-脯氨酸0.69g/L+甘露醇20g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L+2,4-D1mg/ml)誘導兩次后，轉入繼代培養(yǎng)基每7天繼代一次，直至出透明、黃色、堅硬的愈傷組織，可用于轉化（一般繼代三次）4、轉化侵染培養(yǎng)（22--25℃，暗培養(yǎng)3天）恢復培養(yǎng)（暗培養(yǎng)3天）篩選培養(yǎng)分化培養(yǎng)生根培養(yǎng)壯苗5、移栽及管理移栽前，應對移栽用的基質進行滅菌。移栽前，可將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛煉2-3天，然后再開口練苗1-2天，以適應將來自然濕度的條件。玉米組培苗移栽時首先應把根部的培養(yǎng)基清洗干凈，以免受細菌或真菌污染而影響幼苗生長。移栽玉米莖尖組織培養(yǎng)的全過程1、準備工作接種室消毒準備培養(yǎng)基（MS+蔗糖30g/L+瓊脂6.5g/L)滅菌1、玉米種子消毒在500ml三角瓶中裝入200—300粒玉米種子用75%酒精清洗8min0.1%升汞5min無菌水洗2遍加入無菌水靜置8h0.1%升汞8min無菌水洗5遍裝入鈑盒28℃暗培養(yǎng)3天2、接種取出培養(yǎng)三天后的種子，接種到MS固體培養(yǎng)基中，根向下伸入培養(yǎng)基中，芽向上，芽萌發(fā)得不太好的繼續(xù)放進飯盒中再培養(yǎng)。接種到MS固體培養(yǎng)基中的芽放回28℃暗培養(yǎng)3-4天。3、玉米莖尖轉化取出MS固體培養(yǎng)基中的芽放在無菌濾紙上切根鑷子夾胚軸，在莖尖處用刀尖切半邊。在莖尖生長點劃一小口。轉化后，接種于MS培養(yǎng)基中，進行暗培養(yǎng)。3、移栽及其管理

培養(yǎng)3—5天后，將其移栽至至花盆中，其中注意事項與前面的相同。后期的管理也于前者相近。

濱州職業(yè)學院第五節(jié)馬鈴薯的脫毒培養(yǎng)目的要求:

(1)掌握馬鈴薯脫毒培養(yǎng)的大致過程，了解馬鈴薯脫毒苗的鑒定方法;(2)掌握馬鈴薯的生物學習性：

(3)熟悉微型薯的生產過程濱州職業(yè)學院微型薯濱州職業(yè)學院濱州職業(yè)學院

馬鈴薯是一種全球性的重要經濟作物。適應性廣，營養(yǎng)價值高，耐貯藏適運輸，既是一種重要的糧食作物也是一種調節(jié)市場供應的重要蔬菜。馬鈴薯原產于拉丁美洲，當被發(fā)現(xiàn)可以食用后，很快傳到世界各地，成為栽培很廣的一種作物。濱州職業(yè)學院但是，當發(fā)現(xiàn)從外地引種栽培1~2個周期后，明顯發(fā)現(xiàn)產量降低，植株變矮，并有卷葉的現(xiàn)象產生，經檢測證明這是由于病毒引起的退化現(xiàn)象。濱州職業(yè)學院

危害馬鈴薯的病毒有17種之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花葉病毒、紡錘形塊莖病毒等。由于馬鈴薯是無性繁殖作物，病毒逐代積累，日益嚴重，引起嚴重退化。馬鈴薯病毒可使塊莖產量減少50%~80%。濱州職業(yè)學院法國Morel和他的同事們，1955年從患病馬鈴薯植株中選取到了無病植株，為治療作物病毒開辟了新途徑。濱州職業(yè)學院一、特性和生物學習性1、馬鈴薯的形態(tài)特性根馬鈴薯的根系由初生根和匍匐根兩部分組成。莖馬鈴薯分地上部分和地下部分，地上主莖在形成16片葉子后，由花芽封頂，并在花的下部發(fā)生兩個側枝，從而構成馬鈴薯的主要同化系統(tǒng)。地下莖包括主莖的地下部分、匍匐莖和塊莖。濱州職業(yè)學院（3）葉馬鈴薯先出土的葉是初生葉，全緣，心臟形。以后發(fā)生的葉奇數(shù)羽狀全裂單葉，在葉柄基部與主莖相連處著生有托葉。（4）花馬鈴薯的花為聚傘花序，第一或第二花序開放，恰是塊莖強盛膨大之時，此時是需要不斷澆水的形態(tài)標志。

