動物胚胎移植技術(shù)鄭州牧業(yè)工程高等專科學校主講人：張長興

動物繁殖新技術(shù)系列講座動物胚胎移植技術(shù)鄭州牧業(yè)工程高等?？茖W校主講人：張長興目錄第一節(jié)胚胎工程概述第二節(jié)胚胎移植的原理第三節(jié)胚胎移植的技術(shù)程序第四節(jié)牛的胚胎移植動物繁殖新技術(shù)系列講座目錄第一節(jié)胚胎工程概述動物繁殖新技術(shù)系列講座第一節(jié)胚胎移植概述1.胚胎移植的歷史2.胚胎移植技術(shù)的應用3.胚胎移植的成本4.胚胎移植的經(jīng)濟效益動物胚胎移植技術(shù)第一節(jié)胚胎移植概述1.胚胎移植的歷史動物胚胎移植技術(shù)1.胚胎移植的歷史胚胎移植概述1.胚胎移植的歷史胚胎移植概述1.1初始階段：1890-1900W.Heape將安哥拉兔和荷蘭兔的受精卵分別移植到比利時兔的輸卵管內(nèi)，分別獲得仔兔2只。胚胎移植的歷史1.1初始階段：1890-1900W.Heape將安哥拉1.2初級階段：1900-1950主要由英美科學家在家兔、綿羊、山羊小家畜方面研究，成功率35%左右。胚胎移植的歷史1.2初級階段：1900-1950主要由英美科學家在家兔、1.3發(fā)展階段：1950-1970日本首次在牛胚胎移植上成功，之后日、美采用非手術(shù)法移植成功。胚胎移植成功率達70-80%胚胎移植的歷史1.3發(fā)展階段：1950-1970日本首次在牛胚胎移植上1.4實用化初始階段：1970-1980加美開始成立牛胚胎移植公司，1973年牛凍胚移植成功（英）胚胎移植的歷史1.4實用化初始階段：1970-1980加美開始成立牛胚1.5實用化研究階段：1982-大規(guī)模胚胎移植、核移植、嵌合體、胚胎分割、性別鑒定、體外受精在英美日德廣泛開展?？寺⊙蛘Q生。胚胎移植的歷史1.5實用化研究階段：1982-大規(guī)模胚胎移植、核移植、嵌2.胚胎移植的應用范圍在家畜改良方面的應用在特定品種擴繁上的應用在動物生物多樣性上的應用其它方面應用：轉(zhuǎn)基因動物、性別控制、體外受精胚胎移植概述2.胚胎移植的應用范圍在家畜改良方面的應用胚胎移植概述2.1在家畜改良方面的應用人工授精技術(shù)可成幾十到幾百倍地提高了優(yōu)秀種公畜的配種效能。但對優(yōu)秀母畜來說，受其產(chǎn)仔數(shù)和世代間隔的限制，尤其是牛羊等繁殖力較低的畜種更是如此。通過超數(shù)排卵和胚胎移植技術(shù)（multipleovulationandembryotransfer:MOET)牛羊的生長性狀年遺傳進展可比正常繁殖提高80%和70%；產(chǎn)奶性狀提高33%。胚胎移植的應用范圍2.1在家畜改良方面的應用人工授精技術(shù)可成幾十到幾百倍地提高2.2在特定品種擴繁上的應用牛羊等低繁殖力家畜，從引進到形成一個純種群體需要7-8個世代，15-20年。而采用MEOT法，一次就可獲得一個純種群體80年代初，美、澳、新從歐洲引進的大型肉牛品種均采用胚胎移植技術(shù)擴繁2000年前后，我國的波爾山羊也是采用胚胎移植進行擴繁的胚胎移植的應用范圍2.2在特定品種擴繁上的應用牛羊等低繁殖力家畜，從引進到形成2.3在動物生物多樣性上的應用在保護動物遺傳資源，提高家畜生產(chǎn)性能，挽救瀕臨滅絕的野生動物方面，胚胎移植技術(shù)越越來發(fā)揮出重要作用。