哮喘兒童支氣管肺泡灌洗液IL-17、IL-8和VEGF水平測定及意義趙靈芝;盧美萍目的:Th17IL-17T(VEGF)等的水平變化,探討其在哮喘急性發(fā)作兒童氣道炎20092-20091288,n=52)、非喘息組(肺炎組,n=25)及對照組(n=11)BALF,進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分類,ELISABALFIL-17、IL-8、VEGF、IL-4、IFN-γIL4/IFN-γIL-17IL-8P＜0.05)IL-82IL-17P＞0.05);與肺炎組和對照組VEGFP＜0.01)VEGFIL-4,IFN-γIL-4/IFN-γP＞0.05)P＜0.01),而哮喘組與肺炎組患兒的中性粒細(xì)胞百分比無顯著差異(P0.05).結(jié)論:IL-17、IL-8VEGF,Th17ToinvestigatethemechanismofairwayinflammationinchildrenwithasthmabydeterminingthelevelsofIL-17,IL-8andvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)inbronchoalveolarlavagefluid(BALF).METHODS:Eighty-eightchildrenwereenrolledinthestudyanddividedintoasthmagroup(n=52),pneumoniagroupn=25)andcontrolgroup(n=11).BALFwerecollectedfromall88cases.ThelevelsofIL-17,IL-8.VEGF,IL4andIFN-γinBALFweremeasuredbyELISA.ThecelltypesinBALFweredetermined.RESULTS:Comparedwiththecontrol,thelevelsofIL-17andIL-8weresignificantlyelevatedinasthmagroupandpneumoniagroup(allP＜0.05).ThelevelofIL-8(P＜0.05)inthepatientswithasthmawaslowerthanthatinthepneumoniapatients.NostatisticaldifferenceoftheIL-17levelbetweenasthmagroupandpneumoniaegroupwasobserved(P＞0.05).Comparedwithpneumoniagroupandcontrolgroup,thelevelofVEGFwassignificantlyincreasedinasthmagroup(allP＜0.01),andtheVEGFlevelamongcontrolgroupandpneumoniagroupswasalmostsimilar(P＞0.05).ThelevelsofIL-4andIFN-γ,andratioofIL-4/IFN-γamonggroupswerenotstatisticallydifferent.ThepercentageofneutrophilsinBALFwassignificantlyhigherinasthmagroupandpneumoniagroupthanthatinc:ontrolgroup(allP＜0.01).CONCLUSION:IL-17,IL-8andVEGFplayimportantrolesinairwayinflammationinchildrenwithasthma.Th17cellsmayparticipateinthepathogenesisofasthmainchildren.【期刊名稱】《中國病理生理雜志》【年(卷),期】2011(027)003【總頁數(shù)】4頁(P577-580)【關(guān)鍵詞】哮喘;兒童;支氣管肺泡灌洗液;白細(xì)胞介素17;細(xì)胞因子類【作者】趙靈芝;盧美萍【作者單位】浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院呼吸科,浙江,杭州,310003;浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬兒童醫(yī)院呼吸科,浙江,杭州,310003【正文語種】中文【中圖分類】R562.2+5支氣管哮喘(簡稱哮喘)是由多種炎癥細(xì)胞、炎癥介質(zhì)及細(xì)胞因子參與的常見兒童氣道炎癥性疾病。2009GINA數(shù)據(jù)顯示，全球約有3億人口罹患哮喘，根據(jù)不同國家的不同診斷標(biāo)準(zhǔn)，患病率高達(dá) 1%-18%，包括哮喘的兒童、成人以及喘息患兒但是，關(guān)于兒童哮喘的發(fā)生機(jī)制仍未完全明了，兒童哮喘是否存在氣道重塑尚存在爭議。隨著兒童纖維支氣管鏡的開展，與血標(biāo)本相比，支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolarlavagefluid，BALF)的獲得為我們的研究提供了更直接可靠的數(shù)據(jù)。Th17細(xì)胞是以分泌IL-17為主的新型T細(xì)胞亞群，近年研究發(fā)現(xiàn)其與過敏性疾病的炎癥反應(yīng)相關(guān)；血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)過量表達(dá)可促使氣道黏膜血管的新生和數(shù)目增多，參與哮喘氣道的血管重塑過程[1]，但關(guān)于其在兒童哮喘急性發(fā)作中的作用則報道較少。