(5)果實、種子馬鈴薯果實為球形或橢圓形漿果。種子小。扁平腎形。種子可用來繁殖，但后代性狀分離大。濱州職業(yè)學院2、生物學習性馬鈴薯性喜冷氣候，不耐高溫和霜凍，解除休眠的塊莖4℃下發(fā)芽，發(fā)芽適溫為12~18℃。地上莖葉生長溫度為17~21℃，25℃以上時生長不良，葉變小，超過30℃和7℃以下莖葉停止生長，-1℃時受凍。塊莖形成要求晝溫14~24℃，夜溫12~14℃，土溫16~18℃。土溫20℃以上時塊莖形成緩慢，而且容易引起退化，高溫下養(yǎng)分多用于芽和匍匐莖生長不易形成塊莖，25~30℃時已經長成的塊莖也變成細長莖，結薯期要求12h左右的短日照和疏松、濕潤、肥沃以及通氣良好的土壤條件。土壤板結，薯塊表面粗糙和薯形不整。濱州職業(yè)學院馬鈴薯生產中普遍存在有種性退化問題，表現(xiàn)為植株長勢衰弱，株形矮化，分枝變少，薯塊變小，產量逐降低，造成退化的原因和學說多種，綜合而言，主要是薯塊生長錐細胞發(fā)生階段性衰老而導致種性退化，而病毒和細菌病害的侵染，以及肥水、營養(yǎng)條件不良等都會加劇其退化程度。濱州職業(yè)學院二、馬鈴薯脫毒技術馬鈴薯在營養(yǎng)繁殖時易受病毒的浸染，當條件適合時，病毒就會在植株內增殖，轉運和積累，隨著世代傳遞，病毒危害逐年加重，一般可造成減產50％以上。研究發(fā)現(xiàn)，有30多種病毒易感染馬鈴薯，并引起品種退化，嚴重影響馬鈴薯的生產。通過微莖尖組織培養(yǎng)技術能從馬鈴薯體內脫除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。濱州職業(yè)學院因此，采用組織培養(yǎng)技術，通過一定良種繁殖體系，生產優(yōu)質種薯，是保證馬鈴薯高產、穩(wěn)產的一項有效措施。濱州職業(yè)學院全國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積300多萬公頃，且有逐步增加的趨勢，每年需合格種薯45億公斤，脫毒原種4億公斤，脫毒小薯或微型薯45億粒。因此，脫毒馬鈴薯推廣具有廣闊的市場前景，對于增加農民收入和發(fā)展馬鈴薯產業(yè)化生產具有十分重要的意義。濱州職業(yè)學院我國的馬鈴薯平均單產僅為13.60噸/公頃，是世界單產最高國這瑞士（48.80噸/公頃）的1/4。造成如此大的差別，最主要的因素就是種薯質量差，品種布局不合理。采用脫毒快繁技術，種用脫毒種薯，一般可增產30-50%，甚至成倍增產，充分發(fā)揮品種的潛能，提高馬鈴薯生產能力。如果我國現(xiàn)有馬鈴薯播種面積的1/3（即114萬公頃）用脫毒種薯，就可年增產糧食100多億公斤。濱州職業(yè)學院我國在70年代用莖尖組織培養(yǎng)方法得到脫毒馬鈴薯試管苗，并成功地獲得脫毒復壯的馬鈴薯，開始了脫毒種薯的生產和推廣。"八五"期間，農業(yè)部在全國范圍內設立了6個馬鈴薯原原種基地建設和種薯生產項目，初步形成了脫毒草種薯生產體系。共推廣脫毒種薯36.5-40萬公頃，獲經濟效益近30.8億元。濱州職業(yè)學院我國已有許多科研、推廣單位開展了脫毒馬鈴薯的研究和生產，在生產上產生了一定的經濟效益和增產效果，但由于長期以來各自為政，技術方法和脫毒標準不盡統(tǒng)一，未能發(fā)揮出脫毒種薯應有的增產潛力。到目前為止，我國仍未建立國家級的脫毒種薯質量監(jiān)督和病毒檢測制度。

濱州職業(yè)學院1．脫毒種薯生產程序采用微莖尖組織培養(yǎng)的方法，誘導出苗，采用聯(lián)免疫吸附試驗法或指示植物方法鑒定馬鈴薯病毒和類病毒，經鑒定后，無主要病毒及類病毒的試管苗可定為脫毒試管基礎苗。濱州職業(yè)學院試管基礎苗在無菌條件下，采用固體、液體培養(yǎng)基相結合的方法，進行擴繁基礎苗，在防蟲網室栽植或封閉溫室扦插，生產出原原種（或稱脫毒小薯）。用原原種在一定隔離條件下產生原種1代，以后逐級稱為原種2代、良種1代、良種2代。濱州職業(yè)學院濱州職業(yè)學院2．莖尖培養(yǎng)脫毒（1）取材和培養(yǎng)一般多采用在室內發(fā)芽，芽經熱處理（38℃）2周。然后取頂芽或側芽1厘米的莖尖，在自來水下沖洗干凈，無菌條件下先用70％的酒精浸潤組織15-20秒，再用2％的次氯酸鈉溶液浸泡4--5min，然后用無菌水沖洗3次。濱州職業(yè)學院把消毒好的芽放在解剖鏡下仔細剝離，逐層剝去幼葉，露出圓滑的生長點，可以留1-2個葉原基，0.2—0.3毫米，隨即接種于MS液體培養(yǎng)基上，每升加0.1mgNAA、0.2mgGA3、0.5mgBA，2%蔗糖，pH值5.8。培養(yǎng)條件：21~25℃、2000-3000lx、12h/d。2-3周愈傷，4-5周綠點，3--6月長成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。（2）繼代和生根培養(yǎng)成功的馬鈴薯脫毒苗，經ELISA（試劑盒）鑒定后（試管苗應每3月檢測一次，每年4次）鑒定后，采用固體、液體培養(yǎng)基相結合方法擴繁。取試管苗單節(jié)切段扦插在（或平放）固體培養(yǎng)基上，每瓶可插20個左右莖段，經20d左右發(fā)育成5~10cm高小植株，繼續(xù)進行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，試管苗多接種在液體培養(yǎng)基上，進行淺層靜止液體培養(yǎng)。濱州職業(yè)學院培養(yǎng)基：MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸鈣10，3%蔗糖，20-25度，3000-4000LX，14-16小時光照，