冷凍能夠很好地保存瀕臨滅絕動物的胚胎或生殖細胞，但該種動物雌性個體的減少，也是這種動物的胚胎或生殖細胞無法得到移植，科學家開始研究在該種動物的亞種或親緣種中試驗，并取得一些成功。如斑馬胚胎移植給馬，蒙古馬胚胎移植給驢，白肢野牛移植給荷斯坦牛。胚胎移植的應用范圍2.3在動物生物多樣性上的應用在保護動物遺傳資源，提高家畜生2.4其它方面應用胚胎移植是克隆技術(shù)的必須過程體外受精必須借助胚胎移植實現(xiàn)“試管嬰兒的繼續(xù)發(fā)育轉(zhuǎn)基因及動物生物反應器的研究也必須借助胚胎移植胚胎移植的應用范圍2.4其它方面應用胚胎移植是克隆技術(shù)的必須過程胚胎移植的應用3.胚胎移植的成本種母畜購入或培育成本及飼養(yǎng)費，胚胎成本分攤配種費激素：FSH、LH、PG手術(shù)費：手術(shù)藥品及耗材、手術(shù)輔助人員報酬等技術(shù)費：技術(shù)人員約定報酬其它：實驗室配置、差旅費、招待費胚胎移植概述3.胚胎移植的成本種母畜購入或培育成本及飼養(yǎng)費，胚胎成本分攤4.胚胎移植的經(jīng)濟效益胚胎移植是一個技術(shù)過程復雜，各個環(huán)節(jié)環(huán)環(huán)相扣，任何一個不能出現(xiàn)失誤的系統(tǒng)工程。影響胚胎移植成功率的因素很多，同時，其運作成本較高。這使其應用中存在經(jīng)濟效益上的高風險性。如果不是基于急需擴群、供體高經(jīng)濟價值、育種目的，一般盡量采用自然繁殖。在特殊情況下，如供種初始階段，少量優(yōu)秀個體的擴增，胚胎移植可創(chuàng)造較好的經(jīng)濟效益。胚胎移植概述4.胚胎移植的經(jīng)濟效益胚胎移植是一個技第二節(jié)胚胎移植的生理基礎及原則1.胚胎移植的生理學基礎2.胚胎移植的基本原則動物胚胎移植技術(shù)第二節(jié)胚胎移植的生理基礎及原則1.胚胎移植的生理學基礎動1.胚胎移植的生理學基礎成年母畜卵巢上存在數(shù)千到上萬個卵泡，在外源激素作用下，每個發(fā)情期的卵泡發(fā)育和排卵數(shù)可達十數(shù)個每個發(fā)情周期生殖器官都有一個孕向發(fā)育早期胚胎處于游離狀態(tài)胚胎發(fā)育不存在免疫問題胚胎發(fā)育到一定階段會與子宮發(fā)生生理和組聯(lián)系胚胎的遺傳性不受受體的影響胚胎移植的生理基礎及原則1.胚胎移植的生理學基礎成年母畜卵巢上存在數(shù)千到上萬個卵泡，2.胚胎移植的基本原則胚胎移植前后所處的環(huán)境的同一性供體和受體在分類學上的相同屬性動物生理上的一致性：受體和供體在發(fā)情時間上的同期性動物解剖位置上的一致性：空間環(huán)境的一致性胚胎的發(fā)育期限：必須處于周期黃體期內(nèi)胚胎的質(zhì)量：胚胎必須是正常的，并在處理過程中不受不良因素的影響至目錄胚胎移植的生理基礎及原則2.胚胎移植的基本原則胚胎移植前后所處的環(huán)境的同一性至目錄第三節(jié)胚胎移植的技術(shù)程序1.供體和受體的選擇2.超數(shù)排卵處理3.供體母畜的配種4.胚胎的收集5.胚胎的檢查6.胚胎的保存與培養(yǎng)7.胚胎的移植8.供體和受體的術(shù)后觀察動物胚胎移植技術(shù)第三節(jié)胚胎移植的技術(shù)程序1.供體和受體的選擇動物胚胎移植1.