本研究將通過觀察BALFIL-17、VEGF、IL-8、IL-4IFN-γIL-171對象88例行纖維支氣管鏡檢查的患兒，均為我院2009年2月-2009年12月期間的3(1)哮喘急性發(fā)作組(哮喘組，n=5237157-1281112008狹窄等先天性氣道異常引起的喘息；(2)非喘息組(肺炎組，n=25)：其中男18例，女7例，年齡11個月-12歲11個月，平均年齡2歲?；純喝朐簳r均符合肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，但無喘息癥狀，聽診無哮鳴音，既往無喘息或哮喘病史，無個人及家族過敏史；(3)對照組(n=11)：其中男8例，女3例，年齡10個月-9歲6個月，平均年齡2歲1個月，6例經(jīng)纖維支氣管鏡檢查診斷為支氣管異物，病程均小于3d，另5例為甲狀腺囊腫或眼瞼外翻外科手術(shù)非感染患兒，既往均無喘息或哮喘病史，無個人及家族過敏史，除外心、肝、腎、血液等系統(tǒng)的慢性疾病。各組間年齡、性別比較，差異均無顯著(P>0.05)。方法病史采集患兒入院時詳細(xì)詢問病史，包括個人及家族過敏史，既往喘息史。BALF的收集及處理患兒入院2-5d370.5mL/kg36024℃、4000r/min心15min。離心后取上清液，凍存于-80℃冰箱中待檢，沉淀用于細(xì)胞學(xué)分類計(jì)數(shù)。ELISABALFIL-17、IL-8、VEGF、IL-4IFN-γIL-17R&D。IL-8、VEGFRayBiotech。IL-4IFN-γELISAng/L。BCABALFBicinchoninicacid(BCA)法測定BALFgprotein/L。BALF10s12-3min15min2-3min1胞的胞質(zhì)呈無色或極淺的淡紅色，有許多彌散分布的細(xì)小的淺紅或淺紫色的特有顆粒,細(xì)胞核呈桿狀或分葉狀；嗜酸性粒細(xì)胞的胞質(zhì)充滿粗大的鮮紅色嗜酸性顆粒；巨噬細(xì)胞比前2種細(xì)胞略大，胞核較小，胞質(zhì)呈嗜酸性，有明顯的吞噬小泡；淋巴細(xì)胞一般形態(tài)較小，胞核大而圓，染色深，胞質(zhì)少，呈天藍(lán)色。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理由于數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布(IL-4IL-17、IL-8、VEGF、IL-4IFN-γM(Qdng/gprotein；細(xì)胞學(xué)分類數(shù)據(jù)以M(QdSPSS(16.0)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，采用秩和檢驗(yàn)。BALFIL-17與對照組比較，哮喘組患兒和肺炎組患兒的IL-17水平顯著增高[35.85(10.75)ng/gproteinvs42.95(24.1)ng/gprotein，35.85(10.75)ng/gproteinvs42.95(16.05)ng/gprotein，均P<0.05]；而哮喘組與肺炎組患兒IL-17[42.95(24.1ng/gproteinvs42.95(16.05ng/gprotein，P>0.05]，見圖1A。BALFIL-8與對照組比較，哮喘組和肺炎組患兒IL-8水平明顯增高[515.25(508.90)ng/gproteinvs945.05(1277.35)ng/gprotein，515.25(508.90)ng/gproteinvs1544.85(1429.50)ng/gprotein，均P<0.05]；而肺炎組IL-8水平較哮喘組增高更顯著[1544.85(1429.50)ng/gproteinvs945.05(1277.35)ng/gprotein，P<0.05),見圖1B。BALFVEGF哮喘組患兒VEGF水平較肺炎組及對照組均明顯增高[1250.45(1353.30)ng/gproteinvs643.00(900.90)ng/gprotein，1250.45(1353.30)ng/gproteinvs561.80(979.35)ng/gprotein，均P<0.01]，而肺炎組與對照組患兒VEGF水平無顯著差異[643.00(900.90)ng/gproteinvs561.80(979.35)ng/gprotein，P>0.05]，見圖1C。BALFIL-4、IFN-γIL-4/IFN-γ對照組、哮喘組及肺炎組患兒的IL-4水平分別為77.95(17.75)ng/gprotein、80.30(16.45)ng/gprotein和78.40(12.80)ng/gprotein，3組之間比較無顯著差異，均P>0.05；IFN-γ水平分別為36.50(15.75)ng/gprotein、41.25(6.90)ng/gprotein和42.65(20.15)ng/gprotein，3組之間比較無顯著差異，均P>0.05；IL-4/IFN-γ比值分別為0.46(0.25)、0.54(0.15)和0.57(0.19)，3組之間比較無顯著差異，均P>0.05，見圖1D。