供體和受體的選擇供體應具有相當高的育種價值供體生殖機能應處于較高的狀態(tài)：產(chǎn)后60天以上，無生殖系統(tǒng)疾病，體質(zhì)強健受體應容易購買，繁殖性能好，對地方適應性強，體型中上等，非優(yōu)良品種受體健康狀況良好，已進入發(fā)情季節(jié)供受體發(fā)情時間應接近或一致胚胎移植的技術(shù)程序1.供體和受體的選擇供體應具有相當高的育種價值胚胎移植的技術(shù)2.超數(shù)排卵處理意義：讓每個供體提供更多的胚胎處理時間：牛：預計自然發(fā)情時間的前4天，或發(fā)情周期的第16-17天羊：發(fā)情周期的第12-15天，促性腺激素處理的第二天或第三天，注射PG胚胎移植的技術(shù)程序2.超數(shù)排卵處理意義：讓每個供體提供更多的胚胎胚胎移植的技3.供體母畜的配種必須用優(yōu)秀的種公畜進行多次配種，一般隔8-12小時進行一次配種，直到發(fā)情結(jié)束配種前應對種公畜的精液進行質(zhì)量檢查可優(yōu)秀種公畜不足時，可考慮首次采用本交，以后采用人工授精，也可以全部采用人工授精胚胎移植的技術(shù)程序3.供體母畜的配種必須用優(yōu)秀的種公畜進行多次配種，一般隔8-4.胚胎的收集胚胎沖洗液的配制：杜氏磷酸緩沖液PBS，布林斯特液SOF合成輸卵管液手術(shù)法收集胚胎輸卵管沖胚：順向沖胚、逆向沖胚子宮角沖胚非手術(shù)法收集胚胎二路法三路法胚胎移植的技術(shù)程序4.胚胎的收集胚胎沖洗液的配制：杜氏磷酸緩沖液PBS，布林斯收集到的沖洗液靜置，沖洗液分離揀胚：將胚胎移至培養(yǎng)液或保存液中胚胎鑒定：根據(jù)透明帶、胚胎細胞、發(fā)育階段及細胞在透明帶中的比例確定胚胎級別胚胎移植的技術(shù)程序5.胚胎的檢查收集到的沖洗液靜置，沖洗液分離胚胎移植的技術(shù)程序5.胚胎的檢胚胎的降溫：使胚胎停止發(fā)育，延長其體外生存時間體外培養(yǎng)：將胚胎置于體溫條件下，在培養(yǎng)液中，使其繼續(xù)發(fā)育胚胎冷凍：通過一定的處理程序，將胚胎降溫冷凍后，保存于液氮中胚胎移植的技術(shù)程序6.胚胎的保存胚胎的降溫：使胚胎停止發(fā)育，延長其體外生存時間胚胎移植的技術(shù)手術(shù)法移植非手術(shù)法移植胚胎移植的技術(shù)程序7.胚胎移植手術(shù)法移植胚胎移植的技術(shù)程序7.胚胎移植供體和受體的抗炎處理健康狀況檢查返情狀況檢查妊娠檢查及妊娠確定胚胎移植的技術(shù)程序8.供體和受體的術(shù)后觀察及處理供體和受體的抗炎處理胚胎移植的技術(shù)程序8.供體和受體的術(shù)后觀動物胚胎移植技術(shù)第四節(jié)牛的胚胎移植一、供體牛的選擇二、供體牛的飼養(yǎng)三、超數(shù)排卵處理四、采卵五、檢卵六、胚胎的鑒定和分級七、胚胎的移植八、妊娠診斷動物胚胎移植技術(shù)第四節(jié)牛的胚胎移植一、供體牛的選擇五、檢1.應符合本品種標準，具有較高的生產(chǎn)性能。2.1.5～8歲，體格健壯，無遺傳性疾病，繁殖機能正常。3.產(chǎn)犢記錄清楚，無流產(chǎn)史，產(chǎn)后有兩次正常發(fā)情記錄。4.生殖器官正常，無繁殖疾病。5.重復超數(shù)排卵間隔60d左右。最多連續(xù)處理4次后，自然繁殖后再使用。凡2次超數(shù)排卵反應差的母牛不再用作供體。6.供體牛的超數(shù)排卵處理應在情期的第9～13d進行。凡黃體發(fā)育不良，卵巢靜止的母牛不宜用。7.應選擇性情溫順的母牛作供體，以便于操作。

牛的胚胎移植一、供體牛的選擇1.應符合本品種標準，具有較高的生產(chǎn)性能。牛的胚胎移植一、供牛的胚胎移植二、供體牛的飼養(yǎng)管理1.良好的營養(yǎng)狀況:要保證給供體牛足夠的優(yōu)質(zhì)干草、青貯或多汁飼料、精料以及維生素和礦物質(zhì)，并供給清潔的飲水和鹽，做到合理飼養(yǎng)，精心管理。2．供體牛在采卵前后要特別注意保持良好的飼管環(huán)境，不得任意變換飼草；飼料和管理程序，避免因過強的應激所造成的神經(jīng)緊張狀態(tài)。

牛的胚胎移植二、供體牛的飼養(yǎng)管理1.良好的營養(yǎng)狀況:要保證給三、超數(shù)排卵處理牛的胚胎移植三、超數(shù)排卵處理牛的胚胎移植1.FSH法促卵泡素(FSH)減量注射法：供體牛在發(fā)情后的9～

13d肌注FSH，早晚各一次，間隔12h，分4d減量注射。在第3d時同時宮注PGF2α2.0～2.4mg或氯前列烯醇0.6mg。如使用國產(chǎn)FSH總劑量為325單位時，處理方法如附圖所示。超排劑量根據(jù)不同廠家激素確定適宜劑量，國產(chǎn)激素320～360單位，進口激素28～36mg。超數(shù)排卵處理1.FSH法促卵泡素(FSH)減量注射法：供體牛在

（三）采卵

激素的選擇與鑒定（三）采卵激素的選擇與鑒定牛超數(shù)排卵示意圖超數(shù)排卵處理牛超數(shù)排卵示意圖超數(shù)排卵處理2.PMSG法孕馬血清促性腺激素(PMSG)處理法在情期的11～12d，一次肌注PMSG2500～30001U，48h后宮注PGF2α2.4mg。發(fā)情后約18h肌注等量的抗PMSG。超數(shù)排卵處理2.PMSG法孕馬血清促性腺激素(PMSG)處理法超數(shù)排卵處3.發(fā)情觀察和配種PGF2α處理后40～48h，大部分處理牛發(fā)情。通常要求從注PG第2d傍晚開始觀察發(fā)情，至少早晚各觀察一次。在觀察到接受爬跨后4～6h進行第一次輸精，間隔12h后第二次輸精。每次有效精子數(shù)不得少于50×106，輸入兩側(cè)子宮角或子宮體。注意輸精時不得觸摸卵巢。超數(shù)排卵處理3.發(fā)情觀察和配種PGF2α處理后40～48h，四、采卵

牛的胚胎移植四、采卵牛的胚胎移植1．采卵時間以發(fā)情日為第0d，在第5～6d檢查卵巢確定黃體數(shù)，以便于安排受體頭數(shù)。第7d(或第6～8d)非手術(shù)回收卵。

采卵1．采卵時間采卵2．器械和沖卵液的準備滅菌處理過的沖卵管用PBS液沖洗2～3次，插入鋼芯，檢查氣球。在無菌間用導管連接吊瓶和集卵杯灌流裝置。裝入PBS液的吊瓶在37℃水浴中預溫待用。準備好必要的麻醉劑、注射器、酒精棉球和沖洗消毒劑等。

采卵2．器械和沖卵液的準備采卵3．供體牛的保定和麻醉供體牛保定完畢后，在第一、二尾椎骨間酒精消毒，用2%普魯卡因3～5ml作硬膜外麻醉，或肌注2%靜松靈lml。

（三）采卵

采卵3．供體牛的保定和麻醉供體牛保定完畢后，在第一、二尾椎4．外陰清洗、消毒麻醉后將牛尾豎直綁在保定架上，清除糞便，用清水沖洗會陰部及外陰，再用高錳酸鉀液沖洗消毒，用滅菌衛(wèi)生紙擦干，最后用酒精棉球消毒外陰部。