5各組BALF細(xì)胞學(xué)分類與對照組比較，哮喘組和肺炎組患兒BALF中性粒細(xì)胞百分比明顯增高[1.91(1.64)%vs22.38(25.22)%，1.91(1.64)%vs29.12(25.15)%，均P<0.01]，而哮喘組與肺炎組患兒比較差異無顯著[22.38(25.22)%vs29.12(25.15)%，P>0.05]；與對照組比較，哮喘組和肺炎組患兒BALF巨噬細(xì)胞百分比顯著降低[88.64(2.42)%vs64.12(25.46)%，88.64(2.42)%vs50.36(25.99)%，均P<0.01]，而哮喘組患兒巨噬細(xì)胞百分比高于肺炎組[50.36(25.99)%vs64.12(25.46)%，P<0.05]；與肺炎組比較，哮喘組和對照組患兒BALF淋巴細(xì)胞百分比均明顯降低[18.76(19.40)%vs11.75(8.24)%，18.76(19.40)%vs9.09(2.47)%，均P<0.05]，哮喘組與對照組比較差異無顯著[11.75(8.24vs9.09(2.47P>0.05]BALF0.27(0.471.94(4.791.76(2.28，32。以往研究者認(rèn)為，哮喘是由Th2細(xì)胞和IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)性慢性氣道疾病，其特點(diǎn)是嗜酸性粒細(xì)胞浸潤的氣道炎癥[3]，小鼠哮喘模型的BALF中嗜酸性細(xì)胞比例可達(dá)60%-70%，而中性粒細(xì)胞不足5%-10%[4]。但目前越來越多的學(xué)者致力于中性粒細(xì)胞參與為主的“非Th2型哮喘”的研究，認(rèn)為中性粒細(xì)胞參與哮喘的急性發(fā)病及惡化過程[5]。本研究結(jié)果也顯示，與對照組比較，哮喘組兒童BALF的中性粒細(xì)胞顯著增高，而嗜酸性粒細(xì)胞變化不明顯，表明中性粒細(xì)胞而非嗜酸性粒細(xì)胞參與的氣道炎癥可能是導(dǎo)致兒童哮喘急性發(fā)作的主要原因之一。另一方面，感染而非過敏可能是兒童哮喘急性發(fā)作的誘因。比例顯著增高[6]IL-8IL-8IL-8，形成正反饋，進(jìn)一步加重氣道炎癥，導(dǎo)致組織破壞[7]。最新研究還發(fā)現(xiàn)，另一新型的細(xì)胞因子，Th17IL-17IL-17[8]OVA[9]Th2[10]。因此，IL-17Th2IL-8TNFIL-8[11]。本研究結(jié)果顯示，哮喘BALFIL-17IL-8IL-8IL-17肺炎組患兒IL-8水平顯著高于哮喘組和對照組，表明IL-17和IL-8也參與非哮喘兒童的氣道炎癥。β(transforminggrowthfactor-βTGF-β)蛋白家族和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases,MMPs)在哮喘的氣道重VEGF[1]研究表明，VEGF[12]研究還顯示，VEGFTh2VEGFKim[13]研究發(fā)LPSVEGFTh1和Th17細(xì)胞分化因子，促使幼稚TTh1Th17盡管以往研究表明，Th2BALFIL-4IL-4/IFN-γ[14]。但最新有研究表明，Th2Th1Th17BALFTh2型細(xì)胞因子IL-4、Th1型細(xì)胞因子IFN-γ以及IL-4/IFN-γ比值未見明顯上升，可能與本組病例年齡偏小(大多在3歲以內(nèi))、而且嬰幼兒喘息大多為感染誘發(fā)有關(guān)，也進(jìn)一步說明哮喘可能存在Th2介導(dǎo)的嗜酸性哮喘以外的、如Th17介導(dǎo)的非嗜酸粒細(xì)胞性哮喘的炎癥反應(yīng)。綜上所述，IL-17和IL-8在哮喘急性發(fā)作兒童氣道炎癥中發(fā)揮重要作用，Th17細(xì)胞可能參與兒童哮喘急性發(fā)作的發(fā)病機(jī)制，作用機(jī)制可能與其誘導(dǎo)氣道中性粒細(xì)胞浸潤有關(guān)。同時，VEGF參與哮喘急性發(fā)作患兒的氣道重塑?！鞠嚓P(guān)文獻(xiàn)】RibattiD,PuxedduI,CrivellatoE,etal.Angiogenesisinasthma[J].ClinExpAllergy,2009,39(12):1815-1821.[J]2008，46(10)：745-753.BogaertP,TournoyKG,NaessensT,etal.Whereasthmaandhypersensitivitypneumonitismeetanddiffer:noneosinophilicsevereasthma[J].AmJPathol,2009,174(1):3-13.NakaeS,LunderiusC,HoLH,etal.TNFcancontributetomultiplefeaturesofovalbumin-inducedallergicinflammationoftheairwaysinmice[J].JAllergyClinImmun,2007,119(3):680-686.ObokiK,OhnoT,SaitoH,etal.Th17andallergy[J].AllergolInt,2008,57(2):121-134.KimYK,OhSY,JeonSG,etal.Airwayexposurelevelsoflipopolysaccharidedeterminetype1versustype2experimentalasthma[J].JImmunol,2007,178(8):5375-5382.IL-18、IL-16、IL-8、嗜酸性粒細(xì)胞趨化因子水平和類糜蛋白酶活性的測定[J].中國病理生理雜志，2005，21(11)：2201-2204.WakashinH,HiroseK,IwamotoI,etal.RoleofIL-23-Th17cellaxisinallergicai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