采卵4．外陰清洗、消毒麻醉后將牛尾豎直綁在保定架上，清除糞便，用5．沖卵管的插入和沖卵部位助手將準備好的沖卵管交給術(shù)者的右手，術(shù)者左手食指和拇指壓開陰門插入沖卵管，再將左手伸入直腸，仔細小心地誘導沖卵管經(jīng)子宮頸進入一側(cè)子宮角至大彎處，抽出少許鋼芯，再將沖卵管向前推，使其尖端靠近子宮角深部。由助手持30ml注射器一次推入10ml空氣，然后按術(shù)者要求，以1ml計數(shù)充氣。根據(jù)子宮大小及沖卵管在子宮的位置確定充氣量，一般青年牛充氣14～16ml，經(jīng)產(chǎn)牛為18～25ml。沖卵管固定后抽出鋼芯，開始灌流。

（三）采卵

采卵5．沖卵管的插入和沖卵部位（三）采卵采卵6．灌流方法將吊瓶掛在距外陰部1.0m高處，接通三通管(Y型)和沖卵管。術(shù)者用右手控制進流和出流開關，每次灌注30～50ml，由少到多，每側(cè)總量為300～500ml。左手通過直腸輔助按摩子宮角。每側(cè)子宮角沖8～10次?；蛘哂?0ml注射器，每次注入30～50ml的PBS沖卵液，分次沖洗子宮角，回收后注入加蓋量筒。另一側(cè)子宮角的沖洗是由術(shù)者右手拉直沖卵管，助手小心插入鋼芯。術(shù)者的左手在直腸內(nèi)誘導鋼芯插穩(wěn)后，給氣球放氣。術(shù)者再將沖卵管插入另一側(cè)子宮角，用同樣的方法沖洗。全過程需在室溫(20℃左右)操作。

（三）采卵

采卵6．灌流方法將吊瓶掛在距外陰部1.0m高處，接通三通管(Y型（三）采卵

采卵（三）采卵采卵7．術(shù)后處理兩側(cè)子宮角沖卵完成后，從氣球放出一部分空氣，將沖卵管抽至子宮體灌注土霉素溶液(3g土霉素粉溶于100ml滅菌雙蒸水或生理鹽水)或10ml青霉素(80萬u)和鏈霉素(100萬u)，拔出沖卵管。

（三）采卵

采卵7．術(shù)后處理兩側(cè)子宮角沖卵完成后，從氣球放出一部分空氣，將沖五、檢卵

（三）采卵

五、檢卵（三）采卵1．過濾集卵杯(日本產(chǎn))法回收結(jié)束后，用帶4G針頭的注射器沖洗濾網(wǎng)2～3次，吸去杯中的泡沫，置實體顯微鏡下檢查。

（三）采卵

檢卵1．過濾集卵杯(日本產(chǎn))法回收結(jié)束后，用帶4G針頭的注射器沖2．過濾杯(美國產(chǎn))法濾去沖卵液，將過濾杯中留下的30～50ml倒入平皿，用沖卵液沖洗過濾杯2～3次，一并倒入平皿，置鏡下檢查。

（三）采卵

檢卵2．過濾杯(美國產(chǎn))法濾去沖卵液，將過濾杯中留下的30～503．沉淀法(或濾網(wǎng)吸液法)將回收的沖卵液注入1000ml量筒，在20～25℃下靜置20～30min(min)，用導管吸去上層液體?；蛘甙春脼V網(wǎng)，用導管在濾網(wǎng)上吸去上部沖卵液，將殘留的80～100ml倒入平皿內(nèi)檢卵。（三）采卵

檢卵3．沉淀法(或濾網(wǎng)吸液法)將回收的沖卵液注入1000ml量筒4．檢卵前的準備在酒精燈上拉好內(nèi)徑為200～300um的玻璃吸管和玻璃棒，在吸管上連接乳膠管(也可用1ml一次性注射器與一支采血管接一起)。在小培養(yǎng)皿內(nèi)做好含10%或20%牛血清的PBS保存液液滴3～5個，覆蓋上液體石蠟油，作好編號，放入培養(yǎng)箱待用。（三）采卵

檢卵4．檢卵前的準備在酒精燈上拉好內(nèi)徑為200～300um的玻璃5．檢卵用玻璃棒清除卵外圍的粘液、雜質(zhì)。用吸管將卵移至培養(yǎng)皿的液滴內(nèi)，同一供體牛的卵放于同一液滴內(nèi)。然后用吸管先吸入少量第二液滴的PBS保存液至第一液滴，吸入全部卵，防止吸入黏液、雜質(zhì)，移至第二液滴，依次沖洗卵3～5次。室溫20～25℃，需2人進行檢卵及胚胎鑒定。

（三）采卵

檢卵5．檢卵用玻璃棒清除卵外圍的粘液、雜質(zhì)。用吸管將卵移至培養(yǎng)皿六、胚胎的鑒定和分級胚胎的鑒定及分級六、胚胎的鑒定和分級胚胎的鑒定及分級1．胚胎的鑒定（三）采卵

胚胎的鑒定及分級1．胚胎的鑒定（三）采卵胚胎的鑒定及分級在100～200倍實體解剖鏡下觀察受精卵的形態(tài)、色調(diào)、分裂球的大小、均勻度、細胞的密度、與透明帶的間隙以及變性情況等。凡卵子的卵黃未形成分裂球及細胞團的，均列為未受精卵。（三）采卵

胚胎的鑒定及分級在100～200倍實體解剖鏡下觀察受精卵的形態(tài)、色調(diào)、二細胞至四細胞胚胎

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級二細胞至四細胞胚胎（三）采卵胚胎的鑒定及分級胚胎的早期發(fā)育過程胚胎的鑒定及分級胚胎的早期發(fā)育過程胚胎的鑒定及分級

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級（三）采卵胚胎的鑒定及分級通常受精后6～8d非手術(shù)回收的正常受精卵發(fā)育情況如下：桑椹胚一發(fā)情后第5～6d回收的卵，只能觀察到球狀的細胞團，分不清分裂球，占據(jù)透明帶內(nèi)腔的大部分。致密桑椹胚：發(fā)情后第6～7d回收的卵，細胞團變小，占透明帶內(nèi)腔60%～70%。

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級通常受精后6～8d非手術(shù)回收的正常受精卵發(fā)育情況如下：

（三）采卵

早期囊胚：發(fā)情后第7～8d回收的卵，細胞的一部分出現(xiàn)發(fā)亮的胚泡腔。細胞團占透明帶內(nèi)腔70%～80%，難以分清內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層。囊胚：發(fā)情后第7～8d回收，內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層界線清晰，胚泡腔明顯，細胞充滿透明帶內(nèi)腔。擴大囊胚：發(fā)情后第8～9d回收，胚泡腔明顯擴大，體積增大到原來的1.2～1.5倍，與透明帶之間無空隙，透明帶變薄，相當于正常厚度的1/3。胚胎的鑒定及分級（三）采卵早期囊胚：發(fā)情后第7～8d回收的卵孵育胚：一般在發(fā)情后9～11d，由于胚泡腔繼續(xù)擴張，致使透明帶破裂，卵細胞脫出。凡在發(fā)情后第6～8d回收的16細胞以下的受精卵均應列為非正常發(fā)育卵，不能用于移植或冷凍保存（三）采卵

胚胎的鑒定及分級孵育胚：一般在發(fā)情后9～11d，由于胚泡腔繼續(xù)擴張，致2．胚胎的分級：（三）采卵

胚胎的等級劃分還應考慮到受精卵的發(fā)育程度。如：發(fā)情后第7d回收的受精卵在正常發(fā)育時應處于致密桑椹胚至囊胚階段。凡在16細胞以下的受精卵及變性細胞超過一半的胚胎均屬等外。胚胎的鑒定及分級2．胚胎的分級：（三）采卵胚胎的等級劃分還應考慮到受精卵的A級胚胎形態(tài)完整，輪廓清晰，呈球形，分裂球大小均勻，結(jié)構(gòu)緊湊，色調(diào)和透明度適中，無附著的細胞和液泡。

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級A級（三）采卵胚胎的鑒定及分級B級一輪廓清晰，色調(diào)及細胞密度良好，可見到一些附著的細胞和液泡，變性細胞約占10%～30%

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級B級（三）采卵胚胎的鑒定及分級C級輪廓不清晰，色調(diào)發(fā)暗，結(jié)構(gòu)較松散，游離的細胞或液泡較多，變性細胞達30%～50%。

（三）采卵

胚胎的鑒定及分級C級（三）采卵胚胎的鑒定及分級（三）采卵

胚胎的鑒定及分級（三）采卵胚胎的鑒定及分級塑料細管的編號：剪一段(2cm)0.5ml的塑料細管作為標記外套，內(nèi)裝色紙，寫上供體品種、牛號、胚胎發(fā)育階段及等級、制作日期(年、月、日)，并在外套管上寫明序號備查。（三）采卵

3.胚胎的標記塑料細管的編號：剪一段(2cm)0.5ml的塑料細管作七、胚胎的移植（三）采卵

牛的胚胎移植七、胚胎的移植（三）采卵牛的胚胎移植1．受體牛的選擇標準

年齡在3～8歲，健康，無疾病，體格較大，膘度好。繁殖性能正常，產(chǎn)后60d以上，并有兩次以上的正常自然發(fā)情記錄。泌乳性能好，無難產(chǎn)史。不使用兩次人工授精未孕的牛。（三）采卵

胚胎的移植1．受體牛的選擇標準（三）采卵胚胎的移植2．受體牛的飼養(yǎng)管理

●做到精心管理，合理飼養(yǎng)，環(huán)境清潔，飼草、飼料、飲水要新鮮，補充食鹽和必要的添加劑。●組成一定數(shù)量的牛群。圈舍內(nèi)防止過擠，以便于發(fā)情觀察。●農(nóng)戶長期舍飼的母牛要注意加強運動。

●防止在移植前后因飼料及環(huán)境改變造成的應激反應。（三）采卵

胚胎的移植2．受體牛的飼養(yǎng)管理●做到精心管理，合理飼養(yǎng)，環(huán)境清潔，飼3．供體牛、受體牛的同期發(fā)情

自然發(fā)情根據(jù)受體牛的發(fā)情觀察，與供體牛發(fā)情前后相差一天內(nèi)的牛，可作為受體。

（三）采卵

胚胎的移植3．供體牛、受體牛的同期發(fā)情自然發(fā)情（三）采卵胚胎的移植

使用PGF2α。(一次宮注)誘發(fā)發(fā)情一般在供體牛注射PGF2α前一天，給處于情期8～15d且直檢黃體好的受體牛一次宮注PGF2α2mg誘發(fā)發(fā)情。兩次PGF2α處理在不考慮發(fā)情周期的情況下，可間隔11d，前后兩次宮注PGF2α受體牛的處理日程安排應與供體牛超排處理相吻合。（三）采卵

胚胎的移植

使用PGF2α。(一次宮注)誘發(fā)發(fā)情（三）采卵胚4.發(fā)情觀察原則上根據(jù)母牛接受爬跨確認發(fā)情，早、晚各觀察30min發(fā)情情況。對發(fā)情牛需做直檢以確認卵泡，次日上午或晚上確定是否排卵。若在發(fā)情后36h以后排卵的牛不能用作受體。

（三）采卵

胚胎的移植4.發(fā)情觀察（三）采卵胚胎的移植

供體牛、受體牛的發(fā)情日差移植胚胎時，如果供體和受體牛的發(fā)情周期不一致，則難以受胎。要求兩者的子宮環(huán)境相一致。受體牛的發(fā)情日比供體牛早一天為+1，晚一天為-1，同日發(fā)情為0。超過2d不能用于移植。按胚胎發(fā)育情況選受體牛的發(fā)情日差可將致密桑椹胚移植給發(fā)情6d的受體牛，將早期囊胚移植給發(fā)情7d的受體牛，將囊胚和擴大囊胚移植給發(fā)情8d的受體牛。

（三）采卵

胚胎的移植

供體牛、受體牛的發(fā)情日差（三）采卵胚胎的移植5.器械準備仿西德式金屬移植器，先將移植槍、槍頭及金屬保護外套分別用紙包扎好，高壓消毒。塑料卡蘇式移植槍需經(jīng)氣體滅菌。移植時，先用70%酒精棉球消毒